p16基因转染对人胰腺癌细胞系生长抑制作用的研究

目的　探讨p16基因对人胰腺癌细胞系JF30 5的生长抑制作用。　方法　用脂质体介导法将外源野生型p16基因转染不表达p16的人胰腺癌细胞系JF30 5 ,对转染后细胞DNA、RNA和蛋白进行分析并观察其生物学特性变化。　结果　外源野生型p16基因已整合入细胞并获稳定表达 ,表达有外源p16基因的细胞生长速度及集落形成率均有部分抑制。细胞周期分析可见G1期增加 ,S期下降。电镜观察超微结构出现生长抑制特征。　结论　p16基因可作为胰腺癌基因治疗目的基因之一。     

外源性p16基因对食管癌患者癌细胞系的生长抑制作用

目的 观察外源性p16基因质粒导入食管癌患者食管鳞癌细胞系Ec109后的表达及其对Ec109细胞增殖生长状况的影响。方法 根据转染质粒的不同或是否行p16 cDNA质粒转染分为三组,每组分别为5个样本。PcDNA3-P16转染组（P16转染组）：采用脂质体（Lipofectamine）为载体,将PcDNA3-P16表达质粒寻入Ec109细胞;空载体转染组：用PcDNA－3－neo空载体以上述相同方法转染,作空白对照;未转染组：未用PcDNA3－P16质粒转染,作阴性对照。应用Northern斑点杂交、免疫组织化学、免疫荧光检测转化细胞的P16蛋白变化;流式细胞仪分析细胞周期变化,DNA片段化电泳检测细胞凋亡。结果 P16转染组外源性p16基因在Ec109细胞中表达后,细胞生长速度减慢,克隆形成能力下降,瞬时表达时有细胞凋亡发生,稳定表达后细胞存在G1期阻滞;空载体转染组和未转染组均未观察到以上结果。结论 脂质体介导的外源性p16基因转染对Ec109细胞有生长抑制作用,p16基因瞬时表达可诱导细胞凋亡。     

p16基因逆转录病毒载体的构建及其对人胃癌细胞生长的抑制作用

我们构建了ｐＬＮＣＸ ｐ16逆转录病毒载体 ,并将其转染至人未分化胃癌细胞 ,观察其对胃癌细胞生长的抑制作用。资料与方法1.一般资料 :白细胞采自正常人外周血 ,人未分化胃癌细胞株ＨＧＣ 2 7购自中科院上海细胞所 ,ＤＨ5α、逆转录病毒载体ｐＬＮＣＸ为本实验室保存 ,ＰＣＲ试剂盒、反转录ＰＣＲ扩增试剂盒、ＤＮＡ连接试剂盒和限制性内切酶购自宝生物工程(大连 )有限公司。ＴＲＩｚｏｌＲｅａｇｅｎｔ、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。2 .方法 :(1)野生型ｐ16基因逆转录病毒载体的构建及鉴定 :自正常人外周血…     

逆转录病毒介导的p16基因治疗原发性肝癌的实验研究

目的 调查转入野生型p16cDNA对肝细胞性肝癌细胞生物学行为的影响。方法 构建p16基因的逆转录病毒表达载体pCLXSN-p16。完成病毒包装后，分别感染p16表达阴性与阳性的肝癌细胞株，并筛选出各自稳定表达株，观测转基因后外源P16蛋白的表达及肿瘤细胞的生长情况。并检测肿瘤细胞的凋亡与生长周期。结果 我们包装产生的pCLXSN-p16假病毒具有感染肿瘤细胞并表达外源P16蛋白的功能，p16表达阴性的细胞SNU-449转入野生型p16基因后，细胞生长速度明显减慢，G0-G1期细胞明显多于转基因前，而p16表达阳性的细胞HepG2.2.15，转入外源p16cDNA后，其生长状况及细胞周期则未见明显改变，就SNU-449与HepG2.2.15细胞株而言，转入p16cDNA后，其生长状况及细胞周期则未见明显改变，就SNU-449与HepG2.2.15细胞株而言。转入p16cDNA均未能诱导细胞凋亡。结论 转入外源p16基因可抑制P16蛋白表达阴性的肝癌细胞的生长。     

腺病毒介导p16基因转染对胃癌细胞作用的研究

目的　观察以腺病毒为载体介导 p16基因转染对胃癌细胞 (MGC80 3)生长的影响。方法　重组腺病毒Ad p16感染胃癌细胞 ,观察胃癌细胞生长情况 ;用Ad p16感染胃癌细胞接种于大鼠体内 ,Ad lacZ为对照组 ,每组大鼠 10只 ,观察大鼠接种的阳性率 ;用重组腺病毒Ad p16作用于胃癌大鼠模型 ,Ad lacZ为对照组 ,每组大鼠 10只 ,观察大鼠肿瘤的生长情况。结果　p16可以抑制胃癌细胞生长 ,促进胃癌细胞的凋亡 ,经Ad p16感染的胃癌细胞肿瘤发生率明显下降 (由 90 %降至 2 0 % )。腺病毒介导 p16基因作用胃癌大鼠模型 2周后肿瘤的重量 ( 2 .2 1± 0 .2 6 )g明显低于对照组 ( 5 .6 4± 0 .5 3)g ,差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。应用免疫组织化学检查可见肿块有明显的淋巴细胞侵润。结论　腺病毒介导 p16基因对胃癌细胞有明显的抑制作用。     

p16基因与肝癌的研究近况

肿瘤发生的最重要原因是细胞增殖失控，这表明调节细胞周期的分子机制参与肿瘤的发生。细胞周期的运行主要依靠一组使其进入分裂期的依赖性细胞周期蛋白激酶（CDKS）的作用。CDKS只有和细胞周期蛋白（Cyclin）结合才能被激活，从而使细胞由G1期进入S期。同时，细胞中存在CDKS的抑制因子，抑制其活性，阻止细胞分裂。近年来发现的CDK抑制分子（CDK inhibitor，CDI），对细胞周期有负调节作用。p16基因是人们发现的第一个直接作用于细胞周期抑制细胞分裂的抑癌基因.     

原发性肝癌及癌旁组织中抑癌基因p16的表达及其临床意义

目的 探讨抑癌基因ｐ１６在肝癌及癌旁中的表达及意义。方法 应用免疫组化方法对５０例肝细胞癌（ＨＣＣ）及癌旁肝硬化组织（４４例）手术切除石蜡包埋标本进行Ｐ１６基因蛋白表达的测定,结合临床病理指标进行分析。结果 ｐ１６基因在ＨＣＣ中的阳性表达４８％（２４／５０）,癌旁９１％（２４／５０）,癌旁９１％（４０／４４）。ｐ１６基因表达与ＨＣＣ的分化程度密切相关（ｐ＝０．０１４）,在分化Ⅰ－Ⅱ级中ｐ１６阳性率     

p16基因对前列腺癌细胞的体外作用研究

目的：研究可控性表达的p16基因对前列腺癌细胞的生长抑制作用。方法：通过可诱导的真核表达载体pMDNA-3-p16将外源野生型p16基因转染至该基因表达功能丧失的人前列腺癌细胞PC3中,使用ZnSO4作为诱导物,观察p16基因的可控性表达及其对前列腺癌细胞生物学特性的影响。 结果：转染了野生型p16基因的人膀胱癌细胞PC3-pMDNA3-p16经ZnSO4诱导后,开放了p16基因的转录和翻译,p16蛋白得到高水平表达,细胞生长速度及集落形成率均有了部分抑制,细胞周期分析可见G1期增加,S期下降。结论：P16基因与前列腺癌的发生、发展有关,为用p16基因进行前列腺癌的基因治疗提供了实验依据。     

p16基因转染对膀胱癌细胞系BIU-87体外生长的抑制作用

为探讨ｐ16基因在膀胱癌发生、发展过程中的作用及其在膀胱癌基因治疗中的应用前景 ,我们将野生型ｐ16基因导入缺失 ｐ16基因的ＢＩＵ 87细胞中 ,观察 ｐ16基因的肿瘤抑制功能。一、材料与方法1.ｐ16基因重组表达载体的构建与鉴定 :质粒 ｐＧＲＥ5 1含全长 0 .96ｋｂ的人 ｐ16ｃＤＮＡ基因片段 ,用ＥｃｏＲＩ和ＸｈｏＩ双酶切 ｐＧＲＥ5 1分离出ｐ16ｃＤＮＡ基因片段 ,将其插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ3( 5 .4ｋｂ)的ＥｃｏＲＩ/ＸｈｏＩ酶切位点间 ,构建成重组质粒 ,命名为 ｐｃＤＮＡ3 ｐ16,酶切、电泳鉴定。2 .ｐ16基因转染ＢＩＵ 87细…     

反义增殖细胞核抗原联合p16基因转染抑制膀胱癌细胞生长的研究

目的 探讨膀胱癌联合基因治疗的新策略。方法 反义增殖细胞核抗原(PCNA)联合p16转染膀胱癌细胞，观测共转染1—7d后癌细胞增殖活性、DNA合成速率、细胞周期时相、克隆形成能力、细胞凋亡和PCNA、p16基因表达情况。结果 联合转染后癌细胞PCNA表达减弱，p16表达显著增强，增殖活性抑制15．45％—68．47％(P＜0．01)，DNA合成速率减慢65．77％(P＜0．01)，细胞周期阻滞于G0／G1期，克隆形成率抑制64．49％(P＜0．01)，凋亡率为22．00％(P＜0．01)。结论 反义PCNA与p16共转染具有抑制增殖、诱导凋亡的双重作用，有望成为膀胱癌联合基因治疗的新途径。     

p27kip1基因逆转录病毒载体的构建及其对人胃癌细胞系生长抑制作用的研究

目的：研究逆转录病毒介导的p27^kip1基因过度表达对细胞周期和细胞增殖的影响。方法：构建含人p27^kip1基因的逆转录病毒真核表达载体，应用脂质体介导法，将外源性p27^kip1基因转染人胃癌细胞系BGC－823，应用Western blot,FCM等方法，检测p27^kip1蛋白在胃癌细胞内的表达及其对细菌胶殖的影响。结果：获得含人p27^kip1 cDNA的重组逆转录病毒载体，外源性野生型p27^kip1基因整合于胃癌细胞并获稳定表达，细胞生长速度受抑制，同时出现G1期阻滞。结论：构建的p27^kip1重组逆转录病毒能有效介导外源性p27^kip1在人胃癌细胞系中高表达，抑制细胞增殖，为进一步研究以p27^kip1为目的基因的肿瘤基因治疗奠定了基础。     

野生型p16基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及代谢影响的实验研究

目的　探讨野生型 p16基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞 (keloidfibroblasts,KFb)生长增殖及DNA合成代谢的影响。　方法　构建含p16cDNA片段的真核表达载体 pcDNA3 p16 ,采用脂质体介导的基因转染法 ,将其导入体外培养的KFb中 ,并用G4 18筛选阳性克隆。随后对已转染及未转染的KFb进行免疫细胞化学染色 ,观察p16蛋白的表达 ,并通过绘制细胞生长曲线及采用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷 (3 H TdR)掺入法 ,比较转染前后细胞在生长增殖及DNA合成代谢方面的变化。结果　经酶切鉴定证实 ,pcDNA3 p16构建成功。已转染的KFb经G4 18筛选 ,出现阳性克隆 ,并有 p16蛋白表达 ;与正常KFb比较 ,其生长增殖速度明显减缓 ,DNA合成代谢能力明显减弱 (P <0 .0 5 )。　结论　p16基因对KFb的生长增殖及DNA合成代谢有明显的抑制作用。     

p16与细胞因子基因联合基因疗法对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的 探讨瘤体内直接注射途径的ｐ１６抑癌基因疗法与细胞因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因疗法联合应用对荷瘤肾癌小鼠免疫功能的影响。方法 建立皮下荷瘤肾癌小鼠模型。于接种种瘤细胞３ｄ后将荷瘤小鼠随机分为５组,分别给予不同的治疗,检测每组小鼠的免疫功能,观察每组小鼠的存活期,并行肿瘤病理学分析。结果 与其它４组相比,ｐ１６和ＧＭ－ＣＳＦ联合治疗组小鼠机体免疫功能显著增强（Ｐ〈０．０１）,存活时间明显延长（Ｐ〈０．０５）。结论 ｐ１６与ＧＭ－ＣＳＦ联合基因疗法的应用可增强小鼠抗肿瘤免疫反应,并抑制肿瘤的生长。     

抑癌基因PTEN和p16在肝细胞性肝癌中的表达及其意义

目的探讨PTKN和p16基因在肝细胞性肝癌（HCC）中的表达及其意义。方法采用免疫组化技术S—P法检测PTKN蛋白及p16蛋白在43例HCC及其相应癌旁组织中的表达。结果PTKN蛋白在HCC组织中的阴性表达率明显高于在癌旁组织中的阴性表达率（P〈0．01）;PTKN蛋白表达阴性率与HCC的分化程度、临床分期呈负相关,与AFP甲值及有无转移、HBV感染相关,与p16蛋白缺失率呈正相关,而与患者年龄、性别、肿瘤直径无关。比较PTKN阴性表达和阳性表达的HCC患者的术后1,3,5年生存率,差异在统计学上有显著性意义。结论PIEN失活部分参与了HCC的发生、发展进程。PIEN基因、p16基因的失活及HBV感染可能在HCC的发生、发展中存在协同关系。PTEN蛋白表达的检测可为HCC患者术后的预后判断提供参考。     

乳腺癌细胞p16基因的研究

目的 探讨Ｐ１６基因在乳腺癌中的突变形式和频率以及有效的检测手段。方法 采用细胞２,反复贴壁法纯化人乳腺癌细胞、经多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析技术。对１４例纯化乳腺癌细胞标本,１４例新鲜未纯化标本和２７例石蜡包埋标本及相应的癌旁乳腺组织标本的这６基因突变进行了对比性研究。结果 纯化的癌细胞组Ｐ１６基因突变率为４２．９％,而新鲜未纯化细胞组、石蜡包埋细胞组及癌旁乳腺细胞组的Ｐ     

肝癌及癌旁组织p16,nm23基因蛋白的表达及其临床意义

本研究用免疫组织化学技术检测肝细胞癌 (ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＨＣＣ)及癌旁组织中ｐ16、ｎｍ2 3基因蛋白表达 ,探讨它们与临床病理学特征的关系。一、材料与方法1 一般材料 :ＨＣＣ标本 5 0例取自我院 1993～ 1995年术后石蜡包埋标本 ,全部病例随访 3年以上。ｎｍ2 3、ｐ16基因蛋白免疫组织化学试剂盒购自ＤａＫｏ公司。免疫组织化学染色采用ＡＢＣ法。2 结果判定 :ｎｍ2 3和ｐ16为定位于胞浆抗原。采用半定量记分法 ,以着色强度分为“ ” ;“ ” ;“ ” 3级。3 统计学处理 :应用ＳＡＳ软件统计处理 ,…     

p15、p16对人胆管癌细胞增殖影响的实验研究

目的 研究抑癌基因p15、p16对人胆管癌细胞的生长抑制作用。方法 将抑癌基因p15、p16的cDNA构建到真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中形成p15真核表达质粒pcDNA3 p15及p16真核表达质粒pcDNA3 p16。通过脂质体法将重组质粒pcDNA3 p15,pcDNA3 p16质粒分别转染人胆管癌细胞系QBC939，获得稳定高表达p15或p16的人胆管癌细胞模型。用MTT法测定细胞生长曲线，流式细胞光度术测定细胞生长周期。结果 p15、p16高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到抑制，p15、p16均明显阻遏细胞由G1期向S期的转换。结论 抑癌基因p15、p16均参与了细胞周期的阻抑作用。     

肝细胞肝癌中p15、p16基因表达的关系

目的 探讨ｐ１５,ｐ１６基因在肝细胞肝癌（ＨＣＣ）的表达情况,相互关系及其临床病理意义。方法 用免疫组织化学方法（ＳＡＢＣ法）检测了ｐ１５,ｐ１６基因在３０例ＨＣＣ标本中的表达。结果 ｐ１６,ｐ１５基因在ＨＣＣ的阳性表达率在肿瘤分级及及临床分期的差异中均有显著意义。结论ｐ１５,ｐ１６基因的异常表达在ＨＣＣ中的发生,发展过程中起重要作用,二者在ＨＣＣ中的表达具有不均衡性。     

腺病毒介导的p16基因转染对膀胱癌细胞生长影响的研究

目的　探讨复制缺陷型腺病毒介导的 p16基因转染对人膀胱癌细胞生长的影响。 　方法　将 p16重组腺病毒 (Ad p16 )感染p16蛋白表达阴性的人膀胱移行细胞癌T2 4细胞株 ,Ad LacZ、X gal染色法检测重组腺病毒的转染效率 ;Westernblot法检测 p16蛋白的表达 ;MTT法及流式细胞术评估Ad p16对T2 4细胞增殖的影响。　结果　在感染复数 (MOI)为 5 0时 ,重组腺病毒对T2 4细胞的转染率达 97% ;此Ad p16在T2 4细胞中可获高效表达 ;与转染Ad LacZ组及未转染组相比 ,转染Ad p16组T2 4细胞生长受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ,细胞周期分析表明生长抑制主要发生在G1 S节点。　结论　腺病毒载体可有效地将外源 p16基因导入T2 4细胞 ;p16基因重组腺病毒载体转染能抑制T2 4细胞的生长。