红景天苷对脂多糖诱导的支气管上皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨红景天苷对脂多糖（LPS）诱导的正常人支气管上皮细胞（NHBE）损伤的保护作用及机制。方法：培养NHBE细胞,调整其细胞的密度为每毫升含有1＆#215;104个,给予不同浓度的红景天苷（3.3、10、30μg·mL-1）作用24 h,MTT检测细胞的活力,观察红景天苷在正常的情况下对人支气管上皮细胞的影响。在此基础上,以终浓度为2μg·mL-1的LPS作用NHBE细胞6 h,诱导其损伤,然后给予红景天苷24 h,MTT检测细胞活力,收集上清液,ELISA试剂盒检测炎症因子IL-6（白介素-6）、IL-1β（白介素-1β）、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）的水平,收集细胞,用Western blot方法测定细胞中的蛋白NF-κB（核因子）、MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）的表达。结果：在正常条件下,红景天苷对人支气管上皮细胞的活力无影响,没有损伤作用。红景天苷可明显降低培养液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平（P〈0.01）,降低细胞中NF-κB、MAPK的表达（P〈0.01）。结论：红景天苷可以通过降低IL-6、 IL-1β、TNF-α的水平来减轻LPS诱导的NHBE细胞的损伤,减轻炎症反应。     

五味子丙素抑制脂多糖诱导心肌细胞的炎症反应与 细胞焦亡的作用及机制研究

目的：探究五味子丙素（SchC）对脂多糖（LPS）诱导心肌细胞HL-1炎症反应与细胞焦亡的影响。方法：培养小鼠心肌细胞HL-1,将其分为空白对照组、模型组（LPS）、LPS＋SchC组。SchC预处理1 h后,分别以LPS刺激24 h或48 h,ELISA法提取细胞培养液上清液,检测细胞因子IL-1β、HMGB1和TNF-α的分泌,MTT法收集细胞检测细胞活力,Western Blot检测cleaved-Caspase1、GSDMD-N和NLRP3的表达;将HL-1细胞分为空白对照组、模型组（LPS）、LPS＋siGSDMD（GSDMD siRNA）组、LPS＋siGSDMD+SchC组,给药预处理1 h后,LPS刺激24 h,收集细胞培养液上清液,ELISA法检测IL-1β的分泌,MTT法检测细胞活力。结果：与LPS组比较,LPS＋SchC组细胞活力得到改善（P<0.05）,IL-1β、HMGB1和TNF-α的分泌均显著降低（P<0.05）;Western Blot结果表明,与LPS组比较,LPS＋SchC组的cleaved-Caspase1、GSDMD-N段和NLRP3蛋白水平显著降低（P<0.05）;ELISA和MTT结果表明,与LPS组比较,LPS＋siGSDMD组IL-1β的分泌显著降低（P<0.05）且细胞活力显著得到改善（P<0.01）,然而LPS＋siGSDMD组与LPS＋siGSDMD+SchC组的IL-1β分泌水平和细胞活力并无显著性差异。结论：五味子丙素能有效缓解LPS诱导HL-1的炎症反应和细胞焦亡。     

五味子丙素抑制脂多糖诱导心肌细胞的炎症反应与 细胞焦亡的作用及机制研究

目的:探究五味子丙素(SchC)对脂多糖(LPS)诱导心肌细胞HL-1炎症反应与细胞焦亡的影响。方法:培养小鼠心肌细胞HL-1,将其分为空白对照组、模型组(LPS)、LPS+SchC组。SchC预处理1 h后,分别以LPS刺激24 h或48 h,ELISA法提取细胞培养液上清液,检测细胞因子IL-1β、HMGB1和TNF-α的分泌,MTT法收集细胞检测细胞活力,Western Blot检测cleaved-Caspase1、GSDMD-N和NLRP3的表达;将HL-1细胞分为空白对照组、模型组(LPS)、LPS+siGSDMD(GSDMD siRNA)组、LPS+siGSDMD+SchC组,给药预处理1 h后,LPS刺激24 h,收集细胞培养液上清液,ELISA法检测IL-1β的分泌,MTT法检测细胞活力。结果:与LPS组比较,LPS+SchC组细胞活力得到改善(P<0.05),IL-1β、HMGB1和TNF-α的分泌均显著降低(P<0.05);Western Blot结果表明,与LPS组比较,LPS+SchC组的cleaved-Caspase1、GSDMD-N段和NLRP3蛋白水平显著降低(P<0.05);ELISA和MTT结果表明,与LPS组比较,LPS+siGSDMD组IL-1β的分泌显著降低(P<0.05)且细胞活力显著得到改善(P<0.01),然而LPS+siGSDMD组与LPS+siGSDMD+SchC组的IL-1β分泌水平和细胞活力并无显著性差异。结论:五味子丙素能有效缓解LPS诱导HL-1的炎症反应和细胞焦亡。     

白藜芦醇对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用

目的研究白藜芦醇对脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法以小鼠气道滴注LPS制备急性肺损伤模型,检测气道吸气阻力(Ri)、气道呼气阻力(Re)和动态肺顺应性(Cdyn)的变化,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,检测肺湿/干比值和毛细血管通透性,观察组织病理学变化。结果白藜芦醇能明显抑制Ri、Re增长和Cdyn降低,降低BALF中IL-1βI、L-6、TNF-α的含量,降低肺湿/干比值和渗透性,减轻肺组织病理学的损伤。结论白藜芦醇对LPS诱导的ALI具有保护作用,作用机制可能与抑制炎症因子的合成与释放有关。     

丹参素改善脂多糖诱导的支气管上皮细胞损伤研究

目的 探讨丹参素（DSS）对脂多糖（LPS）诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）法检测DSS对16HBE细胞活力的影响以筛选无毒性的DSS作用浓度。用LPS诱导构建支气管上皮细胞损伤模型。将细胞分为空白组、模型组和低、中、高剂量实验组。空白组细胞正常培养,模型组以25μg·mL^-1LPS诱导细胞24 h,低、中、高剂量实验组分别向LPS诱导的细胞中加入20,40,80μmol·L^-1 DSS处理24 h。以MTT法检测细胞活力;以流式细胞术检测细胞凋亡情况;以酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞炎症因子分泌和氧化应激指标含量;以二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯（DCFH-DA）法检测细胞内活性氧（ROS）水平;以蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞沉默信息调节因子1（SIRT1）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）蛋白的表达水平。结果 空白组、模型组和低、中、高剂量实验组细胞存活率分别为（96.11±5.14）%,（50.23±4.30）%,（51.12±4.08）%,（60.57±4.56）%和（...     

青蒿琥酯对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症反应影响的分子机制研究

目的探讨青蒿琥酯对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症反应的影响,并研究青蒿琥酯对人结肠上皮细胞炎症治疗作用的可能机制。方法体外原代培养人结肠上皮细胞,并分为空白对照组,LPS诱导组,青蒿琥酯低、中、高剂量组,CCK-8法检测青蒿琥酯对人结肠细胞增殖的影响,ELISA法检测青蒿琥酯对人结肠上皮细胞分泌IL-6和TNF-α炎症因子的影响,Western blot检测青蒿琥酯对Traf6/p65信号通路的影响。结果与LPS诱导组相比,青蒿琥酯能显著改善LPS对人结肠上皮细胞增殖的抑制作用(P<0.05);与LPS诱导组相比,各剂量青蒿琥酯均显著降低了人结肠上皮细胞分泌的IL-6和TNF-α水平(P<0.05);免疫印迹法检测发现,各剂量青蒿琥酯组相对LPS诱导组细胞中Traf6和p-p65表达水平明显降低(P<0.05)。结论青蒿琥酯可抑制人结肠上皮细胞炎症反应,进而改善炎症对细胞增殖的抑制作用,其作用机制可能与下调Traf6/p65信号通路活化有关。     

细胞焦亡调控宫颈癌发生和发展的研究进展

细胞焦亡是一种新型的程序性细胞死亡方式,主要依靠Caspases家族的促炎性细胞死亡,表现为肿瘤细胞不断胀大直至细胞膜破裂,导致细胞内容物释放,进而引起强烈的炎症反应.细胞焦亡主要包括依赖于Caspase-1的经典途径和依赖于Caspase-4、Caspase-5、Caspase-11的非经典途径.越来越多的研究发现,...     

白藜芦醇影响一氧化氮途径对大鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

目的研究白藜芦醇（resveratrol,Res）对酒精性肝损伤后肝组织氧化反应和炎性反应的影响及与一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）通路的关系。方法大鼠灌胃给予55度红星二锅头复制肝损伤模型。大鼠随机分为正常对照组、肝损伤模型对照组、Res低剂量组（25 mg.kg-1）、Res中剂量组（50 mg.kg-1）、Res高剂量组（100 mg.kg-1）,每日2次,连续7 d。采用试剂盒测定肝脏组织乳酸脱氢酶（LDH）、活性氧（ROS）、还原型谷胱甘肽（GSH）、NO、iNOS和血清IL-10、IFN-γ水平。Western blot测定iNOS表达,RT-PCR测定iNOS mRNA表达。结果与正常对照组相比,酒精性肝损伤模型组肝组织LDH、ROS、NO浓度显著升高（P〈0.01）、GSH显著下降（P〈0.01）,血清IFN-γ水平显著升高、IL-10显著降低（P〈0.01）,肝组织iNOS和iNOS mRNA表达增加（P〈0.01）。与模型组相比,Res显著降低肝脏组织ROS、LDH、NO浓度（P〈0.01）,降低血清IFN-γ水平和升高血清IL-10与肝脏组织GSH含量（P〈0.01）,减少iNOS和iNOS mRNA表达（P〈0.01）。结论 Res可能通过NO通路,消除氧化性应激状态,改变炎性因子水平,对酒精性肝损伤发挥防治作用。     

Increased Transport of Resveratrol Across Monolayers of the Human Intestinal Caco-2 Cells is Mediated by Inhibition and Saturation of Metabolites

Purpose The study's aim was to investigate the dose-dependent effect of sulfation and glucuronidation on intestinal absorption of resveratrol, a dietary constituent found in grapes and various medical plants.Materials and Methods The intestinal epithelial membrane transport kinetics and metabolism of resveratrol (10–200 μM) was studied using Caco-2 monolayers cultured in Transwells.Results Along with resveratrol it was possible to identify three metabolites, namely, resveratrol-4′-O-glucuronide (M1), resveratrol 3-O-gucuronide (M2), and resveratrol-3-O-sulfate (M3) by LC/MS and NMR. Efflux of the glucuronides M1 and M2 followed Michaelis–Menten kinetics significantly favouring basolateral efflux. The predominant metabolite was the monosulfate M3, however, its formation was strongly inhibited at higher resveratrol concentrations. As biotransformation was either inhibited or saturated, total amount of resveratrol transported across the Caco-2 monolayers increased as much as 3.5-fold at 200 μM resveratrol. This value might be even higher when taking into account the high intracellular concentration of resveratrol, which accounted for up to 61% of the applied dose.Conclusions Our data demonstrate a concentration-dependent biotransformation of resveratrol in Caco-2 cells, which may also apply to human enterocytes affecting oral bioavailability.     

Culture medium type affects endocytosis of multi-walled carbon nanotubes in BEAS-2B cells and subsequent biological response

We examined the cytotoxicity of multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) and the resulting cytokine secretion in BEAS-2B cells or normal human bronchial epithelial cells (HBEpCs) in two types of culture media (Ham’s F12 containing 10% FBS [Ham’s F12] and serum-free growth medium [SFGM]). Cellular uptake of MWCNT was observed by fluorescent microscopy and analyzed using flow cytometry. Moreover, we evaluated whether MWCNT uptake was suppressed by 2 types of endocytosis inhibitors. We found that BEAS-2B cells cultured in Ham’s F12 and HBEpCs cultured in SFGM showed similar biological responses, but BEAS-2B cells cultured in SFGM did not internalize MWCNTs, and the 50% inhibitory concentration value, i.e., the cytotoxicity, was increased by more than 10-fold. MWCNT uptake was suppressed by a clathrin-mediated endocytosis inhibitor and a caveolae-mediated endocytosis inhibitor in BEAS-2B cells cultured in Ham’s F12 and HBEpCs cultured in SFGM. In conclusion, we suggest that BEAS-2B cells cultured in a medium containing serum should be used for the safety evaluation of nanomaterials as a model of normal human bronchial epithelial cells. However, the culture medium composition may affect the proteins that are expressed on the cytoplasmic membrane, which may influence the biological response to MWCNTs.     

基于转录组测序探究PM2.5损伤肺上皮细胞 BEAS-2B的相关机制

目的 研究 PM2.5 对肺上皮细胞 BEAS-2B 基因表达的影响,并探讨其可能作用的信号通路。方法 BEAS-2B细胞分为对照组（PBS处理）和PM2.5组（200 mg/L PM2.5处理）,干预24 h后提取各组细胞总RNA进行高通 量测序。所得的序列经质控,与参考基因组比对,获得用于后续转录本组装、表达量计算的 mapped data（reads）后,比 对到 6 大数据库［NR、Swiss-Prot、Pfam、COG（Evolutionary genealogy of genes）、GO（Gene Ontology）、KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）］注释,利用差异分析软件DESeq2筛选出差异表达基因（DEGs）,运用生物信息学 分析方法对DEGs进行GO和KEGG生物功能等分析,采用qRT-PCR法检测5个关键基因（FOSB、FOSL1、MUC5AC、 CSF2、IL-6）进行验证。结果 PM2.5组和对照组与转录组的数据比较后共获得961个DEGs,其中PM2.5组上调表达 453个,下调表达508个。通过GO和KEGG功能分析后发现这些DEGs主要参与了细胞蛋白质的磷酸化、免疫调节过 程、信号转导途径的调节以及凋亡途径的调控过程,并显著富集于IL-17信号通路。qRT-PCR结果显示,PM2.5组 FOSB、FOSL1与IL-6的相对表达量显著上调（P＜0.05）,这与RNA-seq测序结果一致。结论 PM2.5可能通过调控 “IL-17信号通路”中关键基因的表达,加重了细胞的炎症反应,促进了细胞凋亡等生命进程。     

间-尼索地平对大鼠急性肺损伤的保护作用

目的观察新型钙拮抗剂间-尼索地平对脂多糖（LPS）诱导大鼠急性肺损伤（ALl）是否有保护作用,探讨Au治疗的新思路。方法以LPS（5．0mg／kg）尾静脉注射建立肺损伤模型。观察各组大鼠肺组织病理改变,计算肺W／D值,检测肺泡上皮细胞内Ca2＋浓度,测定支气管-肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子α（TNF—α）和蛋白质含量,肺组织中丙二醛（MDA）含量,肺毛细血管通透指数（CPI）的变化。结果间-尼索地平能明显减轻LPS所致ALl模型肺组织病变情况。间-尼索地平组肺泡上皮细胞Ca2＋浓度比LPS组含量明显减少（P〈0．05）,肺W／D值比LPS组明显降低（P〈O．05）,肺CPI比LPS组明显降低（P〈0．01）,肺组织MDA含量比LPS组含量减少（P〈0．01）。结论间-尼索地平对脂多糖肺损伤有一定的保护作用。     

甲基莲心碱对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞的保护作用

摘 要 目的：探讨甲基莲心碱对脂多糖（LPS）诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制。方法: 通过预实验筛选出LPS最佳的诱导浓度;再采用最适浓度的LPS模拟人脐静脉内皮细胞炎性损伤模型,通过CCK8测定不同浓度的甲基莲心碱（0.3,1,3,5,10 μmol·L^-1）对损伤细胞的凋亡率的影响;Griess Reagent法用于检测一氧化氮(NO)的含量; 比色法测定一氧化氮合酶( NOS)分型的活力;倒置显微镜观察细胞形态变化。结果: CCK8检测到LPS的浓度为100μg·mL^-1时,细胞抑制率为54.50%,此时细胞的损伤适中,确定为诱导浓度（P＜0.01）。在0.3～5.0 μmol·L^-1内,不同浓度的甲基莲心碱能明显提高损伤后的HUVECs的细胞活性,但在10 μmol·L^-1时,HUVECs细胞的增殖明显减少（P＜0.05）。甲基莲心碱能显著性逆转LPS诱导的人脐血管内皮细胞中NO含量的增加和总NOS（tNOS）和iNOS的活性的升高（P＜0.05）。倒置显微镜结果显示,甲基莲心碱在0.3~5.0 μmol·L^-1的浓度范围内,随着浓度增加,漂浮的死细胞变少,细胞形态基本良好,细胞间排列紧密。结论:甲基莲心碱能够逆转LPS诱导的人脐静脉内皮细胞的损伤,其机制可能与调节内皮细胞中NO的释放和NOS的活力有关。