半枝莲与白花蛇舌草及其药对石油醚部位成分分析及其抗子宫内膜癌细胞活性研究

目的:对半枝莲、白花蛇舌草及其药对石油醚部位成分进行分析,并研究体外抗子宫内膜癌细胞活性。方法:采用GC-MS结合保留指数(Kovats retention index,KI)对主要成分进行分析和鉴定;甲基偶氮唑盐类(MTT)法研究三者的抗子宫内膜癌细胞活性。结果:通过GC-MS分析鉴定出半枝莲、白花蛇舌草及药对石油醚部位中同时含有不饱和脂肪酸、酯类、甾醇类等成分,白花蛇舌草和药对相区别于半枝莲的石油醚部位又含有较多蒽醌类化合物。半枝莲、白花蛇舌草及其药对石油醚部位抗子宫内膜癌细胞HEC-1A的IC50值分别为275.204μg/m L,105.826μg/m L,148.645μg/m L,抗子宫内膜癌细胞Ishikawa的IC50值分别为189.114μg/m L,77.974μg/m L,137.999μg/m L。结论:半枝莲与白花蛇舌草及其药对石油醚部位对子宫内膜癌细胞HEC-1A和Ishikawa均有抑制作用,其中白花蛇舌草的抗子宫内膜癌细胞活性最强,推测可能与含量较高的蒽醌类化合物有关。     

大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度大蒜素(12.5、25、50μg/mL)和顺铂(40μg/mL)分别干预对数生长期Ishikawa细胞,采用MTT法检测Ishikawa细胞增值抑制;通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用Western blotting法检测Ishikawa细胞中caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测Ishikawa细胞中Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值。结果:大蒜素能够显著提高子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖抑制率,阻滞Ishikawa细胞周期于G2/M期,提高细胞凋亡率,上调caspase-3蛋白和Bax mRNA表达,下调bcl-2 mRNA表达,提高Bax/bcl-2表达比值,且上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖具有抑制作用以及促其凋亡的作用,机制可能与大蒜素能够改变Ishikawa细胞周期以及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。     

白花蛇舌草通过阻滞细胞周期抑制人结肠癌细胞的增殖

目的观察白花蛇舌草对人结肠癌细胞HT-29增殖及周期的影响,并初步探讨其可能的机制。方法分别采用不同浓度白花蛇舌草体外干预结肠癌HT-29细胞,MTT及集落形成实验观察该药对HT-29细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR检测相关基因mRNA的表达。结果白花蛇舌草对结肠癌细胞HT-29有明显抑制作用,且具有一定的量-效关系;对细胞周期的影响主要是阻滞在G1/S期,S期的比例逐渐下降;RT-PCR结果显示周期相关基因CyclinE、CDK2及P27 mRNA的表达随着给药浓度的增加而降低。结论白花蛇舌草可通过调节结肠癌HT-29细胞周期相关基因的表达,阻滞结肠癌HT-29细胞的周期进程,抑制结肠癌细胞增殖。     

华蟾素对两株子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

目的研究华蟾素对体外培养的两株子宫内膜癌细胞(PTEN表达完整的HEC-1A细胞和PTEN缺失的Ishikawa细胞)生物学行为影响并探讨分子机制。方法以不同浓度华蟾素作用两株子宫内膜癌细胞,MTT和克隆形成法检测细胞增殖;流式细胞法检测细胞周期及凋亡率;Transwell法检测侵袭;RT-PCR和Western blot法检测胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)基因和蛋白表达。结果 PTEN基因缺失的Ishikawa细胞随华蟾素浓度升高,增殖和侵袭能力明显降低,凋亡率显著升高,G1期细胞比例明显增多,IGF-1R基因和蛋白表达显著下降,HEC-1A细胞对华蟾素作用不敏感。结论PTEN基因缺失可增强子宫内膜癌细胞对华蟾素的敏感性。     

熊果酸对Hacat细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察中药白花蛇舌草主要有效单体熊果酸对人永生化细胞株Hacat细胞增殖及凋亡的影响,明确百花蛇舌草治疗银屑病的机制。方法:体外培养人角质形成细胞株Hacat,使用WST-8法检测熊果酸对Hacat细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测熊果酸对Hacat细胞细胞周期及凋亡的影响,并采用免疫荧光染色的方法标记凋亡细胞,从而进一步验证熊果酸对Hacat细胞凋亡的影响。结果:熊果酸能有效抑制Hacat细胞的增殖,与药物浓度呈正相关,同时可以将Hacat细胞阻滞于G1/G0期,同时可促进Hacat细胞凋亡。结论:熊果酸对角质形成细胞增殖有抑制作用,角质形成细胞凋亡有促进作用,推断其可能是白花蛇舌草治疗银屑病的有效单体之一。     

紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡及其机制的研究

目的:研究紫草素诱导体外培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡作用及其机制。方法:流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率变化;免疫组化法(SABC法)检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:紫草素可诱导细胞凋亡,改变细胞周期分布,多数细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.05);紫草素可上调Bax和下调Bcl-2基因蛋白的表达,与空白组对照差异有统计学意义(P<0.05)。结论:紫草素能够诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,其凋亡机制可能与促进Ishikawa细胞中Bax上调,Bcl-2下调相关。     

雷公藤甲素对子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响

目的探讨雷公藤甲素对子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响。方法 MTT法检测雷公藤甲素对Ishikawa细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测雷公藤甲素对Ishikawa细胞周期的影响,Western blot检测PI3Kp85、p-AkT、AkT、 p-mTOR、mTOR蛋白表达,荧光定量PCR检测PI3Kp85、AkT、mTOR、LC3ⅡmRNA表达。结果雷公藤甲素对Ishikawa细胞增殖有明显抑制作用,可显著减低PI3Kp85、p-AkT、p-mTOR蛋白和mRNA表达(P0.05,P0.01),显著升高Ishikawa细胞S期和G2/M期比例、LC3ⅡmRNA表达(P0.05,P0.01)。结论雷公藤甲素可能基于PI3K-AkT-mTOR通路阻滞子宫内膜癌Ishikawa细胞周期,从而抑制肿瘤细胞生长。     

紫草素对子宫内膜癌Ishikawa细胞生长的作用研究

目的研究紫草素体外诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用,并初步探讨其诱导凋亡的机制,为紫草素的临床应用提供实验依据。方法采用MTT法测定各组药物对Ishikawa细胞的增殖抑制作用;流式细胞术观察紫草素对子宫内膜癌Ishikawa细胞周期及其凋亡率的影响;应用RT-PCR法检测紫草素对子宫内膜癌Ishikawa细胞中Bax及其Bcl-2蛋白表达的影响。结果紫草素对Ishikawa细胞的增殖有明显抑制作用,并呈明显的量效关系和时间依赖性。紫草素主要将细胞阻滞于G1期,并且同一时间点下紫草素诱导Ishikawa细胞凋亡的作用具有浓度依赖性。紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的机制与蛋白Bax及Bcl-2表达相关,通过促进Bcl-2表达下调与Bax表达上调从而诱导子宫内膜癌细胞的凋亡(P<0.05)。结论紫草素可以有效抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性。促进细胞凋亡并将细胞周期阻止于G1期,其机制可能与抑制Ishikawa细胞中Bax与Bcl-2蛋白的表达有关。     

狗舌草总黄酮对L_(1210)细胞的体外作用研究

目的:研究狗舌草总黄酮对L1210细胞体外生长和细胞周期的影响。方法:用细胞计数法绘制细胞生长曲线,用细胞平均倍增时间(mPDT)检测L1210细胞增殖速度,台盼蓝拒染率测定细胞存活率,流式细胞术分析细胞周期。结果:狗舌草总黄酮能抑制L1210细胞生长且呈浓度依赖性,对L1210细胞的增殖具有显著抑制作用。S期细胞数目显著增加,并引起S-G2阻滞,从而阻断细胞周期的正常发展。结论:狗舌草总黄酮对L1210细胞体外生长、增殖有抑制作用,对细胞周期有阻滞作用,显示一定的抗肿瘤活性。     

大蒜素对人子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭和迁移抑制作用的研究

目的:探索大蒜素对人子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭和迁移的抑制作用及其调控机制。方法:取对数生长期人子宫内膜癌Ishikawa细胞为受试细胞,设空白对照组(DMSO),大蒜素低、中、高剂量组(12.5、25、50μg/ml)和顺铂组(40μg/ml)。药物干预48 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,PI染色流式细胞术分析细胞周期分布,Transwell小室法、划痕实验检测细胞侵袭能力和迁移能力,Western blot法检测MMP-2、MMP-9、E-cadherin、PI3K、p-Akt蛋白表达。结果:经大蒜素中、高剂量或顺铂干预能够明显提高Ishikawa细胞增殖抑制率,提高处于G₀/G₁期Ishikawa细胞比例,降低Ishikawa细胞侵袭能力和迁移能力,下调MMP-2、MMP-9、E-cadherin、PI3K、p-Akt蛋白表达量,较空白对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:大蒜素对人子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭和迁移具有明显抑制作用,其机制可能与阻滞细胞周期进程而抑制细胞增殖,降低MMP-2...     

小檗碱抑制人子宫内膜癌细胞增殖及转移机制的研究

目的探讨小檗碱抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和转移的机制。方法四甲基偶氮唑蓝法检测小檗碱对人子宫内膜癌Ishikawa细胞株的抑制作用;流式细胞仪观察对细胞周期分布的影响;ELISA法检测细胞培养上清液中炎性因子白细胞介素-8（IL-8）的浓度变化;应用Western印迹法检测经小檗碱干预该细胞48 h后,细胞核因子-кB（NF-кB）信号途径中p65的变化。结果小檗碱可显著抑制Ishikawa细胞生长,呈时间剂量依赖性。小檗碱可阻滞细胞于G0/G1期。细胞培养上清液中IL-8的浓度随着干预时间延长而减少（P〈0.05）。小檗碱作用48 h后,细胞中NF-кB p65表达明显下降（P〈0.05）。结论小檗碱具有抗人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖作用,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制细胞产生IL-8,并能够阻断NF-кB信号通路,从而抑制子宫内膜癌的转移。     

珍珠舌草胶囊总黄酮苷对胃癌细胞AGS生长的影响及机制研究

目的:对珍珠舌草胶囊进行拆方研究,观察其总黄酮苷对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:对珍珠舌草胶囊组成中药进行生药鉴定后,提取总黄酮苷;应用MTT法检测总黄酮苷及对胃癌细胞AGS生长的影响;应用流式细胞仪检测总黄酮苷对胃癌AGS细胞周期和细胞凋亡的影响;比色法测定药物对肿瘤细胞Caspase 3活性的影响;药物干预期间用显微镜观察细胞数量及形态学变化。结果:珍珠舌草胶囊总黄酮苷可明显抑制胃癌AGS细胞的生长,该作用呈时间与剂量依赖性。总黄酮苷可以阻滞细胞周期于G2/M期;还可以促进细胞的凋亡,显著增强Caspase 3的活性。结论:珍珠舌草胶囊总黄酮苷能显著抑制AGS细胞的增殖。阻滞细胞周期于G2/M期,并诱导和促进细胞凋亡。促凋亡作用可能通过Caspase 3的活性增强途径实现。     

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对A549细胞增殖的影响;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;Western Blot 检测药物作用后的Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 白花蛇舌草乙醇提取物抑制A549细胞增殖呈时-效和量-效关系;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞后可见凋亡细胞;40 mg/ml白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞12,24,36,48h,药物组G1～G0期细胞百分比分别为(42.82±3.95)%,(51.84±6.37)%,(54.76±8.85)%和(64.94±7.56)%,药物组细胞凋亡率分别为(5.72±0.98)%,(7.10±2.08)%,(19.89±4.25)%,(32.55±6.51)%,均高于对照组(P均﹤0.05),且G1～G0期细胞百分比和凋亡率随药物作用时间增加而增加;Western Blot显示,白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞,Bax的表达随作用时间增加而增加,Bcl-2的表达随作用时间增加而减低.结论 白花蛇舌草乙醇提取物随着药物浓度和作用时间的增加对肺腺癌A549细胞的体外抑制效应增加;其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G1～G0期和通过上调Bax和下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的.     

白花蛇舌草水提物抗白血病CEM细胞的增殖作用及机制

目的 观察白花蛇舌草水提物对CEM细胞增殖影响及其机制.方法 对CEM细胞进行细胞培养.采用台盼蓝拒染法,镜下计数活细胞数,绘制生长曲线,检测白花蛇舌草水提物对CEM细胞的生长抑制作用;琼脂糖凝胶电泳法检测白花蛇舌草水提物对CEM细胞的诱导凋亡作用.结果 白花蛇舌草水提物终浓度0.64,3.2,16μg/ml均显著抑制CEM细胞的生长,且呈剂量和时间依赖性.琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡条带,而空白对照组没有出现梯形条带.结论 白花蛇舌草水提物对CEM细胞生长具有显著抑制作用,诱导肿瘤细胞凋亡可能是其主要机制之一.     

白花蛇舌草提取物诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的机制研究

目的探讨白花蛇舌草提取物在体外诱导结肠癌HT-29细胞株凋亡的机制研究。方法采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定对照组和不同浓度白花蛇舌草提取物组,干预24 h。倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定不同浓度白花蛇舌草提取物对HT-29细胞增殖的影响,DNA Ladder试剂盒检测药物作用后细胞凋亡情况,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位变化,应用比色法分析Caspase-9和Caspase-3的活化情况。结果白花蛇舌草提取物干预HT-29细胞24 h后,HT-29细胞密度明显减少,细胞变小,可明显抑制HT-29细胞增殖,细胞凋亡增加,线粒体膜电位丧失,具有显著地剂量依赖,并出现明显的DNA Ladder条带;Caspase-9和Caspase-3的活化随着药物浓度的升高而增加。结论白花蛇舌草提取物能通过线粒体通路诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

白花蛇舌草不同极性部位抗血管生成及抗氧化活性研究

目的:研究白花蛇舌草不同极性部位的体外抗血管生成和抗氧化活性,以期为白花蛇舌草深入研究与开发提供理论依据。方法:使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对95%乙醇提取物水溶液依次萃取,得到4种不同极性部位。人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管腔形成实验初步观察各极性部位抗血管生成活性;以总还原力、DPPH·和·OH清除率为评价指标,考察各萃取物抗氧化能力。结果:石油醚、乙酸乙酯萃取物对HUVEC管腔形成有较好抑制作用;乙酸乙酯部位总还原力高于其他部位;DPPH·清除率顺序为:乙酸乙酯正丁醇石油醚水部位,其IC50值分别为0.110 mg/m L、0.122 mg/m L、0.473 mg/m L和0.754 mg/m L,·OH清除率顺序为:石油醚正丁醇乙酸乙酯水部位,其中石油醚部位清除·OH线性关系较好,线性方程为y=38.565x-40.991,IC50值为2.374 mg/m L。不同极性部位对HUVEC管腔形成的抑制和抗氧化活性呈浓度依赖关系,DPPH·清除率呈时间依赖关系。结论:白花蛇舌草不同极性部位具有一定抗氧化活性,同时能抑制HUVEC管腔形成。     

白花蛇舌草对肝癌细胞SMMC-7721基因表达的影响

目的:检测白花蛇舌草对肝癌细胞SMMC-7721细胞生长及肝癌相关基因表达的影响。方法:利用MTT比色法检测白花蛇舌草对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖方面的影响;利用以肝癌cDNA抑制性消减文库构建的肝癌相关基因微阵列,检测白花蛇舌草作用肝癌细胞SMMC-7721 36 h后基因的表达变化。结果:白花蛇舌草作用肝癌细胞SMMC-7721后36 h,观察到有1个基因的表达上调,14个基因表达下调。结论:证实白花蛇舌草对肝癌细胞的作用是通过影响多基因的表达改变实现的。本研究发现的差异表达基因为进一步研究白花蛇舌草抗肝癌的分子机制提供了线索,并为中草药筛选提供了一种可能的依据方法。     

联合靶向阻断EGFR和mTOR信号通路增强紫杉醇对子宫内膜癌细胞化疗敏感性

目的 观察紫杉醇联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂RG - 14260和阻断哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)对子宫内膜癌细胞株Ishikawa的影响.方法 紫杉醇、RG -14260、Rapamycin单独和联合处理Ishikawa细胞后,MTT法和细胞克隆形成法检测细胞增殖抑制率和存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布;Transwell法检测细胞体外侵袭力.结果 紫杉醇、RG -14260与Rapamycin均可抑制Ishikawa细胞增殖、诱导细胞凋亡、减少S期细胞数量、降低细胞侵袭力,三者联合应用呈协同效应(P＜0.01).结论 紫杉醇联合RG-14260及Rapamycin靶向治疗剂能协同性地抑制子宫内膜癌细胞生长、降低其侵袭力,这种作用可能是通过增加G1期细胞阻滞及凋亡来实现的.     

白花蛇舌草注射液抗肿瘤和免疫调节作用实验研究

目的研究白花蛇舌草注射液抗肿瘤及对荷瘤小鼠的免疫调节作用。方法采用MTT比色法,检测白花蛇舌草注射液对肿瘤细胞株增殖的抑制作用,计算抑制率。测定荷瘤小鼠脾脏NK细胞活性、腹腔巨噬细胞吞噬功能、脾细胞增殖的影响、血清凝集素活性和脾脏IL-2活性5项指标。结果白花蛇舌草注射液对A549、SGC-7901、HEP-G2、Hela的增殖,剂量在100～20μg/mL范围时,均有不同程度的抑制作用。白花蛇舌草注射液能明显增强荷瘤小鼠脾NK细胞杀伤活性,增强处于IL-2活性严重低下状态下荷瘤小鼠的IL-2活性,增强荷瘤小鼠脾细胞增殖,增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,提高荷瘤小鼠体液免疫血清中抗羊红细胞凝集素值。结论白花蛇舌草注射液具有体外抗肿瘤及提高荷瘤小鼠免疫功能的作用。     

白花蛇舌草和半枝莲微粉配伍对小鼠H22肝癌细胞周期及凋亡的影响

目的:通过研究白花蛇舌草和半枝莲微粉配伍对小鼠H22肝癌细胞周期及凋亡的影响,初步探讨其抗H22肝癌的作用机制。方法:昆明种小鼠50只,接种H22细胞24 h后,随机分为模型对照组,白花蛇舌草和半枝莲普通粉15.6 g·kg-1组,白花蛇舌草和半枝莲微粉低、中、高剂量(7.8,11.7,15.6 g·kg-1)组5组。ig,模型组给予生理盐水ig,10 d后,流式细胞术观察药物对小鼠移植性肿瘤H22肝癌细胞周期、凋亡率、细胞增殖指数(PI)的影响。结果:白花蛇舌草和半枝莲微粉15.6 g·kg-1剂量组G0/G1细胞百分比,细胞增殖指数(PI)及凋亡指数(AI)分别为(58.72±6.62)%,(41.28±6.62)%,(36.11±4.83)%(n=10),与模型对照组(27.48±1.75)%,(72.52±1.75)%,(13.72±4.56)%(n=10)相比,有显著差异;与普通粉组(43.24±4.30)%,(56.76±4.30)%,(25.41±4.00)%(n=10)相比,也有统计学差异(P<0.05)。结论:白花蛇舌草和半枝莲微粉配伍能够抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长,其机制可能与阻滞细胞于G1→S期,促进肿瘤细胞凋亡,减少增殖有关。