脓毒症大鼠心肌细胞Toll样受体4和炎症因子基因表达的变化及作用机制

目的 观察脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的变化及与Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)基因表达的关系;同时探讨谷氨酰胺(Gln)在脓毒症心肌损伤治疗中的保护作用.方法 采用内毒素脂多糖(LPS)腹腔注射法制备脓毒症大鼠模型.将大鼠随机分为对照组、LPS组及Gln组,再分为术后0、6、12、24 h亚组,每组6只.于相应时间点取心肌组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4、TNF-α及IL-6的mRNA表达,并观察心肌组织病理学改变.结果 LPS组大鼠心肌细胞凋亡程度增高.LPS组、Gln组各时间点心肌细胞TLR4、TNF-α及IL-6的mRNA表达均较对照组明显增加(P均<0.05).而Gln组心肌细胞凋亡程度较LPS组轻,各时间点TLR4 mRNA表达均较LPS组升高幅度明显降低,且于12 h、24 h差异有统计学意义;TNF-α mRNA表达亦降低,于6 h、24 h差异有统计学意义;IL-6 mRNA表达较LPS组升高幅度降低,且于12 h差异有统计学意义(P均<0.05).结论 TLR4信号转导基因及其调控细胞因子TNF-α、IL-6基因表达在脓毒症心肌细胞损伤的发生发展中起重要作用.Gln通过影响相关基因表达干预脓毒症心肌细胞的凋亡.     

八肽胆囊收缩素对脂多糖攻击小鼠抗炎症细胞因子表达的影响

目的观察脂多糖（LPS）攻击小鼠白细胞介素-4（IL-4）、IL-10的动态变化规律，以及八肽胆囊收缩素（CCK-8）对其表达的影响。方法随机将小鼠分组，每组7只。腹腔注射LPS10mg／kg，于攻击后0、2、4、6和12h检测血清、肺组织IL-4和IL-6表达高峰的时间。对照组腹腔注射生理盐水0．2ml；LPS组腹腔注射LPS10mg／kg；LPS＋CCK-8组在注射LPS前30min腹腔注射CCK-8 60μg／kg；CCK-8组腹腔注射CCK-8 60μg／kg。用酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录-聚合酶链反应（PT—PCR）方法检测各组小鼠血清和肺组织中IL-4、IL-10的含量及其mRNA的表达情况。结果LPS攻击后2h血清及肺组织IL-4、IL-6均显著升高，血清IL-4、IL-6于4h和6h达高峰；肺组织IL-4、IL-6则均于6h达高峰。说明LPS攻击可使小鼠血清及肺组织中IL-4、IL-10的蛋白及mRNA表达均增加；预先注入CCK-8可使IL-4和IL-10的蛋白以及mRNA表达均进一步增加（P均〈O．01）；而单独注射CCK-8对血清、肺组织IL-4、IL-10的表达无明显影响。结论CCK-8可能通过进一步增加LPS攻击小鼠IL-4、IL-10的表达参与抗炎反应过程，从而减轻LPS引起的肺组织炎症反应。     

Toll样受体4在脓毒症大鼠胰岛中的表达

目的 研究Toll样受体4(TLR4)在脓毒症大鼠胰岛中的表达变化及其对血糖的影响.方法 SPF级SD雄性大鼠腹腔内注射脂多糖(LPS)5 mg/kg,间隔3h注射第2次,制备脓毒症模型.大鼠被随机(随机数字法)分为正常对照组(n=5)、LPS组(n=5)、抗TLR4抗体组(n=5)和抗TLR4抗体+LPS组(n=5),分别采用RT-PCR法、Western-blot法和免疫组化法检测大鼠胰岛TLR4的表达.大鼠给药处理6h后行葡萄糖静脉试验(IVGTT)测定静脉全血葡萄糖和胰岛素水平,计算胰岛素、血糖曲线下面积(AUC).结果 正常组大鼠胰岛细胞有TIR4表达,LPS处理大鼠6h后胰岛组织中TLR4蛋白和mRNA的表达升高,与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01),注射抗TLR4抗体预处理后用LPS刺激,LPS诱导的TLR4蛋白及mRNA水平的升高均被抑制(P＜0.01).LPS处理后与正常对照组比较,大鼠IVGTT 10、30、60、120 min血糖明显升高,30、60、120 min胰岛素分泌降低(P＜0.01).抗TLR4抗体干预后能降低30 ～ 120min血糖的升高,改善LPS对胰岛素分泌的抑制(P＜0.01).结论 脓毒症大鼠胰岛细胞TLR4表达升高,LPS-TLR4系统可能是应激性高血糖的发生机制.     

右美托咪定可能通过抑制TLR4通路对LPS诱导的脓毒症小鼠急性肺损伤起保护作用

目的研究右美托咪定(Dex)对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症(Sep)小鼠急性肺损伤(ALI)起保护作用的分子机制。方法将100只清洁级成年雄性BALB/c小鼠随机平均分为高浓度右美托咪定组(A组)、低浓度右美托咪定组(B组)、脓毒症组(C组)和空白对照组(D组)。A、B两组小鼠分别于建模前30min经腹腔注射Dex 12.5μg/kg和25μg/kg,A、B、C三组小鼠均用腹腔内注射LPS建立ALI模型,建模后0、12h用Western blot法检测各组小鼠肺组织中TLR-4水平,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠肺组织中MyD88、NF-κB和IL-6水平,并检测肺组织湿/干质量比(W/D)。结果建模后,A、B、C三组小鼠肺组织中MyD88、NF-κB和IL-6水平均随时间延长而提高,且均显著高于D组(P0.05)。各个时间点A、B、C三组MyD88、NF-κB和IL-6水平存在显著差异,C组显著高于A组(P0.05),A组显著高于B组(P0.05)。结论 TLR-4信号通路可能参与了脓毒症大鼠肺损伤过程,Dex可能通过抑制TLR-4通路来实现脓毒症大鼠的肺保护作用。     

八肽胆囊收缩素抑制脂多糖诱导急性肺损伤小鼠的炎症反应

目的探讨八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对脂多糖(lipopo- lysaccharide,LPS)诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠炎症反应的影响。方法复制LPS致ALI小鼠模型。实验动物随机分为生理盐水对照组、LPS组(腹腔注射LPS)、LPS CCK-8组(注射LPS前30 min腹腔注射CCK-8)及CCK-8组(单独注射CCK-8)。用酶联免疫吸附法(ELISA)及逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)检测不同时间点各组小鼠血清、肺组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6的含量及mRNA表达情况。观察各组肺组织光镜病理改变。结果腹腔注射LPS可成功复制ALI小鼠模型,肺组织病理显示,在LPS组12h时可见肺间质充血、水肿,大量炎性症细胞浸润,腹腔预注射CCK-8可明显改善肺组织病理变化;腹腔注射LPS可使小鼠血清及肺组织中IL-1β、IL-6表达增加,分别于注射后2h及4h达到高峰,预先注入CCK-8可显著抑制IL-1β、IL-6的表达。结论CCK-8可能通过抑制ALI小鼠IL-1β、IL-6的表达参与抗炎反应过程,从而减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织炎症反应。     

脓毒症大鼠急性肺损伤肺血管通透性、炎症因子、诱导型一氧化氮合酶的变化及意义

目的:观察脓毒症大鼠急性肺损伤肺血管通透性、炎症因子、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的变化特点及其意义.方法:24只雄性SD大鼠随机分为脓毒症组和对照组,脓毒症组按5 mg/kg体重腹腔注射脂多糖(LPS),对照组给予等量生理盐水,于注射后2h、6h经腹主动脉采血、处死,比较动脉血气分析、ELISA法检测的肺组织iNOS、白介素-6(IL-6)含量、右下肺肺组织病理切片计算的病理学肺损伤积分.结果:与对照组比较,脓毒症组大鼠氧合指数显著下降、肺组织iNOS、IL-6含量、病理学肺损伤积分均显著增加,P＜0.01.结论:脓毒症大鼠肺iNOS的过度表达增加了炎症因子的释放、增加肺血管通透性,加重肺损伤.     

二烯丙基三硫对急性肺损伤小鼠血清细胞因子IL-18的影响

目的：探讨二烯丙基三硫（DATS）对急性肺损伤小鼠血清IL-18的影响。方法：30只健康昆明小鼠,随机分为5组：（1）ALI组：腹腔注射大肠杆菌脂多糖（LPS）;（2）预防组：腹腔注射DATS 7 d后注射LPS;（3）治疗组：腹腔注射LPS后30 min注射DATS;（4）DATS组,腹腔注射DATS 7 d;（5）对照组：腹腔注射等量氯化钠溶液。光镜观察12 h点肺组织形态学改变。测定血清中IL-18在2 h和6 h含量。结果：DATS预防组肺泡间渗出及炎性细胞浸润较ALI组明显减轻。其血清中IL-18含量均明显低于ALI组（P〈0.01）。结论：预防性应用DATS可减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织炎症反应,及抑制LPS诱导的小鼠血清中炎性细胞因子IL-18的生成。     

脂多糖刺激后腹腔巨噬细胞表面Toll样受体表达的变化

目的探讨LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2、TLR4表达的动态变化.方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞,调整细胞数为2×106/孔,分为6组,每组设3个复孔,加入LP S使其终浓度为1μg/ml,在终浓度为1μg/ml LPS刺激下,5%CO2,37℃孵育0、1.5、3、6、16、24h.用异硫氢酸荧光素(FITC)标记的大鼠抗小鼠TLR2抗体和藻红蛋白(PE)标记的大鼠抗小鼠TLR4抗体对小鼠腹腔巨噬细胞进行免疫荧光染色,流式细胞仪(FCM)测定FITC、PE阳性细胞数及其平均荧光强度(MFI).结果1.随着LPS刺激时间的延长,TLR2阳性率逐步上升,6h达到高峰后出现缓慢下降趋势,各刺激组阳性率与对照组组相比,P＜0.01.TLR2 MFI则随着LPS刺激时间的延长而缓慢下降,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.2.随着LPS刺激时间的延长,TLR4阳性率逐步上升,刺激达24h时,阳性率为14.02%+1.23%,与对照组(8.98%±1.06%)相比,P＜0.01.TLR4 MFI也随着刺激时间的延长而上升,各刺激组与对照组相比,P＜0.05.结论LPS能够引起巨噬细胞TLR2/4表达和分布发生变化,说明TLR2与TLR4均参与针对LPS的反应.     

衣康酸减轻脂多糖诱导的急性肺损伤的机制研究

目的探讨衣康酸外源性衍生物4-辛基衣康酸(4-octyl itaconate, 4-OI)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的作用及具体调控机制。方法采用6～8周龄的C57BL/6雄性小鼠, 按照随机数表法均分为对照组、4-OI组、LPS组、4-OI+LPS组和去铁酮(deferiprone, DFP)+LPS组, 每组6只。通过腹腔注射LPS建立LPS诱导的ALI模型, 4-OI治疗组在LPS造模前2 h预先腹腔注射4-OI。造模12 h后处死收集小鼠肺组织并进行病理及分子生物学检测。应用苏木精伊红染色和马松染色分别检测肺损伤及胶原沉积程度。应用实时定量PCR检测炎性因子及铁死亡相关基因表达水平, 采用免疫印迹法测定铁死亡相关蛋白的表达水平。计量资料统计前进行方差齐性检验, 多组间差异比较采用单因素方差分析。结果与对照组比较, LPS组小鼠肺组织病理损伤加重, 胶原沉积增加, 肺损伤评分及肺湿干重比明显升高(均P<0.05), 而4-OI治疗明显减轻LPS诱导的ALI。4-OI治疗还显著降低...     

内毒素血症小鼠骨骼Toll样受体4基因的变化

目的 通过检测内毒素血症模型动物骨骼相关基因表达变化,进一步明确内毒素对机体的损害机制,为下一步研究骨骼变化对脏器产生何种影响奠定基础.方法 腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)制作内毒素血症小鼠模型.将48只小鼠随机分为正常组和LPS处理4、6、8、12、24、48和72 h组,每组6只.采尾血计数全血白细胞;取眼眶血检测肝、肾功能;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨骼中TLR4 mRNA表达;苏木素-伊红(HE)染色,镜下观察骨骼病理学变化.结果 与正常组比较,LPS 4 h组白细胞计数显著下降(P＜0.01),之后逐渐升高,于72 h时显著高于正常组(P＜0.05);LPS 4 h和6 h组丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著升高(P均＜0.05),于8 h降至正常水平(P＞0.05);LPS 6 h组血尿素氮(BUN)水平逐渐升高(P＜0.05),于8 h达峰值(P＜0.05),然后下降,12 h趋于正常(P＞0.05);LPS 6 h组TLR4 mRNA表达增加(P＜0.01),24 h达峰值(P＜0.01),然后逐渐下降,72 h仍处在较高水平(P＜0.05).LPS作用于骨骼后,HE染色显示骨骼无明显改变.结论 内毒素血症中骨骼TLR4 mRNA表达量显著增加.     

阻断toll样受体对脂多糖致急性肺损伤的保护作用

目的：本文旨在探讨阻断toll样受体（TRL4）对脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法将60只健康雄性清洁级SD大鼠分为正常组、损伤组和阻断组,每组20只。损伤组大鼠采用尾静脉注射LPS（6mg/kg）复制ALI模型;阻断组同时注射TLR4抗体（10mg/mL）;正常组给予等容积生理盐水。3h后处死大鼠,采用凝胶滞留法检测核因子-κB（NF-κB）活性;Westernblot印记分析法检测抑制蛋白（IκB-α）水平;检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子α细胞因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-10（IL-10）水平。结果与正常组相比,损伤组和阻断组肺组织湿质量/干质量比值增高,NF-κB活性升高,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平升高（P＜0．05）,而IL-10水平降低（P＜0．05）。而比较损伤组与阻断组发现,阻断组肺组织湿质量/干质量比值降低,NF-κB活性降低,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平明显低于损伤组（P＜0．05）,IL-10水平高于损伤组（P＜0．05）。结论采用抗TLR4单克隆抗体阻断TLR4介导的信号传导可明显降低NF-κB活性和IκB-α、TNF-α、IL-1β水平,同时提高IL-10水平阻断TLR4,对LPS致ALI有一定的保护作用。     

重症急性胰腺炎并发肺损伤促/抗炎症因子的变化及大黄附子汤的干预研究

目的观察大黄附子汤对重症急性胰腺炎并肺损伤（SAP-ALI）时血清促/抗炎症因子的影响。方法健康长白猪,体重25～30kg,13头,随机分成三组：对照组（n=4）、重症急性胰腺炎肺损伤组（模型组,n=4）、大黄附子汤治疗组（治疗组,n=5）。其中模型组采用主胰管内逆行注入4%牛磺胆酸钠（1ml/kg）诱导SAP-ALI模型。三组均于术后即刻、术后6h、12h、24h、48h、72h取血,ELISA法动态检测血清中促炎因子（TNF-α和IL-1β）、抗炎因子（IL-4）浓度变化,同时动态比浊法测定血清内毒素（LPS）含量。术后72h处死动物,计算肺组织湿/干重比,观察胰腺与肺病理形态学变化。结果模型组6～72h血清淀粉酶、内毒素、TNF-α、IL-1β浓度及肺病理组织学评分均较对照组明显升高（P〈0.05）,IL-4浓度在术后24h开始较对照组逐渐升高（P〈0.05）。治疗组各时间点血清淀粉酶、内毒素、TNF-α、IL-1β浓度均较模型组明显下降（P〈0.05）,但血清IL-4浓度于术后12h出现明显升高,48h达到峰值。结论促炎因子（TNF-α、IL-1β）、抗炎因子（IL-4）及内毒素等共同参与了SAP-ALI的发病过程。大黄附子汤通过降低血清LPS水平,进而下调血清TNF-α及IL-1β表达,上调IL-4表达,减轻SAP-ALI的程度。     

乌司他丁对脂多糖致大鼠急性肺损伤肺组织糖皮质激素受体的影响

目的探讨乌司他丁(UTI)对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)组织糖皮质激素受体(GR)的影响,并了解其可能机制。方法清洁级成年雄性SD大鼠54只,随机分为3组:空白对照组(Con组,n=18),LPS组(n=18),脂多糖+乌司他丁组(LPS+UTI组,n=18)。各组又按照不同的时间点被分为4 h、8 h、12 h三个亚组。在各时间点处死大鼠,利用Western blot检测大鼠肺组织中GR的表达,实时荧光定量PCR检测GR m RNA的表达,同时酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织匀浆液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-10的浓度以及肺组织病理学的变化。结果与对照组相比,LPS组GR蛋白表达在各时间点降低(P<0.05),LPS+UTI组GR蛋白在各时间点的表达水平高于LPS组,低于Con组(P<0.05);与对照组相比,LPS组GR m RNA表达降低(P<0.05),LPS+UTI组GR m RNA在各时间点的表达水平略高于LPS组(P>0.05),低于Con组(P<0.05);与对照组相比,LPS组TNF-α的表达在各时间点升高(P<0.05),LPS+UTI组TNF-α的表达水平在各时间点低于LPS组,高于Con组(P<0.05);与对照组相比,LPS组IL-10的表达在各时间点升高(P<0.05),LPS+UTI组IL-10的表达水平在各时间点高于LPS组(P<0.05)。组织病理学检查显示:LPS组肺组织见肺泡结构破坏,炎性细胞浸润,肺泡间隔增宽,出血,水肿,LPS+UTI组肺组织病理损害较LPS组明显减轻。结论 UTI能提高GR的表达;TNF-α和IL-10出现高峰的时间不同。     

萝卜硫素对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4/核因子κB信号通路的影响

目的评价萝卜硫素对于脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织炎症反应以及Toll样受体4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路的影响。 方法将30只雄性Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分成假手术组、模型组和治疗组,每组各10只。模型组和治疗组大鼠采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备大鼠脓毒症模型,治疗组大鼠在术后立即腹腔注射50 mg/kg的萝卜硫素注射液,其余两组注入等量等渗NaCl溶液;于术后24 h大鼠右侧颈总动脉采集动脉血标本,然后处死大鼠取肺组织测定肺组织湿/干比。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测三组大鼠肺组织匀浆标本肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、NF-κB p65表达水平;荧光实时定量PCR检测三组大鼠肺组织TLR4 mRNA的表达。 结果假手术组、模型组及治疗组大鼠肺组织湿/干比[（4.00 ± 0.13）、（6.10 ± 0.05）、（5.80 ± 0.08）]、氧合指数[（315 ± 11）、（177 ± 7）、（200 ± 12）mmHg]、TNF-α[（6.05 ± 0.29）、（45.06 ± 0.52）、（27.09 ± 0.85）ng/L]、IL-1β[（8.02 ± 0.21）、（38.23 ± 0.81）、（32.73 ± 1.12）ng/L]及NF-κB p65[（0.375 ± 0.013）、（1.230 ± 0.045）、（0.988 ± 0.043）ng/L]表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 480.891、255.309、4 245.262、1 918.168、564.842,P均< 0.001）。进一步两两比较发现,模型组和治疗组大鼠肺组织湿/干比、TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达水平均较假手术组大鼠显著升高（P均< 0.05）,治疗组大鼠肺组织湿/干比、TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达水平均较模型组大鼠显著降低（P均< 0.05）;而模型组和治疗组大鼠氧合指数均较假手术组大鼠显著降低（P均< 0.05）,治疗组大鼠氧合指数较模型组大鼠显著升高（P < 0.05）。荧光实时定量PCR结果显示,三组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义（F= 224.538,P < 0.001）。进一步两两比较发现,与假手术组比较,模型组及治疗组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达均显著升高（P均< 0.05）;而治疗组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达较模型组显著降低（P < 0.05）。 结论萝卜硫素可减轻脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织炎症反应、肺水肿程度,改善缺氧状态,对于肺组织具有一定保护作用,且其作用机制可能与干预TLR4/NF-κB信号途径相关。     

盐酸戊乙奎醚对急性肺损伤患者Toll样受体4表达的影响

目的 观察急性肺损伤(ALI)患者早期应用盐酸戊乙奎醚治疗效果;早期应用盐酸戊乙奎醚治疗ALI患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达及其下游炎症因子和血清中抗炎因子的表达变化;探讨TLR4在ALI过程中的参与机制.方法 2007/年9月至2008年8月,南京军区南京总医院急救医学科重症监护病房收治的45例ALI患者.全部患者符合国内外普遍应用的ALI诊断标准.45例ALI患者随机分成盐酸戊乙奎醚治疗组(实验组,n=21)和常规治疗组(对照组,n=24).两组均给予常规综合治疗,实验组在常规综合治疗基础上加用盐酸戊乙奎醚治疗,1 mg,肌注,1次/12h.观察两组48 h临床疗效、动脉血气、细胞因子等的变化,流式细胞仪即时检测血液中TLR4的表达变化.两组间均数比较用成组t检验,组内各时间点与0 h的比较采用配对t检验.两组率的比较采用Fisher精确概率法.结果 治疗后心率、呼吸频率48 h两组均较0 h有改善,组间无统计学差异(P>0.05),两组PaO_2和PaO_2/FiO_2均逐渐升高,6 h,24 h,48 h实验组改善优于对照组(P<0.05);加用盐酸戊乙奎醚治疗可明显缩短患者在ICU监护治疗的时间(P<0.01);流式细胞仪TLR4检测显示,0 h两组患者TLR4表达水平明显高于正常健康体检者(P<0.01);治疗后24 h、48 h两组患者TLR4均较0 h下降(P<0.05),实验组下降幅度大于对照组24 h(P<0.05),48 h(P<0.01),且两组TLR4水平0 h就明显升高的患者预后不良,大部分发展为ARDS;24 h ARDS发生率实验组为23.8%,对照组为29.17%,至48 h对照组又有2例进展为ARDS,实验组无再发患者;细胞因子检测:0～48 h IL-1、IL-广8和TNF-α浓度两组均进行性下降,其中24 h IL-8和TNF-α实验组较对照组下降明显(P<0.05),48 h三者实验组均较对照组下降明显(P<0.05);IL-13在0～24 h进行性升高,48 h较24 h略有下降,与0 h相比组内有统计学差异(P<0.05),组间无统计学差异.结论 盐酸戊乙奎醚能够早期改善氧合、抑制TLE4的表达,使其传导通路下游炎症因子表达下降,这种对炎症因子的抑制作用并非是通过早期上调抗炎介质而是通过下调TLR4来实现的,盐酸戊乙奎醚可能成为急性肺损伤治疗的重要药物.TLR4在急性肺损伤发生、发展的病理过程中有重要作用,并可以考虑作为判断ALI预后的参考标志.     

肺表面活性蛋白-D在高原肺水肿发生发展中的表达及作用

目的探讨肺表面活性蛋白-D（SP-D）在高原肺水肿发生发展中的表达及作用。 方法将64只Wistar雄性大鼠随机分为4组,正常对照组（16只,586 m室温饲养）,低压低氧24 h、48 h及72 h组（各16只,于模拟海拔6000 m低压低氧舱内分别饲养24 h、48 h及72 h）,取右侧肺组织行HE染色,观察肺组织损伤情况,收集左侧肺组织肺泡灌洗液,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中SP-D、白介素（IL）-1β、IL-6、C反应蛋白（CRP）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。 结果成功建造高原肺水肿动物模型;与正常对照组相比,低压低氧24、48、72 h组肺组织病理评分升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;SP-D含量均有所下降,IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α含量均上升,且各组间两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;BALF中SP-D含量与肺组织病理评分呈负相关（r=-0.687,P＜0.05）,炎症因子IL-1β、IL-6、CRP及TNF-α与肺组织病理评分均呈正相关（r=0.705,P＜0.05;r=0.728,P＜0.05;r=0.733,P＜0.05;r=0.737,P＜0.05）。 结论SP-D在高原肺水肿的发生发展中起着一定的作用,其可能是防治高原肺水肿的新靶点。     

骨髓间充质干细胞对烟雾吸入性损伤兔早期炎症因子分泌的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)对烟雾吸入性损伤早期外周血及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β、IL-6、IL-10)分泌的影响.方法 全骨髓培养法体外培养兔MSCs,用流式细胞术鉴定.将56只健康新西兰大耳白兔按随机数字表法分为正常对照组(C组,n=8)、烟雾吸入性损伤组(S组,n=24)、烟雾吸入性损伤+MSCs移植组(M组,n=24),后两组再分为伤后2、4、6 h亚组,每组8只.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆及肺组织匀浆液中促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及抗炎因子IL-10的含量.结果 与C组比较,S组各时间点血浆促炎、抗炎因子均显著升高;各时间点肺组织促炎因子显著升高,抗炎因子无明显变化.与S组比较,M组各时间点血浆促炎因子显著下降,抗炎因子显著升高[6 h时TNF-α(μg/L):1.7±1.7比4.1±1.6,IL-1β(ng/L):9.9±1.7比21.2±2.6,IL-6(μg/L):1.0±0.3比1.3±0.2,IL-10(ng/L):15.2±4.4比7.9±3.5,均P＜0.05];各时间点肺组织促炎因子显著降低,而抗炎因子仅在4 h、6 h显著升高[6 h时TNF-α(ng/L):503.0±156.4比587.7±171.2,IL-1β(ng/L):0.4±0.2比0.6±0.2,IL-6(ng/L):155.2±13.7比350.2±20.3,IL-10(ng/L):23.3±5.4比11.0±5.6,均P＜0.05].结论 MSCs移植能降低烟雾吸入性损伤早期促炎因子水平,升高抗炎因子水平,改善全身炎症反应,对烟雾吸入性损伤肺组织具有一定的保护作用.

Abstract：

Objective To explore the effect of bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) engraftment on secretion of tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukins (IL-1β, IL-6, IL-10) in peripheral blood and lung homogenates in the early stages of smoke inhalation injury. Methods MSCs were proliferated by the method of whole marrow culture and identified by flow cytometry. Fifty-six healthy New Zealand rabbits were randomly divided into control group (C group, n=8), smoke inhalation injury group (S group, n=24)and smoke inhalation injury+MSCs engraftment group (M group, n=24). The latter two groups were subdivided into 2, 4, 6 hours after injury subgroups, with 8 rabbits in each group. The levels of TNF-α,IL-1β, IL-6 and IL-10 in peripheral blood and lung homogenates were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results Compared with C group, concent of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines in peripheral blood at each time point in S group were increased significantly.The concent of pro-inflammatory cytokines in lung homogenate at each time point in S group was significantly higher than thoae in C group, and that of anti-inflammatory cytokines showed no significant changes.Compared with the S group, concent of pro-inflammatory cytokines in peripheral blood in M group was decreased significantly, and that of anti-inflammatory cytokines was increased significantly [6 hours TNF-α(μg/L):1.7±1.7 vs. 4.1±1.6, IL-1β (ng/L): 9.9±1.7 vs. 21.2±2.6, IL-6 (μg/L): 1.0±0.3 vs.1.3 ± 0. 2, IL-10 (ng/L): 15. 2 ± 4. 4 vs. 7. 9 ± 3.5, all P＜0.05]. Concent of pro-inflammatory cytokines at each time point in M group was decreased significantly when compared with S group in lung homogenate,while only anti-inflammatory cytokine at 4 hours and 6 hours was increased significantly [6 hours TNF-α (ng/L): 503. 0±156. 4 vs. 587.7±171.2, IL-1β (ng/L): 0.4±0.2 vs. 0.6±0.2, IL-6 (ng/L): 155.2±13.7 vs. 350.2±20.3, IL-10 (ng/L): 23.3±5.4 vs. 11.0±5.6, all P＜0.05]. Conclusion MSCs engraftment could decrease pro-inflammatory cytokines and increase anti-inflammatory cytokines in the early stages of smoke inhalation injury, thus amelioratea inflammatory reaponse, which confers protective effect on smoke inhalation injury.     

硫辛酸对内毒素诱导的大鼠急性肺损伤的保护作用

目的：以内毒素（lipopolysaccharide,LPS）诱导法建立大鼠急性肺损伤（acute lung injury,ALI）模型,探讨不同剂量的硫辛酸（lipoic acid,LA）处理对大鼠ALI的保护作用.方法：选择健康SD大鼠90只,其中72只SD大鼠腹腔注射LPS 25 mg/kg,构建大鼠ALI模型,再按不同干预方法将72只大鼠分为LA阴性对照组（腹腔注射等量0.9％氯化钠液）、LA大剂量组[腹腔注射LA 120 mg/（kg·d）]、LA中剂量组[腹腔注射LA 60 mg/（kg·d）]、LA小剂量组[腹腔注射LA 30 mg/（kg·d）],每组18只;其余18只大鼠,仅腹腔注射等量0.9％氯化钠液（正常组）.检测各组大鼠处理24、48、72 h后肺组织中核因子κB （NF-kappa B,NF-κB）、白细胞介素1（interleukin 1,IL-1）、NO合成酶（NO synthetase,NOS）、NO、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor α,TNF-α）的水平.结果：LPS诱导后,LA阴性对照组大鼠肺组织中NF-κB、IL-1、NOS、NO、TNF-α在72 h时最高.与正常组大鼠比较,其余各组NOS、NO、TNF-α的水平均较高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与LA阴性对照组比较,处理24、48、72 h后LA大剂量组IL-1、NF-κB、NOS、NO、TNF-α的水平明显下降（P均＜0.05）,LA中剂量组在处理24 h后的NOS、NO水平以及处理72 h的NO水平也明显下降（P均＜0.05）.结论：LA对ALI大鼠的治疗效果以大剂量组最为明显,其机制可能与LA抑制NF-κB激活以及下调肺组织中IL-1、NOS、NO、TNF-a的表达有关.     

高容量血液滤过对内毒素休克犬心肌组织Toll样受体4表达的影响

目的 探讨高容量血液滤过(HVHF)对内毒素休克心肌组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响.方法 健康犬16只,静脉注射脂多糖(LPS)650 μg/kg诱导犬内毒素休克模型.将制摸成功的动物按随机数字表法分为对照组和HVHF治疗组,每组8只.用放射免疫法测定血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10含量,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定心肌TLR4 mRNA表达,电镜下观察心肌组织病理改变.结果 治疗组HVHF后1、2、4 h血清TNF-α(μg/L:0.59±0.15、0.51±0.12、0.41±0.10)、IL-6(ng/L:11.08±2.83、9.82±2.58、8.25±2.05)、IL-10(μg/L:57.28±5.93、53.81±5.83、50.67±6.33)的含量显著低于本组成模时[(0.84±0.16)μg/L、(16.97±2.50)ng/L、(70.86±5.43)μg/L]和对照组相应时间点[TNF-α(μg/L):0.75±0.14、0.74±0.11、0.72±0.11,IL-6(ng/L):15.33±3.20、14.66±3.24、14.20±3.33,IL-10(μg/L):71.54±4.73、70.71±4.34、69.35±4.60],差异均有统计学意义(均P<0.01).治疗组较对照组心肌TLR4 mRNA表达明显下调(t=3.58,P<0.01).相关分析显示,TLR4 mRNA表达与循环血中TNF-α、IL-6、IL-10浓度呈正相关(r1=0.785,r2=0.569,r3=0.635,均P<0.05).电镜下观察治疗组心肌病理损伤较对照组减轻.结论 HVHF能下调内毒素诱导休克犬心肌TLR4mRNA 表达,减轻心肌炎症反应和心肌损伤.