重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA与rrs基因突变特征分析

目的分析重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA、rrs基因突变特征及其与氧氟沙星(ofloxacin,Ofx)、卡那霉素耐药(kanamycin,Km)的关系。方法对89株耐多药结核分枝杆菌的Ofx耐药相关基因gyrA和Km耐药相关基因rrs进行序列测定,分析其基因突变特征。结果89株MDR结核分枝杆菌中有50株对Ofx耐药,其中46株(92.00%,46/50)gyrA基因发生突变,突变位点包括74、89、90、91和94位密码子;22株耐Km菌株中,19株(86.36%,19/22)发生rrs基因突变,突变类型均为A1401G。Ofx、Km耐药株的gyrA、rrs基因突变率明显高于相应敏感株的基因突变率,两者之间的差异有统计学意义(χ²=62.937,P<0.001;Fisher双侧P<0.001)。结论gyrA基因90、91、94位密码子突变是重庆市耐多药结核分枝杆菌Ofx耐药的主要机制;rrs基因A1401G突变则是Km耐药的主要原因。     

结核分枝杆菌对氨基糖苷类药物耐药相关基因突变特征分析

目的 分析宁波地区耐多药结核分枝杆菌(Multiple drug-resistant tuberculosis, MDR-TB)不同基因型构成及氨基糖苷类药物耐药相关基因突变特征,为本地区耐多药结核病防控提供科学依据。方法 宁波市疾病预防控制中心2014-2016年耐药监测组共收集106例MDR-TB临床分离株,对其进行3种氨基糖苷类药物卡那霉素(Km)、阿米卡星(Am)、卷曲霉素(Cm)耐药检测。应用RD105缺失基因检测法鉴定北京基因型及非北京基因型菌株。采用DNA直接测序法对所有MDR-TB菌株氨基糖苷类药物耐药相关基因rrs、tlyA、eis、gidB进行测序分析。结果 106株MDR-TB菌株中,北京基因型83株78.3%(83/106),非北京基因型23株(21.7%,23/106)。耐氨基糖苷类药物的菌株中北京基因型10株12.0%(10/83),非北京基因型0株0.0%(0/23)。10例耐氨基糖苷类药物的耐多药菌株中有4株发生耐药基因突变,突变率为40.0%(4/10),96例对氨基糖苷类药物全敏感的耐多药菌株中有24株发生耐药基因突变,突变率为26.7%(24/96),差异无统计学意义(χ²=1.048, P>0.05)。结论 宁波地区MDR-TB中北京基因型与氨基糖苷类药物耐药相关,目前已知的耐药相关基因突变不能完全解释结核分枝杆菌对氨基糖苷类药物耐药的原因。     

江西省结核分枝杆菌耐二线抗结核药的分子学特征

目的 初步明确江西省耐二线抗结核药相关基因突变的特征,评价等位基因特异性多重PCR（multiplex allele-specific polymerase chain reaction,MAS-PCR）检测二线抗结核药耐药性的可行性。 方法 采用DNA测序方法和MAS-PCR技术,对江西省52株耐二线抗结核药的结核分枝杆菌进行耐药相关基因突变位点检测。 结果DNA测序分析：39株耐氧氟沙星（Ofx）菌株中,32株存在gyrA基因错义突变,2株发生gyrB基因错义突变。29株耐卡那霉素（Km）或卷曲霉素（Cm）菌株中,22株为rrs1401位点A→G突变。52株耐二线抗结核药的结核分枝杆菌,40株为北京基因型（76.92%,40/52）,其中17株北京基因型菌株发生gyrA-GAC94GGC突变（42.50%,17/40）,19株北京基因型菌株发生rrs-A1401G突变（47.50%,19/40）。北京基因型与基因突变类型gyrA-GAC94GGC和rrs-A1401G无明显相关性（χ²=1.16、1.92,P值均＞0.05）。MAS-PCR检测Ofx耐药株的敏感度为61.54%（24/39）,检测Km或Cm耐药株的敏感度为79.31%（23/29）。 结论 gyrA基因94位密码子突变是江西省结核分枝杆菌Ofx耐药的主要机制; rrs-A1401G突变则是Km或Cm耐药的主要原因。MAS-PCR方法对于快速检测二线抗结核药的耐药性有一定的临床应用价值。     

宁波地区流动人口耐多药肺结核二线抗结核药物耐药状况及耐药基因突变特征分析

目的 了解宁波地区流动人口耐多药肺结核(multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis,MDR-TB)患者临床分离菌株二线抗结核药物耐药状况及耐药基因突变特征。方法 以2017—2019年浙江省宁波地区结核病耐药监测收集的133例MDR-TB患者作为研究对象(流动人口占42.11%,56/133;户籍人口占57.89%,77/133),采用1%比例法对患者临床分离菌株进行卡那霉素(kanamycin,KAN)、阿米卡星(amikacin,AMK)、卷曲霉素(capreomycin,CAP)、氧氟沙星(ofloxacin,OFX)、左氧氟沙星(levofloxacin, LVX)5种二线抗结核药物的耐药检测。同时采用PCR DNA直接测序法检测rrs、tlyA、eis、gidB、gyrA、gyrB 6个二线抗结核药物耐药相关基因的突变特征。结果 56株流动人口MDR-TB 患者临床分离菌株KAN 耐药率(7.14%,4/56),AMK耐药率(5.36%,3/56),CAP耐药率(1.79%,1/56),OFX耐药率(28.57%,16/56),LVX耐药率(33.93%,19/56)与77株户籍人口患者临床分离菌株KAN 耐药率(7.79%,6/77),AMK耐药率(6.49%,5/77),CAP耐药率(3.90%,3/77),OFX耐药率(31.37%,24/77),LVX耐药率(25.97%,20/77)比较差异无统计学意义(X²_KAN=0.020,P=0.888; X²_AMK =0.074,P=0.786; X²_CAP =0.036,P=0.850; X²_OFX =0.104,P=0.747; X²_XLV =0.990,P=0.320)。56株流动人口MDR-TB 患者临床分离菌株准广泛耐药率(Pre-XDR)(33.93%,19/56),广泛耐药率(XDR-TB)(3.57%,2/56)与77株户籍人口患者临床分离菌株准广泛耐药率(Pre-XDR)(24.68%,19/77),广泛耐药率(XDR-TB)(7.79%,6/77)比较差异无统计学意义(X²_Pre-XDR=1.360,P=0.243;X²_XDR-TB=0.411,P=0.521)。56株流动人口MDR-TB患者临床分离菌株rrs突变率(8.93%,5/56)、tlyA突变率(1.79%,1/56)、eis突变率(3.57%,2/56)、gidB突变率(5.36%,3/56)、gyrA突变率(39.29%,22/56)和gyrB突变率(3.57%,2/56)与77例户籍人口患者临床分离菌株rrs突变率(5.19%,4/77)、tlyA突变率(11.69%,9/77)、eis突变率(0.00%,0/77)、gidB突变率(2.60%,2/77)、gyrA突变率(31.17%,24/77)和gyrB突变率(2.60%,2/77)比较差异无统计学意义(X²_rrs=0.247、X²_tlyA=3.259、X²_eis=0.901、X²_gidB=0.133、X²_gyrA=0.944、X²_gyrB=0.000,均P>0.05)。6个基因的突变类型中,rrs 2种、tlyA 1种、eis 2种、gidB 2种,gyrA 5种、gyrB 4种,均以点突变为主。结论 尽管本地区流动人口MDR-TB患者临床分离菌株二线抗结核药物耐药形势较为严峻,但流动人口可能不是MDR-TB二线抗结核药物耐药防控的重点人群。     

重庆地区耐多药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物耐药的相关基因特征分析

目的 分析重庆地区耐多药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类(FQs)药物耐药的相关基因特征,以及与结核分枝杆菌基因型的相关性。 方法 收集2015年1月至2017年6月重庆市39个区(县)967例耐多药结核病(MDR-TB)可疑患者的所有耐多药(MDR)结核分枝杆菌临床分离株229株,通过微孔板Alamar blue显色法检测4种FQs药物[氧氟沙星(Ofx)、左氧氟沙星(Lfx)、莫西沙星(Mfx)、加替沙星(Gfx)]的耐药性,用PCR测序方法对FQs药物耐药相关基因gyrA、gyrB进行分析,并采用实时荧光定量熔解曲线方法进行北京基因型鉴定。 结果 在229株MDR菌株中,94株(41.0%,94/229)对任一FQs药物耐药。其中,Ofx耐药率最高(41.0%,94/229);Lfx、Mfx耐药率居中,分别为31.4%(72/229)、30.6%(70/229);Gfx耐药率最低(20.1%,46/229)。94株对FQs耐药菌株中,81株(86.2%,81/94)发生gyrA基因突变,第94位密码子突变最常见(60.6%,57/94);10株(10.6%,10/94)发生gyrB基因突变。7株gyrA基因双位点突变均显示为高水平耐药;9株gyrA与gyrB联合突变中,2株为高水平耐药。重庆地区对FQs耐药菌株中北京基因型80株(85.1%,80/94),其中,现代北京基因型占60.0%(48/80)。 结论 重庆地区MDR结核分枝杆菌 对FQs耐药的菌株以现代北京基因型为主,其耐药相关基因突变主要发生于gyrA基因。     

结核分枝杆菌Km基因突变与耐卡那霉素药物的研究

目的　分析结核分枝杆菌(T.M)耐卡那霉素(KM)和(Km)基因突变情况。方法 通过传统梯度药敏试验和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析127株分枝杆菌临床分离株耐KM情况和Km基因的变化。结果 药敏试验卡那霉素耐药率为35.4%(45/127),127株分枝杆菌临床分离株的16S rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。45株耐卡那霉素分离株中,12株(26.6%)Km基因SSCP泳动异常。结论 T.M对抗结核二线药物中的KM药物已出现耐药,其部分耐药原因可能是由于T.M耐KM药物的Km基因突变所致。     

宁波地区耐多药结核分枝杆菌喹诺酮耐药gyr基因突变研究

目的 为阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌(Multiple drug-resistant tuberculosis, MDR-TB)的gyr基因突变特征,深入研究MDR-TB对喹诺酮类药物耐药与gyr基因突变特征的关系。方法 采用1%比例法对MDR-TB进行氧氟沙星药敏检测实验,通过 DNA直接测序法分析MDR-TB的gyr基因突变情况。结果 120株MDR-TB临床分离株中有34株对喹诺酮耐药,总耐药率为28.33%(34/120)。34株耐喹诺酮菌株中,30株gyr基因发生突变,突变率为88.24%(30/34)。30株gyr基因发生突变的菌株中gyrA基因突变有29株,占96.67%(29/30),突变位点包括90、91和94位氨基酸;gyrB基因突变有2株,其中1株均合并gyrA基因突变,占6.67%(2/30),突变位点包括499和502位氨基酸。结论 宁波地区MDR-TB对喹诺酮类药物耐药形势较为严峻,gyrA基因突变与MDR-TB对喹诺酮类药物耐药相关。     

福建省耐多药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物表型耐药与gyrA基因突变特征分析

目的 了解福建省耐多药(Multi-drug resistant, MDR)结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones,FQs)的gyrA基因突变特征,为FQs耐药菌株的快速分子药敏检测提供基础科学数据。方法 收集来自福建省2010-2011年和2008-2009年耐药监测点的所有MDR Mtb临床菌株,采用常规比例法进行FQs敏感性试验。PCR扩增包含gyrA耐药决定区的基因片段,测序后比对分析。结果 共收集到MDR结核分枝杆菌临床菌株119株,经常规药敏试验,氧氟沙星(Ofloxacin,Ofx)的耐药率为26.89%,左氧氟沙星(Levofloxacin,Lfx)耐药率为25.21%,莫西沙星(Moxifloxacin,Mfx)耐药率为11.76%。FQs敏感株gyrA基因未检测到突变。gyrA基因在Ofx耐药菌株的突变率为84.38%(27/32),Lfx耐药菌株的突变率为83.33%(25/30), Mfx耐药菌株的突变率为92.86%(13/14)。gyrA基因突变为点突变,共发现有5种突变类型,以Asp94Gly,Asp94Asn和Ala90Val为主。结论 福建省MDR-Mtb对FQs耐药的主要原因是gyrA基因突变,最常见的突变位于第94位,第90位和第91位密码子。     

MTB对阿米卡星和卡那霉素耐药相关rrs与eis基因突变的研究

本研究搜集了吉林省全部9个地级市结核病医疗机构2014—2017年内1357株结核分枝杆菌分离株。采用比例法进行Am和Km的药物敏感性试验,并对rrs和eis基因进行PCR和测序分析。发现28株同时耐Km和Am,单耐Km者有2株; 其中26株MTB的rrs基因均发生突变,基因突变率为92.86%;6株菌存在eis基因突变,突变率为21.43%。60株对照株未发现基因突变。吉林省MTB对Am和Km存在较高的交叉耐药现象;rrs基因的突变可以作为两者交叉耐药的分子标志,为建立耐Am和(或)Km结核病快速检测技术提供分子基础。     

山东省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的　分析山东省利福平耐药结核菌株rpoB基因突变特点。方法 本研究为回顾性调查,135株样本分别取自1997、2000及2003年的流行病学调查和医院的临床样本。采用PCR直接基因测序法分析rpoB基因突变。结果 135株结核菌中,60株为利福平耐药菌株,其中55株(91.7%)rpoB基因的利福平耐药决定区(RRDR)有突变。突变频率依次为密码子531(60.0%),526(29.1%)和516(7.3%)。1株耐药菌同时发生了少见的3个密码子(511,515,518)的多核苷酸突变。75株敏感菌株中,仅3株(4.0%)有突变,均发生在密码子533,包括一个新发现的突变基因型CTG(Leu)→ATG(Met)。结论 来自山东省结核菌中,利福平耐药表型与rpoB基因突变的符合率为94.1%,并提示密码子533突变与利福平耐药表型相关性较低。     

High levels of resistance to second-line anti-tuberculosis drugs among prisoners with pulmonary tuberculosis in Georgia.

SETTING: Penitentiary system of Georgia. OBJECTIVE: To determine the prevalence of resistance to second-line drugs among prisoners with pulmonary tuberculosis (PTB). DESIGN: Retrospective evaluation of resistance to second-line drugs in tuberculosis (TB) patients treated from 2001 to 2003. RESULTS: The overall observed prevalence of multidrug-resistant TB (MDR-TB) was 14.4% (39/270). The lowest resistance was found for ofloxacin (OFX), which was 2.2% (6/270) overall and 5.1% (2/39) among MDR patients. Isolates from four non-MDR patients who had never received anti-tuberculosis treatment were found to be resistant to OFX. Resistance to kanamycin and capreomycin occurred simultaneously only among MDR patients and was observed in 17/39 cases (43.6%). High rates of resistance to > or =2 second-line drugs (18/39, 46.2%) and > or =3 second-line drugs (10/39, 25.6%) were observed among all MDR-TB patients, reaching respectively 59.3% and 29.6% among previously treated MDR-TB cases. Only one patient was found to be resistant to four second-line drugs. No extensively drug-resistant TB (XDR-TB) according to the latest definition was detected. CONCLUSION: Our findings reveal a serious threat to the TB control efforts in the study population.     

耐多药肺结核患者抗二线结核药的耐药分析

目的了解耐多药肺结核患者对二线抗结核药物的耐药情况。方法对我院住院的341例耐多药肺结核患者二线抗结核药物的耐药情况进行分析。结果 341例MDR-TB对左氧氟沙星、丙硫异烟胺、力克肺疾、对氨基水杨酸、丁胺卡那霉素、卷曲霉素的总耐药率依次为49.9%、26.4%、24.9%、23.4%、18.5%、15.8%。复治组对二线抗结核药物的耐多药率明显高于初治组,不合理治疗是形成MDR-TB或XDRTB的主要原因。结论耐多药肺结核患者对二线抗结核药物耐药情况严重,要引起重视。     

上海地区结核分枝杆菌分离株对一线和二线抗结核药物的耐药性分析

目的 了解结核分枝杆菌分离株对一线和二线抗结核药物的耐药性。方法 收集2008年1月至2009年3月采用Bactec-MGIT 960检测的518株结核分枝杆菌,分析药物敏感试验结果。数据行x2检验。结果518株结核分枝杆菌菌株对一线和二线抗结核药物全敏感168株,占32.44％;耐药350株,占67.56％;单耐药72株,占13.90％;耐两种药24株,占4.63％;耐三种及以上药254株,占49.03％。217株为耐多药菌株,占所有病例的41.89％。65株为广泛耐药菌株,占所有病例的12.55％,占耐多药菌的29.95％。在一线药物中,耐异烟肼有278株,耐药率达53.67％;二线药物中,耐氧氟沙星有206株,耐药率达39.77％。433例复治患者任一药物耐药率、耐多药率和广泛耐药率分别为72.05％、46.42％和13.86％,均高于初治患者的44.70％、18.82％和5.88％（x2 =24.253,x2=22.229,x2=4.117,均P＜0.01）。结论 上海地区结核病专科医院结核分枝杆菌分离株的耐药率高,且耐多药与广泛耐药率也较高,在复治患者中耐药情况更严重。     

Second-line drug resistance in multidrug-resistant tuberculosis cases of various origins in the Netherlands

SETTING: The Netherlands. OBJECTIVE: To investigate the frequency of resistance to second-line drugs among multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) cases and its correlation with patients' geographic origin. DESIGN: Retrospective laboratory database study of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis complex strains isolated in the Netherlands between January 1993 and October 2007. RESULTS: We found 153 patients with MDR-TB, of whom 18 (12%) were native Dutch. Complete second-line drug susceptibility testing was performed for 131 MDR-TB patients. Resistance to second-line drugs was noted in primary samples of 28 (21%) MDR-TB patients. Resistance to a single second-line drug was most frequent (24/28 [86%]; 9 to prothionamide [PTH], 6 to para-aminosalicylic acid, 4 to amikacin [AMK], 4 to ciprofloxacin and 1 to cycloserine). Four MDR-TB patients had strains resistant to multiple second-line drugs; two were extensively drug-resistant M. bovis. In MDR-TB patients of European and Central Asian origin, resistance to second-line drugs was most frequent and involved the widest range of drugs. PTH resistance was frequent among African and American MDR-TB patients, while AMK resistance was frequent among South-East Asians. CONCLUSION: Resistance to second-line drugs is infrequent among MDR-TB patients in the Netherlands. Most second-line drug resistance is recorded among immigrants, with substantial differences in second-line drug resistance in MDR-TB patients originating from different geographical areas.     

中国耐多药结核分枝杆菌二线抗结核药物敏感性分析

目的分析中国耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）菌株对二线抗结核药物的敏感性,为耐多药结核病防治政策的制定提供科学依据。方法从全国2007-2008年耐药基线调查收集的菌株中选取2008年4-7月期间耐药基线调查点收集的126株MDR菌株,对其进行2种一线抗结核药物（链霉素和乙胺丁醇）和7种二线抗结核药物（氧氟沙星、卡那霉素、卷曲霉素、乙硫异烟胺、丙硫异烟胺、环丝氨酸和对氨基水杨酸）的敏感性进行检测,分析对不同药物耐药率以及交叉耐药的情况。结果一线药物链霉素和乙胺丁醇,总体耐药率分别为73.0%（92/126）和58.7%（74/126）;对于二线药物,氧氟沙星和乙硫异烟胺耐药率最高,分别为25.4%（32/126）和23.0%（29/126）;其次为卡那霉素和环丝氨酸,其耐药率分别为17.5%（22/126）和13.5%（17/126）;最后为卷曲霉素、丙硫异烟胺和对氨基水杨酸,其耐药率均为3.2%（4/126）。初治患者对卡那霉素（χ²=20.025,P<0.01）和环丝氨酸（χ²=6.558,P=0.017）的耐药率(卡那霉素: 20/60, 33.3%; 环丝氨酸: 13/60,21.7%)显著高于复治患者(卡那霉素: 2/66, 3.0%; 环丝氨酸: 4/66,6.1%)。此外,卡那霉素和卷曲霉素,乙硫异烟胺和丙硫异烟胺间均存在单向交叉耐药,在对卷曲霉素耐药的4株中,有3株同时对卡那霉素耐药;4株对丙硫异烟胺耐药菌株均同时对乙硫异烟胺耐药。结论我国耐多药结核分枝杆菌菌株对二线抗结核药物具有较高的耐药率,特别是氧氟沙星和乙硫异烟胺,这对我国结核病控制工作,特别是耐多药结核病控制工作的实施带来严峻的挑战。