白藜芦醇在大鼠肝微粒体中的代谢动力学研究

目的研究白藜芦醇在大鼠肝微粒体中的代谢特征和参与代谢的细胞色素P450(CYP)亚型。方法将白藜芦醇与地塞米松(DEX)、苯巴比妥(PB)诱导的大鼠肝微粒体进行体外共孵育,并且用不同浓度的CYP3A1特异性抑制剂酮康唑(Ket)在空白肝微粒体中共孵育,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)方法测定孵育后白藜芦醇的浓度。观察Ket对白藜芦醇代谢的影响及参与其代谢的CYP酶。结果白藜芦醇在DEX、PB诱导组的代谢明显加快(P<0.01),Ket能够显著抑制白藜芦醇代谢,并呈剂量依赖性。结论白藜芦醇具有酶促动力学代谢特性,CYP3A主要参与白藜芦醇的代谢,CYP2B可能参与其部分代谢。     

人肝微粒体中西尼地平及其代谢物的HPLC测定法及代谢动力学

目的　建立人肝微粒体中西尼地平及其脱氢代谢物的 HPLC测定法 ,并用本法研究西尼地平在人肝微粒体中代谢的动力学。方法　色谱柱为 Hypersil C1 8柱 (2 5 0 mm× 4.6mm ID,5μm) ,流动相为乙腈 -甲醇 -0 .0 1 mol/ L四丁基溴化铵溶液 (5 5∶ 5∶ 40 ,V/ V/ V) ,柱温 5 0℃ ,检测波长 UV 2 3 8nm,样品用乙醚 -正己烷 (1∶ 1 ,V/ V)提取。用人肝微粒体研究西尼地平的代谢。结果　本法的回收率为 90 .62 %～ 1 0 9.90 % ,西尼地平和其脱氢代谢物的日间、日内 RSD分别为 4.70 %～ 8.3 5 %和 3 .88%～ 8.1 1 % ,西尼地平及其脱氢代谢物的浓度分别在 0 .77μg/ ml～ 98.2 4μg/ ml和 0 .1 3 μg/ ml～ 5 .3 6μg/ ml范围内与峰面积呈良好的线性相关性。在温孵时间为1 0～ 60 min,微粒体蛋白浓度为 1 mg/ ml时 ,西尼地平呈线性消除 ,而其脱氢代谢物呈线性增加。结论　西尼地平在人肝微粒体内被迅速代谢 ,人肝 P45 0酶参与了西尼地平的脱氢氧化     

HPLC-TOF/MS分析五味子中3个木脂素类成分在大鼠肝微粒体中的代谢速率及代谢产物

目的 研究五味子中3个木脂素类成分五味子甲素、五味子醇乙、五味子酯甲在肝微粒体内的代谢速率,鉴别这3个木脂素类成分在肝微粒体中的代谢产物。方法 体外培养大鼠肝微粒体代谢模型,采用HPLC-MS法测定3个木脂素类成分的含量,并计算代谢速率。液相条件采用Agilent Zorbax SB-C₁₈色谱柱（3.0 mm×100 mm,3.5 μm）,60%的乙腈和40%的水等度洗脱,进样量5 μL,流速0.8 mL/min,柱温30℃,运行时间30 min。质谱ESI离子源选择离子监测,正离子模式,干燥气温度350℃,毛细管电压4 000 V,干燥气流速9.0 L/min,裂解气电压90 eV。采用HPLC-TOF/MS分析鉴别木脂素类成分的代谢产物,质谱参数与HPLC-MS的参数相同。结果 五味子甲素、五味子醇乙、五味子酯甲在0.010 22～2.044、0.044 24～2.212、0.042 32～2.116 μg/mL的线性范围内,线性关系良好（r>0.999 0）;方法学考察结果表明,日内、日间精密度RSD%均<5%,基质效应>75%,提取回收率>80%。3个木脂素类成分在大鼠肝微粒体中代谢的半衰期分别为：五味子甲素0.721 0 min,五味子醇乙43.58 min,五味子酯甲86.63 min,采用HPLC-TOF/MS分析鉴别出五味子甲素的7个代谢产物、五味子醇乙的6个代谢产物、五味子酯甲的4个代谢产物。结论 五味子木脂素类成分在肝微粒体中易发生代谢,这将影响木脂素类成分的生物利用度及药效。     

钩吻素子在猪及大鼠肝微粒体中代谢表征的研究

目的 研究钩吻素子在猪和SD大鼠2种不同种属肝微粒体体外代谢差异,评价它们对钩吻素子的代谢作用,初步揭示猪肝脏细胞色素P450酶系的解毒作用. 方法 用相同蛋白浓度的猪与SD大鼠的肝脏微粒体与钩吻素子共同孵育,用高效液相色谱法对二者孵育液进行检测,检测条件:依利特色谱柱150 mm×4.6 mm,乙腈∶0.1％三-乙胺(20∶80)洗脱,柱温30°C,流速1.0 mL/min,检测波长为254 nm,进样量为20 μL. 结果 在孵育条件相同的情况下,钩吻素子与猪肝微粒体的孵育液在21 min出现了一个色谱峰,且钩吻素子峰面积有所减小,而钩吻素子与大鼠肝微粒体孵育液中未出现任何物质,且峰面积未有变化. 结论 在相同孵育条件下,猪肝微粒体可以代谢钩吻素子,而SD大鼠却无此现象.     

香柑内酯在不同种属肝微粒体中的代谢差异研究

[目的]研究香柑内酯在7种不同肝微粒体中的代谢差异。[方法]采用肝微粒体体外孵育的方法研究香柑内酯在7种不同种属肝微粒体中的代谢差异。使用四级杆飞行时间液质联用（Q-TOF-LC/MS）法检测分析代谢产物。[结果]香柑内酯与7种肝微粒体孵育后共检测出4种不同的代谢产物,通过分析代谢产物的种类及含量,香柑内酯在比格犬和大鼠肝微粒体中的代谢与在人肝微粒的代谢较为相近。[结论]通过研究发现,香柑内酯在比格犬和大鼠肝微粒体中的代谢与在人肝微粒体中的代谢较为接近。     

多噻烷对肝微粒体和胞质中酶活性的影响及其Ⅰ相代谢产物的急性毒性作用

本文研究多噻烷对大鼠肝脏微粒体和胞质中尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶、谷胱苷肽S转移酶、脱甲基酶和细胞色素P-450活性的影响，以及多噻烷经P-450体外代谢产物对小鼠经口急性毒性。结果表明染毒剂量为25和50mg／kg体重的多噻烷能不同程度地诱导上述酶类，酶活性为对照组的1.07～1.66倍。多噻烷体外代谢产物对小鼠的经口LD_(50)为1513.6mg／kg，属低毒，远低于多噻烷本身对小鼠的经口LD_(50)(145.8mg/kg)。     

Liguzinediol在不同种属肝微粒体中代谢产物的比较研究

目的 比较研究不同种属间liguzinediol的体外代谢产物。方法 建立liguzinediol及其体外代谢产物的LC-MS/MS检测方法,采用肝微粒体温孵法研究liguzinediol在大鼠、犬、猴、人等多种属肝微粒体中的代谢产物。结果 liguzinediol在肝脏可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,并且在大鼠、犬、猴、人肝微粒体温孵体系中均孵育有氧化产物和葡萄糖醛酸结合产物。结论 liguzinediol在大鼠、犬和猴等动物的肝微粒体中的Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物与人肝微粒体基本一致,该研究结果可为liguzinediol临床前安全性评价的实验动物选择提供依据。      

人β防御素4基因的合成及其真核表达载体的构建

人类β防御素（human13defensin，HBD）是一类具有广谱抗微生物活性的小分子抗菌肽，具有杀伤细菌、真菌、病毒、原虫、肿瘤细胞以及免疫调节等多重活性，而且其作用机制独特，至今尚未发现病菌株对其产生耐药性，因此成为国内外众多学者研究的热点。目前发现的HBD有4种，即HBD1～4。已证实HBD4对多种病原菌有杀灭作用，尤其对现在耐药严重的肉葡萄球菌和绿脓杆菌有强大的杀菌作用，在上皮及黏膜尤其是呼吸道黏膜的防御、抵抗病原微生物感染方面起着重要作用。本研究拟通过人工合成HBD4基因并构建其真核表达载体，为HBD4基因的转染和表达以及抗菌治疗的研究奠定基础。     

HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异

目的 采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）建立R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔在肝微粒体孵育体系中的含量测定方法,并分别比较普萘洛尔不同对映体在大鼠、犬、猴以及人4种肝微粒体中的代谢特征。方法 分别将R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔溶解在由烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）启动孵育的不同种属的肝微粒体中,在孵育不同的时间后加入乙腈终止反应。使用电喷雾离子源（ESI）,以卡维地洛为内标,在多反应监测模式（MRM）下进行正离子扫描,分别测定各孵育体系中R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔的浓度。以孵育0 min时不同构型的普萘洛尔的质量浓度为参照,分别计算R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔在不同肝微粒体样品中的药物剩余百分比和体外代谢半衰期和固有清除率。结果 普萘洛尔的线性范围为0.05～10.00μg/mL,定量下限为0.05μg/mL;日内、日间精密度的RSD%均小于13%。在4个种属的肝微粒体孵育体系中,R-（+）-普萘洛尔在大鼠肝微粒体中代谢快,在猴肝微粒体中次之,在犬和人肝微粒体中代谢慢,体外消除半衰期依次为大鼠<猴&l...     

芦荟大黄素的体外肝微粒体代谢动力学和代谢酶表型研究

目的 研究芦荟大黄素在人肝微粒体(HLM)和大鼠肝微粒体(RLM)的代谢特征,并确定其代谢酶表型.方法 将芦荟大黄素分别与加入不同辅酶因子的人和大鼠肝微粒体孵育,LC-MS/MS法定量分析芦荟大黄素的剩余含量,考察芦荟大黄素的代谢稳定性和酶动力学.将芦荟大黄素分别与一组重组人源CYP同工酶(CYP1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、3A4)孵育,或在HLM中加入各同工酶的特异性抑制剂,确定其CYP酶代谢表型.结果 在HLM和RLM中,芦荟大黄素均可发生依赖于NADPH的Ⅰ相代谢消除.经加热法确定,Ⅰ相代谢主要由CYP酶介导,30 min的代谢百分率分别为85.8%和81.7%,消除半衰期t1/2分别为(10.3±0.3)min和(11.5±3.3)min;内在清除率CLint分别为(420.1±10.9)和(573.4±188.2)ml/(min·kg);表观酶动力学参数Km分别为(2.4±0.9)和(3.9±1.4)μmol/L,Vmax分别为(1492±170.5)和(2783±595.8)nmol/(min·g protein).在RLM中还观察到芦荟大黄素的葡糖醛酸结合反应,30 min代谢转化率为38.5%,消除半衰期t1/2为31.6 min,CLint为(197.1±15.5)ml/(min·kg).CYP酶代谢表型研究表明,芦荟大黄素的肝微粒体代谢由多个CYP同工酶介导,其中CYP1A2、3A4、2B6和2C9的整体归一化贡献率分别为35.4%、21.9%、6.6%和6.8%.结论 芦荟大黄素在HLM和RLM中,主要发生多个CYP同工酶介导的Ⅰ相代谢消除,其中CYP1A2和3A4的代谢贡献率>20%;HLM和RLM代谢存在一定的种属差异,RLM还存在葡糖醛酸结合反应.     

肝硬化患者糖代谢异常的初步研究

目的　探讨肝硬化患者糖代谢障碍的机制。方法　对 32例肝硬化患者和 1 0例正常对照进行空腹及餐后血糖 ,空腹胰岛素及胰高血糖素检测和比较。结果　肝硬化组存在糖耐量异常 ,空腹及餐后血糖 ,空腹胰岛素及胰高血糖素均显著高于正常对照组 (P <0 .0 5) ,随着肝硬化的加重 ,Child分级的增加 ,糖代谢障碍更加明显 (P <0 .0 5)。结论　肝硬化患者存在糖代谢障碍 ,减轻胰岛素抵抗 ,降低高胰岛素血症及高胰高血糖素血症可能是预防和治疗肝源性糖代谢紊乱的关键。     

利拉鲁肽对人HepG2肝细胞脂代谢的影响及作用机制

目的:建立HepG2肝细胞脂肪变性模型,了解利拉鲁肽是否可改善HepG2细胞内脂代谢状态,并对相关机制进行初步探讨?方法:软脂酸钠诱导建立HepG2肝细胞脂肪变性模型,并给予利拉鲁肽干预?油红O染色确定HepG2肝细胞脂肪变性模型的建立?Western blot检测HepG2 中脂质合成和分解关键酶蛋白水平的变化情况及HepG2 中PI3K信号通路活化情况?采用PI3K信号通路抑制剂预处理HepG2 细胞,观察PI3K信号通路在软脂酸钠诱导建立HepG2肝细胞脂肪变性中的作用?结果:油红O染色结果显示模型建立成功?Western blot结果显示,软脂酸钠诱导可显著升高HepG2中固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein1c,SREBP1c)?脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)的蛋白水平,降低脂肪甘油三酯脂酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)的蛋白水平(P < 0.01),并上调HepG2中PI3K信号通路活化水平;与软脂酸钠组相比,利拉鲁肽干预可显著降低HepG2中SREBP1c?FAS 的蛋白水平,升高ATGL的蛋白水平,并抑制HepG2中PI3K信号通路活化水平;阻断HepG2中的PI3K信号通路后,软脂酸钠诱导HepG2脂肪变性的能力显著降低(P < 0.01)?结论:利拉鲁肽可通过调节HepG2中的PI3K信号通路,进而改善HepG2细胞的脂代谢情况?     

经典非转流原位肝移植无肝期循环和氧代谢观察

目的:观察非转流原位肝移植患者无肝期循环和氧供氧耗改变并分析评价处理方法。方法:经典非转流原位肝移植患者20例行静吸复合全麻,麻醉前左桡动脉穿刺置管监测血压,气管插管后经右颈内静脉置入六腔Swan-ganz导管连续监测体循环和肺循环血流动力学参数、中心血温等。采集下腔静脉阻断前5 min(T0)、阻断后5 min(T1)、阻断后20 min(T2)、开放前5 min(T3)桡动脉和肺动脉血行血气分析,分别记录氧分压(PaO2、PvO2)、血氧饱和度(SaO2、SvO2),记录各时点桡动脉平均血压(MAP)、心率(HR)、中心静脉压(CVP)、心输出量(CO)。计算心脏指数(CI)、每搏指数(SVI)、体循环阻力(SVR)、动静脉血氧含量(CaO2,CvO2)、氧供量(DO2I)、氧耗量(VO2I)和氧摄取率(ERO2)。结果:T1与T0比较CI、SVI、MAP明显下降(P<0.01),SVR升高(P<0.05);DO2I降低(P<0.01),VO2I和ERO2增加(P<0.01)。阻断期间CO、CI呈下降趋势;T2时DO2I、VO2I比T1下降(P<0.01)。结论:经典非转流手术患者的无肝期处理不但要考虑循环改变,还要注意氧供需平衡的变化,避免出现失衡,以保证患者的安全。     

Effect of chronic intermittent hypoxia on theophylline metabolism in mouse liver

Background Chronic intermittent hypoxia (CIH) has been associated with abnormalities in the liver,which is the most important organ for drug metabolism.This study aimed to investigate the effect of CIH...     

FP+艾迪注射液联合125I粒子植入治疗中晚期原发性肝癌的临床研究

目的 观察5-氟尿嘧啶和顺铂(FP)联合艾迪注射液联合125I粒子植入治疗中晚期原发性肝癌的临床疗效.方法 以唐山市人民医院2012年2月至2015年7月收治的原发性肝癌患者95例作为研究对象,按随机数表法分为观察组(n=50)和对照组(n=45).对照组患者采取FP联合125I粒子植入治疗,观察组在对照组基础上联合艾迪注射液进行治疗,时间2个疗程.比较两组患者临床缓解率、治疗前后KPS评分、外周血白细胞计数、不良反应发生率,以及1年和2年生存率.结果 治疗后,观察组患者的临床缓解率为36.0%,明显高于对照组的17.8%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组与对照组患者治疗前的KPS评分分别为(72.2±4.1)分、(72.4±4.4)分,外周血白细胞计数分别为(6.3±1.9)×109/L、(6.1±2.2)×109/L,组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组与对照组患者的KPS评分分别升高至(85.3±5.0)分、(79.3±5.2)分,外周血白细胞计数分别减少至(5.0±1.6)×109/L、(3.1±1.3)×109/L,较治疗前均改善明显,且观察组治疗后的KPS评分、外周血白细胞计数均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 FP+艾迪注射液联合125I粒子植入治疗中晚期原发性肝癌能明显提高临床缓解率与KPS评分,抑制白细胞减少,生存时间得以延长,值得临床推广应用.     

2型糖尿病并脂肪肝与血脂紊乱的关系探讨

目的　探讨 2型糖尿病并脂肪肝患者与脂代谢紊乱之间的关系。方法　对 60例 2型糖尿病并脂肪肝和 5 2例 2型糖尿病不并有脂肪肝病例的血脂谱 ,空腹血糖 (FPG ) ,餐后 2小时血糖 ( 2hPG) ,空腹胰岛素 (FINS)进行测定 ,计算体重指数 (BMI)及胰岛素敏感指数 (ISI)。结果　 2型糖尿病并脂肪肝与不并脂肪肝相比 ,甘油三脂 (TG) ,低密度脂蛋白胆固醇 (LDL -C) ,FINS均升高 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,而ISI明显降低 (P <0 .0 1)、脂蛋白a(Lp(a)降低(P <0 .0 5 )。结论　 2型糖尿病并脂肪肝比不并脂肪肝者存在明显脂代谢紊乱及胰岛素抵抗     

辛基酚对5-羟色胺转运及受体通路的影响

目的 通过观察人肝7702细胞暴露于辛基酚(OP)后5-羟色胺(5-HT)转运体SERT、5-HT3b受体表达以及5-HT水平的变化,探讨OP对5-HT转运通路和受体结合通路的影响.方法 实验分5个组,分别为OP高(5.0μg/L)、中(1.0μg/L)、低(0.2μg/L)剂量组、盐酸氟西汀组和空白对照组,体外细胞培养48 h,采用ELISA试剂盒检测细胞上清液中5-HT含量的变化,运用实时荧光定量PCR法检测转运体SERT及5-HT3b受体的表达.结果 中、高剂量组细胞上清液中5-HT含量高于空白对照组(P＜0.05),细胞中5-HT3B受体的表达降低(P＜0.05);低、中、高剂量组细胞中SERT的表达均低于空白对照组(P＜0.05);与盐酸氟西汀组检测结果一致.结论 OP可引起5-HT再摄取障碍,同时减少5 HT.受体的表达,对机体5-HT代谢网络的转运通路及受体结合通路产生毒效应作用.     

新药Ⅰ期临床耐受性试验中不良事件的评价方法

目的：对新药Ⅰ期临床耐受性试验中不良事件监察的指标、评价方法、结果判定进行探讨。方法：通过对盐酸丙哌维林、两种格列美脲等三种新药单剂量口服的Ⅰ期临床耐受性试验,观察、分析其不良事件。结果：此三种新药在常规口服剂量时,有良好的耐受必性,仅有部发患出现轻度药物不良反应。结论：新药Ⅰ期临床耐受性试验中不良事件评价对发现新药不良反应苗头具有重要意义。     

注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响

目的 研究注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响。方法 将SD大鼠分成盐酸头孢他美给药组和生理盐水空白组,每组6只,雌雄各半,给药组尾静脉注射盐酸头孢他美50 mg/(kg·d),连续给药7 d,每天2次。HPLC法同时测定CYP450的3种同工酶特异性探针底物在SD大鼠肝微粒体内代谢产物生成量和原型探针底物降解量,判断酶亚型活性变化。分析柱Diamonsil C₁₈ (150 mm×4.6 mm,5 μm),流速1.0 mL/min。CYP1A2代谢样品测定条件为甲醇(0.1%甲酸)(A)-水(0.1%甲酸)(B),0~5 min: 18%A,5~10 min: 18%~60%A,10~15 min: 60%A,检测波长为247 nm;CYP3A4代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(0.02%甲酸)(B),0~11 min: 40%~60%A,检测波长为223 nm;CYP2E1代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(B),0~10 min: 37%~75%A,检测波长为287 nm。结果 探针底物及其代谢产物在测定浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 7),精密度RSD<6％(n=5),提取回收率83.2%～97.5%。SD大鼠连续注射给予盐酸头孢他美后,CYP3A4的活性与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),可能存在诱导作用;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05)。结论 静注给予盐酸头孢他美能诱导SD大鼠肝微粒体CYP3A4,对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用。提示经CYP3A4 代谢的药物在临床上与注射用盐酸头孢他美合用时,可能存在潜在药物-药物相互作用。