H1N1嵌合冷适应疫苗株的构建及其生物学特性分析与鉴定

目的 应用反向遗传技术构建以B型流感病毒冷适应株为骨架表达季节性流感病毒H1N1 HA蛋白的嵌合疫苗株。方法 将B型流感病毒冷适应株B/Vienna/1/99的HA片段胞外区替换为H1N1(A/Victoria/2570/2019)的HA蛋白,将重组质粒与骨架株的其余7个质粒共转染293T细胞,拯救H1N1嵌合疫苗株。对重组病毒株进行血凝鉴定、RT-PCR鉴定、电镜鉴定、一步生长曲线绘制以及小鼠安全性评价。结果 成功拯救出H1N1嵌合流感病毒株,命名为rA/B-H1-Vic。经测序鉴定其序列与预期一致,并且在电镜下观察到流感病毒粒子的典型特征。H1N1嵌合流感病毒株血凝效价最高达2⁵,在MDCK细胞上的病毒滴度为10^4.5 TCID₅₀/mL,在鸡胚中的病毒滴度为10^8.36EID₅₀/mL。分别以10⁶ EID₅₀和10⁵ EID₅₀剂量鼻腔接种小鼠,其体重与对照组相比无明显下降,小鼠存活...     

狂犬病两株不同毒力克隆株病毒的神经毒力和全长基因序列比较

目的 对2株毒力不同的狂犬病病毒克隆株(CTN181-3和CTN181-12)进行神经毒力和全长基因序列的比较。方法 分别对2株病毒用10、14和21日龄小鼠脑内接种,测定小鼠的致死力(LD₅₀);同时用空斑法测定2株病毒的病毒滴度(PFU),以lgPFU/lgLD₅₀比较2株病毒的毒力差异;分别对2株病毒进行全基因序列测定并分析,找出毒力差异关键基因位点。结果 2株病毒对10、14和21日龄小鼠的lgPFU/lgLD₅₀,CTN181-3株为0.07、3.40和6.60,CTN181-12株为<-0.9、<-0.6和1.04。全基因序列分析表明,二者共有8个核苷酸和6个位点的氨基酸存在差异。结论 CTN181-3株的神经毒力明显低于CTN181-12株,两者间6个氨基酸的差异是其毒力差异的分子基础。     

射频消融联合TACE治疗原发性肝癌患者疗效及对外周血T细胞亚群的影响

目的 探讨射频消融联合TACE治疗原发性肝癌患者的疗效及其对外周血T细胞亚群的影响。方法 2014年1月~2016年2月间于我院接受TACE治疗的原发性肝癌患者97例,按照TACE术后是否接受射频消融治疗,将患者分为联合组52例和TACE组45例。采用ELISA法检测血清细胞因子。对两组患者的治疗效果、治疗前后T细胞亚群变化情况以及治疗后生存质量进行比较。结果 联合组总有效率为67.31%,显著高于TACE组的40.00% （P<0.05）;联合组疾病控制率为90.38%,显著高于TACE组的73.33%（P<0.05）;联合组治疗后3个月外周血CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞、CD4⁺/CD8⁺比值分别为（68.40±10.20）%、（45.76±6.83）%和（1.96±0.31）,均明显高于TACE组【（56.14±6.75）%、（33.27±5.16）%和（1.21±0.22）,P<0.05】,联合组CD8⁺T细胞百分比为（22.08±2.55）%,显著低于TACE组【（28.42±3.97）%,P<0.05】;联合组患者治疗后3个月外周血IL-6、IL-8和TNF-α水平分别为（129.45±67.14） pg/mL、（0.49±0.13） ng/mL和（134.78±88.20） pg/mL,均明显低于TACE组【（165.30±65.91）pg/mL、（0.72±0.20） ng/mL和（200.43±84.02）pg/mL,P<0.05】;联合组患者生活质量改善率为55.77%,显著高于TACE组的40.00%（P<0.05）,联合组患者并发症发生率为73.08%,与TACE组的71.11%相比无统计学差异（P>0.05）。结论 射频消融联合TACE治疗原发性肝癌患者近期疗效较好,可改善患者免疫功能,提高生存质量。     

猫用高效狂犬病灭活疫苗研究

目的研制水包油新型佐剂狂犬病疫苗开展猫的免疫试验。方法利用BHK-21细胞培养狂犬病病毒鼬獾源性JX04-45株,病毒滴度达到10^7.5 TCID₅₀/mL以上的病毒培养物用于灭活和疫苗制备,佐剂为新型水包油型;通过本实验室建立的荧光抗体病毒中和试验(FAVN)测定疫苗效力和猫免疫后的中和抗体,并进行了攻毒试验,评价本疫苗免疫效果。结果一个剂量的疫苗免疫小鼠后FAVN方法测定的疫苗效力≥3.0 IU/剂量;水包油佐剂型狂犬病灭活疫苗免疫猫后14 d时无不良反应,FAVN测得其诱导的中和抗体水平平均达16.04±4.29 IU/mL,28 d平均达37.13±6.12 IU/mL,56 d为21.01±7.61 IU/mL。180 d为6.71±3.44 IU/mL,360 d为2.66±2.01 IU/mL。至15个月时,咬肌攻毒10⁶MIC LD₅₀狂犬病病毒BD06株,观察90 d试验组无一死亡,对照组全部死亡。结论本疫苗诱导长达1年的免疫保护,可扩大安全评价和临床试验,以验证其实用价值。     

家蝇抗菌肽MAF-1A体外抗甲型流感病毒活性及机制研究

目的 探讨家蝇抗菌肽MAF-1A体外抗甲型流感病毒(IAV)活性及其潜在机制。方法 通过观察CPE、MTT法及qRT-PCR评价MAF-1A体外抗IAV活性,采用MTT法测定MAF-1A对MDCK细胞的毒性;利用透射电镜(TEM)技术、血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验进一步分析MAF-1A抗IAV的作用机制。结果 MAF-1A对IAV 的半数有效浓度(EC₅₀)为(89.8±2.97)μg/mL,而对 MDCK 细胞的毒性较小;MAF-1A可直接破坏IAV形态结构的完整性;浓度为1.56 μg/mL的MAF-1A即可抑制IAV引起的红细胞凝集;对神经氨酸酶具有抑制作用,IC₅₀为(134.7±10.31)μg/mL。结论 抗菌肽MAF-1A具有体外抗IAV活性,除能直接破坏IAV的结构外,还可能通过与血凝素 HA1 亚基结合、抑制神经氨酸酶的活性而阻止IAV的感染,提示MAF-1A具有多靶点抗IAV的作用。     

抗菌肽MAF-1A衍生物体外抗白念珠菌生物膜活性及机制研究

目的 探讨抗菌肽MAF-1A衍生物体外抗白念珠菌生物膜活性及潜在机制。方法 采用微量稀释法检测MAF-1A衍生物对白念珠菌的MIC、MFC;通过扫描电镜等方法观察MAF-1A衍生物对白念珠菌生物膜形态学的影响;以XTT法测定MAF-1A衍生物对不同阶段生物膜活性的影响及生物膜 80% 抑制浓度(SMIC₈₀);采用流式细胞术、激光共聚焦显微技术、qRT-PCR等分析MAF-1A衍生物抗白念珠菌生物膜的作用机制。结果 MAF-1A衍生物对白念珠菌的MIC、MFC及SMIC₈₀均低于模板肽,分别为62.5 μg/mL、125 μg/mL和62.5~125 μg/mL。MAF-1A衍生物可明显抑制白念珠菌的黏附和菌丝形成,且抑制作用呈剂量依赖性;可使菌细胞黏附及菌丝形成相关基因(ALS3、HWP1、SUN41、UME6)的mRNA表达量降低(t_UME6=12.42,P<0.001;t_ALS3=12.20,P<0.001;t_SUN41=7.206,P<0.001;t_HWP1=22.52,P<0.001);可使形成中的生物膜和成熟生物被膜活性明显降低(t₂₅₀=3.680,P<0.05;t₅₀₀=4.153,P<0.05;t₁₀₀₀=4.934,P<0.05;t₂₅₀=0.5335,P<0.05;t₅₀₀=1.504,P<0.05;t₁₀₀₀=6.431,P<0.05)。62.5 μg/mL浓度的MAF-1A衍生物即可直接破坏白念珠菌成熟生物膜结构,引起成熟生物膜的细胞凋亡、ROS含量明显增加,线粒体膜电位显著降低。 结论 MAF-1A衍生物具有较好的体外抗白念珠菌生物膜活性,不仅能通过抑制细胞黏附、菌丝形成来干扰生物膜的早期形成,还能通过直接损伤以及ROS累积、线粒体膜电位去极化所引发的细胞凋亡来破坏成熟生物膜。     

miR-363靶向调控E2F3表达影响HepG2细胞增殖和凋亡研究*

目的 探讨微小RNA-363（miR-363）靶向调控E2F转录因子3（E2F3）的表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养HepG2细胞,采用Lipofectamine法将miR-363抑制剂或其阴性对照转染到HepG2细胞,继续培养48 h,收获细胞,采用四噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖率,使用流式细胞术法检测细胞凋亡率,采用实时荧光RT-PCR法检测HepG2细胞miR-363 mRNA水平,采用Western Blot法检测HepG2细胞E2F3、BAX和Caspase-3蛋白表达水平。结果 对照组HepG2细胞增殖率为（96.4±9.7)%,显著高于抑制剂处理组【（72.3±6.5）%,P<0.05】,凋亡率为（8.2±1.4）%,显著低于抑制剂处理组【（9.7±0.8）%,P<0.05】;对照组HepG2细胞miR-363 mRNA相对水平为（1.0±0.1）,显著高于抑制剂处理组【（0.6±0.2）,P<0.05】,E2F3蛋白表达量为（1.0±0.1）,显著高于抑制剂处理组【（0.6±0.1）,P<0.05】,而对照组HepG2细胞Bax和Caspase-3蛋白表达量分别为（0.4±0.0）和（0.5±0.1）,均显著低于抑制剂处理组【（0.6±0.1）和（0.7±0.0）,P均<0.05】。结论 miR-363可靶向调控E2F3的表达,抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡。本研究结果为肝癌靶向治疗提供了一定的理论依据。     

呼肠孤病毒空斑检测方法建立

目的 建立呼肠孤病毒空斑检测方法,为进一步研究该病毒奠定基础。方法 通过Western Blot、免疫荧光检测纳尔逊海湾正呼肠孤病毒Miyazaki病毒株感染L929细胞和BSR细胞情况,病毒RNA水平凝胶电泳验证Miyazaki病毒株核酸成分。建立呼肠孤病毒空斑检测方法,计算病毒滴度。结果 Miyazaki病毒株能成功感染L929细胞和BSR细胞,水平凝胶电泳验证病毒株核酸成分正确,病毒株感染的L929细胞出现空斑,计算得出病毒滴度结果为2.2×10⁸ PFU/mL。结论 呼肠孤病毒空斑检测方法成功建立,该方法可以形成清晰可见的空斑,能稳定地对病毒滴度进行定量测定,为进一步研究呼肠孤病毒提供帮助。     

微载体规模化培养MDCK细胞增殖H9N2亚型禽流感病毒的研究

目的探索H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)在微载体大规模培养的MDCK细胞中的增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H9N2亚型禽流感病毒株接种到生长在24孔培养板上的MDCK细胞中进行增殖试验,检测接种不同感染剂量病毒、添加不同浓度TPCK-胰酶、在不同pH值的培养液中培养,接毒后不同时间的病毒血凝素滴度(HA)。根据最佳增殖条件将病毒接种至生长在微载体上的MDCK细胞中,利用250 mL和5L转瓶逐级进行大规模增殖。结果最佳病毒增殖条件为TPCK-胰酶终浓度为10μg/mL,接毒剂量为MOI=0.025,培养液pH值为7.4,在此条件下,H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)适应在250 mL和5L转瓶中微载体培养的MDCK细胞内大量增殖,病毒的最高血凝价均可达到9log2(1∶512)。结论本研究为以哺乳动物细胞为基质规模化生产禽流感疫苗奠定了基础。     

绵羊脑炎单核增生性李斯特菌LM90 SB2鞭毛基因FlaA的敲除及对毒力影响的研究

目的 研究缺失了flaA基因编码的鞭毛蛋白对LM90 SB₂的毒力等方面的影响。方法 应用同源重组技术构建LM90 SB₂的flaA基因突变株,通过生长曲线的测定、运动性试验、BF形成能力以及LD₅₀的测定来探究缺失flaA基因后对LM90 SB₂毒力的影响。结果 与野毒株相比突变株菌落形态未发生改变,仍具有良好的遗传稳定性,但生长变缓,在25 ℃的环境中运动性显著降低,突变株BF形态结构更加松散和不完整;野毒株和突变株的小鼠LD₅₀的菌量分别为4.27×10⁶ cfu和1.62×10⁷ cfu。结论 flaA基因可以影响LM90 SB₂的鞭毛的形成,缺失flaA基因后LM90 SB₂形成BF能力以及菌株的毒力显著下降。     

2014-2015年鄱阳湖地区禽流感病毒流行风险分析

目的 对鄱阳湖地区禽流感病毒进行监测,了解各类场所存在的禽流感病毒情况并分析其影响因素,为该地区禽流感病毒的防治工作提供合理建议。方法 于2014年9月、2015年1月及2015年3月底对该地区的候鸟保护区、家庭散养户、活禽批发市场、活禽零售市场进行3次调查和采样,对样本进行PCR检测。结果 调查期间在该地区共采集7 470份标本进行禽流感病原学检测,禽流感病毒阳性率结果为活禽零售市场(36.86%)>活禽批发市场(32.5%)>家庭散养户(0.9%)>候鸟保护区(0.36%),差异具有统计学意义(χ²=1377.7,P<0.05),与活禽密度由高到低的趋势一致。在家庭散养户采集的4 190份标本结果显示,其中有完整免疫程序的家庭散养户阳性率为0.45%(13/2 889),无完整免疫程序的家庭散养户阳性率为1.92%(25/1 301),差异具有统计学意义(χ²=21.6,P<0.05)。不同密度组、消毒频率的病毒阳性率结果为高密度组>中密度组>低密度组;消毒间隔超过7 d组>消毒间隔小于7 d组。结论 鄱阳湖地区各类禽类相关环境均有不同程度的禽流感病毒存在情况,其中活禽零售市场阳性率最高,活禽密度最大。完整的免疫程序以及低密度、消毒频率较高的环境有利于降低禽流感病毒阳性率。     

福建省人感染H5N6禽流感病毒与外环境禽流感病毒相关性分析

目的 分析福建省外环境H5亚型禽流感病毒分布情况及与人感染H5N6禽流感的关系,为人感染禽流感的科学防治提供依据。方法 收集2013-2017年福建省外环境常规监测标本信息,进行统计分析。从数据库下载相关禽流感病毒基因序列,进行基因同源性比对和系统进化分析。结果 外环境监测结果统计分析显示:2013-2017年共采集样本4 903份,H5亚型阳性率为4.24%,且不同的网络实验室(χ²=101.033)、监测场所(χ²=45.526)、标本类型(χ²=31.751)和季节(χ²=48.174)阳性率均存在统计学差异(P<0.05)。福建省首例人感染H5N6禽流感(A/Fujian-Sanyuan/21099/2017)病毒全基因序列与6株福建省外环境H5N6病毒的同源性在85.1%~98.5%,与病家院中采集的1株加强监测外环境标本的HA和NA基因同源性分别为100.0%和99.9%。系统进化分析显示:福建省人感染H5N6病毒HA基因与加强监测的外环境H5N6病毒的进化距离最近,与其余6株距离较远,处在不同的进化分枝中,其基因源于H5N8病毒;而NA基因则与7株外环境H5N6病毒的进化距离较近,源于H5N6病毒。结论 福建省冬春季外环境中禽流感活动较为活跃,应加强活禽交易市场的卫生管理工作。福建省发现的首例人感染H5N6禽流感与外环境禽流感病毒的重配可能存在一定的相关性。     

福建省甲型H1N1流感病毒分离及首例分离株全基因组序列分析

目的分离甲型HIN1流感病毒,分析福建省首例病毒分离株全基因组序列和遗传特征,为研究病毒进化、致病性、流行规律提供科学依据。方法采用MDCK细胞和Real—time PCR法进行病毒分离、鉴定;提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增其8个基因片段,测定核苷酸序列,利用生物信息软件拼接全基因组序列;分析重要基因位点,利用GENBANK中相关序列对首例病毒分离株A／Fujian／01／2009（H1N1）进行基因进化树分析。结果从82例甲型H1N1流感确诊病例标本中分离出50株甲型H1N1流感病毒,第一代分离阳性率60．98％。在福建省首次获得甲型H1N1流感病毒株及全基因组序列。基因组序列分析证明：该毒株与2009年大流行株高度同源,其基因组存在四源重组现象;氨基酸位点分析其对达菲药物敏感,对金刚烷胺类药物耐药;相对于猪流感代表株A／Swine／Iowa／15／1930（HIN1）存在6个HA抗原决定簇位点变异。结论MD—CK细胞对甲型H1N1流感病毒具有较高敏感性;福建省首例甲型H1N1流感病例分离病毒株与北美流行株高度同源;相对于以往古典型猪流感代表株出现了HA蛋白抗原性漂移;为今后进一步开展甲型H1N1流感病毒分子生物学研究奠定基础。     

Quercetin as an Antiviral Agent Inhibits Influenza A Virus (IAV) Entry

Influenza A viruses (IAVs) cause seasonal pandemics and epidemics with high morbidity and mortality, which calls for effective anti-IAV agents. The glycoprotein hemagglutinin of influenza virus plays a crucial role in the initial stage of virus infection, making it a potential target for anti-influenza therapeutics development. Here we found that quercetin inhibited influenza infection with a wide spectrum of strains, including A/Puerto Rico/8/34 (H1N1), A/FM-1/47/1 (H1N1), and A/Aichi/2/68 (H3N2) with half maximal inhibitory concentration (IC₅₀) of 7.756 ± 1.097, 6.225 ± 0.467, and 2.738 ± 1.931 μg/mL, respectively. Mechanism studies identified that quercetin showed interaction with the HA2 subunit. Moreover, quercetin could inhibit the entry of the H5N1 virus using the pseudovirus-based drug screening system. This study indicates that quercetin showing inhibitory activity in the early stage of influenza infection provides a future therapeutic option to develop effective, safe and affordable natural products for the treatment and prophylaxis of IAV infections.     

重组溶瘤流感病毒靶向杀伤肝癌细胞的实验研究

目的拯救获得重组溶瘤流感病毒株rFlu △ NS/HCC,对其全面鉴定并评价特异性杀伤肝癌细胞的效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,将NS基因部分敲除,构建重组质粒pFlu △ NS1,与流感病毒PR8的7个质粒pHW191-PB2、pHW192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M共转染MDCK和COS-Ⅰ细胞,经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒,命名为rFlu △ NS/HCC。重组溶瘤流感病毒株rFlu △ NS/HCC经SPF鸡胚扩大培养、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心纯化等步骤获得重组病毒,通过血凝试验、RT-PCR、电镜观察病毒形态等方法对rFlu △ NS/HCC进行全面鉴定,并通过MTS细胞活力测定、细胞病变检测评价重组溶瘤流感病毒对不同类型肝癌细胞系的杀伤效果。结果成功拯救重组溶瘤流感病毒rFlu △ NS/HCC,血凝效价为2~(9~10),在HpG2细胞上感染病毒滴度log10TCID50/ml为6.5。MTS和结晶紫染色检测结果显示,重组溶瘤流感病毒rFlu △ NS/HCC感染复数(multiplicity of infection,MOI)≥1时,能够显著降低HepG2细胞活力(P均0.05);MOI≥3时,对SMMC-7721细胞活力影响达显著水平(P均0.05);而不同MOI值的rFlu △ NS/HCC对正常细胞L02无明显影响。结论重组溶瘤流感病毒rFlu △ NS/HCC能靶向杀伤肝癌细胞,有望为临床肝癌靶向治疗提供新的治疗策略。     

Genetic characterization of seasonal influenza A (H3N2) viruses in Ontario during 2010–2011 influenza season: high prevalence of mutations at antigenic sites

Background

The direct effect of antigenic site mutations in influenza viruses on antigenic drift and vaccine effectiveness is poorly understood.

Objective

To investigate the genetic and antigenic characteristics of human influenza A (H3N2) viruses circulating in Ontario during the early 2010–2011 winter season.

Study design

We sequenced the hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) genes from 41 A(H3N2) viruses detected in nasopharyngeal specimens. Strain typing was performed by hemagglutination inhibition (HI) assay. Molecular and phylogenetic tree analyses were conducted.

Results

HA and NA genes showed high similarity to the 2010–2011 vaccine strain, A/Perth/16/2009 (H3N2)-like virus (97·7–98·5% and 98·7–99·5% amino acid (AA) identity, respectively). Compared to A/Perth/16/2009 strain, HA gene mutations were documented at 28 different AA positions across all five H3 antigenic sites, with a range of 5–11 mutations in individual viruses. Thirty-six (88%) viruses had 8 AA substitutions in common; none of these had reduced HI titer. Among Ontario isolates, 11 antigenic site AAs were positively selected with an increase in glycosylation sites.

Conclusion

The presence of antigenic site mutations with high frequency among 2010–2011 influenza H3N2 isolates confirms ongoing adaptive H3N2 evolution. These may represent early phylogenetic changes that could cause antigenic drift with further mutations. Clinical relevance of antigenic site mutations not causing drift in HI assays is unknown and requires further investigation. In addition, viral sequencing information will assist with vaccine strain planning and may facilitate early detection of vaccine escape.     

发热伴血小板减少综合征病毒温度敏感性研究

目的 研究发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV)对温度的敏感性,为SFTSV的消毒和实验室生物安全防护提供依据。方法 将SFTSV细胞培养上清液分装到250 μL的PCR管中,100 μL/管,分别放置在4 ℃冰箱,以及25 ℃、37 ℃、39 ℃、56 ℃、70 ℃金属浴中,处理预定时间后,再将其感染Vero细胞,采用间接免疫荧光法测定病毒滴度。结果 随温度的升高,病毒滴度下降速度加快,在4 ℃、25 ℃、37 ℃和39 ℃放置24 h后病毒滴度由10^7.25/100 μL分别下降到10^7.00/100 μL、10^6.75/100 μL、10^6.50/100 μL和10^5.00/100 μL。同一温度,随放置时间的延长,病毒滴度下降趋势也愈加明显,SFTSV在4 ℃、25 ℃、37 ℃放置72 h后,病毒滴度由10^7.25/100 μL分别下降到10^6.63/100 μL、10^6.50/100 μL和10^3.38/100 μL。SFTSV在39 ℃放置72 h失去感染性,在56 ℃作用180 min或70 ℃放置5 min即被灭活。结论 SFTSV 70 ℃放置5 min即被灭活,但其在4 ℃和25 ℃条件下放置3 d,病毒滴度变化不明显,实验室和医务人员应重视个人防护和对被SFTSV污染过的物品的消毒。     

禽流感病毒特异性NP单克隆抗体的鉴定及禽流感特异性检测方法的建立

目的筛选鉴定禽流感病毒特异性单克隆抗体(单抗)并建立一种适合禽源流感病毒特异性检测的抗原检测方法。方法利用分子进化树分析方法对甲型流感病毒核蛋白(NP)基因进行分类,从禽流感病毒分支和人流感病毒分支上各挑选一个代表性流感病毒株的NP基因进行重组抗原的表达及其单抗的筛选制备,最后应用免疫渗滤技术(A-Dot-ELISA)建立抗原快速检测方法。结果根据分子进化树分析结果确定禽流感H5N1病毒株HK/212/2003和人流感H1N1病毒株CA/04/2009的NP基因进行原核表达,获得高纯度的禽流感病毒NP重组抗原rNP-HK/212和人流感病毒NP重组抗原rNP-CA/04;利用上述两种NP抗原制备出抗rNP-HK/212单抗53株,通过差异筛选获得只对禽流感病毒NP蛋白rNP-HK/212有特异性反应而不与人流感病毒NP反应的3株单抗(1F2,5D2及25A2);免疫荧光方法证实1F2等3株单抗只特异识别禽流感病毒;利用单抗1F2成功建立一种适于禽流感病毒特异性检测的抗原快速检测方法 AIV-Dot-ELISA,该方法对病毒滴度为0.025~0.1HA titer的19个不同亚型的禽流感病毒均能检出,对病毒滴度为5HA titer的8个人流感病毒和2个乙型流感病毒的检测均为阴性。结论本研究成功制备出禽流感病毒NP蛋白特异性单抗,并建立了一种仅特异识别禽流感病毒的抗原快速检测方法 AIV-Dot-ELISA,为快速鉴别禽类流感病毒和人类流感病毒感染提供了一种有用的分析检测工具。