小鼠骨髓细胞MN、SCE技术及其在中医药研究中的应用体会

本文介绍了微核（Micronucleus,MN）和姐妹染色单体互换（Sister Chromatid Exchange,SCE）制片方法,及其作者在中医院校科研中的应用体会.以便在分子生物学新技术层出不穷的今天,使微核,姐妹染色单体互换检测技术在中医药研究中继续发挥作用.     

桂枝甘草汤抗突变效应的实验研究

以ＩＣＲ纯种小鼠骨髓细胞的微核（ＭＮ）和姐妹染色单体互换（ＳＣＥ）为指标,对《伤寒论》方桂枝甘草汤的抗突变效应进行实验研究,结果表明桂枝甘草汤具有较强的抗突变活性。     

熟地黄多糖对环磷酰胺诱导小鼠的抗突变作用研究

目的：探讨熟地黄多糖的抗突变作用。方法：采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换试验方法评价熟地黄多糖的抗突变作用。结果：熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的小鼠微核率、染色体畸变率、姐妹染色单体交换率具有抑制作用。结论：熟地黄多糖具有抗突变活性。     

六味地黄丸延缓衰老作用机理的实验研究

以小鼠活体骨髓细胞微核（ＭＮ）和姐妹染色单体互换（ＳＣＥ）为指标,对滋阴补肾、延缓衰老方——六味地黄丸进行抗ＤＮＡ损伤作用的实验研究。结果表明,六味地黄丸具有良好的抗ＤＮＡ损伤作用,提示其提高机体抗ＤＮＡ损伤是延缓衰老作用的主要机理所在。     

四种补益药延缓衰老作用机理的实验研究

目的 :观察几种补益药抗衰老的作用机理。方法 :以小鼠骨髓细胞微核 (MN)和姐妹染色单体互换(SCE)为指标 ,对常用补益药人参、黄芪、当归、枸杞子进行抗DNA损伤作用的实验研究。结果表明 ,人参、黄芪、当归、枸札子具有良好的抗DNA损伤作用。结论 :这几种补益药抗DNA损伤作用可能是延缓衰老作用的机理之一。     

四种补益药延缓衰老作用机理的实验研究

目的：观察几种补益药抗衰老的作用机理。方法：以小鼠骨髓细胞微核(MN)和姐妹染色单体互换(SCE)为指标，对常用补益药人参、黄芪、当归、枸杞子进行抗DNA损伤作用的实验研究。结果表明，人参、黄芪、当归、枸札子具有良好的抗DNA损伤作用。结论：这几种补益药抗DNA损伤作用可能是延缓衰老作用的机理之一。     

莪术四君子汤对硫酸镍诱导的人外周血淋巴细胞非程序脱氧核糖核酸合成的影响

目的:探讨莪术四君子汤对硫酸镍诱导的人外周血淋巴细胞非程序性DNA合成的影响.方法:用3H-TdR掺入法测定了人外周血淋巴细胞非程序性DNA合成(UDS).结果:莪术四君子汤实验剂量浓度达到1.0g/ml时,由硫酸镍或硫酸镍与紫外线共同诱导的人外周血淋巴细胞UDS基本恢复到阴性对照水平;莪术四君子汤实验剂量浓度达到1.5g/ml时未见其抑制3H-TdR向人外周血淋巴细胞DNA的掺入.结论:莪术四君子汤对人外周血淋巴细胞非程序DNA合成无诱导效应,但对硫酸镍及硫酸镍与紫外线共同诱导的人外周血淋巴细胞非程序DNA合成有明显抑制作用,且呈剂量效应关系.提示莪术四君子汤能有效减轻镍和紫外线对人外周血淋巴细胞DNA的损伤.     

野罂粟对人淋巴细胞的毒性效应

目的探讨野罂粟提取物及总生物碱对人遗传物质的毒理效应。方法用微核率和姊妹染色单体互换(SCE)率来评价野罂粟提取物及总生物碱对人淋巴细胞的遗传毒性作用。结果低剂量野罂粟提取物(1mg)组及总生物碱(2μg、4μg和8μg)组的SCE率、微核率与空白对照组无差异(P>0.05),但随提取物及总生物碱浓度升高,SCE率、微核率逐渐上升,表现出明显的剂量-效应关系。结论提取物及总生物碱虽有一定的细胞毒性和遗传毒性,但在正常使用剂量内不会引起人遗传物质的毒性效应。     

四君子汤在人体外周血淋巴细胞微核试验系统中抗氟尿嘧啶诱变作用的实验研究

目的探讨四君子汤在体外实验中的抗诱变作用。方法采用人体外周血淋巴细胞微核(MN)试验测试系统,以临床常用的化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照物,研究四君子汤的抗诱变性能。在实验设计上,选用1个空白组,1个阳性组,四君子汤(含药血清)高、中、低3个剂量组。MN试验制备出玻片标本后,双盲法阅片,在油镜下观察、计数,并显微照相记录典型标本。两组间均数比较用t检验,各剂量组间用方差分析。结果与空白组比较,阳性组的人体外周血淋巴细胞微核率明显高于空白组(P0.01),说明这种化疗药有明显的诱变作用。与阳性组比较,四君子汤低剂量组有显著性差异(P0.05),中、高剂量组有更显著差异(P0.01)。经方差分析,四君子汤在该实验中,低剂量与高剂量、低剂量与中剂量、中剂量与高剂量比较,有显著性差异(P0.05),在统计学上表现出剂量-效应关系。结论四君子汤在体外实验表现出较强的抗诱变性的作用。     

何首乌抗诱变作用的实验研究

目的:系统研究何首乌的抗诱变作用及剂量效应.方法:采用小鼠骨髓细胞微核(MN)实验和染色体畸变(CA)实验,人体外周血淋巴细胞姐妹染色单体交换(SCE)和微核(MN)实验、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞染色体畸变(CA)实验等5种测试系统,研究何首乌的抗诱变作用.每个实验中,分别设空白对照组、阳性对照组、何首乌高剂量组、何首乌中剂量组和何首乌低剂量组.制备出微核及染色体畸变标本后,在光镜下观察、计数.结果:与阳性(CPP)组比较,小鼠骨髓细胞MN实验中,何首乌3个剂量组有极显著性差异(P＜0.01);小鼠骨髓细胞CA实验中,何首乌3个剂量组均有极显著差异(P＜0.01).与阳性(MMC)组比较,人体外周血淋巴细胞SCE实验中,何首乌3个剂量组对MMC诱发的SCE增高有明显地抑制作用(P＜0.05或P＜0.01);人体外周血淋巴细胞MN实验中,何首乌3个剂量组对MMC诱导的MN率增高有明显地抑制作用(P＜0.01);CHO细胞CA实验中,何首乌3个剂量组均能显著降低由MMC诱发的CHO染色体畸变率(P＜0.01).结论:何首乌无论是体内还是体外实验均表现出抗诱变活性.     

刺蒺藜多糖对遗传损伤防护作用的研究

实验结果证明,刺蒺藜多糖对小鼠无诱变作用,对环磷酰胺诱发的染色体和DNA损伤有明显的防护作用。     

四君子汤六味地黄汤抗突变作用机理的实验研究

目的 :探讨四君子汤、六味地黄汤的抗突变作用机理。方法 :以ICR纯种小鼠的血清为实验材料 ,用超氧化物歧化酶 (SOD)和丙二醛 (MDA)作指标 ,对临床上常用的两首精方四君子汤和六味地黄汤进行抗氧化作用的实验研究。结果 :两用药组及阴性对照组与阳性对照组相比均有显著性差异。结论 :表明环磷酰胺对抗氧化系统具有抑制作用 ,而两首方药均能拮抗环磷酰胺的抑制作用 ,提示其提高SOD活力 ,降低MDA的含量可能是其抗突变作用的主要机理所在。     

传统中医抗衰老中药遗传毒性的体外实验研究

采用人外周血淋巴细胞体外培养,检测传统中医抗衰老中药的致突变性.结果显示:药物剂量在1.2×10~3μg/ml、2.6×10~4μg/ml时,其SCE频率、微核率、染色体畸变率分别为6.72/细胞、7.10/细胞,3.83%、4.58‰,1.10%、1.30%;各组之间数值经t检验与F检验均无显著性差异,表明此中药在体外实验未见明显遗传毒性.     

芦笋汁抗突变作用的研究

用微核（ＭＮ）试验、姐妹染色单体交换（ＳＣＥ）及精子畸形试验探讨芦笋汁对环磷酰胺（ＣＰ）致突变作用的影响,结果表明,单纯芦笋汁对小鼠骨髓细胞ＭＮ、ＳＣＥ及精子畸形无明显影响,但一定剂量芦笋汁可使ＣＰ诱发的ＭＮ率降低、ＳＣＥ减少、精子畸形率下降、均有剂量－效应关系和统计学意义。     

大枣的抗变作用研究

用姊妹染色单体互换技术发现小鼠灌服大枣煎液能明显降低环磷酰胺所致SCE值升高,表明有抗变作用。     

黄芪多糖对甲醛染毒人BMSCs染色体损伤的保护作用

目的:研究黄芪多糖(APS)对甲醛染毒人骨髓间充质干细胞(BMSCs)微核形成、姐妹染色单体互换(SCE)频率升高的保护作用及潜在的机制。方法:体外培养人BMSCs,随机分为空白组,甲醛组,APS 40,100,400 mg·L^-1组。用120μmol·L^-1甲醛染毒人BMSCs,染毒同时,APS 40,100,400 mg·L^-1组分别加入40,100,400 mg·L^-1APS共培养。利用倒置相差显微镜观察细胞形态,微核实验检测微核形成情况,姐妹染色单体互换实验检测SCE发生频率,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA),着色性干皮病基因B,D,F,G(XPB,XPD,XPF,XPG) mRNA和蛋白表达情况。结果:与空白组比较,甲醛染毒人BMSCs细胞数量明显减少,形态明显改变,APS40,100,400 mg·L^-1作用后,细胞数量和形态均有所恢复。甲醛组微核形成及SCE发生频率较空白组显著升高(P<0.01),PCNA mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05),XPB,XPD,XPF和XPG mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与甲醛组比较,APS 40,100,400 mg·L^-1作用后,微核形成及SCE发生频率显著降低(P<0.01),PCNA,XPB,XPD,XPF和XPG mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05,P<0.01),其中APS 100 mg·L^-1组效果最为明显。结论:APS可以保护甲醛染毒人BMSCs减少微核形成和SCE发生频率,100 mg·L^-1APS保护作用最为明显,其机制可能与上调核苷酸切除修复通路PCNA,XPB,XPD,XPF和XPG基因表达,促进损伤修复有关。     

“回春仙”中药复方制剂对环磷酰胺诱发小鼠骨髓细胞遗传损伤防护作用的研究

本文以小鼠骨髓嗜多染成红细胞(PCE)微核率,小鼠骨髓细胞染色体畸变率(CA)和姐妹染色体交换率(SCE)为指标,探讨“回春仙”对环磷酰胺(CP)诱发的遗传损伤有无防护作用。实验结果表明,回春仙对PCE微核率和SCE率有明显的防护作用,对CA率有降低的趋势,但无统计学差异。     

半夏对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核及人体外周血培养淋巴细胞SCE频率的影响

半夏的妊娠禁忌作用在妊娠大白鼠、小白鼠和家兔试验中得到证实,半夏汤剂在对母体无害的情况下,具有显著的胚胎毒性。本实验观察了半夏诱发的小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核出现率,结果表明半夏汤剂不引起微核率升高;人体外周血培养淋巴细胞姐妹染色单体交换(SCE)试验表明,半夏汤剂除相当于临床用量的150倍直接加入培养液,引起 SCE 频率显著增高外,其他中低剂量组均不能肯定升高,表明半夏汤剂对 DNA的损伤和修复过程影响不大。提示半夏汤剂不大可能出现遗传毒性。     

桦菌芝多糖的抗突变作用研究

目的：研究桦菌芝多糖对环磷酰胺（CP）致小鼠微核率、染色体畸变率改变的影响,以探讨其对突变的拮抗作用。方法：60只小鼠随机分成6组,分别为对照组、桦菌芝多糖低剂量组、桦菌芝多糖中剂量组、桦菌芝多糖高剂量组、猪苓多糖组、环磷酰胺组。连续8d给药,于第9、10d给予环磷酰胺,于第10d注射环磷酰胺后,颈椎脱臼法处死试验动物。取骨髓常规制片,光学显微镜观察计数微核和染色体个数。结果：与阳性对照组比较,高中低3个剂量组微核形成率和染色体畸变率有显著的差异（P〈0．05）。结论：桦菌芝多糖具有抗突变作用。     

四君子汤改善C57小鼠恶病质状态肌肉消耗的疗效及机制研究

目的 观察四君子汤缓解或改善C57小鼠恶病质状态肌肉消耗的疗效及机制.方法 C57BL/6小鼠皮下注射lewis肺腺癌肿瘤细胞建立肿瘤恶病质模型,按照随机数字表法分为正常组、模型组、四君子组1 g/(mL·d)和地屈孕酮组予甲地孕酮溶液0.024 g/(kg·d),每组6只,连续给药14天.检测各组小鼠的体质量、肿瘤大...