圆锥角膜组织与正常角膜组织差异蛋白的表达

目的运用比较蛋白质组学技术,比较圆锥角膜组织和正常角膜组织的差异表达蛋白,筛选出圆锥角膜特异性分子标记物,探讨其与圆锥角膜发病机制的关系。方法收集12例圆锥角膜组织和4例正常人角膜组织,提取角膜组织总蛋白,行固相PH梯度双向凝胶电泳,分析凝胶电泳图谱,筛选差异表达蛋白,采用基质辅助激光解吸离子化一串联飞行时间质谱(MOLDITOF/TOFMS)和数据库检索对差异蛋白质进行鉴定。结果圆锥角膜组织和正常角膜组织的双向电泳代表胶的蛋白点数分别为1035和1070,匹配点数为869个,匹配率为84%。选取有明显表达差异的7个蛋白质点,其中6个蛋白质点在圆锥角膜组织中表达下调,1个蛋白质点表达上调。这7个蛋白质点分别为转化生长因子B诱导的细胞外基质黏附蛋白(TGFBIp/βigh3)、VI型胶原蛋白α1链前体(collagenalpha1(VI)chainprecursor)、αA晶体蛋白(alphacrystallinA)、βB晶体蛋白(alphacrystallinB)、βB2晶体蛋白(betacrystallinB2)、谷氨酰胺合成酶(glutaminesynthetase)、碳酸酐酶(carbonicanhydrase),除VI型胶原蛋白α1链前体在圆锥角膜组织中表达上调外,其余6个蛋白成分在圆锥角膜组织中均表达下调。结论TGFBIp/βigh3、alphacrystallinA、alphacrystallinB、betacrystallinB2、glutaminesynthetase、collagenalpha1(VI)chainprecursor6种在圆锥角膜中差异表达的蛋白质成分可能与圆锥角膜发病相关。     

同种异体组织工程化软骨组织形成的初步研究

目的：探讨以同种异体的软骨细胞作为种子细胞、以聚乳酸(PLA)作为支架，应用组织工程学方法在体内形成新生软骨组织的可能性，为组织工程软骨修复喉、气管软骨缺损提供实验依据。方法：将出生3～5d的新西兰大白兔乳兔四肢关节软骨组织酶解，分离出软骨细胞，体外扩增后，将其接种到PLA三维可吸收支架上；将软骨细胞-PLA复合物移植到成年新西兰大白兔的背部皮下，经过7周的体内培养，将组织标本行大体观察和组织学检查。结果：软骨细胞-PLA复合物在同种异体的动物体内有新生组织形成，经组织学染色，证实为软骨组织；随着植入时间的延长，软骨基质的分泌增加，炎性细胞的浸润逐渐减轻。结论：同种异体的软骨细胞-PLA复合物在有免疫力的动物体内能够形成新生软骨组织，这一方法为喉、气管软骨缺损的修复提供了一条新的途径。     

软骨组织工程进展

组织工程软骨的研究目前仍处于实验室阶段，本文就组织工程软骨的概念，生物支架材料，体外和体内培养方法及组织工程软骨性能等方面作一简述。     

游离组织瓣修复晚期颅底肿瘤术后组织缺损

目的 总结游离皮瓣在晚期颅底肿瘤术后组织缺损中修复的效果及适应证.方法 回顾性分析中国医学科学院肿瘤医院头颈外科1999年3月-2009年3月颅底手术后组织缺损修复的游离皮瓣共25例,其中背阔肌肌皮瓣9例,腹直肌肌皮瓣6例,腹壁下动脉穿支皮瓣4例,股前外侧皮瓣3例,前臂皮瓣2例,腓骨骨肌皮瓣1例.颅底缺损类型分别为颅骨25例次,脑膜10例次,脑组织3例次,鼻腔鼻窦13例次,黏膜14例次,皮肤20例次.结果 23例(92%)游离皮瓣全部成活,1例皮瓣坏死,1例部分坏死.5例(20%)患者出现术后中枢神经系统并发症,其中脑疝死亡1例,颅内感染2例和脑脊液漏2例.结论 游离组织瓣修复技术可靠,适用于晚期颅底复发肿瘤,同时涉及皮肤或黏膜手术缺损的修复.     

喉软骨组织化生

喉软骨的损害,不是起源于肿瘤(软骨瘤和软骨肉瘤),就是起源于组织化生。两者间的区分不易,治疗和预后与诊断有关。作者报告1例喉软骨组织化生:男,54岁,主诉声嘶数月来诊。患者每天吸烟40支,约30年;2年前曾在间接喉镜下行舌会厌谷囊肿切除术。入院检查:左室带有直径0.5cm的息肉样肿物,被覆正常粘膜;同侧声带角化过度,但活动正常。局麻下行间接喉镜检查,切除活组织,显微镜检查,诊断为喉组织化生。术后一般情况良好,出院。2年半后随访无明显复发。     

游离组织瓣移植

头颈肿瘤外科治疗的首要目的是彻底切除肿瘤以达到根治的效果。因此,在肿瘤切除的过程中应该做到各个方向切除足够的安全界。过去由于缺少理想修复手段,手术者首先要保证伤口能够关闭,但切除边界可能不够导致肿瘤复发。因此,手术医师只有在明确手术缺损能够被妥善修复的情况下,才能按照根治的需要进行病变切除。经过20多年发展的游离组织瓣移植技术,为头颈外科医师做到足够、适当的切除肿瘤提供了保证。     

游离带血管组织瓣在头颈部组织缺损整复中的应用

游离带血管组织瓣在头颈部组织缺损整复中的应用游学俊，崔永华，汪吉宝最初，修复头颈部的组织缺损多是采用局部带蒂皮瓣，因为其皮肤的颜色和纹理十分接近于缺损部位的皮肤，且修复的手术比较容易进行。然而临床表明。尽管这种皮瓣的长度可达其宽度的５倍，但由于受到其...     

组织工程学中支架材料

组织工程学是在体外预先构建一个有生命的种植体，用于修复器官缺损。它主要包括三个方面的内容，即种子细胞、支架材料和细胞外基质。其中对生物支架材料的研究，一直是医学研究的热点之一。本文就该方法多年来的研究进展作一综述，希望对该领域的认识和进一步的研究提供帮助。     

喉癌EGFR和PCNA表达及DNA含量的研究

研究喉鳞癌中表皮生长因子受体、增殖细胞核抗原的表达和ＤＮＡ含量,分析各指标间的相关性及与喉癌临床生物学行为和预后的关系。方法：用免疫组化ＳＰ法和图像分析仪检测正常喉粘膜、喉鳞癌的ＥＧＦＲ、ＰＣＮＡ和ＤＮＡ指数,结合临床资料进行分析。结果：喉鳞癌的ＥＧＦＲ的阳性表达率为５４．８％,与正常喉组织的差异有统计学意义,但ＥＧＦＲ的阳性表达与喉癌的病理分级和５年生丰率无显著相关,而ＰＣＮＡ阳性表达和ＤＩ则随     

CD44+喉癌细胞的干细胞生物学特性初步研究

目的 初步研究透明质酸盐受体(hyalurate receptor)CD+44喉癌细胞的干细胞生物学特性.方法 原代培养喉痛细胞,利用亲和板结合分离法,将CD+44和CD+44肿瘤细胞分选出来,继续常规培养,比较CD+44与CD+44肿瘤细胞在功能状态、细胞周期、分化状态、克隆形成能力及形态等方面的差异.结果 CD+44细胞在喉癌细胞中所占的百分率为49.8%～53.5%,中位数为51.3%,亲和板结合法分选出CD+44细胞,继续常规培养后恢复原始比例.CD+44细胞中RNA含量低,细胞处于GO和G1期的比例高于CD+44细胞.CD+44细胞中正常鳞状上皮干细胞角蛋白(cytokeratin 14,CK14)表达强阳性或阳性,而分化的上皮细胞标记物外皮蛋白(involucrin)表达弱阴性或阴性.倒置显微镜下观察,CD+44细胞为多角形,突起多;而CD+44细胞为梭形,突起较少.对CD+44细胞进行有限稀释单细胞克隆培养,产生的子代克隆集落出现了异质性细胞,而CD-44细胞未能产生异质性子代细胞.与CD-44细胞相比,CD+44细胞表现出较高的克隆形成能力说明其具有较强的增殖能力.结论 CD+44喉癌细胞具有干细胞的某些特性,肿瘤干细胞可能存在于CD+44细胞内.     

肿瘤相关巨噬细胞和基质溶解素在喉鳞状细胞癌组织的表达与肿瘤微血管密度的关系

目的：探讨CD68抗体标记的肿瘤相关巨噬细胞TAMs和基质溶解素MMP-7在喉鳞状细胞癌组织的表达及与临床病理参数的关系,探讨两种分子标志物表达与喉癌组织MVD的关系。方法：使用免疫组织化学法检测标本65例（喉鳞状细胞癌组织45例,瘤旁非肿瘤组织20例）中CD68及MMP-7、CD34抗体标记的MVD的表达。结果：CD68阳性表达率,鳞癌组织（82.2%,37/45）与瘤旁组织（15.0%,3/20）比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。MMP-7阳性率鳞癌组织（71.1%,32/45）与瘤旁组织（25.0%,5/20）比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。CD34-MVD鳞癌组织（26.52±6.36）高于瘤旁组织（12.23±4.01）。有淋巴结转移组CD68、MMP-7阳性率高于无淋巴结转移组;MMP-7、CD68表达与分化程度无关;MMP-7与肿瘤分期无关,而CD68与肿瘤分期相关;CD68、MMP-7与CD34-MVD有正相关性。结论：两种分子标志物在喉癌组织的高表达及与MVD的正相关性说明了TAMs与MMP-7在促进喉鳞状细胞癌组织的转移及新生血管形成中发挥了作用,可作为判断喉癌侵袭及转移的重要标志物。     

Tumor escaping mechanisms present in microenvironment of laryngeal cancer

In tumor tissue obtained from a group of 21 patients treated surgically for laryngeal carcinoma, the expression of Fas, Fas-L, CD3, TCR zeta chain and Bcl-2 were estimated. It has been shown that tumor often express: Fas-L, Fas, Bcl-2, the molecules which may influence increased tumor survival. On the other hand lack of MHC class I antigen expression on tumor cells frequently has been observed. As it is known, such tumor cells can not be recognized by cytotoxic T lymphocytes. Frequently observed decreased expression of TCR zeta chain and high level of apoptosis among T cells present in tumor microenvironment seems to depend on direct interactions with molecules expressed by tumor. Understanding of these interactions may be of great importance in evaluation of tumor aggressiveness, patients follow up and the approach to treatment.     

环氧化酶-2在喉鳞状细胞癌中的表达及其与微血管密度的关系

目的：检测喉鳞状细胞癌（LSCC）中环氧化酶-2（COX-2）、兔抗人Ⅷ因子（FⅧ）的表达,探讨LSCC中COX-2的表达情况与微血管密度（MVD）的关系。方法：利用免疫组织化学SABC法检测42例LSCC及其癌旁正常组织中COX-2、FⅧ的表达,分析其与LSCC的临床病理、淋巴结转移、MVD等的关系。结果：LSCC组织中COX-2阳性率为71．4％,癌旁正常组织中COX-2的阳性率为19．1％,肿瘤组织中COX-2的表达明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义（P〈0．05）;COX-2在LSCC中的表达与患者的性别、年龄、病变原发部位、分化程度和T分期无关（均P〉0．05）：与病理分期、颈淋巴结转移和MVD密切相关。结论：COX-2在LSCC中的高表达对肿瘤的发生、发展及淋巴结转移起促进作用,COX-2可能是促进肿瘤血管形成的主要因子。     

CD44蛋白在人喉癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨CD44在人喉癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学Envision法对261例喉不同病变组织标本进行CD44表达检测。结果：人喉癌组织中CD44高表达率为70．9％，明显高于癌前病变（16．7％）及正常喉组织（0％），其差异均有极显著性意义（P＜0．01）；喉癌组织中高分化鳞癌CD44表达明显低于低分化鳞癌（P＜0．01）；Ⅲ-Ⅳ期喉癌病变组织CD44表达明显高于I－Ⅱ期（P＜0．01）；有颈淋巴结转移的喉癌组织CD44表达明显高于无颈淋巴结转移的喉癌组织（P＜0．01）；CD44表达阳性病例3、5年生存率明显低于CD44表达阴性病例（均P＜0．05）。结论：喉癌的发生、发展及患者预后与CD44表达密切相关。     

CD45RO在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的：探讨喉鳞状细胞癌中cD45RO的表达及其临床意义,为喉鳞状细胞癌的预后评估提供新的思路,及为其生物治疗提供理论依据。方法：2010—01—2012—12期间我院确诊并手术治疗的初发喉鳞状细胞癌标本50例。另取10例喉部正常黏膜作对照分析。所有标本均经10％甲醛固定,石蜡包埋、切片。采用免疫组织化学、苏木精伊红染色方法检测CD45RO的阳性表达,分析其与喉鳞状细胞癌临床病理特征之间的关系。结果：CD45RO在正常组织及喉鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为30％、86％。在50例喉癌病例中,CD45RO与局部淋巴结转移呈负相关（r=-0．713,P〈0．05）,与肿瘤分区呈负相关（r=-0．750,P〈0．05）,与年龄、T分类、病理分化程度、临床分期无明显相关性。结论：①CD45RO在喉鳞状细胞癌组织中的表达高于正常喉黏膜组织中的表达;②CD45RO过表达可能减少区域淋巴结转移;③CD45RO过表达可能有利于喉鳞状细胞癌患者的预后;④传统UICC—TNM分期、组织学分级评估预后不同,通过对CD45RO的检测可以从另外一个角度评估喉鳞状细胞癌的预后情况。     

黏着斑激酶在喉癌中的表达及临床意义

目的 :探讨黏着斑激酶 (FAK)在喉癌及癌旁组织中的表达及其与喉癌的临床分期、生存率、转移等生物学行为的关系。方法 :应用免疫组织化学法检测 10 0例喉癌及 6 0例癌旁组织石蜡标本中FAK的表达水平。结果 :FAK在喉癌中的表达明显高于癌旁组织 (P <0 .0 5 ) ;Ⅲ、Ⅳ期表达较Ⅰ、Ⅱ期高 (P <0 .0 5 ) ;FAK表达较强阳性和强阳性者 3、5年生存率分别为 76 .9%(5 0 /6 5 )和 6 1.5 %(4 0 / 6 5 ) ,而阴性和弱阳性者 3、5年生存率分别为 97.1%(34/ 35 )和 88.6 %(31/ 35 ) ,其差异均有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :FAK的表达可作为了解喉癌肿瘤细胞生物学行为、转移及预后判断的一种较有价值的病理指标。     

CD4+C25+Treg细胞与喉鳞状细胞癌的相关性研究

［摘要］目的：研究CD4+CD25+Treg细胞与喉鳞状细胞癌的相关关系。方法：收集2005年7月至2005年12月山东大学齐鲁医院耳鼻咽喉科手术治疗的30例喉鳞状细胞癌患者和同期13例健康献血者的外周血，应用流式细胞仪检测外周血中CD4+CD25+Treg细胞的百分比，用ELISA法检测外周血中TGF β，IL 10，IFN γ的含量。结果：喉鳞状细胞癌患者与正常对照组外周血中CD4+CD25+Treg细胞的百分比分别为（8.72±1.54）%和（4.64±0.93）%，喉鳞状细胞癌组高于正常对照组(P＜0.05)，但与性别、年龄、临床分期、淋巴结转移无关。喉鳞状细胞癌患者外周血中TGF β，IL 10含量分别为(10.96±1.19)?pg/ml和(15.87±2.17)?pg/ml，高于正常对照组的(6.77±0.72)?pg/ml,(1.8±2.5)?pg/ml (P＜0.05)；但IFN γ的含量为(16.67±8.39)?pg/ml，低于正常对照组的(21.98±9.64)?pg/ml(P＜0.05)。结论：CD4+CD25+Treg细胞在喉癌患者外周血中大量增加,下调T细胞介导的肿瘤免疫。     

共刺激分子CD28、CD137在喉癌患者T淋巴细胞中的表达及其与细胞免疫功能失调的关系

目的探讨共刺激分子CD28、CD137与喉癌患者细胞免疫功能状况的关系。方法应用梯度离心法分离并纯化外周血和肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte,TIL）,流式细胞术检测喉癌患者外周血T细胞CD8^＋、CD8^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^-、CD28^＋细胞亚群分布和双香豆素（phytohemagglutinin,PHA）刺激前后患者外周血T细胞及TIL中CD137的表达。结果喉癌患者CD8^＋T细胞比率为（32.11±5.07）%,CD8^＋CD28^-T细胞比率为（21.03±5.69）%,均明显高于正常对照组（均P〈0.01）;CD28^＋T细胞比率为（45.53±4.51）%,CD8^＋CD28^＋T细胞比率为（12.70±3.41）%,均明显低于正常对照组（P均〈0.01）。CD137^＋T细胞活化增殖能力与CD28的阳性表达呈明显的正相关,喉癌患者外周血T细胞和TIL在未受PHA刺激时CD137^＋T细胞比率分别为（1.90±0.71）%和（3.52±1.64）%,明显高于正常对照组（P均〈0.01）。但经PHA刺激48小时后,外周血和TIL中CD137^＋-48h/CD137^＋-0h值为分11.48±4.03和10.39±3.02,均明显低于正常对照组,P均〈0.01。结论共刺激分子CD28在CD8^＋T细胞亚群中的表达失调使免疫效应性CD137^＋T细胞活化增殖能力下降,是引起喉癌患者细胞免疫功能紊乱的重要原因之一。 还原