牛磺酸对胚胎中脑细胞移植后的保护作用

①目的　观察牛磺酸对帕金森病 (PD)模型大鼠胚胎中脑细胞移植术后移植细胞的存活及生长的影响。②方法　应用 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)制备偏侧损毁的PD模型大鼠 ,将胚胎腹侧中脑 (VM )细胞悬液或生理盐水 (NS) (对照组 )立体定位移植到模型大鼠的损毁侧纹状体中 ,VM移植大鼠于术后侧脑室分别注射NS或牛磺酸 ,5 6d后通过免疫组织化学酪氨酸羟化酶 (TH)染色观察纹状体中多巴胺 (DA)能神经元 (TH阳性细胞 )的存活及生长情况。③结果　行胚胎中脑细胞移植术后 ,在PD模型大鼠的损毁侧纹状体中可检测到移植成活的DA能神经元 ,侧脑室注射牛磺酸组比侧脑室注射NS组细胞成活数目明显增多 (F =5 0 8.5 ,q =3.9,P <0 .0 1)。而在对照组模型大鼠的损毁侧纹状体中未检测到DA能神经元。④结论　牛磺酸可有效改善移植细胞的存活条件 ,并促进移植细胞的生长。     

羊膜细胞移植于帕金森病鼠纹状体的实验研究

目的 探讨非多巴胺能组织－羊膜细胞移植治疗帕金森病（ＰＤ）的作用机制。方法 通过６－羟基多巴胺（６－ＯＨＡＤ）立体定向注射破坏一侧黑质，制成ＰＤ大鼠模型，然后将鼠成活羊膜细胞悬液植入受损侧纹状体，与死羊膜细胞移植及生理盐水假移植对照。结果 发现活羊膜细胞移植可抑制大鼠的异常旋转行为，酪氨酸羟化酶（ＴＨ）免疫组化结果显示在活羊膜细胞移植靶点周围出现了ＴＨ阳性物质。结论 活羊膜细胞诱导了宿主纹状体残存多巴胺（ＤＡ）神经纤维的再生，提示羊膜细胞能够分泌对在体ＤＡ神经元具有营养作用的物质。     

Nurr1基因修饰人脐血间充质干细胞源性多巴胺能 神经元移植治疗帕金森病

 【目的】 探讨Nurr1基因修饰的人脐血间充质干细胞(HUCB-MSC)源性的多巴胺能神经元移植对帕金森病(PD)模型鼠的治疗作用.【方法】 SD大鼠PD模型随机分为假手术组(A组)?单纯HUCB-MSC组(B组)、Nurr1基因修饰HUCB-MSC组(C组)。将HUCB-MSC及Nurr1基因修饰后的HUCB-MSC体外分化为多巴胺能神经元,并通过立体定向的手段将其移植入毁损侧纹状体,观察移植前后PD模型大鼠旋转行为的变化和脑内多巴胺(DA)含量的改变,以及纹状体区酪氨酸羟化酶 (TH) 表达的变化。【结果】 B?C两组在移植后第2周?4周和8周时旋转行为及脑内DA含量均较A组有所改善(P < 0.05,P < 0.01),且B、C组间比较C组改善明显(P < 0.05),这种差异以第8周时最为明显。移植后B、C两组TH表达较A组明显增高,并随着时间的增加而逐渐增高,且C组在各时间点上TH表达较B组含量高(P < 0.05),并在移植后第8周时最为明显。【结论】 Nurr1基因修饰HUCB-MSC来源的多巴胺能神经元移植治疗PD模型鼠,能有效地增加鼠脑内多巴胺含量和纹状体区TH的表达,改善PD模型鼠的症状,为细胞移植治疗PD提供了一种崭新的手段。     

TH基因修饰NdSCs-D-BMSCs治疗PD大鼠的实验研究

目的:探讨大鼠酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)修饰的骨髓基质源性神经元样干细胞(neuronoid stem cells derived from bone marrow stem cells NdSCs-D-BMSCs)分别在脑室移植途径及纹状体移植途径下对帕金森病(Parkinson’s Disease PD)大鼠的治疗作用。方法:将酶切鉴定后的新构建质粒pEGFP-C2-TH经电穿孔法转染培养第8d NdSCs-D-BMSCs后,观察绿色荧光蛋白及TH的共表达,而后分别注射到PD大鼠模型右侧纹状体及右侧脑室,观察大鼠行为学变化,移植细胞在大鼠脑组织内的迁移,以及高效液相方法检测脑内DA的含量。结果:质粒pEGFP-C2-TH转染NdSCs-D-BMSCs后第5d,绿色荧光蛋白表达59.0%,与TH共表达率为83.5%;移植后10周,纹状体移植组及脑室移植组大鼠症状均显著改善,DA含量较模型对照组显著提高(P<0.01),分别恢复至正常水平46.6%、33.0%,移植细胞可以在PD大鼠脑内存活,并出现远处迁移。结论:TH修饰的大鼠NdSCs-D-BMSCs在纹状体移植及脑室移植途径下均对PD大鼠具有明显的治疗作用,为临床中多种移植途径的选择,特别是经脑室穿刺干细胞移植提供实验依据。     

酪氨酸羟化酶基因修饰的神经干细胞脑内移植PD模型动物旋转行为及神经生化研究

目的探讨TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响.方法构建pN2ATH逆转录病毒载体质粒,用PA317细胞包装,G418筛选阳性克隆,病毒上清感染神经干细胞,将神经干细胞和表达TH的神经干细胞植入PD大鼠纹状体内,测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及DA和DOPAC含量变化.结果 TH基因修饰的神经干细胞移植8周后能显著降低PD大鼠旋转行为,增加纹状体DA和DOPAC含量,疗效好于单纯神经干细胞移植组和对照组.结论 TH基因修饰的神经干细胞脑内移植能增加纹状体DA和DOPAC含量,降低PD大鼠旋转行为,从而对PD大鼠有明显的治疗作用,也为PD的治疗开辟了新途径.     

酪氨酸羟化酶基因修饰的神经干细胞脑内移植PD模型动物旋转行为及神经生化研究

目的 探讨TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响。方法 构建pN2ATH逆转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染神经干细胞，将神经干细胞和表达TH的神经干细胞植入PD大鼠纹状体内，测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及DA和DOPAC含量变化。结果 TH基因修饰的神经干细胞移植8周后能显著降低PD大鼠旋转行为，增加纹状体DA和DOPAC含量，疗效好于单纯神经干细胞移植组和对照组。结论 TH基因修饰的神经干细胞脑内移植能增加纹状体DA和DOPAC含量，降低PD大鼠旋转行为，从而对PD大鼠有明显的治疗作用，也为PD的治疗开辟了新途径。     

移植诱导中脑NSCs分化的多巴胺能神经元对PD大鼠治疗作用的实验研究

目的研究移植诱导中脑神经干细胞分化出的多巴胺能神经元对PD大鼠的治疗作用.方法利用纹状体提取液诱导大鼠胚胎中脑神经干细胞,使其部分分化为酪氨酸羟化酶(TH)阳性的多巴胺能神经元,继而把分化后的细胞移植到PD大鼠的纹状体内,免疫组化法证实移植细胞的存活并以诱发旋转行为的改善来观察其治疗作用.结果纹状体提取液能够诱导中脑神经干细胞分化出多巴胺能神经元而且这种经诱导后产生的细胞能够在PD大鼠体内长期存活并改善阿卟吗啡诱导的旋转行为.结论诱导中脑神经干细胞分化出的多巴胺能神经元对PD有一定的治疗作用.     

帕金森病发病机制、功能显像诊断及基因治疗的实验研究

目的研究帕金森病(PD)的发病机制,提高临床的正确诊断及其探索基因治疗。方法和结果MTT法、末端标记法(TUNEL)、流式细胞仪(FCM)、电镜、DNA电泳、RT-PCR和Western blot方法检测显示MPP~+致使MES23.5细胞活力显著减低,线粒体膜电势(△m)下降和氧自由基增加,MPTP、MPP~+和(或)6-OHDA使黑质细胞和(或)PC12细胞发生凋亡,Caspase-3mRNA表达增加。微透析与HPLC、免疫组化等显示PD患者血IgG、脂多糖(LPS)、Fe~(2+)致使大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞减少,纹状体多巴胺(DA)降低,MPTP致使猴纹状体谷氨酸、天门冬氨酸、一氧化氮增高。~(125)I-β-CIT、~(99m)Tc-TRODAT-1及~(125)I-IBZM、~(131)I-AIBZM单光子发射断层扫描和(或)放射自显影显示PD猴、大鼠或小鼠模型的纹状体DA转运载体(DAT)功能降低和D_2DA受体活性增强。转TH基因成肌细胞或转TH与GTP环水解酶-1(GCH)成纤维细胞,以及腺病毒介导的胶质源性神经营养因子(GDNF)移植治疗显示PD大鼠模型的旋转行为改善,TH和GDNF基因表达,以及DA浓度增加。结论氧化应激、兴奋性毒性、免疫异常等与PD发病有关。DAT和D_2DA受体显像有助于提高疾病的诊断和病情监测。TH和(或)GDNF基因可能是PD治疗的有效措施。     

建立类似于绝经期妇女帕金森病大鼠模型的实验研究

目的探讨利用6-羟基多巴(6-OHDA)制备模拟绝经期妇女帕金森病的大鼠模型。方法应用6-OHDA制备OVX PD模型大鼠,应用免疫组织化学染色、高效液相色谱法等技术对大鼠黑质(SN)的酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目、纹状体多巴胺(DA)及其代谢物二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)含量进行考察并评价。结果阿朴吗啡可诱导出明显的PD大鼠旋转行为;大鼠损伤侧黑质TH阳性神经元数量较健侧显著减少(P<0.01),纹状体DA及其代谢物DOPAC和HVA含量也较健侧明显减少(P<0.01)。结论本模型具有绝经期妇女帕金森病的基本的病理特点。     

腺病毒介导的血管内皮生长因子基因转移对帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因转移对帕金森病(PD)大鼠的保护作用。方法携带VEGF165基因的腺病毒(Ad-VEGF165)感染PD模型大鼠纹状体后,采用大鼠旋转行为观察、免疫组织化学方法和高效液相色谱技术检测VEGF165基因转移的PD大鼠行为学变化、黑质纹状体酪氨酸羟化酶(TH)、层黏蛋白(laminin)和胶质纤维原性酸性蛋白(GFAP)的表达以及纹状体区多巴胺(DA)及代谢产物含量变化。并与重组腺病毒载体(Ad-Lacz)组及磷酸盐缓冲液(PBS)组进行比较。结果Ad-VEGF165成功感染PD大鼠并高表达目的基因和蛋白。感染Ad-VEGF165的大鼠获得行为学改善,其黑质和纹状体TH阳性细胞数和纤维密度与对侧半球的比值(0．42±0．11和0．56±0．10)高于Ad-LacZ组(0．20±0．10和0．28±0．09)和PBS组(0．22±0．13和0．24±0．08),P<0．01;纹状体区血管和胶质细胞数量均明显增多;Ad-VEGF165感染组大鼠纹状体区DA及代谢产物含量与对侧比值也高于对照组。结论Ad-VEGF基因转移能保护PD大鼠多巴胺能神经元,血管和胶质细胞的增生可能参与了VEGF对在体多巴胺能神经细胞的保护机制。     

胚胎中脑细胞植入帕金森病模型大鼠脑内的实验研究

目的：观察胚胎中脑细胞脑内移植治疗帕金森病(PD)模型大鼠的长期疗效。方法：将取自11．5天胚胎(E11．5)大鼠的中脑细胞植入PD模型大鼠的绞状体，观察大鼠旋转行为的改变，并于移植手术1年后用免疫组织化学的方法检测移植细胞的存活及其分化为多巴胺能神经元的状况。结果：E11．5大鼠中脑细胞在植入脑内后能够明显改善PD大鼠的旋转行为，但只有不到0．1％的移植细胞能够分化成为多巴胺能神经元，这些分化良好的多巴胺能神经元可以在脑内长期存活。结论：E11．5大鼠的中脑细胞植入PD模型大鼠的绞状体后，虽然有一定的疗效，但其最终分化成为多巴胺能神经元的比例却较低，提示E11．5大鼠胚胎中脑细胞不如E13—E15大鼠胚胎中脑细胞脑内移植治疗PD的效果好。     

偏侧帕金森病猴模型的评价

目的通过测定行为、纹状体多巴胺转蛋白、多巴胺及黑质纹状体多巴胺能神经元评价应用ＭＰＴＰ制备的偏侧帕金森病猴模型。方法经右侧颈总动脉注射ＭＰＴＰ制备偏侧帕金森病猴模型,应用９９ｍＴｃ－ＴＲＯＤＡＴ－１ＳＰＥＣＴ显像观察纹状体多巴胺转运蛋白功能;采用微透析结合高效液相一电化学法检测纹状体细胞外液多巴胺（ＤＡ）及其代谢产物（ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ）含量;免疫组化法观察黑质纹状体酪氨酸羟化酶（ＴＨ）阳性神经元及纤维。结果ＭＰＴＰ注射侧多巴胺转运蛋白密度低于未注射侧,左右侧纹状体感兴趣区的比值为１．１０～１．１８。与未注射侧相比,ＭＰＴＰ注射侧纹状体细胞外液ＤＡ、ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡ分别降低７０％、３４％和３８％,黑质和纹状体ＴＨ阳性细胞及纤维为对侧的１０％～１５％。结论应用ＭＰＴＰ制备的偏侧帕金森病猴模型与人类早期帕金森病有一定的相似性。微透析和ＳＰＥＣＴ在体检测多巴胺转运蛋白和多巴胺是研究帕金森病的有效手段。     

The observation of transplanted embryonic motoneurons in the denervated muscles of adult rats.

OBJECTIVE: To observe the survival of embryonic motoneurons after they were transplanted into the denervated skeletal muscles and to find a new method to retard the atrophy of denervated muscles. METHODS: Dissociated embryonic motoneurons prelabled with 5-bromo-2'-deoxyuridine (Brdur) on the embryonic days 12 were injected into the denervated gastrocnemius muscles of adult rats. Then gastrocnemius muscles were processed with Nissl staining, acetylcholinesterase staining and Brdur immunocytochemical staining to show the implanted motoneurons at 9 and 22 weeks post-transplantation. Myofibrillar ATPase staining was used to show the morphology of muscle fibers. The rats in experimental group were implanted with embryonic motoneurons in the predenervation muscles, while the rats in control group were injected with just culture medium without motoneurons. RESULTS: Embryonic motoneurons survived, developed and extended long axons to form neuromuscular junctions with the denervated muscles. The differentiation of muscle fibers and fiber type grouping occurred among bigger fibers in experimental group. The transverse area was smaller and there was no apparent fiber type grouping in control group. CONCLUSIONS: Embryonic motoneurons can survive, develop and reinnervate denervated muscles after being transplanted into denervated muscles. It is worth further investigating on ameliorating the atrophy of denervated muscle.     

内质网应激中GRP78和ATF4–CHOP–Puma信号通路与帕金森病的关系及其治疗靶点的研究进展

内质网是真核细胞中重要的细胞器之一,与维持细胞稳态关系密切。当缺乏葡萄糖、缺氧、体内钙平衡紊乱或者发生氧化应激时,会引起细胞内未折叠蛋白或错误折叠蛋白的积累,导致内质网应激。帕金森病是一种慢性进行性脑变性疾病,典型的病理变化是黑质纹状体多巴胺能神经细胞变性丢失导致的多巴胺神经递质缺乏。目前对帕金森病的治疗多为缓解症状,但不能阻止疾病的进展。通过对内质网应激中的信号通路的研究发现：在帕金森病的发病过程中,多巴胺能神经元的选择性死亡与内质网应激有关。内质网应激过程中的中心调节因子：葡萄糖调节蛋白78（GRP78）及其下游ATF4–CHOP–Puma信号通路与帕金森病的发病过程有密切的联系,本文对GRP78及其下游ATF4–CHOP–Puma信号通路近些年来的研究进展进行综述,以期为帕金森病的治疗提供新的靶点和思路。     

Study on functions of regenerated axons in end-to-side neurorrhaphy

Traditionally, end-to-end anastomosis was adoptedin neurorrhaphy or nerve grafting. However, the routine technique can not supply distal nerve regenerateda-cons for those cases in which the distal nerve is intact, but the proximal nerve is seriously avulsed orinjured. Therefore, end-to-side anastomosis was advanced and became a hot spot of plastic surgery"'. Inorder to provide basis for clinical application of thisnew technique, animal model of great auricular nerveimplanting into the denerved…     

Intrastriatal Gene Transfer of Vascular Endothelial Growth Factor Rescues Dopaminergic Neurons in a Rat Parkinson's Disease Model

Parkinson's disease (PD) is a chronic progressivegerontic disease, which is characterized by the degeneration of dopaminergic neurons in substantia nigra. Efforhas been made to find effective treatment to arrest oslow down the degeneration of dopaminergic neuronsOnce regarded as an endothelial cell-specific factorvascular endothelial growth factor (VEGF), in recenyears, was unexpectedly found to be a critical player inneurodegeneration, and have direct neurotrophic andneuroprotective effects…     

帕金森病大鼠模型激发自体脑内神经干细胞增殖的实验研究

目的　研究帕金森病 (Parkinson’sdisease ,PD)大鼠激发自体脑内神经干细胞的增殖情况。方法　选用SD大鼠 ,将 6 羟多巴胺 (6 OHDA)注入纹状体内制作PD大鼠模型 ,假手术对照组注入等量生理盐水 ,于不同时间点处死大鼠。处死前均注射 5 溴脱氧尿苷 (Brdu)。免疫组织化学方法动态检测Brdu和巢蛋白 (Nestin)的表达 ,以确定脑内增殖细胞和神经前体细胞数量 ,Brdu/Nestin免疫双标确定脑内神经干细胞的增殖情况。结果　同正常组、假手术对照组比较 ,PD大鼠损伤侧海马区、侧脑室室管膜下区和黑质区的Brdu 细胞、Nestin 细胞和Brdu /Nestin 细胞数在模型成功后的第 3、5、7天明显增加 ,14d后逐渐减少 ,2 8d后恢复到正常水平。结论　 6 OHDA纹状体内注射制作PD的模型大鼠能够激活自体神经干细胞增殖。     

α-Synuclein与帕金森病临床前期动物模型研究

用 1 甲基 4 苯基 1 ,2 ,3 ,6 四氢吡啶 (MPTP)小剂量慢性给药建立帕金森病临床前期动物模型 ,观察小鼠脑组织形态学、生物化学及行为学方面的变化 ,同时对实验组小鼠黑质内α 突触核蛋白 (α synuclein ,NACP)阳性细胞数与纹状体内的突触数量进行动态变化的研究 ,探讨NACP与突触损伤之间的关系。C5 7BL/ 6j小鼠 60只 ,根据给药时间长短分为 5、1 0、1 5、2 0d 4组 ,腹腔注射MPTP〔4mg/ (kg·d)〕 ,正常对照组注射生理盐水。最后一次给药后 7d进行脑组织取材 ,分别进行NACP免疫组化染色、黑质纹状体形态学观察及纹状体内多巴胺含量的检测。发现 :1 )黑质内NACP免疫组化阳性细胞数在 5d组为最高峰 ,随后各组逐渐减少。 2 )电镜下黑质内除见固缩的神经细胞外 ,其他的神经元也有超微病理改变如线粒体肿胀、粗面内质网减少等。 3 )各给药组小鼠纹状体内的多巴胺含量与正常对照组相比均有明显下降 (P <0 .0 1 ) ,各给药组之间无明显差异 (P >0 .0 5 )。实验结果证实 :1 )低剂量MPTP慢性给药小鼠虽不能诱导出帕金森病的症状 ,但免疫组化、多巴胺含量测定及超微病理出现的改变可以作为帕金森病临床前期动物模型的参考指标。 2 )在MPTP慢性给药小鼠的早期阶段 ,黑质内神经细胞损伤时NACP表达水平增高可能是神?     

胎脑黑质脑内移植后帕金森病大鼠纹状体内THmRNA含量的研究

采用核酸斑点杂交技术对移植区可特异性反映移植物存活、功能状态的酪氨酸羟化酶的基因表达进行了连续定量分析，研究发现移植早期该酶ｍＲＮＡ表达量较高，移植术后４周，移植的功能开始处于稳定状态。     

失神经支配肌肉提取物对大鼠骨骼肌作用的组化与形态计量研究

目的　观察失神经支配肌肉提取物对大鼠骨骼肌的影响。方法　 40只大鼠随机分成 5组 ,分别用 5只大鼠和 5只切断坐骨神经 5天后的大鼠 ,取比目鱼肌 ,制成正常肌肉提取物 (normalmuscleextractNME)和失神经支配肌肉提取物 (denervatedmuscleextractDME)。连续 6天分别给DME处理组和NME处理组大鼠腹腔注射DME和NME ,用同样方法给对照组大鼠注射生理盐水 ,然后处死大鼠 ,取其比目鱼肌进行组织化学与形态计量分析。结果　在DME处理组的大鼠比目鱼肌中 ,肌纤维截面积及直径显著大于对照组和NME处理组 (P <0 .0 5 )。同时显示DME组大鼠比目鱼肌肌纤维的再生现象。结论　DME能够引起大鼠骨骼肌的肥大、再生 ,并可能与肌肉在失神经后的分泌代谢变化有关。