非融合重组人碱性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌中的克隆及高效表达

目的:获得大肠杆菌中高效表达的非融合重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF).方法:采用RT-PCR技术,以人胎儿脑组织的总RNA克隆出hbFGF基因,再以此为模板,设计引物,对hbFGF的TIR(翻译起始区)部分碱基进行改造和降低G C含量,最后将该新基因克隆于质粒载体pET-3C,转化于大肠杆菌中表达.结果:非融合rhbFGF在大肠杆菌中高效表达,占总蛋白量的30％以上.采用离子交换和亲和层析方法纯化后,生物活性与标准蛋白一致.结论:非融合rhbFGF及调整TIR区域的碱基序列能有效提高重组蛋白的表达效率.     

大肠杆菌分泌型载体表达重组人碱性成纤维细胞生长因子

设计构建了带有大肠杆菌外膜蛋白信号肽序列的重组分泌型表达载体ｐＳＥ－ｈｂＦＧＦ，在大肠杆菌ＤＨ５α中分泌表达了重组人碱性成纤维细胞生长因子。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹及生物活性测定均表明表达产物分泌到细胞细菌周质和培养式中。分泌到周质中的ｒｈｂＦＧＦ可占周质总蛋白的１５％。     

重组蛋白在大肠杆菌分泌表达的研究进展

长期以来,大肠杆菌是表达外源蛋白的首选表达系统,重组蛋白分泌表达与胞内表达相比有很大优越性,在细胞周质腔不仅能促进重组蛋白二硫键的形成及正确折叠,还能促进分泌蛋白的N-端加工。本文综述了近年来在大肠杆菌中表达可溶性外源蛋白的进展,目的是为了提高外源蛋白的生物活性。     

在大肠杆菌周质表达重组蛋白的研究进展

大肠杆菌表达系统是基因表达技术中发展最早和应用最广的表达系统,由于大肠杆菌周质空间具有其独特优势,重组蛋白在周质表达和提取技术得到国内外学者的关注。文章从重组蛋白在大肠杆菌周质表达的特点、提高周质蛋白表达的策略以及周质蛋白提取技术进行了论述。     

表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的重组卡介苗的构建及免疫原性[英]

本文报道了分别以胞质蛋白、细胞壁相关脂蛋白和分泌蛋白形式表达大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LT-Bh)的三株重组卡介苗(rBCG:CY、rBCG:CW和rBCG:SC)的构建及其在小鼠中的免疫原性.BCG为巴斯德1173A2亚株,大肠杆菌为DH5α株.大肠杆菌etxB基因自煮沸的人产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)培养物用含BamHI位点的3种有义引物和含HindⅢ位     

pET28a-Streptag I-SbpA-Ag85B重组质粒的表达与鉴定

目的 应用分子克隆技术获得纳米级Ag85B蛋白并对其进行鉴定和免疫学特性检测.方法 利用S-layer/Streptag I这一具有自我组装能力的纳米模式嵌合结核杆菌分泌的Ag85B蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pET28a（＋）中,并在大肠杆菌中表达Ag85B蛋白,表达后的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定.结果 原核表达重组质粒pET28a-Streptag I-SbpA-Ag85B成功构建,并可在大肠杆菌中诱导表达,得到的Streptag I-Sbpa-Ag85B蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确,重组蛋白能被结核患者血清识别.结论 重组后的Ag85B蛋白具有较强的免疫反应性.所建立的原核表达体系为新型结核疫苗研制提供了一个新的思路.     

ProZZ-EGFP融合蛋白基因在大肠杆菌中分泌表达条件的优化

目的优化大肠杆菌分泌表达ProZZ-EGFP融合蛋白基因的培养条件。方法采用摇瓶培养,在液体培养基中加入终浓度不同的蔗糖、Triton X-100和甘氨酸,诱导大肠杆菌周质腔内蛋白质“泄漏”到液体培养基中,利用ProZZ-EGFP浓度-荧光强度标准曲线快速检测培养基中目的蛋白质浓度。结果利用大肠杆菌HB101表达ProZZ-EGFP融合蛋白,在培养基中含有终浓度1%Triton X-100及1%甘氨酸,可使ProZZ-EGFP在培养液的分泌表达量提高6倍。结论仅在培养基中加入几种物质即可提高ProZZ-EGFP融合蛋白的分泌表达量,简单易行。     

新基因Betatrophin原核重组蛋白表达及纯化

目的 构建人Betatrophin基因(h-Betatrophin)原核表达载体,诱导Betatrophin重组蛋白表达及纯化,为制备Betatrophin蛋白多克隆抗体及其功能研究打下基础.方法 体外克隆Betatrophin cDNA序列,酶切后连接到PET32 a(+)原核表达载体上,构建重组载体h-Betatrophin-PET 32 a,然后转入大肠杆菌BL 21(DE 3),用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE-考马斯亮蓝染色及Western blotting检测蛋白表达情况,然后用Ni-NTA His·Bind(R)Resin纯化目的蛋白.结果 成功构建Betatrophin基因原核表达载体,诱导表达Betatrophin重组蛋白表观分子量正确,经纯化后可以得到纯度较高的Betatrophin重组蛋白.结论 重组载体h-Betatrophin-PET 32 a转入大肠杆菌BL 21后通过诱导及纯化可获取到纯度很高的Betatrophin重组蛋白,为后期研究Betatrophin基因功能奠定基础.     

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位研究进展

不耐热肠毒素B亚单位(heat-labile enterotoxin B subunit,LTB)是产肠毒素性大肠杆菌分泌到细胞周质的肠毒素的组成部分,具有黏膜免疫佐剂活性,可介导细菌与肠上皮细胞结合.此文对LTB的结构、重组表达、作为黏膜佐剂的免疫学评价和作用机制等方面进行综述.     

重组TGF β1在大肠杆菌中的表达、纯化

目的通过pET 43.1原核表达载体,表达重组人转化生长因子β1(human transform growth fac-tor,rhTGFβ1)。方法将人工整合了肠激酶作用位点的TGFβ1,插入到含有NusA蛋白的融合表达载体pET 43.1中。重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21(+)并用IPTG诱导表达。通过镍柱纯化重组蛋白,用Western blot杂交检测重组蛋白的免疫原性,用肠激酶酶切得到TGFβ1单体。结果 SDS-PAGE结果显示,相对分子质量约为70 000的融合蛋白大部分在上清中表达,目的融合蛋白量约占菌体总蛋白量的80%。取超声上清,通过His亲和色谱系统纯化目的融合蛋白,纯度质量分数为95%。肠激酶切割得到TGFβ1单体,经Western blot检测重组蛋白的免疫原性。结论人转化生长因子β1在大肠杆菌中实现了高效表达,获得了具有免疫原性的重组TGFβ1。