circAGFG1/miR-487a-3p轴调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的实验研究

目的 探讨circAGFG1对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响和作用机制。方法 RT-qPCR检测31例卵巢癌患者的癌组织和对应的癌旁组织中circAGFG1和miR-487a-3p表达。体外培养SKOV3细胞,分别转染circAGFG1小干扰RNA、miR-487a-3p模拟物或抑制剂后,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell法对细胞迁移和侵袭进行检测,Western blot对细胞中Ki-67、MMP-2、MMP-9、Vimentin和E-cadherin蛋白表达进行检测。双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1和miR-487a-3p调控关系。结果 circAGFG1在卵巢癌组织中表达升高,miR-487a-3p表达降低。下调circAGFG1或上调miR-487a-3p阻碍SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT。circAGFG1在SKOV3细胞中靶向负调控miR-487a-3p表达。敲减miR-487a-3p逆转下调circAGFG1对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的影响。结论 下调circAGFG1可能通过靶向上调miR-...     

miR-106a-5p靶向GAB1影响人心肌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的 探究心力衰竭患者血浆中miR-106a-5p的表达水平及其影响人心肌细胞增殖和凋亡的潜在机制.方法 利用RT-qPCR检测45例心力衰竭患者和健康志愿者血浆中miR-106a-5p的表达水平;利用Lipofectamine 2000转染miR-106a-5p模拟物及模拟物对照至人心肌细胞系,RT-qPCR验证转染...     

miR-146a在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖-凋亡的影响

目的探讨miR-146a在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响。方法RT-qPCR检测21例卵巢癌组织及对应癌旁正常卵巢组织中miR-146a表达;将miR-146a模拟物和miR-146a阴性对照转染到卵巢癌SKOV3细胞中,RT-qPCR检测转染后SKOV3细胞中miR-146a的表达;CCK8检测转染后miR-146a对SKOV3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染后miR-146a对细胞凋亡的影响;Western blot检测SKOV3细胞p-Akt和Bcl-2的表达。结果 miR-146a在卵巢癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织;转染miR-146a模拟物能显著提高SKOV3细胞miR-146a的表达量,显著降低SKOV3细胞的增殖能力,提高SKOV3细胞的凋亡率,抑制SKOV3细胞p-Akt和Bcl-2的蛋白表达(P0.01)。结论 miR-146a在卵巢癌癌组织低表达,转染miR-146a模拟物能抑制SKOV3细胞增殖,促进SKOV3细胞凋亡。     

miR-130a-3p 通过调控 PDK1 影响肝癌细胞糖代谢的研究

目的 探讨 miR-130a-3p 通过靶向糖代谢关键酶 PDK1 对肝癌细胞糖代谢以及增殖迁移的影响, 为肝癌的诊断及治疗提供新的方向。 方法 qRT-PCR 技术检测肝癌的临床组织和细胞中 miR-130a-3p 的表 达, 克隆形成、 CCK-8、 Transwell 和细胞划痕实验检测细胞的增殖和迁移; Western 印迹检测相关蛋白的表 达; 乳酸检测试剂盒, ATP 检测试剂盒和 PDH 活性检测试剂盒分别检测细胞中乳酸的生成、 ATP 的生成和 PDH 的活性; 双荧光素酶报告基因实验验证 miR-130a-3p 与 PDK1 3′UTR 靶向结合。 结果 在肝癌组织和 细胞中 miR-130a-3p 呈低表达, 并与患者肿瘤组织的大小和 TNM 分期有关; 过表达 miR-130a-3p 能够增强 肝癌细胞中 PDH 活性, 抑制乳酸和 ATP 的生成, 从而抑制肝癌细胞的增殖和迁移; miR-130a-3p 可以靶向 调控 PDK1; 抑制 PDK1 的表达, 能够逆转 miR-130a-3p 过表达对细胞增殖和迁移能力的增强, 此外对 PDH 活 性、 乳酸和 ATP 的影响也被逆转。 结论 miR-130a-3p 通过靶向调控 PDK1 影响肝癌细胞糖酵解及恶性进展。     

miR-146a-3p抑制胰岛素样生长因子1表达调控星形胶质细胞增殖、迁移和凋亡

背景：mi R-146a-3p水平改变是大多数神经系统疾病发病机制中的常见事件,mi R-146a-3p调节星形胶质细胞的具体机制尚未被研究。目的：验证mi R-146a-3p通过胰岛素样生长因子1调控星形胶质细胞的增殖、迁移和凋亡。方法：将12只SD大鼠随机分为假手术组和脊髓损伤组,每组6只。术后2周对大鼠脊髓组织进行了RNA-Seq测序分析,筛选出差异基因(log2FC>2),同时挑选出Genecards数据库中脊髓损伤相关基因(Score>20),再通过Targetscan预测mi R-146a-3p的靶基因,取这3个基因集交集,筛选出胰岛素样生长因子1为其中一个重要的目的基因。q PCR、Western blot和免疫组化分析脊髓组织中胰岛素样生长因子1的表达水平。将原代星形胶质细胞分为NC组、NC-mimics组和mi R-146a-3p mimics组,用Annexin-V/PI染色法检测细胞凋亡情况、CCK-8法检测细胞增殖情况、Transwell法检测细胞的迁移能力。结果与结论：脊髓损伤组大鼠脊髓组织中mi R-146a-3p的表达较假手术组下降(P <...     

miR-520c-3p靶向MEX3A调控肺癌细胞增殖、凋亡的分子机制

为研究miR-520c-3p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其潜在的作用机制,用实时定量RT-PCR检测肺癌细胞H1299、NCI-H460、A549和正常肺上皮细胞BEAS-2B中miR-520c-3p和MEX3同源物A(MEX3 homolog A,MEX3A)的表达水平。将miR-NC、miR-520c-3p、si-NC、si-MEX3A、anti-miR-NC、anti-miR-520c-3p转染至H1299细胞后,用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测蛋白表达,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果显示,与正常肺上皮细胞BEAS-2B比较,肺癌细胞H1299、NCI-H460、A549中miR-520c-3p的表达水平均显著降低(P0.05),MEX3A mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P0.05)。miR-520c-3p过表达、MEX3A抑制表达均可抑制H1299细胞的增殖活力,促进细胞凋亡;miR-520c-3p过表达抑制CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达,促进p21、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白的表达;MEX3A抑制表达抑制CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达,促进p21、Bax蛋白的表达。miR-520c-3p可靶向调控MEX3A的表达;MEX3A过表达逆转了miR-520c-3p过表达对肺癌细胞H1299的增殖抑制和凋亡促进作用。提示miR-520c-3p可抑制肺癌细胞H1299的增殖,促进其凋亡,其机制可能与靶向MEX3A有关,这将为肺癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

目的探究miR-300介导LKF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制。方法体外培养卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组。空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋A质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋A质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果卵巢癌SK0V3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋内相对表达(T15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=O.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、B ax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高。结论miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关。     

lnc AL928768.3通过miR-92a-3p/ADAM10轴对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:探讨lnc AL928768.3如何通过miR-92a-3p/解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)轴调控类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖和凋亡。方法:qPCR检测RA患者滑膜组织lnc AL928768.3和miR-92a-3p表达。生物信息学手段和双荧光素酶报告基因实验分析lnc AL928768.3、miR-92a-3p与ADAM10的靶向关系,Western blot分析ADAM10表达。MTT检测MH7A细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot检测MH7A细胞增殖和凋亡相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)和活化的半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)表达。结果:lnc AL928768.3在RA患者滑膜组织中呈高表达,而miR-92a-3p呈低表达。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验证实,lnc AL928768.3可靶向负调控miR-92a-3p表达,且ADAM10是miR-92a-3p的直接靶基因。抑制lnc AL928768.3表达或敲低ADAM10表达均可抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡;干扰miR-92a-3p能够逆转抑制lnc AL928768.3对MH7A细胞增殖抑制和凋亡的促进作用;过表达lnc AL928768.3或干扰miR-92a-3p表达能够逆转敲低ADAM10对MH7A细胞增殖抑制和凋亡的促进作用。结论:lnc AL928768.3在RA患者滑膜组织中表达上调,抑制lnc AL928768.3通过miR-92a-3p/ADAM10轴抑制MH7A细胞增殖并促进细胞凋亡。     

lncRNA MALAT1通过上调miR-30a-5p促进乳腺癌细胞增殖

目的 探讨lncRNA MALAT1靶向miR-30a-5p对乳腺癌细胞增殖的影响。方法 CCK-8实验检测lncRNA MALAT1对乳腺癌细胞MCF7增殖的影响。建立MCF7荷瘤小鼠模型检测lncRNA MALAT1对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。通过生物信息学网站预测miR-30a-5p是否与lncRNA MALAT1结合,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证。Real time-qPCR检测lncRNA MALAT1过表达对miR-30a-5p表达的影响。CCK-8实验检测lncRNA MALAT1过表达载体和miR-30a-5pmimics共转染到MCF7细胞对细胞增殖的影响。结果过表达lncRNA MALAT1促进MCF7细胞的体外增殖及MCF7细胞荷瘤小鼠肿瘤生长。lncRNA MALAT1与miR-30a-5p结合,且过表达lncRNA MALAT1下调miR-30a-5p的表达。结论 lncRNA MALAT1通过下调miR-30a-5p表达促进乳腺癌细胞增殖。     

miR-22-3p调控TCTN1基因对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:探讨miR-22-3p对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法:qRT-PCR检测正常皮肤组织和皮肤鳞状细胞癌组织中miR-22-3p和TCTN1 mRNA水平,Western blot检测TCTN1蛋白水平.转染miR-22-3p mimics或TCTN1小干扰RNA至皮肤鳞状细胞癌A431细胞,q...     

microRNA-29a-3p通过p70s6k/S6信号通路促进乳腺癌细胞增殖

目的 研究microRNA-29a-3p在乳腺癌细胞系中的表达,探讨miR-29a-3p对p70s6k/S6信号通路以及对乳腺癌细胞增殖能力的影响.方法 首先通过实时聚合酶链反应检测乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10A中miR-29a-3p的表达水平,选取miR-29a-3p表达较高...     

miR-199a-3p 通过靶向 CABLES-1 调控流体剪切力介导的成骨细胞增殖

目的 探讨miR-199a-3p在流体剪切力(fluid shear stress, FSS)诱导成骨细胞增殖中的作用及其可能的分子机制。方法 对成骨细胞MC3T3-E1加载1.2 Pa FSS,时间分别为0、15、30、45、60、75、90 min。使用miR-199a-3p模拟物或miR-199a-3p抑制物转染MC3T3-E1细胞。使用将过表达的miR-199a-3p以及其阴性对照分别转染MC3T3-E1细胞,并以1.2 Pa FSS处理45 min。将pcDNA NC、pcDNA-CABLES-1、si RNA NC、si RNA CABLES-1转染至MC3T3-E1细胞中。分别共转染pc DNA-CABLES-1与miR-199a-3p mimic以及si RNA-CABLES-1与miR-199a-3p inhibitor。CCK-8实验检测细胞活性;RT-qPCR检测CABLES-1、 miR-199a-3p、CDK 6、Cyclin D1、PCNA表达水平;荧光素酶报告实验检测CABLES-1和miR-199a-3p的靶向关系。免疫荧光检测CABLES-1蛋白表达。...     

miR-28-3p通过调控Notch表达影响子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨微小RNA-128-3p(miR-128-3p)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法:培养人子宫内膜血管内皮细胞hEEC和EC细胞系HEC-1A、Ishikawa和AN3CA,RT-qPCR检测细胞中miR-128-3p和Notch1 mRNA表达水平,Western blot法检测细胞中...     

FGD5-AS1调控miR-133a-3p对脓毒症血管内皮细胞的细胞活性、凋亡及炎症因子表达的影响

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(LncRNA FGD5-AS1)对脓毒症血管内皮细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响及其分子机制.方法:原代培养大鼠血管内皮细胞,10 mg/ml LPS处理细胞24 h构建脓毒症模型.采用qRT-PCR检测FGD5-AS1与微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p...     

甘草查尔酮A可能通过调控miR-506-5p对宫颈癌细胞增殖和凋亡的分子机制

目的 探讨甘草查尔酮A(licochalcone A,Lic A)可能通过调控miR-506-5p对宫颈癌细胞增殖和凋亡的分子机制.方法 体外培养宫颈癌细胞系SiHa,将细胞分为Control组、Lic A 15 μmol/L组、Lic A30 μmol/L组、Lic A 45μmol/L组、Lic A+anti-mi...     

miR-301a-3p对大鼠星形胶质细胞Cx43转录后的靶向调控作用

目的:研究大鼠星形胶质细胞中微小RNA-301a-3p(miR-301a-3p)对缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的靶向调控作用及其作用位点。方法:合成miR-301a-3p agomir和miR-301a-3p antagomir,转染至星形胶质细胞,Western blot检测各组细胞中Cx43蛋白的表达情况;构建重组载体wt-pEZX-MT05-Cx43和mut-pEZX-MT05-Cx43,采用双萤光素酶报告基因实验验证miR-301a-3p的靶基因;构建表达载体pcDNA3.1-Cx43,通过回复实验分析miR-301a-3p对细胞凋亡的影响。结果:将miR-301a-3p agomir转染到星形胶质细胞后,Western blot检测显示,与对照组相比,Cx43蛋白表达显著降低(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,miR-301a-3p能够与Cx43的3′-UTR结合,对其表达产生负调控;将不含Cx43 3′-UTR的重组载体pcDNA3.1-Cx43转染星形胶质细胞后,能够回复miR-301a-3p对Cx43蛋白表达的负调控作用,引起细胞凋亡。结论:Cx...     

HOTAIR通过靶向抑制miR-519d促进人卵巢癌SKOV3细胞增殖

目的研究HOTAIR对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响以及可能机制。方法使用Lipofectamine TM2000试剂将HOTAIR过表达慢病毒载体以及HOTAIR沉默慢病毒载体分别稳定转染SKOV3卵巢癌细胞后,应用Realtime PCR验证其转染效率;应用CCK-8法检测HOTAIR对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响;应用Real-time PCR检测人SKOV3卵巢癌细胞中miR-519dm RNA表达变化。应用双荧光素酶报告基因验证HOTAIR和miR-519d存在靶向结合并明确其结合位点。结果和对照组相比,HOTAIR过表达显著促进了人卵巢癌SKOV3细胞的增殖,极大降低了miR-519d在SKOV3细胞中的m RNA水平;HOTAIR和miR-519d存在靶向结合,并明确了其结合位点;miR-519d过表达显著抑制了人卵巢癌SKOV3细胞增殖能力;miR-519d过表达有效阻断了HOTAIR促进SKOV3细胞增殖的作用。结论 HOTAIR能够通过靶向抑制miR-519d,提高人卵巢癌SKOV3细胞的增殖能力。     

lncRNA ZFAS1靶向miR-193a-3p调控宫颈癌细胞Siha放射敏感性的分子机制研究

目的:探讨lncRNA ZFAS1对宫颈癌细胞放射敏感性的影响以及其作用机制.方法:实验设置pcDNA组、pcDNA-ZFAS1组、si-con组、si-ZFAS1组、IR+si-con组、IR+si-ZFAS1组、si-ZFAS1+anti-miR-con组、si-ZFAS1+anti-miR-193a-3p组、IR...     

miR-99a-5p靶向SLC44A1对肺癌细胞系A549增殖的影响

目的 探讨miR-99a-5p通过靶点SLC44A1对肺腺癌(LUAD)细胞系增殖的抑制作用及可能机制.方法 从基因表达综合数据库(GEO)中检索并筛选GPL18058的microRNA(miRNA)表达阵列,筛选出肺癌与正常组织差异表达的miR-99a-5p后,通过Target Scan Human数据库预测其下游靶点SLC44A1,并利用UALCAN分析SLC44A1在肺癌组织中的表达情况和LUAD预后关系.利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺腺癌细胞系miR-99a-5p和SLC44A1的表达水平.在A549细胞中转染miR-99a-5p模拟物,通过CCK-8试验、克隆形成实验检测A549的增殖情况;qRT-PCR和Western blot检测SLC44A1的表达.在A549细胞中过表达SLC44A1,评估其对肺癌调节中的miR-99a-5p的选择性作用.结果 在LUAD组织和细胞系中,miR-99a-5p的表达异常下调,过度异位表达的miR-99a-5p抑制A549细胞的增殖(P＜0.05).在LUAD组织和细胞系的基因和蛋白质水平上,miR-99a-5p负性调控SLC44A1(P＜0.05).SLC44A1过度表达有效地逆转了miR-99a-5p在体外对A549细胞增殖的抑制作用.SLC44A1的低表达有利于患者生存率的提高(P＜0.05).结论 miR-99a-5p抑制LUAD中A549细胞系的增殖,并通过负性调控SLC44A1发挥作用.