亚硒酸钠对肺癌细胞生物学行为的影响及其相关机制研究

目的 探究亚硒酸钠对肺癌细胞生物学行为的影响以及如何通过NF-κB信号通路影响肺癌凋亡的具体机制.方法 CCK-8细胞增殖实验、细胞划痕实验观察肺癌细胞的增殖和迁移的能力;流式细胞术、qPCR和Western blot实验检测不同浓度亚硒酸钠处理后的肺癌细胞的凋亡率、凋亡标志因子Bcl-2和Bax的mRNA和NF-κB信号通路相关蛋白(NF-κB、p-NF-κB、IkBα、p-IkBα)的变化水平;细胞免疫荧光实验观察p-NF-KB在细胞内的变化水平和分布情况.结果 CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕实验显示肺癌细胞增殖和迁移被亚硒酸钠显著抑制.流式结果显示,亚硒酸钠处理后细胞凋亡率明显增加.与对照组相比,亚硒酸钠组的 p-NF-KB、p-IkBα、Bcl-2蛋白的表达水平和Bcl-2 mRNA表达水平均下调,而Bax蛋白和mRNA表达水平则与之相反.细胞免疫荧光实验结果显示亚硒酸钠可使NF-κB的磷酸化水平受到抑制.qPCR结果显示,亚硒酸钠组与BAY11-7082(NF-κB抑制剂)均可使Bcl-2 mRNA表达水平下调,Bax mRNA表达水平则上调.结论 亚硒酸钠可能抑制肺癌细胞的增殖和迁移,同时通过抑制NF-κB信号通路诱导肺癌细胞的凋亡.     

NF-κB基因沉默对人胃癌SGC7901细胞增殖影响及机制探讨

目的:研究NF-κB基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖及TFF3、ERK表达的影响。方法:应用脂质体法将靶向NF-κB的干扰RNA(si RNA)转染入胃癌细胞株SGC7901中。采用MTT法和流式细胞术法检测NF-κB基因沉默对SGC7901细胞的增殖抑制率和细胞凋亡情况,运用Real time PCR和Western blot免疫蛋白印迹法检测SGC7901细胞内TFF3、ERK的表达。结果:MTT法显示NF-κB基因沉默组癌细胞抑制率大于空白载体组和对照组(P0.01);流式细胞术法表明NF-κB基因沉默组细胞凋亡比例达12.60%,明显高于空白载体组和对照组(P0.01);RT-PCR和Western Blot检测示,经NF-κB基因沉默后,细胞内NF-κB、TFF3、ERK m RNA及蛋白表达量下降明显。结论:NF-κB基因沉默可抑制胃癌细胞的增殖并促进其凋亡。NF-κB基因作为胃癌治疗的分子靶点可能具有重要意义。     

miR-92a通过调控NF-κB信号通路及EMT过程对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响

探究miR-92a通过调控核因子-κB（NF-κB）信号通路及上皮间质转化（EMT）过程对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。方法 收集2021年6月—2022年6月于本院行手术切除的50例宫颈癌组织标本及其癌旁正常组织标本,体外培养的细胞株包括正常人宫颈上皮HCvEpC细胞及宫颈癌细胞系Me 180、Caski、C-33A、Hela。qRT-PCR检测宫颈癌组织和细胞中miR-92a、NF-κB mRNA的表达;分析miR-92a表达与患者临床病理参数的关系;靶基因预测、双荧光素酶验证miR-92a对NF-κB的靶向调控作用;Pearson检验分析宫颈癌组织中miR-92a与NF-κB mRNA的相关性;将Hela细胞分为对照组、miR-NC组、miR-92a组、miR-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+pcDNA-NC组和miR-92a inhibitor+NF-κB组,采用脂质体瞬时转染法分别转染相应的质粒;MTT法、CCK-8、Transwell小室实验、划痕实验、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期分布情况;Western blot分析各组细胞中NF-κB及EMT相关蛋白的表达。结果 宫颈癌组织和细胞中miR-92a和NF-κB mRNA的表达均显著上调（P＜0.05）;miR-92a表达与患者的肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移有明显的相关性（P＜0.05）;miR-92a靶向促进NF-κB表达;宫颈癌组织中miR-92a与NF-κB mRNA呈明显正相关（P＜0.05）;与对照组和miR-NC组相比,miR-92a组细胞OD值、单克隆形成数目、细胞侵袭数目、划痕愈合率、停留在S期的比例明显增加,NF-κB、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率、停留在G0/G1期的比例、E-cadherin、α-catenin蛋白表达水平明显下降,miR-92a inhibitor组获得与上述相反的结果（P＜0.05）;与miR-92a inhibitor+pcDNA-NC组相比,miR-92a inhibitor+NF-κB组细胞OD值、单克隆形成数目、细胞侵袭数目、划痕愈合率、停留在S期的比例明显增加,NF-κB、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率、停留在G0/G1期的比例、E-cadherin、α-catenin蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）。结论 miR-92a可靶向促进NF-κB表达,增强宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力和EMT,促进细胞周期进程,抑制细胞凋亡,从而降低宫颈癌细胞的放疗敏感性     

芦荟大黄素调控Notch-1/Akt/NF-κB信号通路对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响

目的:观察芦荟大黄素调控Notch-1/AKT/NF-κB信号通路对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法:实验分为对照组(正常培养SGC-7901细胞)、芦荟大黄素低剂量组(SGC-7901细胞+芦荟大黄素10 mg·L^-1)、芦荟大黄素中剂量组(SGC-7901细胞+芦荟大黄素30 mg·L^-1)及芦荟大黄素高剂量组(SGC-7901细胞+芦荟大黄素50 mg·L^-1)。噻唑蓝比色法检测各组细胞培养后的增殖抑制率;Transwell小室检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-APC/7-AAD双染法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Notch-1/AKT/NF-κB信号通路蛋白及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达。结果:与对照组比较,芦荟大黄素低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞增殖抑制率升高(P<0.05),细胞穿膜个数和划痕闭合率明显降低(P<0.05),G0/G1期肿瘤细胞比例增加(P<0.05),细胞凋亡AI值升高(P<0.05),Notch-1、p-Akt、P65、Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值降低,Bax表达升高(P<0.05)。结论:芦荟大黄素可能通过阻滞SGC-7901细胞在G0/G1期,抑制其增殖能力,降低迁移和侵袭能力,并通过抑制Notch-1/AKT/NF-κB信号通路起到诱导细胞凋亡作用。     

API-2靶向抑制P13K／Akt信号通路干预胃癌细胞生长的研究

目的研究蛋白激酶B抑制剂-2（API-2）靶向抑制P13K／Akt信号通路中Akt位点,从而对胃癌细胞生长的影响。方法使用API-2处理人胃癌细胞株SGC7901。MTT法检测0,2,4,6,8μmol／LAPI-2作用不同时间对细胞增殖的影响;荧光染料A0／EB染色观察不同浓度API-2作用24h后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞周期变化;Westernblot法检测P—AKT蛋白以及下游蛋白NF-κB表达情况。结果API-2可抑制SGC7901细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性;不同浓度API-2作用24h后,对细胞的部分周期有明显的影响,也可直接导致肿瘤细胞凋亡、坏死,并且p-AKT蛋白及下游蛋白NF-κB表达均减少。结论API-2有效地抑制P13K／Akt信号通路中Akt位点,影响SGC7901细胞的周期．减少NF-κB的表达,具有增殖抑制及诱导凋亡作用。     

NF-κB途径在舒林酸促人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB（NF-κB）途径在舒林酸促人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,舒林酸（0.1、0.3、0.6、1.2、2.4 mmol/L）作用后,苏木精-伊红染色、电镜观察药物作用后细胞形态学变化,免疫组化、Western-blot方法检测药物对人胃癌SGC-7901细胞核因子κB（NF-κB）、bcl-2、bax蛋白表达的影响。结果苏木精-伊红染色检测结果显示舒林酸抑制肿瘤细胞生长,肿瘤细胞出现核固缩、核碎裂、染色质边集等凋亡及坏死的形态学表现;电镜下可看到染色质边集、凋亡小体;免疫组化、West-ern-blot结果显示舒林酸作用48 h后人胃癌SGC-7901细胞NF-κB、bcl-2表达逐渐下降,bax表达逐渐上升,具有剂量依赖性。NF-κB与bcl-2蛋白表达率之间具有相关性（r=0.846 5,P〈0.01）。结论舒林酸可以促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡,NF-κB途径在舒林酸促进胃癌SGC-7901细胞凋亡中发挥部分作用。     

miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路促进脂多糖诱导的肺上皮细胞凋亡

目的 探讨miR-519d-3p对脂多糖LPS诱导的肺上皮细胞A549细胞凋亡的影响,并研究其具体作用机制。方法 LPS处理A549细胞构建急性肺损伤体外细胞模型,细胞内转染miR-519d-3p拮抗剂或miR-519d-3p激动剂构建miR-519d-3p下调或者上调的细胞模型。NF-κB抑制剂 Bay 11-7082预处理用来抑制细胞内NF-κB通路活性。qRT-PCR检测A549细胞内miR-519d-3p水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白和TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达,细胞免疫荧光检测 NF-κB p65蛋白细胞核移位情况。结果 LPS处理A549细胞后,细胞内miR-519d-3p水平上升,并呈浓度依赖性;上调miR-519d-3p能够促进A549细胞凋亡,而下调则降低细胞凋亡;进一步分子机制研究表明miR-519d-3p通过影响TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达及其磷酸化,诱导NF-κB蛋白细胞核移位而影响细胞凋亡;NF-κB抑制剂可缓解miR-519d-3p上调引起的细胞凋亡。结论 miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路影响LPS诱导的肺上皮细胞凋亡。     

NF-κB活化及livin,survivin表达上调与胃癌细胞耐药的关系

目的:探讨核转录调节因子NF-κB活性及凋亡抑制蛋白livin, survivin的表达与胃癌细胞耐药的关系.方法:MTT法检测化疗药物长春新碱(VCR)对胃癌细胞SGC7901及耐药细胞SGC7901/VCR的生长抑制作用;流式细胞仪检测VCR作用后细胞的凋亡率;ELISA法检测NF-κB核转录活性;Western blot检测livin, survivin蛋白表达.结果:化疗药VCR对SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用较SGC7901细胞显著降低,VCR作用SGC7901/VCR细胞的凋亡率减少;SGC7901/VCR细胞中NF-KB核转录活性增强(P<0.01);livin, survivin在SGC7901/VCR细胞中表达上调(P<0.05).结论:胃癌细胞SGC7901在化疗药VCR长期诱导后产生的继发耐药可能与NF-κB活化及livin, survivin表达上调有关;NF-κB活化是livin, survivin表达上调可能的调控因素.     

胃癌细胞NF-κB和survivin的表达对 TRAIL抗瘤作用的影响

目的探讨胃癌细胞NF-cB和survivin的表达对TRAIL抗瘤作用的影响.方法应用细胞培养和流式细胞仪检测的方法,观察胃癌细胞SGC-7901、MKN28、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞凋亡率,Western blot方法分析四种胃癌细胞中NF-κB和survivin的表达.结果TRAIL300 ng/ml作用于胃癌细胞24 h后,胃癌细胞MKN28、MKN45、AGS和SGC-7901的凋亡率分别为36.05%、20.27%、16.50%和11.80%.Western blot结果显示SGC-7901细胞NF-κB、survivin的表达均高于MKN28细胞的表达.结论TRAIL具有选择性诱导肿瘤细胞凋亡的特性,肿瘤细胞对TRAIL的耐药现象,可能与凋亡抑制因子survivin和NF-κB的表达有关.     

姜黄素通过抑制NF-κB的活化增加胃癌细胞的放疗敏感性

目的检测姜黄素对胃癌细胞的放疗增敏作用,并探讨其具体分子机制。方法MTr法检测姜黄素对胃癌细胞系增殖的影响。克隆形成实验检测姜黄素对放疗敏感性的影响。胃癌细胞系BGC-823经射线照射并利用姜黄素干预后,利用Westernblot技术检测细胞内p65、pSO、AKT和p-AKT的表达情况。结果姜黄素能够抑制胃癌细胞的增殖及细胞照射后的克隆形成能力。姜黄素能够抑制照射后胃癌细胞中的NF-κB亚基p65和p50的核内表达水平,降低细胞中AKT的磷酸化水平（P〈0．05）。结论NF-κB的活性增高和AKT信号通路的活化可能是导致胃癌细胞放疗敏感性降低的重要途径之一。而姜黄素能够通过抑制NF-κB的表达及AKT信号通路的活化增加胃癌细胞的放疗敏感性。     

miR-125b通过TLR4/NF-κB信号通路对心脏成纤维细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨miR-125b通过Toll样受体4/核因子κB（TLR4/NF-κB）信号通路对心脏成纤维细胞增殖和迁移的影响,阐明miR-125b在心肌纤维化中的作用及机制。方法：将对数生长期HEH2细胞随机分为空白对照组、阴性对照组和miR-125b inhibitors组。miR-125b inhibitors组HEH2细胞转染miR-125b inhibitors,阴性对照组HEH2细胞转染阴性对照inhibitors,空白对照组HEH2细胞不进行转染。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定各组细胞中miR-125b水平,采用MTT法测定HEH2细胞增殖活性,Transwell小室测定HEH2细胞迁移能力,采用Western blotting法测定HEH2细胞中Ⅰ型胶原蛋白（Col Ⅰ）、Ⅲ型胶原蛋白（Col Ⅲ）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、TLR4和NF-κB蛋白表达水平。结果：与空白对照组和阴性对照组比较,miR-125b inhibitors组HEH2细胞中miR-125b水平降低（P<0.01）,细胞增殖活性和迁移细胞数降低（P<0.05）,Coll Ⅰ、Coll Ⅲ、α-SMA、TLR4和NF-κB蛋白表达水平降低（P<0.05）。空白对照组和阴性对照组HEH2细胞中miR-125b水平,细胞增殖活性,迁移细胞数,细胞中Coll Ⅰ、Coll Ⅲ、α-SMA、TLR4和NF-κB蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：下调miR-125b水平可抑制心脏成纤维细胞增殖和迁移,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。     

β-榄香烯对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及Survivin表达和Caspase酶活性的影响

目的 观察伊榄香烯对人胃癌细胞系SGC-7901凋亡抑制蛋白survivin及caspase酶活性的影响，探讨β-榄香烯诱导SGC-7901凋亡的作用机制。方法 用不同浓度β-榄香烯作用胃癌SGC-7901细胞后，分别采用Northern blot、Western blot检测Survivin mRNA和蛋白水平，用酶标仪比色法检测Caspase酶活性，分别采用TUNEL法检测细胞凋亡。结果 β-榄香烯能下调Survivin mRNA和蛋白水平，增强Caspase酶活性，并诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡，效果呈浓度和作用时间依赖性。结论 β-榄香烯能诱导人胃癌细胞系SGC-7901凋亡，可能与下调Survivin表达与增强Caspase酶活性有关。     

胃癌细胞来源的exosomes诱导Jurkat T细胞凋亡及其机制初探

目的 研究胃癌细胞来源的exosomes对JurkatT细胞凋亡的影响,初步探讨NF-κB通路在此过程中的作用.方法 采用离心超滤和蔗糖密度梯度超速离心的方法从胃癌SGC7901细胞的上清液中分离出胃癌来源的exosomes.透射电子显微镜下观察exosomes形态.台盼兰拒染法检测细胞增殖能力,瑞氏-姬姆萨染色检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白的表达.结果 透射电子显微镜下观察胃癌SGC7901细胞来源的exosomes具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,它们的直径在30～100nm之问.Exosomes能抑制Jurkat T细胞增殖,并能诱导Jurkat T细胞凋亡,在此过程中伴随有p-IKK表达的下调.结论 胃癌细胞来源的exosomes能抑制Jurkat T细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB通路有关.     

芍药苷抑制NF-κB的活性促进人胃癌细胞凋亡

目的:探讨中药白芍的有效成分--芍药苷对人胃癌SGC-7901细胞株NF-κB的活性以及细胞凋亡的影响.方法:将芍药苷以不同浓度及不同时间作用于胃癌SGC-7901细胞.应用Western Blot方法检测各组胞核NF-κB表达情况,并应用胞核NF-κB活性检测(ELISA法)进一步确定胞核内NF-κB的表达情况,流式细胞仪检测联合应用芍药苷及5-氟尿嘧啶(5-FU)对胃癌细胞凋亡的影响.结果:芍药苷对胃癌SGC-7901细胞胞核NF-κB表达有明确的抑制作用,Western Blot以及胞核NF-κB活性检测结果均显示这种抑制存在着时间及剂量依赖现象,流式细胞术检测结果表明芍药苷对5-FU诱导的肿瘤细胞凋亡有明显的促进作用.结论:芍药苷抑制了细胞内NF-κB的表达,并借助这种作用增强5-FU诱导的细胞凋亡效应.     

姜黄素通过抑制NF-κB信号通路增敏阿霉素的抗肝癌作用

目的探讨姜黄素增敏阿霉素治疗肝癌的效果和机制。方法 MTT法检测联合用药前后姜黄素和阿霉素对HepG2细胞抑制率的影响。应用Western-blot法检测联合用药前后NF-κB信号通路及其下游蛋白Bcl-2的表达,以及与内源性凋亡相关的Caspase的表达。结果联合用药后药物对HepG2细胞的抑制率明显增高,并且NF-κB信号通路的核心蛋白p65以及Bcl-2都发生明显下调。此外,与内源性凋亡相关的Caspase得到激活凋亡效果增强。结论姜黄素在体外与阿霉素联合应用,可以降低NF-κB信号通路的表达,增敏阿霉素的抗肝癌作用。     

调控miR-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及机制研究

目的:探究调控微小RNA(miR)-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法:通过转染不同质粒将Hela细胞分为miR-642a-5p mimic组、miR-642a-5p mimic NC组,以未做任何处理的Hela细胞作为对照组。RT-qPCR法检测miR-642a-5p、NF-κB mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组、miR-642a-5p mimic NC组比较,miR-642a-5p mimic组miR-642a-5p的表达量及细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h的细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率降低(均P<0.05);对照组与miR-642a-5p mimic NC组miR-642a-5p、NF-κB mRNA、NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率、细胞凋亡率比较,...     

辣椒素对食管鳞状细胞癌细胞凋亡和NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨辣椒素对食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)细胞凋亡和NF-κB信号通路的影响。方法:采用Westernblot法检测食管鳞癌EC9706和Eca109细胞中IκBα、磷酸化IκBα(pIκBα)、p50和p65蛋白的表达及0、50、100和200μmol/L辣椒素作用后pIκBα和Bcl-2蛋白的表达;凝胶滞留实验检测2种食管鳞癌细胞胞核中NF-κB与DNA的结合活性及0、100和200μmol/L辣椒素作用对NF-κB与DNA结合活性的影响。2种食管鳞癌细胞分别分为对照组、5-FU组、辣椒素组和联合组,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:2种食管鳞癌细胞胞质均表达IκBα和pIκBα蛋白,胞核均表达p50和p65蛋白;随辣椒素作用浓度的增加,pIκBα和Bcl-2蛋白的表达逐渐下降,NF-κB与DNA的结合活性也逐渐下降。辣椒素可促进2种食管鳞癌细胞的凋亡,与5-FU联合使用时,凋亡细胞显著增加(EC9706:F辣椒素=2535.497,F交互=113.034,P<0.001;Eca109:F辣椒素=5984.040,F交互=5.150,P<0.05)。结论:辣椒素可能通过抑制IκBα的磷酸化阻断NF-κB信号通路,促进食管鳞癌细胞凋亡。     

铁线莲皂苷对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的:观察扬子铁线莲中提取的三萜类皂苷成分对人胃癌SGC-7901 细胞株生长及凋亡的作用,研究其对核转录因子NF-κB 活性的影响,初步探讨其可能的作用机制?方法:应用不同浓度铁线莲皂苷作用于SGC-7901细胞48 h后,MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测联合应用铁线莲皂苷及5-氟尿嘧啶(5-FU)后SGC-7901细胞凋亡率;应用Western blot 方法检测各组胞核中NF-κB p65表达情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)进一步确定胞核内NF-κB的活性?结果:铁线莲皂苷各浓度组对胃癌SGC-7901细胞生长抑制率均明显高于对照组(P < 0.05),且随药物浓度的增加而上升?铁线莲皂苷对5-FU 诱导的细胞凋亡有明显的促进作用?Western blot及ELISA法均证实铁线莲皂苷对胞核NF-κB 表达及活性有一定的抑制作用,并且这种抑制作用存在着剂量依赖现象?结论:铁线莲皂苷对胃癌SGC-7901细胞具有抑制增殖?诱导凋亡的作用,其诱导细胞凋亡的机制可能与抑制胞核NF-κB表达有关?     

miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌生物学行为的影响

目的:探讨miRNA-101在胃癌组织和细胞中的表达情况及对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:应用实时荧光定量PCR法分析31例胃癌组织和癌旁组织样本以及人胃癌细胞系SGC-7901、MKN45、人正常胃黏膜上皮细胞系GES1中miRNA-101的表达水平;建立miRNA-101重组腺病毒载体感染胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,对照组为感染阴性对照病毒的胃癌细胞系SGC-7901、MKN45,MTT法检测miRNA-101对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室法检测胃癌细胞的迁移和侵袭能力.结果:胃癌组织中miR-101表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);miR-101在细胞系SGC-7901和MKN45中的表达量明显低于人正常胃黏膜上皮细胞系GES1(P<0.01).孵育48 h后MKN45细胞miRNA-101组的细胞增殖能力低于其对照组(P<0.05);而孵育72 h后SGC-7901细胞和MKN45细胞的miRNA-101组细胞增殖能力均亦低于相应对照组(P<0.05).迁移试验结果显示,miRNA-101组迁移的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数明显低于相应对照组(P<0.01);侵袭实验结果显示,miRNA-101组侵袭的胃癌细胞SGC-7901和MKN45的平均细胞数亦明显低于其对照组(P<0.01).结论:miRNA-101在胃癌组织和胃癌细胞系中表达下调,转染miRNA-101可明显降低SGC-7901和MKN45细胞的增殖、迁移、侵袭能力,miRNA-101可能参与了胃癌疾病的发生及发展.     

miR-449a/b负反馈调节E2F1抑制胃癌细胞增殖

摘要：目的 探讨miR-449a/b在胃癌发生中的可能作用机制。方法 采用qRT-PCR方法检测了miR-449a/b和E2F1基因在胃癌细胞BGC-823和胃粘膜细胞GES-1表达情况;采用瞬时转染技术将miR-449a/b模拟物(mimic)以及mimic阴性对照分别转入胃癌细胞BGC-823中,qRT-PCR验证转染成功后,通过CCK-8法检测胃癌细胞的增殖能力,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡的变化,细胞划痕实验检测胃癌细胞的迁移能力,Western blot方法检测miR-449a/b上调后其靶基因蛋白的表达水平;并通过转染E2F1过表达质粒和空质粒对照入胃癌细胞BGC-823,Western blot确定转染效率后,分别用qRT-PCR和数字PCR检测miR-449a/b的表达水平。结果 相比于正常胃粘膜细胞株GES-1,miR-449a/b在胃癌细胞株BGC-823中表达均下调（P<0.01）;过表达miR-449a/b可抑制胃癌细胞BGC-823增殖和迁移,并促进其凋亡（P<0.05）;过表达的E2F1可上调miR-449a/b的表达（P<0.001）,而上调miR-449a/b的表达,其直接靶基因CDK4、CDK6表达下调,并可通过CDKs-pRb-E2F1信号通路,间接下调E2F1蛋白的表达（P<0.01）。结论 miR-449a/b的低表达和E2F1的高表达均参与了胃癌的发生、发展,并且miR-449a/b能负反馈调节E2F1抑制胃癌细胞增殖。