导读

弯曲菌(Campylobacter)属于革兰阴性菌,菌体呈弧状、S形或螺旋形。菌体单端或两端有单根鞭毛,赋予弯曲菌较强的运动性。目前发现弯曲菌属有近30个菌种和很多亚种。主要分为:食源性弯曲菌,包括空肠弯曲菌、结肠弯曲菌、乌普萨拉弯曲菌、海鸥弯曲菌和豚肠(猪肠)弯曲菌;口腔定植弯曲菌,包括简明弯曲菌、直肌弯曲菌、唾液弯曲菌等,目前研究发现可能与人的龋齿、牙周疾病相关;特异动物定植弯曲菌,如C.iguaniorum,C.corcagiensis,C.volucris,C.canadensis等,可能导致动物疾病,但与人类疾病的系需深入研究。     

沙门菌主要血清型标准菌株的筛选鉴定

目的 依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022),获得8种沙门菌主要血清型标准株,并建立标准株筛选主要流程。方法 分别对原代及传代沙门菌菌株进行形态学观察、生化试验及基因组测序分析,获得形态及生化典型、基因组稳定的标准菌株。结果 从24株沙门菌中筛选获得8株分属8种血清型(伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、单相鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌)的菌株,这8株菌在沙门菌推荐用选择性培养基上形态典型,生化反应典型,传代后基因组变异较小,血清凝集结果稳定,可以作为沙门菌检验的参比菌株。结论 本研究通过筛选获得具有相应血清型病原特征的8种沙门菌主要血清型标准株,可作为沙门菌检测、血清分型质控、基因组进化分析的参比菌株,并为后续核酸标准品的研制提供基础。     

我国607株不同宿主来源弯曲菌耐药基因簇aadE-sat4-aphA-3分布分析

目的 了解不同宿主来源弯曲菌对氨基糖苷类抗生素的耐药现状,确定耐药菌株中氨基糖苷类耐药基因簇aadE-sat4-aphA-3的分布,并初步了解耐药菌株的菌型特征。方法 利用琼脂稀释法分析不同宿主来源菌株针对链霉素最小抑菌浓度(MIC),对耐药的221株菌通过聚合酶链反应筛查氨基糖苷类耐药基因簇aadE-sat4-aphA-3的分布情况。选取不同来源共100株耐药菌株进行多位点序列分型分析并进行聚类分析,获得耐药菌株的菌型特征及遗传相关性。结果 607株弯曲菌中共筛查到221株(36.41%)链霉素耐药株(MIC4 g/ml),其中腹泻患者来源菌株耐药率33.33%(78/234)、鸡来源菌株耐药率35.14%(123/350)、猪来源菌株耐药率86.96%(20/23)。空肠弯曲菌耐药率14.37%(51/355),结肠弯曲菌耐药率67.46%(170/252)。24株(10.86%)链霉素耐药弯曲菌中筛查到aadE-sat4-aphA-3耐药基因簇,分别来自腹泻患者14株、鸡4株、猪6株。100株耐药菌株共分为58种ST序列型。结论 结肠弯曲菌链霉素耐药率明显高于空肠弯曲菌,猪源弯曲菌耐药率显著高于人源和鸡源,空肠弯曲菌与结肠弯曲菌中均筛查到aadE-sat4-aphA-3耐药基因簇。     

2017-2018年山东省青岛地区畜禽源弯曲菌耐药性调查

目的调查2017—2018年山东省青岛地区畜禽源弯曲菌的流行与耐药现状。方法2017—2018年,从青岛地区的猪/鸡养殖场、屠宰场、农贸超市等场所采集畜禽泄殖腔(肛门)、盲肠、肉等样本,分离弯曲菌,对分离株进行种属鉴定和药敏试验,运用PCR方法检测大环内酯类基因erm(B)与增强型耐药外排泵基因RE-cmeABC。结果共采集畜禽源样本730份,分离到235株(34.66%)弯曲菌,包括空肠弯曲菌131株(55.74%)、结肠弯曲菌104株(44.26%)。其中鸡源菌株147株,分离率为29.40%(147/500);鸭源菌株80株,分离率为47.06%(80/170);猪源菌株8株,分离率为13.33%(8/60)。药敏试验结果显示,结肠弯曲菌对环丙沙星、四环素、卡那霉素、红霉素、庆大霉素、克林霉素和氟苯尼考的耐药性较为严重,耐药率分别为100.00%、99.04%、96.15%、92.31%、92.31%、87.50%、53.85%。空肠弯曲菌对四环素、环丙沙星、卡那霉素和氟苯尼考的药性较为严重,耐药率分别为100.00%、98.47%、70.99%、61.83%。PCR方法检测到12株(5.11%)erm(B)基因阳性菌株,125株(53.19%)REcmeABC基因阳性菌株。结论本研究提示应持续监测青岛地区畜禽源弯曲菌的耐药现状与耐药机制,为控制耐药弯曲菌的流行提供理论基础。     

临床血液标本中18株弯曲菌的菌种与特征分析

目的了解临床血液标本中分离的18株弯曲菌的菌种类型与特征。方法按常规生化实验、16S rRNA基因和rop B基因测序技术对分离株进行种型鉴定,结合鉴定结果、生长属性和临床资料分析其病原学特征。结果 18株血流感染的病原菌均为革兰阴性逗点样弯曲或螺旋样弯曲的弧形菌。经16S rRNA基因和rop B基因测序分析,共有13株胎儿弯曲菌龟亚种、1株胎儿弯曲菌胎儿亚种,2株空肠弯曲菌空肠亚种,1株大肠弯曲菌和1株海鸥弯曲菌。临床资料显示,弯曲菌血流感染主要对象为新生儿和有基础性疾病患者(如肝炎、糖尿病、高血压),大多不伴随腹泻症状。体外存活实验显示,胎儿弯曲菌相对于空肠弯曲菌、大肠弯曲菌等具有较强的生存能力,其在含血液的血培养瓶中可存活一年以上。结论胎儿弯曲菌龟亚种可能是我国弯曲菌血流感染的主要菌型。     

利用基因芯片技术分析空肠弯曲菌的遗传特征

目的 为分析我国弯曲菌遗传特征,本研究根据已发表多株弯曲菌的全基因组测序特征及比对结果自行设计基因芯片,利用芯片对我国不同宿主来源菌株进行遗传特异性分析。方法 根据前期基因组水平比对分析的结果,利用Combimatrix tilingCustomArrayTM 90K芯片,设计DNA芯片。芯片包含已测序菌株 ICDCCJ07001、269.97、NCTC11168、81-176、81-116和RM1221共3384个CDS的探针序列,以及空肠弯曲菌耐药及致病性相关2个质粒共80个CDS的探针序列,与脂寡糖的合成相关基因簇16种共219个CDS的探针序列、荚膜多糖合成相关基因簇7种共160个CDS的所有序列。对我国不同宿主来源27株分离菌株提取DNA,利用芯片进行杂交,获得杂交信息并分析不同菌株CDS分布特征分析及聚类特点。结果 中国菌株的主要变异区域主要存在于与脂寡糖、荚膜多糖合成相关的基因簇、鞭毛修饰相关的基因簇、DNA限制/修饰相关的基因簇以及空肠弯曲菌Mu样噬菌体基因簇。基因组水平不同来源菌株CDS分布的聚类结果没有发现显著的宿主归因特点,但GBS相关菌株脂寡糖合成相关基因组成具有共性特征。结论 通过验证以及与过去研究的比较,本次研究中的基因芯片技术结果准确可信,本研究所用基因芯片在分析空肠弯曲菌基因多态性方面具有很好的优势,可用于弯曲菌遗传特征和重要毒力因子的分析和检测。     

2016－2018年北京市顺义区成年人腹泻患者弯曲菌感染监测及病原学特征分析

目的综合分析北京市顺义区3年期间基于过滤法从成年人腹泻患者分离的弯曲菌菌株的分型特征、耐药特点及分布特征,为我国弯曲菌感染的防控及风险评估提供基础数据。方法连续3年（2016 — 2018年）收集腹泻监测项目中的腹泻患者粪便标本,应用增强过滤法分离弯曲菌并进行菌种鉴定。 应用多位点序列分型（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）2种方法进行细菌分子分型。 采用琼脂稀释法进行分离菌株的抗生素敏感性分析。结果2016 — 2018年,腹泻病例中弯曲菌的检出率分别为5.65%（17/301）、10.51%（39/371）和7.75%（29/374）。 共分离弯曲菌87株,空肠弯曲菌占87.36%（76/87）,结肠弯曲菌占12.64%（11/87）。 76株空肠弯曲菌被分为55种序列分型（ST）,11株结肠弯曲菌被分为9种ST型别。 病例发病时间聚集且分离的弯曲菌为相同ST型别的情况出现了6次,通过PFGE分析,5次聚集病例分离的菌株均呈现单一PFGE带型。 76株空肠弯曲菌的多重耐药率为55.26%（42/76）,11株结肠弯曲菌的多重耐药率为90.91%（10/11）。结论弯曲菌是北京市顺义区成年人腹泻患者的重要病原菌,过滤法可作为弯曲菌分离培养的有效技术方法。 从顺义区腹泻患者分离的结肠弯曲菌多重耐药严重,应引起公共卫生、临床等多部门的关注。     

广州地区儿童空肠弯曲菌感染的检测与分析

目的掌握广州地区空肠弯曲菌引起儿童感染性腹泻的现状,探索空肠弯曲菌的检测方法及耐药状况。方法对2011~2014年该院可疑空肠弯曲菌感染患儿的粪便进行病原菌的分离培养和常规生化鉴定,然后进行聚合酶链反应(PCR)测序确认,同时对所分离菌株进行药敏试验。结果近4年来从2 088例腹泻患儿粪便标本中共检出154株空肠弯曲菌,经生化反应鉴定和PCR检测确认,PCR检测限可达6CFU/mL;该地区儿童感染空肠弯曲菌对亚胺培南和氨基糖苷类药物敏感,对氯霉素、林可霉素和红霉素等抗菌药物耐药率10%,对氟喹诺酮、氨苄西林和四环素有较高耐药率(24.03%~44.16%),对复方磺胺甲噁唑和头孢菌素耐药。结论空肠弯曲菌是儿童腹泻的重要病原菌之一,重症患者可导致严重后果,应引起重视,积极开展对疑似患者的空肠弯曲菌检测;常规检测和特异性的PCR检测有利于提高检出率。     

2016-2018年湖南省株洲市弯曲菌的流行特征及耐药性分析

目的了解湖南省株洲市弯曲菌的流行病学现状和耐药特征。方法2016年7月至2018年6月,在株洲市对腹泻病例和无腹泻症状儿童开展流行病学调查,并采集粪便标本进行弯曲菌的分离培养和耐药性分析。结果共调查人群粪便标本450份,弯曲菌的检出率为6.44%(29/450),其中无腹泻症状儿童的检出率为1.00%(1/100),腹泻病例的检出率为8.00%(28/350)。弯曲菌感染的临床症状以腹泻、腹痛、黏液便、粪便镜检均有红、白细胞为主;5~岁组检出率较高,为19.44%(7/36);学生的检出率最高,为17.65%(6/34);男、女性患者的检出率差异无统计学意义(χ2=1.354,P=0.245);春秋季弯曲菌的检出率高于夏冬季。29株弯曲菌中24株为空肠弯曲菌,5株为结肠弯曲菌,其中41.38%的菌株为多重耐药菌株,菌株对萘啶酸、环丙沙星和四环素的耐药性较强,分别为96.15%、88.46%、76.92%。结论空肠弯曲菌、结肠弯曲菌感染已成为株洲市感染性腹泻的重要病原菌之一,耐药性严重并存在多重耐药现象,应加强弯曲菌的监测和防控。     

荧光定量PCR方法在空肠弯曲菌检测中的应用

空肠弯曲菌是引起人类食源性疾病的主要病原菌之一。快速、特异检测方法的建立对于该病原菌感染的诊断及鉴别诊断具有重要意义。荧光定量PCR方法作为一种快速诊断方法已经广泛应用于空肠弯曲菌的检测及鉴定。本文从荧光定量PCR方法在空肠弯曲菌病原检测中的建立、发展以及应用等方面进行综述。     

McAb—Dot—ELISA对空肠弯曲菌快速鉴定的研究

应用本室研制的抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体。以Dot-ELISA 对空肠弯曲菌进行快速鉴定.通过对实验条件的优选,确定了Dot-ELISA 的工作程序.对两种参考菌株(Pcnner.Loir)、人及10种动物来源的476株空肠弯曲菌进行了鉴定,结果均为阳性反应。可在3h 内报告结果.与11种其它细菌的试验结果表明,除与幽门弯曲茵发生弱阳性反应外,与另外其它10种细菌均为阴性反应.为空肠弯曲菌的鉴定提供了一种特异、快速的方法.     

实时荧光聚合酶链反应检测空肠弯曲菌

目的 探索一种快速、敏感、特异的空肠弯曲菌检验方法.方法 根据GenBank公布的空肠弯曲菌基因序列,在其保守区域设计特异性引物与探针以建立基于TaqMan探针的实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法,并对方法的特异性、敏感性和重复性进行研究.结果 该方法对空肠弯曲菌可产生特异扩增信号,对其他非空肠弯曲菌菌属无响应,其检测敏感性可达10cfu/mL.反应体系具有很高的稳定性.结论实时荧光PCR可快速、特异、灵敏地检测空肠弯曲菌,具有较强的实际应用价值.     

深圳市南山区腹泻患者弯曲菌感染及病原学特征分析

目的获得本地区秋季腹泻患者弯曲菌的感染现状及病原学特征。方法收集深圳市南山区2018年9 — 11月腹泻患者的粪便标本,采用双孔滤膜法分离培养弯曲菌并应用荧光聚合酶链式反应（PCR）方法进行菌种鉴定。 应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）和多位点序列分型（MLST）对分离菌株进行分子分型,应用琼脂稀释法获得菌株对11种抗生素的最小抑菌浓度（MIC）。 根据菌株的序列分型（ST）结果,结合既往菌株分型数据进行本地区菌株的遗传聚类分析。结果共采集腹泻患者粪便标本150份,其中男性患者74例,女性患者76例,年龄在1～86岁之间。 150份粪便标本中共分离到弯曲菌18株,检出率为12.00%（18/150）。 菌种鉴定发现,空肠弯曲菌占77.78%（14/18）,结肠弯曲菌占22.22%（4/18）。 14株空肠弯曲菌可分为11种PFGE带型,8个ST型别,以ST9763最多（35.71%,5/14）,是本研究新发现ST型别。 14株空肠弯曲菌对四环素全部耐药,对红霉素、阿奇霉素、泰利霉素、庆大霉素、链霉素及克林霉素100.00%敏感。 ST型别最小生成树聚类分析结果表明,不同宿主来源菌株没有显著聚集性,腹泻患者分离菌株分布在不同来源的组群中。结论采用双孔滤膜法提高了腹泻患者中弯曲菌的检出率。本地区弯曲菌的感染仍以空肠弯曲菌为主, 分离菌株对四环素类、喹诺酮类抗生素呈现较高的耐药特征,分离的空肠弯曲菌ST呈弥散分布特点。     

空肠弯曲菌感染与人格林-巴利综合征

弯曲菌是全球范围内主要的人兽共患性、细菌性肠道病原菌之一,对人致病的弯曲菌主要是空肠弯曲菌和结肠弯曲菌。特定血清型空肠弯曲菌引起的肠炎是人格林-巴利综合征(GBS)的重要前驱因子。本文对空肠弯曲菌引起GBS的流行病学与致病机制等研究情况及进展进行了综述。     

实时荧光聚合酶链反应检测空肠弯曲菌

目的探索一种快速、敏感、特异的空肠弯曲菌检验方法。方法根据GenBank公布的空肠弯曲菌基因序列,在其保守区域设计特异性引物与探针以建立基于TaqM an探针的实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法,并对方法的特异性、敏感性和重复性进行研究。结果该方法对空肠弯曲菌可产生特异扩增信号,对其他非空肠弯曲菌菌属无响应,其检测敏感性可达10 cfu/mL。反应体系具有很高的稳定性。结论实时荧光PCR可快速、特异、灵敏地检测空肠弯曲菌,具有较强的实际应用价值。     

应用TaqMan实时荧光-聚合酶链反应方法快速检测粪便标本空肠弯曲菌的研究

目的建立空肠弯曲菌TaqMan实时荧光-PCR方法,用于粪便标本的直接检测。方法根据空肠弯曲菌特异性基因hipO和mapA分别设计引物和探针,在对2组引物和探针进行灵敏度、特异性和重复性评价的基础上,对45例临床腹泻患者粪便标本提取DNA之后,荧光PCR检测,同时进行分离培养。 结果两组引物和探针能准确检测空肠弯曲菌菌株2株,检测限可达到10~20 cfu/ml,并与其他肠道致病菌无交叉反应。检测45份腹泻病例粪便标本,该方法检测到3份为阳性,同时进行的传统培养方法仅从该3份标本中的两份中分离到空肠弯曲菌。 结论本研究建立的TaqMan荧光PCR检测粪便标本中所携带的空肠弯曲菌灵敏度高,特异性好,能够提高粪便中空肠弯曲菌的阳性检出率和缩短检测时限。     

深圳地区不同来源空肠弯曲菌毒力基因分布及分子分型研究

目的 了解深圳地区市售禽类食品和腹泻病人中分离的空肠弯曲菌毒力基因分布及其分子分型情况。方法 根据特异性引物,运用聚合酶链式反应(PCR)检测空肠弯曲菌4种毒力基因(cdtB,cadF,flaA,virB11),应用脉冲场凝胶电泳分型技术(PFGE)对空肠弯曲菌分离株进行分子分型。结果 3种毒力基因在禽类食品分离株(5株)和腹泻病人分离株(5株)的分布情况一致,均携带cdtB和cadF,但均未检出virB11,两种来源菌株flaA的检出情况分别为3/5和2/5; PFGE聚类分析图谱显示,10株空肠弯曲菌经Sam I 酶切后可分别产生5～9条DNA条带的PFGE带型,其中食品株与病人株之间部分存在高度同源,同源性达到85%以上,但高度同源的菌株之间携带flaA毒力基因的分布不同。结论 深圳地区空肠弯曲菌存在cadF,cdtB,flaA等3种毒力基因,不同来源菌株之间同时具备多样性和同源性,提示空肠弯曲菌腹泻病人的感染来源可能与受污染的禽类食品密切相关,为该地区食源性空肠弯曲菌腹泻病提供基础性资料和依据。     

空肠弯曲菌脂寡糖核心区合成相关基因簇遗传多样性研究

目的分析我国空肠弯曲菌脂寡糖(LOS)核心区合成相关基因簇的序列特征,获得LOS核心区合成相关基因簇的特异DNA序列特征。方法选择132株空肠弯曲菌的全基因组序列,采用OrthoMCL软件,进行LOS核心区合成相关基因簇DNA的同源性分析并以特异型别基因簇的特异序列为靶位点,建立PCR方法,根据特异引物序列以及扩增产物大小,识别菌株LOS核心区合成相关基因簇的主要型别。结果在132株菌中,105株菌的LOS核心区合成相关基因簇的DNA序列属于14个已确定的LOS型别,27株菌为新型LOS,根据DNA的同源性可分为10个新型别,分别命名为CDC1~10。LOS合成相关基因序列中存在大量的多聚A/T、多聚G/C结构以及碱基的插入、缺失等突变,部分突变有可能导致LOS相关合成酶及转移酶的氨基酸序列发生改变,影响其抗原性。针对A、B、C、CDC8型LOS的特异DNA序列建立的PCR鉴定方法可在50株测序菌株的基因组中得到验证。结论10种LOS新型别的发现有利于更准确地鉴定空肠弯曲菌,解释LOS的抗原多样性特征。空肠弯曲菌的LOS核心区合成相关基因簇序列多样丰富,存在大量多聚结构和DNA序列的突变,是潜在的导致LOS抗原多样性的原因。主要LOS分型的PCR法可用于快速筛查5种特异LOS型,但仍需要更多菌株的验证。     

空肠弯曲菌耐药现状

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni)是革兰阴性的,微需氧弯曲菌,是目前世界上发达国家和发展中国家普遍存在的主要食源性病原菌,也是旅行者腹泻的主要致病菌[1]。空肠弯曲菌的感染导致空肠弯曲菌病,其主要症状为腹泻性肠炎,此外研究证明空肠弯曲菌的感染与格林巴-利综合征(Guillain-Barre Syndrome,GBS)密切相关,是空肠弯曲菌感染造成主要疾病负担之一[2]。在自然界中,空肠弯曲菌广     

2016-2022年云南省市售禽畜肉中弯曲菌污染状况调查分析

目的 了解云南省市售禽畜肉中弯曲菌的污染状况,为食源性疾病的防控提供依据。方法 对2016—2022年云南省16个地(州、市)市售禽畜肉进行随机采样和弯曲菌检测,根据肉类别、样品采集年份、地区、采样环节和季度,对样品中弯曲菌的污染状况进行分析。结果 弯曲菌总检出率为9.21%(178/1 932),空肠和结肠弯曲菌检出率分别为5.75%(111/1 932)和3.47%(67/1 932)。禽肉中弯曲菌的检出率(11.42%,160/1401)高于畜肉(3.39%,18/531),两者差异有统计学意义(χ²=31.521,P<0.001)。弯曲菌在鲜肉、冷却肉和冻肉中的检出率差异有统计学意义(χ²=38.975,P<0.001),冷却肉中检出率最高,为16.67%(39/234),冻肉中检出率最低,为1.89%(5/264)。不同年份采集的样本弯曲菌检出率差异有统计学意义(χ²=26.597,P<0.001;空肠弯曲菌χ²=33.466,P<0.001;结肠弯曲菌χ^...