大肠杆菌耐热毒素与不耐热毒素B亚单位交联菌苗对家兔的保护作用

大肠杆菌的耐热肠毒素(ST)和不耐热肠毒素(LT)可引起急性腹泻。LT及其B亚单位都是全抗原,而ST是半抗原,只有与大分子载体偶联时才有免疫原性。将有毒性的ST与无毒性的LT的B亚单位交联,其产物不但具有两者的抗原性,而且使ST的毒性降低600多倍。作者最近将合成的ST用碳化二亚胺法与LT的B亚单位交联,制成ST-B菌苗,免疫家兔和大鼠。     

霍乱毒素单克隆抗体与大肠杆菌不耐热肠毒素的交叉反应

作者用纯化霍乱毒素(CT)以两种方案分别免疫纯系8～14周龄BALB/c雄性或雌性小鼠:(1)首先用1μg CT静脉注射,然后每次间隔2周,用2、5、5、5和10μgCT注射,再隔3周,用5μg CT连续2天作静脉加强免疫。2天后杀鼠取脾,制备脾细胞悬液;(2)首先腹腔内注射CT 2μg(含于0.5ml弗氏完全佐剂中),3周后,腹腔注射     

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位研究进展

不耐热肠毒素B亚单位(heat-labile enterotoxin B subunit,LTB)是产肠毒素性大肠杆菌分泌到细胞周质的肠毒素的组成部分,具有黏膜免疫佐剂活性,可介导细菌与肠上皮细胞结合.此文对LTB的结构、重组表达、作为黏膜佐剂的免疫学评价和作用机制等方面进行综述.     

用大肠杆菌不耐热肠毒素的全毒素或B亚单位免疫大鼠的保护作用

[Klipstein FA et al:Infect Immun 31(1):144,1981(英文)] 由于霍乱弧菌和大肠杆菌的产肠毒素性菌株通过在肠腔内产生肠毒素而引起腹泻,因此考虑用免疫学方法来预防这些疾病。试验是将三种免疫原性相关的大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)、全毒素(HT)和其B亚单位以及多粘菌素释放型LT(PM LT)作比较,各以不同的剂量免疫大鼠,分别用三种途径作初次     

霍乱毒素与大肠杆菌不耐热肠毒素之间的免疫学关系

作者用人大肠杆菌286C_2株的不耐热肠毒素(LT)、霍乱毒素(CT)以及两种肠毒素A、B亚单位的六种相应抗血清检测LT与CT之间的抗原关系。免疫双扩散试验表明:两种肠毒素的A亚单位之间和B亚单位之间与羊抗CT血清形成的沉淀线部分相连,说明抗原性部分相同;而兔抗LT-A和LT-B血清只与同源亚     

一种完全合成的含有大肠杆菌耐热毒素和不耐热毒素B亚单位抗原决定簇的类毒素菌苗

产肠毒素性大肠杆菌能引起剧烈腹泻,此菌株具有两种免疫原性不同的肠毒素:耐热毒素(ST)和不耐热毒素(LT),类毒素菌苗必须兼有这两种毒素的抗原性.作者用SamII自动肽合成仪合成了LTB亚单位含124个氨基酸顺序的13个片段,用ELISA测定这些片段的抗原性,其中抗原性最强的仅为天然B亚单位的36%.若将由化学交联产生的ST的18个氨基酸顺序与其中一些肽连接,能增强B亚单位的抗原性.B     

用人工合成的耐热毒素与不耐热毒素的B亚单位交联制备防御产肠毒素性大肠杆菌的菌苗

人工合成的耐热毒素(ST)的抗原性和在乳鼠试验中的分泌效应都与从细菌提取的ST相同。本文探索了合成的ST与不耐热毒素(LT)经交联剂结合的问题。作者通过改     

霍乱毒素B亚单位与流感疫苗鼻内合种可增强保护性抗体应答

最近,作者证明霍乱毒素B亚单位(CTB)用作流感病毒血凝素(HA)疫苗鼻内免疫的佐剂颇为理想.疫苗与CTB合用鼻内接种1次就可诱导抵御病毒攻击所需的高水平鼻内和血清抗病毒抗体.作者又探讨了流感病毒A/PR/8/34(PR-8)HA疫苗与CTB诱导保护性抗体水平所要的剂量、抗体应答持续时间、交叉保护性抗体程度以及CTB增加保护性抗体应答的机理.     

有无霍乱毒素B亚单位的口服霍乱死菌苗对人体的保护效果

霍乱自然保护与局部肠道抗菌及抗毒素抗体有关,这两种抗体之间具有协同作用。不经肠道免疫的霍乱菌苗无足够保护力。本试验用单纯霍乱死菌苗及死菌苗加霍乱毒素B亚单位的联合菌苗,给成人志愿者口服免疫。将志愿者分成3组,即未服菌苗     

霍乱毒素B亚单位与p277融合基因在大肠杆菌中表达及免疫分析

为了增强多肽表位的免疫原性,构建了霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)和p277的融合基因CTB-p277,将该融合基因克隆到pET28a( )中,获得原核表达载体pET28a-CTB-p277;并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经2%的乳糖诱导5 h后的表达产物用12%的SDS-PAGE分析表明可以表达融合蛋白,融合蛋白占全菌蛋白约40%,且主要以包含体的形式存在。包含体经洗涤、裂解,用DEAE纤维素离子交换纯化,可以获得99.1%的重组蛋白。重组蛋白的包含体经复性后,在体外可以自组装成五聚体。重组蛋白免疫KK-Ay小鼠后,ELISA的分析表明可以产生抗p277的抗体。血糖和体重的测定结果显示,给药组小鼠的血糖有明显的降低,体重也有相应的减轻。同时GM1-ELISA的检测表明,CTB-p277在体外可以和神经节苷脂GM1(Monosialoganglioside)特异结合,具有生物活性。     

不耐热肠毒素和霍乱毒素B亚单位杂合分子:一种潜在的广谱菌苗(英)

作者构建了3种携有修饰的ctxB基因的质粒：pML-LCTBtacA、pML-LCTBtacB和pML-LCTBtacH，并分别在霍乱弧菌JS1569中表达出3种杂合蛋白：LCTBA、LCTBB和LCTBH。LCTBA的前25个氨基酸残基处与产肠毒素性大肠杆菌不耐热肠毒     

大肠杆菌不耐热毒素的粘膜免疫机理

本文分别从ＬＴ的粘膜免疫原性和佐剂效应两方面对其粘膜免疫机理作一讨论。     

用霍乱毒素B亚单位作为载体蛋白刺激粘膜免疫应答

早已发现小的或无免疫原性的分子可以通过与有免疫原性的大分子蛋白结合而引起免疫应答。近期的研究兴趣已转向将多糖或化学合成多肽偶合到蛋白载体上来刺激对不同的致病性细菌和病毒的免疫应答。但是绝大多数不能复制的死抗原不易引起粘膜IgA抗体应答,只有霍乱肠毒素是例外。肠毒素B亚单位(CTB)本身无毒性,但能刺激粘膜免疫应答。作者试图证明,如果以CTB作为载体,能否使本来在粘膜表面无免疫原性的蛋白诱发粘膜免疫应答。     

霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链结构类似多肽融合蛋白的制备

为了在大肠杆菌中表达霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)与胰岛素B链(9-23)肽段结构类似多肽(Ins B(9-23))的融合蛋白,使用基因工程方法构建了CTB与Ins B(9-23)的融合基因CTB-Ins B-X若干,并将融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌株经乳糖诱导后,其表达产物经过12%SDS-PAGE分析表明该菌株可以包含体形式表达融合蛋白,并制备得到纯度较高的重组蛋白。该重组蛋白的包含体经过变性、复性后,可以在体外自组装成五聚体结构。GM1-ELISA分析结果表明,重组蛋白在体外可以与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合,表明该融合蛋白保持了CTB形成五聚体的生物活性。     

用于发展合成口服疫苗的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的表位图

不耐热肠毒素B亚单位(LT-B)含有引起LT-特异性抗体应答的大部分优势免疫表位.作者用天然LT和重组LT-B免疫小鼠,检测分泌物和血清中抗LT-B抗体应答的特性,并确定抗LT-B的T细胞或B细胞的表位图,以期构建既能刺激粘膜又能产生血清抗LT-B抗体应答的合成肽.作者从产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)H10407株及大肠杆菌K-12株JM83转化体中分别制备LT及重组LT-B,并在都柏林沙门菌中表达重组LT-B.小鼠或于0天口服含25μgLT的磷酸缓冲盐水(PBS)0.25ml,或于0、1和2天各口服含10~(10)CFU都柏林沙门菌EL23株的PBSO.25ml,或于0、7和14天各免疫含50μg合成肽的PBSO.25ml.采集粪浸液及血清,用ELISA测定抗LT-B抗体.体外刺激LT-B特异性T细胞以评估LT-B特异性T细胞的增殖和细胞因子分布.通过细胞因子特异性ELISA检测由LT     

产生霍乱毒素B亚单位的重组卡介苗诱导的免疫应答

经粘膜途径接种的抗原的免疫原性通常弱于全身途径接种,因此粘膜抗原接种后需要粘膜佐剂以获得有效水平的免疫应答。已知五聚体形式的霍乱毒素B亚单位( CTB)是有效的粘膜佐剂,当经粘膜途径与抗原一起给予时能增强抗原特异性分泌性Ig A( SIg A)应答,但口服CTB会被粘膜局部的酶和正常菌群快速清除,为延长CTB在呼吸道粘膜的持续时间,作者将含CTB编码基因的p ENCTB转入卡介苗( BCG) 1 1 73P2株,构建出能分泌和产生CTB的重组( r) BCG。用免疫印迹法检测r BCG表达的CTB,用GM1神经节苷脂连接试验检测已装配的CTB的亚单位数。结果…     

重组霍乱毒素B亚单位的高效表达、纯化及鉴定

本研究采用基因工程技术,构建一种重组霍乱毒素B亚单位（rCT-B）的高效表达/分泌系统。 将CT-B结构基因ctxB与修饰的ompA信号序列融合,然后根据鼠伤寒杆菌阿拉伯糖操纵子的调节信号克隆入M13噬菌体并感染大肠杆菌。将此大肠杆菌接种于含0.2％阿位伯糖的LB肉汤中培养,检测培养物中rCT-B含量并通过S-SepharoseFF柱进行纯化。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、等电聚焦、质谱分析等方法对rCT-B的特性进行研究。     

联合接种流感疫苗和霍乱毒素B亚单位对流感病毒感染的防御作用

霍乱毒素B亚单位(CTB)是一种无毒性的霍乱毒素成分.CTB不仅是有效的肠道免疫原,也是一种肠粘膜佐剂.鼻内联合接种单剂流感病毒与CTB可诱导鼻分泌物中高水平IgA和血清中血凝抑制(HI)抗体.本文作者先给Balb/c小鼠鼻内联合接种甲型流感病毒HA疫苗和CTB,4周后再单独接种甲型流感病毒HA疫苗,观察接种后的免疫应答.小鼠接种两剂较高剂量(1.5μg)的A/PR/8/34(PR-8,H1N1)HA疫苗(第1剂与CTB联合接种)后,鼻洗液中的抗病毒IgA抗体和血清中的HI抗体应答都比第1次接种     

用霍乱毒素合成肽获得对人和猪大肠杆菌株不耐热肠毒素的免疫力

人和动物产肠毒素性大肠杆菌株(ETEC)中的菌毛和定居因子抗原是不同的,而且在接种的群体中可发生抗原性漂移,因此,这些抗原对异源性菌株攻击不能提供免疫力。霍乱毒素(CT)与人ETEC产生的不耐热肠毒素(H-LT)和猪ETEC产生的不耐热肠毒素(P-LT)在免疫学、结构以及功能方面非常相似,且抗原性稳定,估计这些毒素有共同的抗原决定簇,能够提供交叉保护力。Jacob等曾用与CT毒素B亚单位相应的6条合成肽进行免疫,结果证明CTP1(8-20位氨基酸残基)和CTP3(50-64位残基)诱导产生的抗体,能有效抑制CT的生物活性,且能与不同菌株的H-LT发生交叉反应和中和反应。     

鼻内接种流感疫苗和霍乱毒素B亚单位预防流感病毒感染

霍乱毒素(CT)与某种无关的抗原同时接种时,不但是有效的肠道免疫原,而且还是刺激对无关抗原的IgA和IgG抗体应答的免疫调节剂。本文作者将CT或霍乱毒素B亚单位(CTB)与流感疫苗同时接种小鼠,观察小鼠的免疫应答及流感病毒感染情况。流感HA疫苗由流感病毒A/山形/120/86(H1N1)株和A/PR/8/34(H1N1)株制成。对6～8周龄的雌性BALB/c小鼠鼻腔、腹腔或皮下接种HA疫苗和CTB或CT。4周后测定血清中血凝抑制(HI)抗体和鼻腔内流感特异性和CTB特异性IgA抗体。