丹参酮II-A通过调控TLR4/IκBα/NFκB信号通路抑制LPS诱导的细胞炎症

目的建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型,探究丹参酮II-A(Tan IIA)的抗炎活性及其机制。方法CCK-8法测定Tan IIA对细胞活力的影响;迁移小室测定Tan IIA对LPS诱导细胞迁移能力作用;ELISA法测定细胞上清液中小鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factoralpha,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、IL^-1β、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量;Western blot法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases,MMP-2)、MMP-9、Toll样受体-4(TLR4)、IκB-α、p-IκB-α、NFκB和p-NFκB蛋白的表达。结果Tan IIA对LPS诱导的RAW264.7细胞培养液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL^-1β和MCP-1的分泌有明显的抑制作用;明显下调MMP-2、MMP-9、TLR4、p-IκB-α和p-NFκB的蛋白的表达,抑制IκB-α磷酸化和NFκB的入核和活化。结论Tan IIA可通过抑制MMP-2和MMP-9的表达以及TLR4/κB-α/NF-κB信号通路,调控TNF-α、IL-6、IL^-1β等炎症因子的释放而发挥抗炎活性。     

穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用

目的探讨穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及其作用机制。方法采用噻唑蓝比色(MTT)法分析穿心莲内酯对RAW264.7细胞活力的影响。通过脂多糖处理RAW264.7细胞24 h建立细胞炎症模型,造模前1 h用穿心莲内酯2.5、5、10、20μmol/L预处理。荧光定量PCR法检测RAW264.7细胞内相关抗氧化应激酶基因和i NOS水平。穿心莲内酯单独处理RAW264.7细胞24 h,Western blotting法检测Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白和Keap1、Nrf2、HO-1蛋白水平。免疫荧光检测转录因子Nrf2在胞质及核内的分布情况。结果与对照组比较,穿心莲内酯剂量相关性地抑制RAW264.7细胞活力,差异具有统计学意义(P0.05、0.01、0.001)。穿心莲内酯显著抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞的i NOS水平(P0.001),增加相关抗氧化酶基因HO-1、NQO1 m RNA水平。穿心莲内酯抑制Keap1表达,增加Nrf2和HO-1蛋白水平的表达。结论穿心莲内酯可抑制脂多糖诱导的炎症反应,其作用机制可能与激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路从而调控抗氧化酶HO-1、NQO1 m RNA表达水平相关。     

三七总皂苷调节iNOS-NO-NF-κB信号通路抑制LPS诱导的RAW246.7细胞炎症研究

目的 探讨三七总皂苷（PNS）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞iNOS-NO-NF-κB信号通路相关分子表达及活性的影响。方法 MTT比色法检测PNS对RAW264.7细胞增殖的抑制作用;不同浓度PNS（25、50、100 μg/mL）干预体外培养LPS诱导的RAW264.7细胞24、48 h后,Griess法检测NO变化;PNS干预24 h后,Western blotting检测iNOS、NF-κB、p-NF-κB、IKKα、p-IKKα、p-ΙκΒα蛋白表达量的变化;PNS干预4 h后,激光共聚焦显微镜检测NF-κB转位入核情况。结果 PNS浓度大于150 μg/mL时,才表现出显著抑制细胞增殖的作用。25、50、100 μg/mL PNS作用于RAW264.7细胞24和48 h后,与模型组比较,NO生成量均显著降低（P<0.001）。50、100 μg/mL PNS作用于RAW264.7 24 h后,iNOS、NF-κB蛋白表达量显著降低,磷酸化蛋白p-NF-κB、p-IKKα、p-ΙκΒα表达水平也显著降低（P<0.01、0.001）。与模型组比较,PNS 25、50、100 μg/mL组核因子p65入核荧光强度显著降低（P<0.01、0.001）。结论 PNS能够显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS-NO-NF-κB信号通路的活性,降低细胞炎症反应。     

复方甘草酸苷制剂对脂多糖诱导小鼠RAW264.7细胞分泌炎症因子的调节作用

目的:研究复方甘草酸苷片剂和注射剂对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7分泌炎症因子的调节作用。方法:采用脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RWA264.7,建立体外炎症模型。取复方甘草酸苷片剂和注射剂,制备供试药液。分别通过,MTT、Griess和双抗体夹心ABC-ELISA等实验,测定在不同浓度的供试药液作用下RAW264.7细胞活力以及经脂多糖诱导后的RAW264.7细胞的一氧化氮、肿瘤坏死因子TNF-α及白介素IL-1β、-6和-10等炎症因子分泌量的变化。结果:复方甘草酸苷的2种制剂药液在0～300μmol.L-1浓度范围内对RAW264.7细胞活力无影响。复方甘草酸苷注射剂药液在75、150和300μmol.L-1浓度下对经脂多糖处理的RAW264.7细胞的一氧化氮分泌抑制率分别为13.8%、40.4%和53.8%,并致细胞的TNF-α分泌量降低29.8%、41.5%和52.1%,IL-1β分泌量降低39.5%、55.6%和69.6%,IL-6分泌量降低18.3%、29.5%和39.1%,但IL-10分泌量却提高了8.2%、23.8%和30.8%;而复方甘草酸苷片药液在相同浓度下对同样细胞的一氧化氮分泌抑制率分别为9.8%、27.1%和37.8%,致细胞的TNF-α分泌量降低16.6%、37.0%和48.4%,IL-1β分泌量降低28.1%、47.9%和57.9%,IL-6分泌量降低13.5%、19.9%和28.2%,IL-10分泌量提高了3.9%、14.8%和23.4%。复方甘草酸苷的2种制剂对细胞分泌炎症因子的调节作用与阳性对照药地塞米松相似,其中注射剂的作用强于片剂。结论:复方甘草酸苷可剂量依赖性地显著抑制脂多糖诱导小鼠RAW 264.7细胞产生促炎因子一氧化氮、TNF-α及IL-1β和-6并促进抗炎因子IL-10的表达,这可能为其抗炎作用机制。     

青蒿乙素对脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制及机制

目的 探讨青蒿乙素的抗炎活性及其作用机制.方法 采用细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应模型,经青蒿乙素处理后,采用Griess试剂检测NO的含量;采用酶联免疫法(ELISA)检测促炎症因子的水平;采用Western Blot检测炎症相关蛋白及激酶的表达水平.结果 青蒿乙素能明显抑制RA...     

知母皂苷通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能

目的研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞功能的影响,以及对NF-κB-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-NO信号通路的调节。方法以LPS刺激RAW264.7细胞构建体外炎症细胞模型,采用Griess法和ELISA法分别检测SAaB干预下,RAW264.7炎症细胞中的NO、iNOS、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量;Western blot检测RAW264.7细胞NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 RAW264.7细胞在LPS(10 mg·L~(-1))诱导下,NO、iNOS、TNF-α、IL-6的含量以及NF-κB p65蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高。SAaB(0.3、3、30 mg·L~(-1))可明显降低RAW264.7炎症细胞中NO、iNOS、TNF-α和IL-6的含量(P<0.01),且明显下调NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.01)。结论 SAaB可通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路,抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能。     

苹果寡糖下调脂多糖刺激引起的TLR-4/NF-κB通路活性升高

目的探讨苹果寡糖(AOG)对细菌脂多糖(LPS)活化人结肠癌细胞HT-29的TLR-4/NF-κB通路的影响及相关机制。方法将HT-29细胞分为对照组、LPS处理组(1μg·mL~(-1),30 min、1 h)、AOG(0.5 mg·mL~(-1))+LPS(1μg·mL~(-1))处理组(30 min、1 h),采用免疫荧光法观察NF-κB在细胞质、细胞核内的分布情况;免疫印迹法检测细胞中IκB-α、磷酸化IκB-α、细胞核中NF-κB以及细胞膜上TLR-4的蛋白变化。结果 AOG可抑制LPS刺激引起的HT-29细胞的NF-κB核转位;可有效抑制IκB-α降解及IκB-α的磷酸化;可降低细胞膜上TLR-4的表达。结论 AOG可能通过抑制LPS刺激引起的TLR-4表达升高,发挥抑制NF-κB信号通路活化的作用。     

STAT5通路抑制剂对脂多糖诱导RAW264.7细胞的保护作用研究

目的观察信号传导及转录激活因子(STAT)5通路抑制剂对经脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达的影响。方法将处于对数期的RAW264.7细胞分为空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组,实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定iNOS mRNA的表达量,Western blot测定iNOS以及磷酸化STAT5(p-STAT5)的蛋白表达量。结果RAW264.7细胞培养24 h后,空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组以及STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞中NO的含量差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);低、中、高浓度STAT5通路抑制剂对RAW264.7细胞释放NO的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞iNOS mRNA以及蛋白质的表达量比较差异有统计学意义(F=123.59、23.37,P<0.05)。空白对照组、STAT5通路抑制剂对照组、LPS诱导组和STAT5通路抑制剂低、中、高浓度组细胞p-STAT5/STAT5表达比较差异有统计学意义(F=12.07,P<0.05)。结论STAT5通路抑制剂能够抑制RAW264.7细胞iNOS的表达以及NO的产生,其机制可能与抑制STAT5磷酸化的表达有关。     

罗格列酮抑制TLR-4/NF-κB信号通路对肠缺血再灌注损伤的影响

目的探讨罗格列酮(Rosiglitazone,RGZ)对大鼠肠缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法将30只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(IRI组)和RGZ预处理组(RGZ组)。RGZ组在手术前1 h给予罗格列酮(0.3 mg/kg)静脉注射,Sham组和IRI组术前1 h给予等量生理盐水静脉注射。手术分离肠系膜上动脉,夹闭45 min、再灌注4 h诱导缺血再灌注损伤。PAS染色观察肠道黏膜病理学形态学变化,RT-PCR和ELISA检测白介素6(IL-6)、干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达。Western blot检测PPAR-γ、p-PPAR-γ、TLR-4、p-p65和p65的表达。结果与Sham组比较,IRI组肠黏膜损伤明显增加。ELISA和PCR显示,IL-6、IFN-γ和TNF-α也明显上调;WB显示,p-PPAR-γ、TLR-4和p-p65表达明显增加,但PPAR-γ和p65无明显变化。与IRI组比较,RGZ组小肠黏膜损伤明显减少,促炎症因子IL-6、IFN-γ和TNF-α,TLR-4和p-p65表达明显降低,而p-PPAR-γ表达进一步增加,但PPAR-γ表达和p-p65无明显变化。结论罗格列酮预处理可通过抑制TLR-4/NF-κB信号通路激活而抑制炎症反应,从而减轻肠缺血再灌注损伤。     

丹酚酸A抑制NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应

目的 利用脂多糖(LPS)刺激BV2小胶质细胞构建体外神经炎症模型,探讨丹酚酸A(SalA)对神经炎症的抑制作用及机制。方法 (1) BV2细胞分为细胞对照组(正常培养24 h)、LPS(1 mg·L^-1孵育24 h)组、SalA(0.01,0.05,0.5,5,10和20μmol·L^-1培养24 h)组和LPS+SalA(加入LPS 1 mg·L^-1及SalA 0.01,0.05,0.5,5,10和20μmol·L^-1共同培养24 h)组,MTT法检测细胞存活率。(2)除LPS+SalA组SalA给药浓度为0.05,0.5和5μmol·L^-1外,其他分组处理同方法(1)。Griess法检测BV2细胞一氧化氮(NO)分泌水平,ELISA检测BV2细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL^-1β)和IL-6分泌水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测TNF-α,IL^-1β和IL-6 mRNA表达水平,Western印迹...     

胃复春胶囊通过NF-κB信号通路诱导胃癌细胞凋亡并抑制胃癌细胞转移作用

目的 研究胃复春胶囊对人胃癌细胞株MKN-49P的作用,为胃复春胶囊在抗消化道肿瘤方面的应用提供新的依据。方法 将SD大鼠随机分为2组,即对照组、胃复春胶囊组。胃复春胶囊组取胶囊内容物,以生理盐水混悬,按300 g/（kg·d）剂量ig给药,对照组大鼠ig 2 mL生理盐水,共5 d。末次给药后2 h,在无菌条件下,ip 10%水合氯醛（350 mg/kg）麻醉,腹主动脉取血,分离血清,经灭活处理后,置于—20℃冰箱保存备用。用不同质量浓度（0、2.5、5、10、20、30、50、80、100 μg/mL）的胃复春胶囊含药血清处理MKN-49P细胞,采用MTT法检测细胞活力。加入各质量浓度（25、50、100 μg/mL）胃复春胶囊含药血清,流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡情况,Hoechst染色法检测细胞形态,细胞划痕实验测定细胞的迁移能力,Western blotting法检测信号传导与转录激活因子（STAT）蛋白、核转录因子-κB（NF-κB）信号通路及与细胞凋亡相关的蛋白表达情况。结果 胃复春胶囊含药血清能够剂量和时间相关地降低MKN-49P细胞的活力,并可诱导MKN-49P细胞凋亡。Hoechst染色显示细胞膜通透性增强;细胞划痕实验结果显示,与对照组（0 μg/mL）相比,不同浓度胃复春胶囊含药血清（25、50、100 μg/mL）可浓度相关性地抑制MKN-49P细胞的迁移。MKN-49P细胞经过25、50、100 μg/mL胃复春胶囊含药血清分别处理24 h后,MKN-49P细胞中STAT3的磷酸化减弱,NF-κB信号通路相关的蛋白表达量下调,抗凋亡蛋白表达量下降而促凋亡蛋白表达量增加。结论 胃复春胶囊含药血清能抑制胃癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡,并显著降低细胞迁移能力,其作用机制推测与NF-κB信号通路有关。     

雷公藤次碱通过调控TLR4/MyD88/TRAF6信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应

目的 探讨雷公藤次碱抗炎活性及其作用机制。方法 用细胞计数盒-8 (CCK-8)法考察雷公藤次碱对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW 264.7 增殖活性的影响,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测雷公藤次碱对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞分泌细胞因子一氧化氮（NO）、白细胞介素-1β（IL-1β）、 肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的影响,用免疫印迹法考察雷公藤次碱对白介素受体相关激酶（IRAK）、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6（TRAF6）、核因子κB抑制因子α（IκBα）、核因子κB（NF-κB p65）、分裂原激活的蛋白激酶p38（p38）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）在LPS刺激的RAW264.7细胞中的表达及其磷酸化的影响。结果 雷公藤次碱在25、50、100 μmol/L浓度下对RAW264.7细胞无显著毒性,并可显著抑制细胞因子NO、IL-1β、TNF-α和IL-6含量。免疫印迹法检测结果显示雷公藤次碱可显著抑制IRAK及TRAF6的表达;显著抑制ERK、P38和JNK的磷酸化;抑制IκBα的降解,降低NF-κB p65的核转运水平。结论 雷公藤次碱具有体外抗炎活性,其作用机制可能介导TLR4/MyD88/TRAF6信号通路。     

芍药苷对AGEs刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响

目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响。方法 AGEs在不同时间点刺激RAW264.7巨噬细胞,使用不同浓度的PF预先孵育细胞干预刺激,以优化实验条件;后将巨噬细胞随机分为对照组(DMEM培养基)、牛血清白蛋白(BSA)组(200 mg·L~(-1)BSA)、AGEs组(200 mg·L~(-1)AGEs)、PF组(200 mg·L~(-1)AGEs+10~(-5)mol·L-1PF)及TLR2/4抑制剂组(200 mg·L~(-1)AGEs+30 mg·L~(-1)人氧化磷脂)。Western blot检测各组TLR2、TLR4、髓样分化因子(My D88)、p-IRAK1、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、干扰素调节因子3(IRF3)、p-IRF3、NF-κB p-p65、NF-κB p65、iNOS、TNF-α、IL-1β和MCP-1蛋白表达,RT-PCR检测各组TLR2和TLR4mRNA表达,ELISA法测定各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β及MCP-1水平。结果与对照组相比,AGEs能明显上调TLR2、TLR4、My D88、p-IRAK1、TRIF、IRF3、p-IRF3、NF-κB pp65、NF-κB p65、i NOS、TNF-α、IL-1β、MCP-1蛋白表达(P<0.01)及TLR2、TLR4 mRNA表达(P<0.01),增加细胞上清液中TNF-α、IL-1β、MCP-1水平(P<0.01);PF和TLR2/4抑制剂能明显下调AGEs诱导产生的效应(P<0.01)。结论 PF可通过抑制巨噬细胞TLR2/4信号通路而发挥抗炎作用,这可能为糖尿病肾病的治疗提供新的理论基础。     

Plumbagin inhibits LPS-induced inflammation through the inactivation of the nuclear factor-kappa B and mitogen activated protein kinase signaling pathways in RAW 264.7 cells

Plumbagin (PL) has been reported to exhibit anti-carcinogenic, anti-inflammatory and analgesic activities, but little is known about its mechanism. In this study, we investigated the anti-inflammatory property of PL and its mechanism of action. Although no significant cytotoxicity of PL was observed over the concentration range tested, PL (2.5–7.5 μM) significantly and dose-dependently suppressed the secretion of pro-inflammatory mediators and inhibited the expression of TNF-α, IL-1β, IL-6 and iNOS in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Furthermore, PL consistently suppressed the activity of iNOS in LPS-induced RAW 264.7 cells. To elucidate the mechanism underlying the anti-inflammatory activity of PL, we assessed the effects of PL on the MAPK pathway and the activity and expression of NF-κB. These experiments demonstrated that PL significantly reduced the luciferase activity of an NF-κB promoter reporter and p65 nuclear translocation. The LPS-induced phosphorylation of MAP kinases was also attenuated by PL; significant changes were observed in the levels of phosphorylated ERK1/2, JNK and p38 MAPK. Additionally, MAPK inhibitors confirmed the inhibitory effect of PL on the MAPK pathway. Taken together, these data suggest that PL exerts its anti-inflammatory effects by down-regulating the expression of pro-inflammatory mediators through inhibition of NF-κB and MAPK signaling in LPS-stimulated RAW 264.7 cells.     

The effect of linarin on LPS-induced cytokine production and nitric oxide inhibition in murine macrophages cell line RAW264.7

The herb, Chrysanthemum zawadskii var, latilobum commomly known as Gu-Jul-Cho in Korea, used in traditional medicine to treat pneumonia, bronchitis, cough, common cold, pharyngitis, bladder-related disorders, gastroenteric disorders, and hypertension. Linarin is the main active compound and the biological mechanisms of its activity are unclear. It is believed that effects of this herb may be exerted through the pluripotent effectors of linarin due to its ability to treat a variety of afflictions. In this study, the effects of linarin on the mouse macrophages cell line, RAW 264.7, were investigated. It was found that linarin could activate macrophages by producing cytokines. Monocytes and tissue macrophages produce at least two groups of protein mediators of inflammation, interleukin 1 (IL-1) and the tumor necrosis factor (TNF). Recent studies have shown that TNF and IL-1 modulate the inflammatory function of endothelial cells, leukocytes, and fibroblasts. TNF-alpha production by macrophages treated with linarin occured in a dose dependent manner. However, IL-1 production was largely unaffected by this natural product. This study demonstrated the ability of linarin to activate macrophages both directly and indirectly. Linarin also affect both cytokine production and nitric oxide inhibition, in addition to the expression of some surface molecules. Nitric oxide (NO), derived from L-argin-ine, is produced by two forms(constitutive and inducible) of nitric oxide synthase (NOS). The NO produced in large amounts by inducible NOS is known to be responsible for the vasodilation and hypotension observed in septic shock. Linarin was found to inhibit NO production in the LPS-activated RAW 264.7 cells. Linarin may be a useful candidate as a new drug for treating endotoxemia and the inflammation accompanied by NO overproduction. The linarin-treated total lymphocytes exhibited cytotoxicity in a dose dependent manner between 20 microg/ml and 40 microg/ml. These results suggest that linarin may function through macrophage activation.     

Evodiamine protects against airway remodelling and inflammation in asthmatic rats by modulating the HMGB1/NF-κB/TLR-4 signalling pathway

ContextEvodiamine, which is isolated from Evodia rutaecarpa (Rutaceae), possess strong anti-inflammatory, immunomodulatory, and antibacterial properties.ObjectiveThe protective effects of evodiamine in asthma were evaluated.Materials and methodsThirty-two Sprague-Dawley (SD) rats were used, asthma was induced by injecting intraperitoneally with a mixture of Al(OH)₃ (100 mg) and ovalbumin (OA; 1 mg/kg), further exposing them to a 2% OA aerosol for 1 week. All animals were divided into four groups: control, asthma, and evodiamine 40 and 80 mg/kg p.o. treated group. Serum levels of inflammatory cytokines, interferon gamma (IFN-γ), and immunoglobulin E (IgE) and infiltrations of inflammatory cells in the bronchoalveolar lavage fluid (BALF) of the animals were determined. The thickness of the smooth muscle layer and airway wall in the intact small bronchioles of asthmatic rats was examined as well.ResultsCytokine levels in the serum and BALF were lower in the evodiamine-treated group than in the asthma group. Evodiamine treatment reduced IgE and IFN-γ levels as well as the inflammatory cell infiltrate in the lung tissue of asthmatic rats. The thickness of the smooth muscle layer and airway wall of intact small bronchioles was less in the evodiamine-treated group than in the asthma group. Lower levels of TLR-4, MyD88, NF-κB, and HMGB1 mRNA in lung tissue were measured in the evodiamine-treated group than in the asthma group.Discussion and conclusionThe effect of evodiamine treatment protects the asthma, as evodiamine reduces airway inflammation and remodelling in the lung tissue by downregulating the HMGB1/NF-κB/TLR-4 pathway in asthma.     

石蒜碱通过TLR4/NF-κB途径抑制LPS诱导的原代小胶质细胞炎症反应

目的 观察石蒜碱（LYC）对脂多糖（LPS）诱导的原代小胶质细胞炎症反应和表型变化的影响,并探讨其作用机制。方法 将培养的原代小胶质细胞分为对照组、LYC组（0.1、0.5、1和5 μmol/L LYC）、LPS组（0.1 mg/L LPS）和LPS（0.1 mg/L LPS）+LYC组（5 μmol/L LYC）。倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测原代小胶质细胞的纯度及LPS诱导原代小胶质细胞向两种表型转化的情况;CCK-8法检测细胞活性;实时荧光定量PCR（qPCR）检测白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）以及不同表型小胶质细胞表面标志物mRNA表达;Griess法检测一氧化氮（NO）含量;免疫印迹法检测细胞TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达情况。结果 原代小胶质细胞纯度达95%以上。对照组及各浓度LYC组细胞活性差异无统计学意义。后续实验以5 μmol/L的LYC为药物浓度。与LPS组相比,LPS+LYC组的阿米巴样小胶质细胞数量明显减少,IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平以及NO含量降低,CD86 mRNA表达水平和表型比例降低,CD206 mRNA表达水平和表型比例升高,TLR4和p-NF-κB p65蛋白表达水平降低（P<0.01）。结论 LYC通过TLR4/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的原代小胶质细胞炎症反应,并促进其向“抑炎型”极化。