壳聚糖纳米颗粒包裹对鼠白细胞介素2基因表达和调节小鼠免疫效应的影响

本实验制备壳聚糖纳米颗粒 (CNP) ,包裹小鼠白细胞介素 2基因 (mIL 2 )真核表达质粒 (VRMIL 2 ) ,肌注接种 2 1d昆明小鼠 ,观察mIL 2基因体内表达及其对免疫应答和免疫保护的影响。实验结果发现 :CNP包裹VRMIL 2注射小鼠血液中IgG、IgM和IgA不同程度地增多 ,均显著高于CNP包裹空白质粒组 (P <0 .0 5 ) ;其血清中IL 2、IL 4和IL 6的含量明显升高 ,与对照组差异显著 (P <0 .0 5 ) ;外周血液的白细胞和淋巴细胞数量也较对照组显著增加。免疫后 35d以大肠杆菌口服攻毒实验小鼠 ,检测发现 :CNP包裹VRMIL 2组小鼠的上述免疫指标除中性粒细胞外均显著多于对照小鼠 ,VRMIL 2接种小鼠均健康存活 ,而对照小鼠均发病 ;尽管CNP包裹VRMIL 2接种小鼠的体液和细胞免疫指标与未包裹VRMIL 2免疫鼠差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,但剂量仅为后者的 1/ 5。这些结果表明 :壳聚糖纳米颗粒包裹VRMIL 2可显著提高外源IL 2基因体内表达水平 ,明显增强体液和细胞免疫水平的效应 ,增强对大肠杆菌的抗病力 ,提示壳聚糖纳米颗粒包裹IL 2基因可明显增强动物的体液和细胞免疫 ,可作为有效的抗感染免疫调节剂。     

CpG ODN增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答效果

环磷酰胺是肿瘤治疗中最常见的烷化剂 ,严重影响骨髓、胸腺和脾脏的功能导致患者免疫力低下 ,容易患各种感染性疾病 ,疫苗接种成功率也很低 ,因此 ,寻找有效疫苗佐剂来提高这群人的疫苗接种成功率具有重要的实际意义。近年来 ,大量的研究显示细菌DNA中存在非甲基化的CpG二核苷酸序列 (即CpG基序 )能激活免疫系统 ,诱导天然免疫应答分泌免疫球蛋白和各种细胞因子。人工合成含CpG基序的脱氧寡核苷酸 (CpGODN )与蛋白疫苗同时接种正常小鼠 ,能提高抗原特异性免疫应答 ,诱导出高水平保护性抗体。本实验应用CpGODN与乙肝疫苗同时肌肉注射…     

CpG寡脱氧核苷酸增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答

目的 :探讨CpG寡脱氧核苷酸 (ODN)增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答效果。方法 :选用环磷酰胺 (CTX)所致免疫抑制模型小鼠 ,以乙肝疫苗和 2 0 μgCpGODN联合或单独左胫前肌肌注免疫C5 7BL/6小鼠。 2wk后以同样剂量加强免疫 1次 ,再过 3wk后摘除眼球取血 ,用ELISA法检测抗 HBsIgG抗体和IL 12的水平。同时 ,无菌取脾脏做HE染色 ,观察脾脏淋巴细胞的数量和细胞核的变化。结果 :CpGODN与疫苗联合注射组产生的绝对抗体量比单独注射疫苗组提高 1倍 ;注射组产生IL 12的水平较单独注射疫苗组也有明显升高。光镜下各组脾脏淋巴细胞的变化如下 :正常对照组脾脏可见大量的淋巴细胞 ;与正常对照组相比较 ,CTX组的淋巴细胞明显稀少 ;而CTX加CpG组的淋巴细胞数明显增多 ,细胞核也明显增大。结论 :CpGODN能增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答     

磷酸二酯酶抑制剂Rolipram对NOD小鼠免疫应答的影响

目的　探讨磷酸二酯酶Ⅳ型抑制剂Rolipram对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠免疫应答的影响机制,为临床通过免疫干预治疗糖尿病提供理论依据。方法　动物模型分为Rolipram干预组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,分别经DNAladder、免疫组化检测T细胞凋亡;流式细胞、RT- PCR测定T细胞亚群的漂移。结果　与PBS对照组比较,Rolipram干预组外周T淋巴细胞凋亡率增加(Bcl- 2表达减少:0 .3439±0 .0 739vs 0 .736 1±0 .0 839,t=2 .6 82 ,P <0 .0 1;Bax表达增加:0 .7380±0 .1372vs 0 .32 2 7±0 .0 4 2 8,t=2 .6 79,P <0 .0 1;同时DNAladder也呈典型的2 0 0bp及其倍数大小的条带) ;CD4 + TH1型淋巴细胞减少(IL- 2A2 6 0 βactinA2 6 0 :0 .0 33±0 .0 0 1vs 0 .2 87±0 .0 0 6 ,t =2 .70 1,P <0 .0 1)而CD4 + TH2型细胞增加(IL 10A2 6 0 βactinA2 6 0 :0 .32 3±0 .0 0 4vs 0 .0 72±0 .0 0 3,t=2 .135 ,P <0 .0 5 ) ;胰岛炎症积分明显减少(Z =- 1.882 ,P <0 .0 1)。结论　磷酸二酯酶Ⅳ型抑制剂Rolipram能引起T细胞功能抑制,减轻NOD小鼠自身免疫反应程度,保护胰岛β细胞功能,其机制可能是通过T细胞亚群由TH1型向TH2型定向漂移实现的。     

CpG免疫刺激序列对DNA及蛋白质疫苗的免疫增强作用

CpG免疫刺激序列是一些以CpG为核心的具有很强免疫激活功能的核苷酸序列 ,对DNA疫苗及蛋白质疫苗均有极强的免疫增强作用。其作用机制可能与增强局部抗原提呈、诱发辅助T细胞活化及激活转录因子有关。CpG序列安全、经济、有效 ,具有较广阔的应用前景     

CpG ODN对rHBsAg免疫小鼠淋巴细胞增殖反应的影响

目的：进一步探讨以合成含CpG基序的寡核苷酸（CpG ODN）作为免疫增强剂与重组乙型肝炎表面抗原（rHBsAg）联合免疫小鼠,观察其淋巴细胞增殖反应效应.方法：经后腿胫骨前肌初次免疫BALB/c小鼠两周后加强免疫1次;MTT和3H-TdR掺入法分别检测免疫小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞增殖反应.结果：加CpG ODN组与单纯注射抗原及疫苗组相比,淋巴细胞增殖反应显著增强.而且,除胸腺特异性增殖中的CpG加疫苗组和疫苗组外,其他各实验组与对照组相比,淋巴细胞增殖反应也都显著增强.结论：CpG ODN能够明显刺激小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞增殖反应,显示出强而有效的免疫增强效应,有望成为一种新型的免疫佐剂.     

口服甲型副伤寒沙门菌致病岛2缺失株对小鼠的免疫保护效力评估

目的评估甲型副伤寒沙门菌致病岛2缺失株(SPA017ΔSPI2)对小鼠的免疫保护效力,研制有效的甲型副伤寒沙门菌减毒口服疫苗。方法以1×10⁸菌落形成单位(CFU)的SPA017ΔSPI2对6周龄的雌性Balb/c小鼠进行口服免疫,7 d后以相同剂量进行二次免疫,测定小鼠体质量变化、SPA017ΔSPI2体内定植水平、血清抗体水平和脾脏淋巴细胞增殖水平,并对SPA017ΔSPI2亲本株SPA017攻毒后的保护效力进行评价。结果 SPA017ΔSPI2免疫后不影响小鼠的生长性能,该缺失株在小鼠体内具有一定的定植能力,且SPA017ΔSPI2能够诱导小鼠产生显著的体液免疫应答和细胞免疫应答反应,攻毒后免疫组小鼠的发病率和死亡率均显著低于对照组。结论甲型副伤寒沙门菌致病岛2缺失株经口服免疫后可对小鼠提供良好的免疫保护,可以作为甲型副伤寒理想的疫苗候选株。     

CpG序列的免疫激活机理及应用

未甲基化CpG的寡核苷酸片段（CpG oligonucleotides,CpG ODN）是细菌DNA的免疫刺激作用的最小作用单位．广泛存在于细菌DNA中。CpG是以未甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸（CpG）为核心的回文序列,5’端为2个嘌呤,3’端为2个嘧啶,即5’-PurPur-CG-PyrPyr-3’。该序列在原核生物、病毒基因组中出现的频率为1／16,通常是非甲基化的;而在脊椎动物的出现频率则大大的降低,且通常甲基化。脊椎动物正是通过这种差异来识别自体和异体CpG;而哺乳动物细胞则是通过TLR9（Toll-like receptor 9,TLR9）识别细菌未甲基化CpG基元。触发一系列机体防御机制,包括补体激活、吞噬作用和致炎细胞因子基因的表达。目前已知具有较强免疫刺激作用的CpG DNA序列包括5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’等。     

多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb/c小鼠引起的免疫应答

目的：观察多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb／c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法：在成功构建多房棘球绦虫elp基因原核表达载体(pQ-ELP)的基础上，以亲和层析法纯化重组蛋白，SDS-PAGE鉴定，Bradford法进行定量。用ELP重组蛋白(A组)及ELP重组蛋白加弗氏佐剂(B组)免疫Balb／c小鼠(10只／组)，以生理盐水(NS组)作对照。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1，IgG2a和IgG2b水平。双抗体夹心ELISA试剂盒检测免疫鼠脾脏单个核细胞(PMNC)在受到特异抗原刺激后，产生IL-4、IL-12和IFN-γ的能力，^3H-TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增殖能力。结果：本研究成功获得高纯度重组蛋白ELP。首次免疫后2周，A、B组小鼠均产生了大量的特异IgGl抗体，B组还产生了少量的特异IgG2b抗体。除B组小鼠脾PMNC产生了微量IFN-γ外，A组、NS组IFN-γ及各组IL-4和IL-12均未检出。A、B组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高，其淋巴细胞CPM值分别为NS组的2．8和10．8倍，受到多房棘球绦虫抗原或刀豆素刺激时，A、B组淋巴细胞增殖更明显。结论：多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗可引起很强的体液免疫应答和微弱的细胞免疫应答，如与弗氏佐剂联合应用引起的细胞免疫应答会进一步提高。     

小鼠不同基因型与乙肝疫苗免疫应答的关系研究

目的 研究实验小鼠基因型与乙肝疫苗免疫应答的关系.以保证根据小鼠基因型选择适于进行免疫应答检测的实验小鼠,保证进行疫苗免疫应答检测时的规范化和标准化.方法 应用小鼠NIH1、2、3个种群和BALB/c、DBA/1共3种不同品系和同一品系不同种群的小鼠各40只,乙肝疫苗稀释4个不同的稀释度,每个稀释度注射动物10只.酶标法检测乙肝疫苗免疫效力,测定乙肝疫苗的半数有效剂量(ED50)值,再通过微量细胞毒法和PCR方法 检测小鼠的H-2单倍型,计算不同品系小鼠H-2q的百分比,得出乙肝疫苗与不同动物种群的相关性.结果 重组乙肝疫苗(酿酒酵母)经BALB/c鼠检测疫苗的ED50值为2.5μg/ml;经1号种群NIH鼠检测疫苗的ED50值为2.0μg/ml;经2号种群NIH鼠检测疫苗的EDM50值为1.3μg/ml;经3号种群NIH鼠检测疫苗的ED50值为2.3μg/ml;经上海某公司DBA/1鼠检测疫苗的ED50值为0.8μg/ml,对乙肝疫苗的效力反应最强.根据<中国药典>2005年版三部的规定,疫苗的ED50值为≤1.5μg/ml.所以得出的结果 是2号种群NIH鼠和DBA/1鼠检测疫苗是合格的.基因检测结果 DBA/1为H-2q近交系小鼠,2号种群NIH鼠含有H-2q型基因的百分比是96%,3号种群NIH鼠含有H-2q型基因的百分比是30%,而1号种群NIH小鼠含有H-2q型基因百分比为56%,因此DBA/1小鼠和2号种群NIH鼠对乙肝疫苗均产生高应答效应,且远远高于免疫基因型为H-2d的BALB/c小鼠.结论 在进行乙肝疫苗效力鉴定时选择含有q型基因较多的NIH小鼠作为检测动物可以取得较好的应答效果.     

双价志贺疫苗滴鼻免疫小鼠后粘膜免疫与系统免疫应答持续时间的观察

本文探讨双价志贺疫苗滴鼻免疫小鼠一段时间后,粘膜免疫和系统免疫应答的变化。将BALB/c小鼠随机分为三组,每组30只。PBS、FSM-2117和FS-5416(菌量为5×10~6、1×10~7、4×10~7和4×10~7CFU/只/次)经滴鼻途径免疫小鼠。间隔2周,4次免疫后7、30和90d活杀,收集鼻咽、肺、肠、生殖道冲洗液和血清。采用ELISA法检测其中特异性抗福氏、宋内LPSIgA和IgG。结果是两株疫苗经鼻内免疫后,诱发鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内LPSIgA、IgG的显著增加(P<0.01)。特异性抗体水平虽然在免疫后30、90d明显下降,但仍明显高于PBS对照组水平。故认为两株双价志贺疫苗滴鼻免疫小鼠后能有效诱导粘膜免疫和系统免疫应答,并持续较长时间。