白色念珠菌细胞壁酸碱不溶性(1,3)-β-D-葡聚糖的分离、提取和分析

目的研究用酸-碱法制备白色念珠菌细胞壁酸碱不溶性β-葡聚糖,并对其物理化学性质和结构进行分析,获得结构明确的酸碱不溶性(1,3)-β-D-葡聚糖。方法用沙氏肉汤培养白色念珠菌,经离心收集和干燥后,先后用NaOH溶液和乙酸进行处理,提取酸碱不溶性葡聚糖,采用薄层层析分析、高碘酸氧化分析和红外光谱法测定多糖的基本结构,并计算用该种方法提取的酸碱不溶性(1,3)-β-D-葡聚糖的提取效率。结果与标准的(1,3)-β-D-葡聚糖红外光谱相比,提取的多糖红外光谱在890 cm-1有特征吸收峰,表明多糖为β-构型;经苯酚-硫酸法鉴定,样品显桔红色,为多糖阳性反应。多糖经薄层层析分析,比较样品与单糖标准品的Rf值,确定多糖的构型为D-型;多糖经高碘酸氧化后,测定消耗高碘酸量和甲酸生成量,从而测定其多糖的主链键型为1,3位键合。经计算酸-碱法提取的酸碱不溶性(1,3)-β-D-葡聚糖效率为20.9%。结论用酸-碱法可以从白色念珠菌细胞壁中提取到高纯度的酸碱不溶性(1,3)-β-D-葡聚糖,为建立新型高特异(1,3)-β-D-葡聚糖的检测试剂提供关键物质基础。     

G实验对深部真菌感染诊断作用的探讨

目的:研究血浆(1,3)-β-D-葡聚糖[(1,3)-β-D glucan,BG]对深部真菌感染的诊断价值。方法:收集80例临床疑似深部真菌感染患者,应用MB-80微生物动态快速检测系统抽血作血浆(1,3)-β-D-葡聚糖检测。同一时间抽取患者血液和留取患者的痰或中段尿标本进行真菌培养。结果:血浆(1,3)-β-D-葡聚糖的阳性率66.0%,真菌培养阳性率51%。结论:血浆(1,3)-β-D-葡聚糖比真菌培养更早、更灵敏地反映深部真菌的早期感染。     

血清(1,3)-β-D-葡聚糖检测对深部真菌感染的诊断价值

目的:研究血清中(1,3)-β-D-葡聚糖检测对深部真菌感染的临床意义.方法:回顾性分析1100例住院患者检测血清(1,3)-β-D-葡聚糖(真菌G试验)结果.结果:真菌G试验灵敏度为78.0%,特异度为89.9%,阳性预测值74.8%,阴性预测值91.4%,真菌G试验与临床诊断结果差异有统计学意义(x2=491.25,P<0.01).真菌培养灵敏度为48.9%,特异度为92.3%,阳性预测值71.0%,阴性预测值82.5%,真菌培养与临床诊断结果差异有统计学意义(x2=239.34,P<0.01).结论:真菌G试验的检测方法快速、阴性预示值高.传统的真菌培养耗时长,特异性虽高,但标本取材易受污染.建议临床对疑似深部真菌感染时,同时进行真菌G试验和病原培养以提高诊断的敏感性和特异性.     

以G试验阳性误诊为侵袭性真菌感染1例

目的提高正确分析血浆（1,3）-β-D-葡聚糖检测（G试验）阳性的认识。方法报道1例因G试验阳性而被误诊为侵袭性真菌感染的多发性骨髓瘤患者,并结合文献复习。结果患者行VDT方案化疗,硫普罗宁保肝,期间出现高热,G试验阳性,予经验性抗真菌治疗,因严重副反应未完成。但停用硫普罗宁后,体温恢复正常,G试验正常。结论G试验因其阳性预测值及特异性低,在诊断侵袭性真菌感染时存在局限性,应加深对G试验阳性的认识,避免过度治疗。     

真菌（1，3）-β-D-葡聚糖检测在早期诊断ICU肺侵袭性真菌感染中的临床价值

目的探讨真菌(1,3)-β-D-葡聚糖检测(G试验)在早期诊断ICU肺侵袭性真菌感染(IFI)中的临床价值。方法选择2014年1月～2017年1月入住浙江省湖州市中心医院呼吸重症监护病房(RICU)和急诊重症监护病房(EICU)108例怀疑为肺部侵袭性真菌感染患者,根据出院时临床诊断分为IFI组(42例)和非IFI组(66例),使用G试验检测两组患者入院当天的真菌(1,3)-β-D-葡聚糖浓度,并与传统的真菌培养方法比较。结果 IFI组G试验值为(78.7±32.1)pg/mL,明显高于非IFI组(9.6±4.2)pg/mL,差异有统计学意义(P0.01);IFI组患者中,G试验阳性率高达81.0%,高于真菌培养检验方法(66.7%),但差异无统计学意义(P0.05);血浆G试验诊断IFI的灵敏度为81.0%、特异度为92.4%、阳性预测值为87.1%、阴性预测值为88.4%,而真菌培养方法的灵敏度为66.7%、特异度为80.3%、阳性预测值为68.3%、阴性预测值为79.1%。结论血浆(1,3)-β-D-葡聚糖检测(G试验)具有快速、准确、简易等特点,在ICU肺IFI早期诊断中具有较突出的临床价值。     

1，3-β-D葡聚糖检测在侵袭性真菌病诊断中的价值

目的结合临床微生物学检验和临床信息探讨1,3-β-D葡聚糖检测在侵袭性真菌病诊断中的价值。方法对2012年2月至2013年3月疑诊侵袭性真菌病的患者207例,采用G实验检测患者血清1,3-β-D葡聚糖,用传统的深部真菌培养法检测深部组织或体腔感染标本。结果207例中,1,3-β-D葡聚糖检测结果,阳性54例（26．1％）,阴性153例（73．9％）;深部真菌培养结果阳性16例（7．7％）,阴性191例（92．3％）。（1）真菌培养和G试验均阳性者14例,均阴性者151例。（2）40例G试验阳性而培养结果阴性：确证12例为临床用药造成的假阳性;12例未接受抗真菌治疗,病情依然好转,可能为污染等因素造成的G试验假阳性;16例为体液真菌培养阴性,但抗真菌治疗有效,提示真菌培养为假阴性。（3）2例真菌培养阳性而G试验阴性。结论1,3-β-D葡聚糖检测较传统的深部真菌培养方法更简便、快速、阳性率高,可为深部真菌感染的早期诊断提供试验依据,具有重要的临床价值。     

G实验和GM实验在咽喉部侵袭性真菌感染诊断中的应用价值

目的 研究G实验和GM实验对咽喉部侵袭性真菌感染的诊断价值.方法 回顾性分析2014年6月至2017年5月期间就诊于西安市中心医院耳鼻咽喉头颈外科的38例咽喉部真菌感染患者(研究组)的临床资料,所有患者在抗真菌治疗前检测血清半乳甘露聚糖抗原(GM实验)、血清(1,3)-β-D-葡聚糖抗原(G实验).依据纳入及排除标准,...     

血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测侵袭性肺部真菌感染的早期诊断意义

目的:探讨血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测对侵袭性肺部真菌感染早期诊断的意义。方法:应用MB-80微生物快速动态检测系及GKT-5MSet动态真菌检测试剂盒定量检测血浆中(1,3)-β-D葡聚糖的含量,并进行统计学分析。结果:87例真菌培养阳性且结合临床确诊为侵袭性肺部真菌感染患者血浆(1,3)-β-D葡聚糖定量检测有82例阳性,阳性率为94.25%,血浆(1,3)-β-D葡聚糖含量为65.0±21.25 pg/ml,阴性对照组为4.0±1.84 pg/ml。两组数据经t检验,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:血浆(1,3)-β-D葡聚糖检测方法具有早期、快速、简便、灵敏度和特异度高的优点,可为侵袭性肺部真菌感染疾病的早期诊断和疗效判断提供一定的参考依据。     

非血液标本的1,3-β-D-葡聚糖检测对放疗后侵袭性真菌感染的诊断价值

目的评估1,3-β-D-葡聚糖在非血液标本中对放射性肺部真菌感染的诊断价值。方法分析肺癌患者放疗后血液、气道分泌物、胸水中1,3-β-D-葡聚糖(1,3-beta-D-glucan,BG)表达差异。结果不同标本G试验检测结果对放射性肺部真菌感染患者诊断效能存在差异。血液标本的敏感性、准确性、特异性均最高;阳性预测值和阴性预测值最优为胸水标本。结论在G试验阳性判断阈值为≥10pg/mL的条件下,胸水和气道分泌物标本的G试验检测结果能够检测肺癌患者放疗后肺部真菌感染。     

G试验对肺结核患者肺部真菌感染的早期诊断价值

目的 对肺结核疑似真菌感染患者血浆（1-3）-β-D-葡聚糖检测（G试验）和真菌培养结果进行比较,评估G试验对肺部真菌感染的早期诊断价值。方法 选取安徽省胸科医院2014年1月至2015年9月明确诊断为肺结核并且高度疑似真菌感染的患者60例,抽取静脉血分离血浆,检测（1-3）-β-D-葡聚糖含量;同时留取痰液行真菌培养加药敏检测,并进行统计学分析。结果 60例疑似肺部真菌感染的患者中,G试验检测阳性率为56.67%,痰真菌培养阳性率为51.67%,差异无统计学意义（χ²=0.07,P=0.30）。结论 G试验具有快速、早期、简便等特点,对肺结核合并侵袭性肺部真菌感染患者的早期诊断具有重要的临床意义。     

侵袭性白色念珠菌肺部感染患者的生存分析

目的：分析影响ICU侵袭性白色念珠菌肺部感染患者抗真菌治疗后生存情况的因素。方法：收集80例ICU侵袭性白色念珠菌肺部感染患者抗真菌治疗后生存时间,随访结局,性别,年龄,从确诊到开始使用抗真菌药的时间等临床资料,对此数据做Cox回归分析。结果：年龄、心理状态、从确诊到开始使用抗真菌药治疗的时间间隔（以下简称为治疗时间）是对ICU侵袭性白色念珠菌肺部感染患者生存率有影响的主要因素。结论：及早诊断和抗真菌药物使用可延长肺念珠菌感染患者生存期,降低死亡率,年轻患者预后要优于老年患者,同时保持积极向上的心态也有助于疾病康复。     

侵袭性念珠菌感染在免疫力低下人群中的流行病学和治疗进展

随着器官移植等现代医学手段的大量开展、广谱抗生素和免疫抑制剂的广泛应用以及人类寿命的延长,免疫力低下人群的数量不断增多.侵袭性真菌感染在此类人群中的发病率和死亡率不断增高,已成为恶性肿瘤、器官移植等致死的直接原因.念珠菌是侵袭性真菌感染的首要致病真菌,它可侵入人体皮下组织、黏膜和全身各组织、器官,进而在血液中播散.念珠...     

(1-3)β-D-葡聚糖水平对侵袭性肺部真菌感染的诊断效能分析

目的:探讨(1-3)β-D-葡聚糖水平对侵袭性肺部真菌感染的诊断效能。方法:选取本院2013年1月-2015年1月呼吸内科侵袭性肺部真菌感染患者119例作为真菌感染组,同期选取肺部细菌感染患者116例作为细菌感染组、健康体检者115例作为对照组,采用免疫比浊法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和血浆(1-3)β-D-葡聚糖(G试验),以真菌培养法作为IPFI的诊断金标准,分析BALF G试验、血浆G试验及联合两者G试验的诊断阳性率、阴性率、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度。结果:真菌感染组BALF和血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平均明显高于细菌感染组和对照组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),其中细菌感染组与对照组BALF和血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。真菌培养阳性99例,真菌培养阴性20例,其中真菌培养阳性者BALF和和血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平分别为(18.45±5.01)ng/L、(90.26±6.25)ng/L;明显高于真菌培养阴性者的(2.03±0.02)ng/L、(77.94±5.01)ng/L,两者比较差异均有统计学意义(t=14.61、8.28,P<0.001)。BALF+血浆G试验对IPFI的诊断阳性率、灵敏度、阴性预测值和准确度均明显高于单独BALF G试验和血浆G试验,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:BALF联合血浆(1-3)β-D-葡聚糖水平检测操作简便、快速,且显著提高对侵袭性肺部真菌感染的诊断阳性率、灵敏度和准确度,值得临床推广应用。     

真菌 (1-3)-β-D-葡聚糖和血培养检测162例分析

目的 对临床疑似侵袭性真菌感染患者检测(1-3)-β-D-葡聚糖和血培养,并对二者在侵袭性真菌感染诊疗中的作用进行分析.方法 采用MB-80微生物快速动态监测系统和BD-BACTEC9120全自动血培养系统,对我院临床各科疑似侵袭性真菌感染患者进行(1-3)-β-D-葡聚糖和血培养检测,对应用抗真菌药物有效的病例进行研究,分析两种检查在侵袭性真菌感染患者诊疗中的作用.结果 共收集到临床疑似侵袭性真菌感染且应用抗真菌药物有效的病例162例,其中(1-3)-β-D-葡聚糖阳性97例、血培养22例,阳性率分别为:59.9%、13.6%.结论 (1-3)-β-D-葡聚糖检测在侵袭性真菌感染患者中阳性率高于血培养,且阳性出现时间比血培养早,有利于疾病的早期诊断和治疗.     

气管插管法建立免疫抑制小鼠侵袭性肺曲霉病模型

目的动物实验被广泛应用于侵袭性肺曲霉病(invasive pulmonary aspergillosis,IPA)诊断及治疗等方面的研究。文中利用气管插管法建立免疫抑制小鼠IPA模型。方法以环磷酰胺及地塞米松对小鼠进行免疫抑制处理后,气管插管气管内滴入烟曲霉孢子悬液,通过组织病理进行验证,并观察小鼠生存-时间曲线。同时运用平板菌落计数方法比较气管插管法与传统滴鼻法造模实际进入鼠肺的孢子量。结果气管插管法可成功建立小鼠IPA模型。小鼠1周内死亡率为55%,接种24h后肺组织匀浆平板菌落计数显示气管插管法所造成的孢子入肺量为(5.17±0.32)log10CFU/g肺组织,而传统滴鼻法仅为(3.82±0.49)log10CFU/g肺组织。结论气管插管法成功建立小鼠IPA模型,较滴鼻法更适于进行IPA相关研究。     

侵袭性真菌感染诊断的三种方法研究

目的:评估血浆(1-3)-β-D-葡聚糖检测(G实验)、真菌培养法及直接涂片法在侵袭性真菌感染诊断中的方法比较。方法:通过112例怀疑侵袭性真菌感染住院患者在其发热当天抽静脉血做G实验检测,同时留取血液、呼吸道、泌尿道或肠道标本做真菌培养及涂片法检真菌。结果:回顾性分析以血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准与治疗原则(草案)作为临床诊断标准,并以此为标准比较G实验﹑真菌培养及直接涂片法结果,分别计算三种方法及联合检测的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值。G实验、真菌培养法、直接涂片法及三者联合检测的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为86.44%、83.02%、85.00%和84.61%;83.05%、84.91%、85.96%和81.82%;61.02%、94.12%、87.80%和67.61%;91.53%%、81.13%、84.38%和89.58%。结论:G实验﹑真菌培养法及直接涂片法相比较各有优缺点,G实验的灵敏度和阴性预测值高,直接涂片法的特异度高。如果联合检测既可具有G实验的优点,又具有直接涂片法及真菌培养法的优点,减少假阴性,为临床提供直接的诊断依据,对早期诊断侵袭性真菌感染更具临床意义。     

侵袭性真菌感染儿童外周血T淋巴细胞亚群变化分析

[目的]研究侵袭性真菌感染儿童外周血中T淋巴细胞亚群的改变,为临床儿童侵袭性真菌感染的诊断和治疗提供具有一定临床价值的实验依据.[方法]感染组34例抗真菌治疗前后用光度法检测血清1,3-β-D葡聚糖（BG）含量,并用流式细胞技术检测其同期外周血中T淋巴细胞亚群的水平,并与正常对照组比较分析.[结果]抗真菌治疗后血清1,3-β-D葡聚糖和CD8＋明显降低,而CD4＋及CD4＋/CD8＋则明显升高（P〈0.01）.[结论]侵袭性真菌感染的儿童身体免疫力下降,免疫系统发生紊乱,经抗真菌治疗后身体免疫功能得到相应恢复.提示密切关注BG和CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋的变化情况,有助于观察治疗效果.     

免疫抑制小鼠系统性白色念珠菌感染模型建立的研究

目的:建立免疫抑制小鼠系统性白色念珠菌感染模型,为感染性疾病的研究和治疗提供科学依据。方法:给予昆明种正常小鼠腹腔内一次性注射环磷酰胺(CY)200 mg/kg,观察其对小鼠一般状况和白细胞数的影响。继之,分别给予前述小鼠尾静脉接种1.5×105/ml(低浓度组)、1.5×106/ml(中浓度组)、1.5×107/ml(高浓度组)的白色念珠菌菌液,建立感染模型。结果:正常小鼠腹腔注射CY后,各组均出现喜静、少动、消瘦、饮食明显减少、多尿、皮毛欠光滑等现象以及白细胞数的降低。小鼠尾静脉分别接种1.5×105/ml(低浓度组)、1.5×106/ml(中浓度组)、1.5×107/ml(高浓度组)浓度的白色念珠菌菌液后,连续观察3周。低浓度组小鼠死亡率为20%,中浓度组死亡率为50%,高浓度组则全部死亡。组织真菌培养证实白色念珠菌已经侵染小鼠内脏,证明感染模型建立成功。结论:CY能够有效降低小鼠白细胞数,导致免疫力低下。在此基础上经尾静脉接种合适浓度的白色念珠菌可建立小鼠系统性白色念珠菌感染模型。     

BALB／c鼠自身免疫性睾丸炎动物模型的制作

 【目的】探讨BALB／c鼠睾丸炎动物模型的建立方法，观察睾丸炎形成后到生殖功能恢复的时间间隔，以及该动物模型的稳定性。【方法】BALB／c小鼠（10周）背脊皮下注射睾丸混悬液0．1mL，浓度2×10^7／mL，1次/周，共4次。同种睾丸混悬液（组1）、同种睾丸混悬液加完全免疫佐剂（组2）、异种睾丸混悬液（组3）、异种睾丸混悬液加完全免疫佐剂（组4）、空白对照（组5）。【结果】组3建模成功率80％，第5、8、11周按Johusen评分为5．2±1．44、6．2±0．79、8．1±0．87，组1、2、5评分均在9．0以上，组3生精功能明显降低（P〈0．05）。组4小鼠于第2次注射后3～5d，全部死亡。组3第5周生精上皮细胞减少至2～3层，曲细精管管腔中有稀疏的精子，间质出现水肿，淋巴细胞浸润约10％～25％。第5周组3附睾尾精子浓度为（11．0±6．2）×10^6，精子存活率（10．73±8．14）％，精子活动率（7．3±6．1）％，明显低于组1、2、5（P〈0．05），于第11周组3恢复至正常水平。睾丸炎生精障碍持续21～28d。【结论】异种小鼠生殖细胞可诱导建立BALB／c小鼠的EAO模型．模型有一定的持续稳定性，可用于精子发育生物学研究。     

血浆（1-3）-β-D葡聚糖检测对侵袭性真菌感染诊断的临床意义

真菌感染尤其是侵袭性真菌感染所引起的疾病称为真菌病。自然界真菌种类很多,与细菌相比,对人致病者相对较少。但是近年来,随着广谱抗生素、免疫抑制剂及皮质类固醇激素及各种介入治疗在临床上广泛应用,器官移植术、导管插管等普遍开展,侵袭性真菌感染的发病率有明显增长趋势。该类疾病的诊断困难、进展迅速、迁延不愈、病死率高,原因之一就是深部真菌感染的早期诊断困难,