虫草素抑制Ras蛋白表达并诱导非小细胞肺癌H358细胞凋亡研究

目的:研究虫草素在体外对K-Ras突变型非小细胞肺癌H358细胞的抑制作用及其相关机制。方法:用MTT法检测虫草素对H358细胞增殖的影响;以流式细胞术检测虫草素诱导H358细胞凋亡情况和对细胞周期的影响;用活性检测试剂盒检测Caspase3、8、9的活性变化;采用Western Blot方法检测K-Ras蛋白的表达情况。结果:不同浓度的虫草素对于H358细胞增殖均有一定的抑制作用,并以浓度依赖的方式诱导H358细胞凋亡和引起G1期周期阻滞;Caspase3、8、9均被不同程度激活;虫草素能够抑制H358细胞K-Ras的表达。结论:虫草素能够在体外有效诱导H358细胞凋亡并抑制H358细胞增殖,为进一步应用于临床治疗K-Ras突变型非小细胞肺癌等肿瘤疾病奠定了实验基础。     

虫草素对舌癌TCA-8113细胞周期和凋亡的影响

目的:研究虫草素在体外对舌癌TCA-8113细胞周期和凋亡的影响;方法:以噻唑蓝法(MTT)测定虫草素对TCA-8113细胞增殖活性的影响;用流式细胞术测定虫草素对TCA-8113细胞周期的影响情况以及是否诱导TCA-8113发生凋亡作用;采用蛋白免疫印迹检测细胞周期相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达情况;结果:虫草素对TCA-8113细胞增殖活性的抑制作用具有浓度依赖性,能够引起TCA-8113细胞发生G2期细胞周期阻滞,并诱导TCA-8113细胞发生凋亡作用;Cyclin B1和Bcl-2表达减少,Cdc2和Bax表达量没用明显变化。结论:虫草素有效的引起TCA-8113发生细胞周期阻滞,诱导TCA-8113细胞凋亡,从而抑制TCA-8113细胞的增殖活性,为进一步应用于临床治疗舌癌等肿瘤疾病提供了依据。     

姜黄素对人肝癌细胞Sk-hep-1抗癌作用的研究

目的:研究姜黄素对人肝癌细胞Sk-hep-1体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制.方法:应用MTT法、DAPI核染色法和细胞周期分析法,检测姜黄素对Sk-hep-1细胞生长和凋亡的影响,并通过RT-PCR方法检测姜黄素对Sk-hep-1细胞抗凋亡基因(Survivin和Bcl-xL)和耐药基因(DRG2和MDR1)mRNA表达的影响.结果:姜黄素抑制Sk-hep-1细胞增殖呈量效关系.姜黄素处理组肝癌细胞Sk-hep-1,HepG2和Hep3B细胞发生不同程度的凋亡,正常肝细胞Chang's liver无明显凋亡.姜黄素处理组Sk-hep-1细胞周期发生变化,G_0/G_1或G_2/M期细胞比例增多.姜黄素处理组Sk-hep-1细胞耐药基因MDR1 mRNA水平显著下降,而抗凋亡基因的表达无明显变化.结论:姜黄素能够抑制Sk-hep-1细胞增殖,并诱导其凋亡,推测可能是通过下调MDR1 mRNA的表达而起作用.     

虫草素抑制脂多糖诱导气道上皮细胞损伤作用机制研究

目的:研究虫草素抑制脂多糖(LPS)诱导气道上皮细胞损伤作用机制。方法:培养气道上皮细胞9HTZ,50μg/ml的LPS干预9HTZ细胞8h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,并收集细胞上清液和细胞,采用酶联免疫法(ELISA)法检测细胞上清液中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β),采用Western blot法检测细胞中和转录因子NF-κB、细胞间粘附分子1(ICAM-1)蛋白表达。结果:虫草素(50,100μmol/ml)组能显著抑制LPS诱导的9HTZ细胞的凋亡,并能显著性抑制细胞上清液中的IL-6、IL-1β、TNF-α的含量,抑制细胞中NF-κB、ICAM-1蛋白的表达。讨论:虫草素能保护LPS诱导的气道上皮细胞损伤。     

基于SIRT1/HO-1途径研究绿原酸诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的:探讨绿原酸诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定绿原酸对HepG2的生长抑制作用,倒置显微镜观察绿原酸对HepG2细胞作用后的形态改变,TUNEL实验和流式细胞术检测细胞凋亡情况,罗丹明123荧光染色实验观察线粒体膜电位的改变,免疫印迹实验探讨绿原酸的作用机制。结果:与空白组相比较,不同浓度绿原酸(1~10mmol/L)能够抑制HepG2肝癌细胞增殖并呈时间-浓度依赖性,绿原酸(1~10 mmol/L)作用24 h后能够显著降低SIRT1、HO-1、Bcl-2和NF-κB蛋白表达,同时上调p53和Bax蛋白表达。结论:绿原酸能够显著抑制HepG2肝癌细胞增殖并通过调控SIRT1/HO-1依赖的凋亡途径发挥作用。     

汉黄芩素对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖和周期的影响

目的:研究汉黄芩素对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖和周期的影响。方法:以不同浓度的汉黄芩素作用于SPC-A-1细胞,检测细胞抑制率、凋亡及细胞周期。结果:MTT法测得汉黄芩素的IC50为24.7 mg.L-1,能够明显抑制SPC-A-1细胞的集落形成能力。汉黄芩素作用于SPC-A-1细胞后,荧光倒置显微镜下观察到细胞凋亡的形态学改变。Annexin V-FITC/PI双标法证实汉黄芩素可以诱导SPC-A-1细胞凋亡,并具有剂量依赖性。流式细胞仪结果显示,不同浓度汉黄芩素使SPC-A-1细胞周期出现显著的变化,10,20 mg.L-1汉黄芩素可将周期阻滞在G0/G1期,30,40 mg.L-1汉黄芩素则使细胞周期堆积在S期,并且随着给药剂量的增加,凋亡峰显著升高。结论:汉黄芩素能明显抑制SPC-A-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,并对细胞G0/G1和S期具有阻滞效应,具有抗肿瘤作用。     

四藤方对Bel-7402细胞增殖和凋亡作用研究

目的:观察清热解毒中药-四藤方对肝癌细胞Bel-7402增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度四藤方处理人肝癌细胞Bel-7402、人肝细胞HL-7702,WST-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态变化,Western Blot法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)活化。结果:与对照组比较,四藤方对人肝细胞HL-7702增殖无明显影响;100～400μg.mL-1四藤方作用24 h可显著抑制肝癌Bel-7402细胞增殖,促使细胞Bel-7402凋亡,呈现细胞凋亡形态,并可活化Bel-7402细胞caspase-3。结论:四藤方可以抑制Bel-7402细胞增殖,促Bel-7402细胞凋亡,并可能与活化caspase-3相关。     

翼核果素对肝癌HepG2细胞凋亡及细胞骨架蛋白F-actin的影响

目的:研究翼核果素对人肝癌Hep G2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:以不同浓度的翼核果素作用于体外培养的Hep G2细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,HE、吖啶橙染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率和周期,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白F-actin形态学变化。结果:翼核果素可明显抑制人肝癌Hep G2细胞的增殖且呈剂量依赖性,作用于Hep G2细胞24 h的IC50值为124.77μmol·L~(-1)。显微镜可见细胞核变形、染色体聚集等典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测结果显示,60、90μmol·L~(-1)翼核果素给药组细胞凋亡的百分率显著高于对照组,G2/M期细胞比例显著高于对照组,细胞骨架蛋白F-actin呈现解聚断裂状态。结论:翼核果素可抑制Hep G2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与细胞周期阻滞、细胞骨架蛋白F-actin解聚有关。     

紫草素对人肝癌HepG2细胞生长的影响及机制研究

目的:研究紫草素对人肝癌HepG2细胞生长的影响并探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度紫草素(0.3、0.5、0.7μg/ml)和顺铂(40μg/ml)分别干预对数生长期人肝癌HepG2细胞;采用MTT比色法测定细胞增值抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用RT-PCR法检测细胞中Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达并计算Bax/Bcl-2比值,采用Western blotting技术检测Caspase-3蛋白表达。结果:经紫草素干预48 h能够显著提高HepG2细胞增殖抑制率,延长细胞周期G_0/G_1期并缩短G_2/M期,提高细胞凋亡率(Apoptosis Index,AI),上调Bax mRNA表达并下调Bcl-2 mRNA表达、提高Bax/Bcl-2表达比值,上调Caspase-3蛋白表达,上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:紫草素能够通过抑制增殖并促进凋亡而对人肝癌HepG2细胞生长起到一定抑制作用,其机制可能与紫草素能够调节细胞周期以及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。     

冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭的抑制作用及细胞Wnt2/β-catenin表达的影响。方法:培养人肝癌SMMC-7721细胞,实验分为阴性对照组,冬凌草甲素低剂量组(10μmol/L),冬凌草甲素中剂量组(20μmol/L),冬凌草甲素高剂量组(40μmol/L)。MTT检测肝癌细胞存活率;流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡;RT-PCR检测肝癌细胞Wnt2、β-catenin mRNA的表达;Western Blot检测肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果:冬凌草甲素进行剂量干预后,肝癌细胞存活率显著降低(P0.05)。冬凌草甲素以20μmol/L的浓度进行干预后,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡高于阴性对照组(P0.05),冬凌草甲素浓度40μmol/L时,人肝癌SMMC-7721细胞凋亡显著高于阴性对照组(P0.01)。冬凌草甲素干预肝癌细胞后,显著降低肝癌细胞内Wnt2、β-catenin mRNA的表达(P0.05)。同时,冬凌草甲素干预后,肝癌细胞内Wnt2、β-catenin蛋白的表达也得到显著降低(P0.05)。结论:冬凌草甲素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖侵袭具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2/β-catenin经典通路上的Wnt2、β-catenin的表达有关。     

472例新型甲型H1N1流感的分期辨证与病因病机规律探讨

目的：通过对472例新型甲型H1N1流感患者的证候学分期调查,总结新型甲型H1N1流感的分期辨证模式,使其辨证论治根据符合临床实际。方法：参考卫生部甲型HINI流感诊疗方案为诊断标准,选择深圳市第三人民医院2009年5月-2010年3月期间住院隔离并确诊的患者472例。采用横断面调查方法回顾性分析甲型H1N1流感确诊病例472例,分别按照表证期、里证期和恢复期三个阶段的各自临床症状、体征,以及各期相关证素等对346例轻症以及126例重症患者的发病年龄,体重,住院天数,发热情况（包括发病中最高体温,发热持续时间以及治疗-体温正常时间）,进行统计学分析。结果：根据472例甲型H1N1流感患者的临床特征,表证期表达频数超过50%的症状、体征有：发热90.46%,疲乏68.21%,咳嗽50.29%,咽充血72.83%,扁桃体肿大83.53%等;里证期表达频数超过50%的症状、体征有：发热100%、咳嗽100%、小便黄100%、口渴100%、胸痛76.98%、咽痛81.75%等;恢复期相对高频的有：疲乏30.29%、纳差17.58%、脘痞17.58%、小便黄17.16%、咳嗽11.23%等。结论：新型甲型H1N1流感患者表证期以风热袭表、正气受损为特点,里证期类似于＂风温病＂的＂热郁胸膈证＂和＂邪热壅肺证＂的组合,恢复期以正气受损（气虚、阴虚、阳虚）、余邪未净为病机特点。     

补髓生血颗粒剂对慢性再障患者骨髓基质细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1的影响

目的探讨补髓生血颗粒剂对慢性再障患者(CAA)的作用机制.方法将慢性再障患者随机分为补髓生血颗粒剂组和再障生血片对照组,采用免疫荧光法检测慢性再障患者治疗前后骨髓基质细胞(BMSC)血管间粘附分子(VCAM-1)、细胞间粘附分子(ICAM-1)抗原表达水平.结果两组患者治疗前粘附分子水平ICAM-1、VCAM-1明显低于正常对照组(P＜0.001),治疗后两组患者ICAM-1、VCAM-1抗原水平都有不同程度的升高,并且在提高VCAM-1方面补髓生血颗粒剂组优于再障生血片对照组.阳虚型比阴虚型恢复好.结论慢性再障患者骨髓基质细胞ICAM-1、VCAM-1抗原表达水平异常,补髓生血颗粒剂可提高粘附分子ICAM-1、VCAM-1的表达,从而促进骨髓造血.进一步证实"阳虚易治,阴虚难调"的理论.     

化瘀解毒汤对肾小球硬化症PAI-1mRNA的影响

目的:旨在探讨化瘀解毒汤延缓慢性肾衰、肾小球硬化的机理.方法:采用单肾切除加重复尾静脉注射阿霉素的大鼠肾小球硬化模型,用原位杂交的方法检测肾组织PAI-1mRNA的表达.结果:PAI-1mRNA在正常组肾小球内弱阳性表达,模型组表达明显高于各中药治疗组、西药治疗组及正常组(P＜0.05,P＜0.01).西药治疗组表达略高于各中药治疗组,但无显著性差异(P＞0.05).中药各治疗组之间比较,无显著性差异(P＞0.05).结论:化瘀解毒汤可能通过下调肾小球PAI-1mRNA基因的表达,促进肾小球细胞外基质降解,从而达到延缓肾小球硬化作用.     

流行性感冒的中医药防治优势探讨

带有高致病性甲型H1N1病毒的流行性感冒在世界范围内广泛传播,防控形势相当严峻,充分发挥中医药治疗和预防流感蔓延具有重大的现实意义和深远的历史意义。     

含碘中药对甲亢大鼠细胞间黏附分子表达的影响

目的:观察不同浓度含碘中药对甲亢大鼠模型甲状腺组织细胞黏附分子ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达的影响。方法:制作大鼠甲状腺机能亢进模型,灌服不同浓度含碘中药复方及其他对照药物进行治疗,然后RT-PCR法检测各组大鼠甲状腺组织ICAM-1、VCAM-1 mRNA水平。结果:含碘较低的中药复方较之含碘高的中药复方在减少ICAM-1及VCAM-1 mRNA表达上具有显著性的差异。结论:小剂量含碘中药复方对实验性甲亢大鼠具有抑制其甲状腺细胞黏附分子表达,保护甲状腺细胞的作用。     

补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1/TIMP-1活性的影响

目的:研究补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1/TIMP-1活性的影响,探讨其防治肝纤维化的作用机制。方法:建立Wistar大鼠CCL4损伤性肝纤维化模型,通过免疫组化及图像分析等方法,观察补肾化瘀方对肝组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及MMP-1/TIMP-1表达的影响。结果:经补肾化瘀方治疗后,用药组肝细胞变性程度和纤维化程度明显减轻;Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达明显降低(P<0.05);MMP-1含量明显增加,TIMP-1含量降低,MMP-1/TIMP-1比值显著增加,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:补肾化瘀方可能通过增加MMP-1的产生、减少TIMP-1的分泌而使其对MMP-1的抑制作用减弱,促进了Ⅰ型及Ⅲ型胶原的降解,起到抗纤维化的作用。     

苦碟子注射液对大鼠肝纤维化模型肝脏MMP-1、TIMP-1的影响

目的观察肝纤维化形成过程中肝组织MMP-1、TIMP-1表达,以探讨MMP-1、TIMP-1与基质转换的关系,以及苦碟子注射液和大黄虫丸对它们的影响。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组与苦碟子注射液高剂量组、苦碟子注射液低剂量组和大黄虫丸组,采用40%CC l4橄榄油溶液造模(0.15 mL/100 g),2次/周,并从实验第3周开始给大鼠用20%乙醇灌胃(1 mL/100 g),隔天1次造模。造模结束给予苦碟子注射液高低剂量和大黄虫丸治疗,12周末在股动脉处取血,取肝脏标本。采用HE方法检测模型对照组和各给药组病理变化情况、血清PCⅢ水平变化。免疫组织化学法检测肝组织MMP-1、TIMP-1。结果模型对照组及各给药组与正常对照组比较均呈程度不同的病理损害,MMP-1、TIMP-1表达均显著增高(P均0.05),且TIMP-1表达明显高于MMP-1表达。各给药组与模型对照组比较,MMP-1表达均无显著性差异(P均0.05),TIMP-1表达却均明显减少(P均0.05)。结论肝脏炎症活动及纤维化会出现程度不同的病理损害,可能与MMP-1及TIMP-1表达明显失衡有关。苦碟子注射液及大黄虫丸治疗对其有一定的抑制作用。     

新型甲型H1N1流感的分期辨证模式研究

目的观察新型甲型H1N1流感患者的证候学特点,阐述其病因病机,总结出符合临床实际的分期辨证模式。方法以卫生部甲型H1N1流感的诊断标准,采用横断面调查方法回顾性分析甲型H1N1流感确诊病例308例,分别按照表证期、里证期和恢复期三个阶段的各自临床症状、体征,以及各期相关证素等进行统计学分析。结果 (1)表证期相对高频的症状、体征有:发热90.25%,疲乏69.16%,咳嗽49.35%,恶寒43.83%,咽痒咽痛43.83%,头晕头痛33.12%,白痰32.14%,流涕29.87%等,咽充血72.08%,扁桃体肿大83.77%。(2)里证期的相对高频的症状、体征有:发热、咳嗽、小便黄、口渴等为100%,心烦、咽痛等为85.71%,纳差、脘痞、疲乏、扁桃体肿大等为71.43%。(3)恢复期相对高频的症状、体征有:疲乏30.52%,纳差、脘痞17.82%,小便黄17.53%,咳嗽10.39%,咽充血15.26%。(4)主要证素特点是,表证期以风热(100%)、气虚(69.16%)和痰湿(46.75%)为主,里证期以郁火(100%)、气虚(71.43%)和痰湿(71.43%)为主,恢复期以正气受损(气虚、阴虚、阳虚)、余邪未净为病机特点。结论新型甲型H1N1流感患者表证期以风热袭表、阳气郁滞为特点,里证期类似于"风温病"的"热郁胸膈证"和"邪热壅肺证"的组合,恢复期以正气受损(气虚、阴虚、阳虚)、余邪未净为病机特点。     

补阳还五汤对中风后遗症患者血清sICAM1及sVCAM1的影响

目的：观察补阳还五汤对中风后遗症患者血清可溶性细胞间粘附分子1（sICAM1）、可溶性血管细胞粘附分子1（sVCAM1）含量的影响。方法：将65例患者随机分为2组。对照组30倒，采用复方丹参注射液、依美思治疗；治疗组35例，在对照组治疗基础上加服补阳还五汤（处方：生黄芪、当归尾、桃仁、红花、赤芍、川芎、地龙）治疗。疗程均为30天。观察临床疗效及治疗前后血清sICAM1、sVCAM1变化情况。结果：总有效率治疗组为91．4％，对照组为70．0％，2组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。治疗组治疗后血清sICAM1、sVCAM1含量均较治疗前下降，差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05，P〈0．01）；对照组治疗前后血清sICAM1、sVCAM1含量变化差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：补阳还五汤治疗中风后遗症疗效显著，并能降低血清sICAM1、sVCAM1含量，抑制细胞粘附。     

ZTC 1+1用于养阴清肺糖浆水提液的絮凝工艺研究

目的优化养阴清肺糖浆的生产工艺,更好地保留有效成分,提高药液的澄清度。方法采用天然高分子絮凝剂ZTC 1+1对养阴清肺糖浆原药水提液进行絮凝处理,以有效成分甘草酸保留率和药液浊度为衡量指标,考察絮凝剂用量、絮凝温度、搅拌速度、搅拌时间对絮凝效果的影响,并将絮凝后的药液离心处理,以确定最佳工艺条件。结果最佳絮凝提纯工艺条件为药液温度30℃,ZTC 1+1用量0.6 g/L,快搅速度450 r/min,快搅时间2 min,慢搅速度50 r/min,慢搅时间10 min,絮凝后的药液再在转速3 000 r/min下离心20 min,此时甘草酸保留率为84%,药液浊度只有1.3 NTU。结论 ZTC 1+1用于养阴清肺糖浆原药水提液的絮凝提纯效果明显优于醇沉法,絮凝法可以替代醇沉法用于养阴清肺糖浆水提液的提纯。