五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的作用及机制

目的探讨五味子多糖对裸鼠胶质瘤细胞的诱导凋亡作用的机制。方法体外提取和原代培养裸鼠胶质瘤细胞,将浓度为0、200、400和800μg/ml的五味子多糖作用于裸鼠胶质瘤细胞中培养48 h后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测其上清液中Bax和Bcl-2的蛋白表达;细胞免疫组织化学法观察五味子多糖作用后裸鼠胶质瘤细胞Bax和Bcl-2阳性表达率。结果不同浓度五味子多糖作用细胞后,细胞培养上清中Bcl-2蛋白表达水平均下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),Bax/Bcl-2值均升高(P<0.01)。细胞免疫组化结果显示,400和800μg/ml多糖组Bax阳性表达率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。400和800μg/ml多糖组Bcl-2阳性表达率下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论五味子多糖诱导裸鼠胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过上调Bax/Bcl-2比值,使促凋亡因素占优势,从而使胶质瘤细胞发生凋亡。     

羊栖菜多糖诱导MCF-7细胞凋亡机制的研究

目的 研究羊栖菜多糖对MCF-7细胞凋亡的诱导作用及对凋亡相关基因表达的影响，探讨藻类多糖的抗肿瘤机理。方法 流式细胞仪观察SFPS对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响；RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas，FasL mRNA的表达。结果 羊栖菜多糖可阻滞MCF-7细胞由G0／G1期进入S期，升高细胞凋亡指数(APO)；同时上调Fas，FasL mRNA的表达。结论 羊栖菜多糖可能通过上调凋亡相关蛋白Fas，FasL的表达，促进肿瘤细胞凋亡达到治疗肿瘤的目的。     

蟾蜍毒素对人胃癌细胞凋亡的诱导机制

目的:研究蟾蜍毒素诱导人胃癌细胞MGC803凋亡及对凋亡因子Livin、caspase-3的影响.方法:应用MTT法检测10、20、40、80、160nmol/L蟾蜍毒素对胃癌细胞MGC803增殖抑制作用:瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态学的变化;流式细胞术分析周期阻滞和细胞凋亡;Western blot法检测Livin...     

Ghrelin对高糖诱导心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨Ghrelin对高糖诱导心肌细胞凋亡的影响.方法 将原代培养的心肌细胞随机分为:①正常对照组(N组);②高糖组(H组);③高糖+Ghrelin组(G组).应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测各组心肌细胞凋亡,分光光度法检测心肌细胞内caspase-3活性的变化.结果 与N组比较,H组心肌细胞凋亡明显增加,caspase-3活性显著升高;与H组比较,G组心肌细胞凋亡数量明显减少,caspase-3活性明显降低(均P＜0.05).结论 Ghrelin可能通过降低caspase-3活性抑制高糖诱导的心肌细胞凋亡.     

灰树花多糖诱导HeLa细胞凋亡的体外实验

目的 观察灰树花多糖(PGF)对HeLa凋亡的影响.方法 采用MTT法研究PGF对HeLa细胞增殖的体外抑制作用,HE染色观察凋亡细胞形态,免疫组化法检测caspase-3蛋白表达.结果 PGF以时间和剂量依赖的方式抑制HeLa细胞的生长,HE染色观察到凋亡细胞的形态学改变,免疫组化检测到caspase-3蛋白高表达.结论 PGF促进HeLa细胞凋亡,其作用机制可能与caspase-3蛋白表达增高有关.     

灰树花多糖联合顺铂诱导HeLa细胞凋亡

目的探讨灰树花多糖(PGF)联合顺铂(DDP)诱导He La细胞凋亡及其可能的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝比危法(MTT)检测细胞增殖抑制率,RT-PCR法检测survivin和caspase-3 m RNA的表达。结果 MTT法显示,联合用药抑制率均高于单药组(P<0.05)。PGF0.05 mg/L与DDP 1 mg/L联合作用24 h时,Q>1.15;RT-PCR显示,联合用药组与两单药组比较survivin m RNA表达下调,caspase-3 m RNA表达上调。结论联合用药对He La细胞的抑制率较单独用药组有明显提高。联合用药24 h时点,二者有协同作用。联合用药诱导He La细胞凋亡可能与凋亡基因survivin表达下调和caspase-3基因表达上调有关。     

阿奇霉素诱导淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用的研究

目的：研究阿奇霉素诱导淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用,及其相关的凋亡蛋白和细胞周期的变化,为临床治疗淋巴细胞白血病提供新的研究思路。方法：应用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡并用流式细胞术进行细胞周期分析,MTT法检测阿奇霉素对Jurkat细胞的增殖抑制作用,利用West-ern-blotting检测凋亡途径相关蛋白的表达。结果：用阿奇霉素处理Jurkat细胞48h后300mg/L剂量组早期凋亡率显著增高达到（88.0&#177;3.3）%,而25mg/L剂量组为（11.5&#177;2.7）%,与对照组（10.6%&#177;1.8）%无明显差异。MTT法检测结果IC50值为88.4mg/L,200mg/L抑制率达到89.27%。细胞周期显示150mg/L时G1期细胞增加,G2期和S期细胞下降。Western-blotting结果表明Bcl-2蛋白高表达,处理前后无明显变化,而Bax蛋白表达随药物浓度提高而上升,活化的Caspase3在100mg/L表达最高。结论：阿奇霉素可以有效的诱导Jurkat细胞凋亡并呈明显的浓度依赖性,其凋亡途径可能是通过Bax蛋白表达上升诱导下游效应分子Caspase3活化实现。细胞增殖抑制试验表明200mg/L以上时细胞增殖明显受抑制,细胞周期分析提示细胞增殖阻滞在了G1期。     

内质网应激信号在姜黄素诱导Jurkat细胞凋亡中的作用

目的 观察姜黄素对Jurkat细胞的作用,研究内质网应激信号在姜黄素诱导Jurkat细胞凋亡中的作用.方法 在体外培养体系中,通过甲基噻唑蓝(MTT)比色法分析姜黄素对Jurkat细胞存活和增殖的作用,流式细胞学分析姜黄素对Jurkat细胞凋亡的作用,Western印迹检测Jurkat细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶...     

黄芩素通过线粒体凋亡途径诱导体外培养喉癌细胞凋亡的机制

目的探索中药黄芩有效成分——黄芩素(BAI)通过线粒体凋亡途径诱导体外培养喉癌细胞凋亡的分子机制。方法体外培养的人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,暴露于浓度递增的BAI培养液中,分别培养24、48 h,流式细胞术(FCM)检测诱导细胞凋亡作用;分光光度法检测对半胱天冬酶(caspase)-3及caspase-9的激活作用;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测对Bcl-2、Bax mRNA表达的影响;Western印迹检测对酶原蛋白(procaspase)-9、caspase-9,procaspase-3、caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果 BAI可诱导细胞凋亡,凋亡率增加;分光光度法表明BAI可以激活caspase-3、caspase-9活性;BAI可下调Bcl-2 mRNA表达,上调Bax mRNA表达;印迹BAI可上调Bax、caspase-9、caspase-3蛋白表达,下调Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3蛋白表达,差异有统计学意义(P0.05)。结论 BAI通过上调Bax在mRNA和蛋白水平的表达,下调Bcl-2在mRNA和蛋白水平的表达及Bcl-2/Bax比,促进Bax在线粒体外膜处聚集成簇,降低线粒体跨膜电位,促进细胞色素(Cyt)C释放到胞质,进而与激活的caspase-9及Apaf-1形成凋亡小体,从而激活caspase-3及后续线粒体凋亡途径,诱导喉癌Hep-2细胞凋亡。     

人膀胱移行细胞癌中生存素mRNA的表达及与细胞凋亡的关系

目的检测膀胱癌中生存素(Survivin)基因表达,探讨其与细胞凋亡的关系。方法采用原位杂交、免疫组织化学技术和DNA原位末端标记技术,检测46例膀胱癌组织、15例正常膀胱组织生存素mRNA及膀胱癌中caspase3蛋白和细胞凋亡。结果与正常膀胱组织相比,生存素mRNA显著表达于膀胱癌中,并与病理分级有关(P<0.05);膀胱癌中caspase3蛋白与凋亡细胞阳性率分别为76.1%和67.4%,凋亡指数均值为8.1%;生存素阴性组AI显著高于阳性组(P<0.01)。结论生存素选择性表达于膀胱癌中,通过抑制细胞凋亡,参与膀胱癌发生发展。     

Therapeutic effect of Cistanche deserticola on defecation in senile constipation rat model through stem cell factor/C-kit signaling pathway

BACKGROUNDConstipation is one of the chronic gastrointestinal functional diseases. It seriously affects the quality of life. Cistanche deserticola (C. deserticola) can treat constipation obviously, but its mechanism has not been clarified. We supposed that mechanism of it improved the intestinal motility by stimulating interstitial Cajal cells (ICC). Activation of the C-kit receptor on the surface of ICC is closely related to ICC function, and the stem cell factor (SCF)/C-kit signaling pathways plays an important role on it. To investigate the mechanism of how C. deserticola treats constipation, this study aimed to establish a constipation model in rats and explore the role of SCF/C-kit signaling pathway in the treatment. AIMTo explore the SCF/C-kit signaling pathways in the role of C. deserticola for treatment of constipation by a constipation rat model.METHODSForty-eight 8-mo-old Sprague–Dawley rats were divided into 4 groups by random weight method: Normal group (n = 12), model group (n = 12), C. deserticola group (n = 12) and blocker group (n = 12). The normal group received normal saline by gavage; the model group received loperamide by gavage; the blocker group received loperamide and C. deserticola by gavage, and STI571 was injected by intraperitoneally. During treatment, the weight, fecal granules and fecal quality were recorded every 10 d. On day 20 after model induction, the colon tissues of each group were removed. Hematoxylin and eosin staining was used to observe pathological changes. Expression levels of SCF, C-kit and Aquaporin genes were detected by immunohistochemistry, western blotting, and real-time-quantitative polymerase chain reaction. The colonic epithelial mitochondria and goblet cells were observed by transmission electron microscopy.RESULTSCompared with the normal group, as treatment progressed, the weight of rats in the model and blocker groups decreased significantly, the stool weight decreased, and the stool quality was dry (P < 0.05). C. deserticola reversed the decrease in body weight and stool weight and improved stool quality. Histopathological analysis indicated that the colonic mucosal epithelium in the model group was incomplete, and the arrangement of the glands was irregular or damaged. Treatment with C. deserticola improved the integrity and continuity of the epithelial cells and regular arrangement of the glands. The blocking agents inhibited the effects of C. deserticola Immunohistochemistry and real-time-quantitative polymerase chain reaction showed that expression of SCF and C-kit protein or genes in the colonic tissue of the model group was decreased (P < 0.05), while treatment with C. deserticola increased protein or gene expression (P < 0.05). Western blotting showed that expression of aquaporin APQ3 was increased, while the expression of Cx43 decreased in the model group. Treatment with C. deserticola inhibited expression of APQ3 and promoted expression of Cx43. Transmission electron microscopy showed that the mitochondria of the colonic epithelium in the model group were swollen and arranged disorderly, and microvilli were sparse. The condition was better in the C. deserticola group. Mice treated with STI571 blocker confirmed that blocking the SCF/C-kit pathway inhibited the improvement of constipation by C. deserticola.CONCLUSIONC. deserticola improved defecation in rats with constipation, and the SCF/C-kit signaling pathway, which is a key link of ICC function, played an important role of the treatment.     

羊栖菜多糖对内毒素诱导的大鼠肝星状细胞增殖活化、氧化损伤及凋亡的影响

目的:观察羊栖菜多糖(sargassum fusiforme polysaccharides,SFPS)对内毒素(lipopolysccharide,LPS)诱导的肝星状细胞HSC-T6的增殖活化、氧化损伤及凋亡的影响,并探讨其抗纤维化的机制.方法:将大鼠HSC-T6细胞株置DMEM培养液中,37℃50mL/L CO2条件下培养传代后分为空白对照组、LPS模型组、LPS+不同剂量SFPS组.加药处理48h后,MTT比色法检测细胞增殖;Annexin V-FITC标记法检测细胞的凋亡;比色法检测MDA/SOD的含量;采用ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达;Western blot法检测?-SMA的表达.结果:LPS能明显诱导HSC-T6的增殖、提高MDA的分泌及Ⅰ型胶原和?-SMA的表达、降低SOD的分泌;与模型组相比,SFPS(25、50、100mg/L)组可以不同程度抑制HSC-T6增殖并能诱导其凋亡、减少MDA分泌及Ⅰ型胶原和?-SMA的表达、增加SOD的分泌(均P<0.05).结论:SFPS可能具有一定的抗纤维化作用,其与诱导HSC-T6凋亡及保护LPS诱导的HSC-T6细胞氧化应激损伤有关.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后雌二醇的保护作用及其对caspase-3表达的影响

目的观察雌二醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡与caspase-3表达的影响。方法雄性Wistar大鼠72只随机分为假手术组（n=8）、手术对照组和雌二醇组。后两组又根据再灌注时间的不同各分为3、6、12、24h四个小组,每小组8只。线栓法制作脑缺血-再灌注（I/R）损伤模型。缺血2h分别再灌注3、6、12、24h后断头取脑,应用TUNEL染色及SP免疫组织化学方法观察并测定梗死灶体积、凋亡细胞数及caspase3的表达。结果假手术组未发现脑梗死灶和凋亡细胞及caspase-3阳性细胞。雌二醇组较手术对照组脑梗死体积显著缩小（P〈0.05）,凋亡细胞数减少（P〈0.05）;caspase-3表达减弱（P〈0.05）。结论雌二醇通过下调caspase-3的表达抑制脑细胞凋亡,具有脑保护作用。     

急性白血病细胞体外对Jurkat细胞凋亡的影响

为探讨白血病细胞凋亡相关基因 (Fas)的功能性表达情况 ,将 2 7例白血病患者的白血病细胞与 Jurkat细胞体外孵育后 ,用原位末端标记法 (TUNEL )测定单纯 Jurkat细胞 (对照组 )、不加和加入不同浓度抗凋亡相关基因配体 (Fas L)的 Jurkat细胞凋亡率。结果显示 ,不加抗 Fas L 急性非淋巴细胞白血病组 (ANL L 组 )与对照组比较 ,凋亡率明显增高 (P<0 .0 1) ,急性淋巴细胞白血病组 (AL L 组 )与对照组比较仅轻度增高 (P<0 .0 5 ) ,两者均随细胞浓度的增加而凋亡率增高 ;ANL L组加与不加抗 Fas L 相比凋亡率明显减少 (P<0 .0 1) ,随抗 Fas L浓度的增加而凋亡率减少 ,AL L 组加与不加抗 Fas L 相比凋亡率轻度减少 (P<0 .0 5 ) ,也随抗 Fas L 浓度的增高而减少 ,但不如 ANL L组凋亡率变化明显。提示急性白血病细胞存在 Fas L的功能性表达 ,ANL L较 AL L的 Fas L表达高     

大鼠脑出血后血肿周围补体C9和核因子-κB65表达及黄芪多糖的干预作用

目的探讨补体C9、核因子κB65(NF-κB65)在大鼠实验性脑出血后血肿周围的表达及黄芪多糖干预后对其表达的影响。方法雄性SD大鼠69只,随机分为假手术组、模型组及治疗组,每组23只。根据动物处死时间又分为6h和1、3、5d4个亚组,每组每个时间点取5只大鼠用于免疫组化染色,3d时间点取3只用于透射电镜检查。模型组与治疗组采用Ⅶ型胶原酶诱导脑出血模型;假手术组以等量等渗盐水代替Ⅶ型胶原酶。治疗组于术后2h给予黄芪多糖2ml(25mg/kg),腹腔注射,1次/d。分别于6h和1、3、5d对大鼠神经行为学评分,采用免疫组化方法检测不同时间点血肿周围组织C9和NF-κB65表达的变化。透射电镜观察血肿周围神经细胞超微结构的变化。结果模型组与治疗组均于脑出血后6h开始表达补体C9,24h达高峰;6h开始表达NF-κB65,3d达高峰。各时间点表达均高于假手术组(P<0.050.01);NF-κB65的表达与C9的表达呈正相关关系(r=0.752,P<0.05)。与模型组比较,治疗组3、5d大鼠神经行为学评分明显减小(P<0.05),神经细胞超微结构改变亦比模型组减轻。结论补体C9和NF-κB65参与了脑出血后神经细胞的损伤;经黄芪多糖干预后,可能通过抑制NF-κB65及补体C9表达发挥神经保护作用。     

Apoptotic effect of Epigallocatechin-3-gallate on the human gastric cancer cell line MKN45 via activation of the mitochondrial pathway

To investigate whether Epigallocatechin-3-gallate （EGCG） can induce apoptosis of the gastric cancer cell line MKN45 and its apoptotic pathway.METHODS： To determine this, apoptotic rates of MKN45 cells after EGCG treatment with or without caspase-3 inhibitor were evaluated by Annexin V-FITC ＋ PI staining The influence of EGCG on the activity of caspase-3 in the MKN45 cells was determined by ELISA. By Rhodamine123 staining, the membrane potential change of the mitochondrion was also investigated, and mRNAs and protein expression of the bcl-2 family were analyzed by RT-PCR and Western blot.RESULTS： EGCG can induce apoptosis of MKN45 cells in time- and dose-dependent manner. Eight hours after EGCG treatment, the activity of caspase-3 in the MKN45 increased, especially 12 h after treatment. The mitochondrial membrane potential was significantly weakened 4 h after EGCG insult. The mRNA and protein expression levels of pro-apoptotic members, such as Bax, Bid and Bad, were upregulated gradually as treated time increased. Moreover, the mRNA and protein expression levels of anti-apoptotic members, such as Bcl-xL and Bcl-2, were inhibited. CONCLUSION： These data support that EGCG can induce apoptosis of the human gastric cancer cell line MKN45, and the effect is in a time- and dose-dependent manner. The apoptotic pathway triggered by EGCG in MKN45 is mitochondrial-dependent.     

阿司匹林对Jurkat细胞体外作用的实验研究

目的:探讨非甾体类抗炎药阿司匹林对存在有β-连环素异常表达的T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的作用及机制.方法:MTT法观察阿司匹林对Jurkat细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测阿司匹林对Jurkat细胞细胞周期分布的影响.实时荧光定量RT-PCR法分析经不同浓度的阿司匹林处理后的Jurkat细胞β-连环素及CyclinD1基因的表达水平的改变.结果:阿司匹林呈剂量依赖性抑制Jurkat细胞的增殖,72 h半数抑制浓度为1.78 mmol/L;随浓度增加,CyclinD1基因及蛋白的表达水平均下调.结论:非甾体类抗炎药阿司匹林可能通过影响Wnt信号通路调节某些细胞周期相关基因的表达,将Jurkat细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制白血病细胞株Jurkat的增殖.     

哇巴因诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的：研究哇巴因对白血病细胞株Jurkat是否具有凋亡诱导作用，探索其可能的信号传导通路，阐明哇巴因诱导细胞凋亡的作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对白血病细胞生长的抑制程度；应用电镜及流式细胞术观测细胞凋亡；应用Western-blot检测细胞外信号调节蛋白激酶(extracelluar sig-nal-regulated kinase1/2简称 ERK1/2)的表达。结果：哇巴因能诱导白血病细胞凋亡，细胞凋亡的数量与哇巴因的浓度呈正相关，Western-blot检测结果显示哇巴因作用后，磷酸化：ERK1/2的表达减低。结论：细胞外信号调节蛋白激酶ERK通路可能参与了哇巴因引起的白血病细胞的凋亡过程。     

当归多糖对免疫性肝损伤小鼠肝中一氧化氮合酶及凋亡相关基因的影响

目的研究免疫性肝损伤中结构型（ｃＮＯＳ）、诱导型（ｉＮＯＳ）一氧化氮合酶及凋亡相关基因Ｂａｘ、Ｂｃｌ－２表达的变化,在进一步探讨免疫性肝损伤机制的同时观察当归多糖的干预调控作用。方法建立卡介苗和脂多糖诱导的小鼠免疫性肝损伤模型,给予当归多糖 ３０ ｍｇ／ｋｇ、 ６０ ｍｇ／ｋｇ,测定血中 ＡＬＴ、 ＧＳＴ活性及肝中 ＮＯ含量;用免疫组织化学方法观察ｃＮＯＳ、ｉＮＯＳ、Ｂａｘ、Ｂｃｌ－２的表达。结果免疫性肝损伤小鼠ｓＡＬＴ、ｓＧＳＴ及ＮＯ含量明显升高,ｉＮＯＳ含量为正常鼠的１７．８倍,ｃＮＯＳ无明显变化,抗调亡基因Ｂｃｌ－２呈阴性表达,而具有启动凋亡信号、抑制Ｂｃｌ－２表达的 Ｂａｘ增加３１．１％。小剂量当归多糖可使 ｓＡＬＴ、 ｓＧＳＴ及 ＮＯ含量分别降低 ２４．６％、 ４０．８％、 １８．４％, ｉＮＯＳ、Ｂａｘ表达下降８４．２％、 ３７．１％,并使ｃＮＯＳ表达升高６６．８％, Ｂｃｌ－２表达增加 ３．３８倍;大剂量当归多糖可使ｓＡＬＴ、 ｓＧＳＴ及ＮＯ含量分别降低３６．６％、３４．５％、１６、９％,对Ｂａｘ表达的降低作用及对ｃＮＯＳ、Ｂｃｌ－２表达的增加作用不及小剂量明显,但能明显地降低ｉＮＯＳ的表达。结...