中药复方对链球菌性肺炎小鼠炎症p38MAPK信号转导通路的影响

目的:观察中药复方对链球菌性肺炎小鼠炎症p38MAPK信号转导通路的影响。方法:将48只BALB/c小鼠随机分为4组:正常组、模型组、中药组、SB203580组,每组12只。模型组、中药组、SB203580组采用麻醉并破损鼻黏膜滴注一定量肺炎链球菌法建立链球菌性肺炎模型;中药组在造模后以中药复方7.5 g·kg~(-1)·d~(-1)灌胃治疗,2次·d~(-1),SB203580组造模后以SB203580 1mg·kg~(-1)·d~(-1)腹腔注射,1次·d~(-1),共7 d。造模第7天解剖取肺组织,检测各组小鼠肺组织p38MAPK基因及p-p38MAPK蛋白表达水平和TNF-α、IL-6含量变化。结果:中药组小鼠肺组织中p38MAPK基因及p-p38MAPK蛋白表达水平和TNF-α、IL-6含量较正常组高(P0.05),无统计学意义;较模型组低(P0.05),有统计学意义。结论:中药复方能有效抑制链球菌性肺炎小鼠炎症p38MAPK信号通路的活化,控制炎症进程。     

基于p38 MAPK信号通路探讨苍膝通痹胶囊对KOA大鼠关节软骨的保护作用

目的:观察苍膝通痹胶囊治疗膝骨关节炎(KOA)模型大鼠的疗效及相关作用机制。方法:将60只4周龄SPF级健康雄性SD大鼠,随机分为空白组,模型组,二甲基亚砜(DMSO)组,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组,每组10只。除正常组外,其余各组采用改良Hulth法建立KOA模型,造模成功后,苍膝通痹胶囊组每日给予0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊溶液灌胃,SB203580组每日给予0.015 g·kg~(-1)的SB203580溶液灌胃,苍膝通痹胶囊联合SB203580组组每日给予含0.015 g·kg~(-1)SB203580及0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊的混合溶液灌胃,DMSO组给予1%DMSO溶液灌胃,模型组和空白组给予生理盐水灌胃,用药干预4周后处死、取材。苏木素-伊红(HE)染色观察软骨组织形态学改变,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血上清液中白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,实时荧光定量PCR(Real-tine PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测软骨组织中p38 MAPK信号通路中相关因子p38,p-p38,基质金属蛋白酶-13(MMP-13),Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)mRNA及蛋白的表达水平,免疫组化法检测p-p38的定位表达。结果:与正常组比较,模型组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著上调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著下调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著上调(P0.01);与模型组比较,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著下调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著上调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著下调(P0.01)。结论:苍膝通痹胶囊可有效保护KOA大鼠软骨组织,其机制可能与靶向阻断p38 MAPK信号通路有关。     

大蒜素对PM2.5诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的探讨PM2.5对小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及大蒜素(Allicin)的抑制作用及可能机制。方法采集大气PM2.5并分别以0(空白对照组)、20、100、200、400 mg/L(PM2.5 20、100、200、400 mg/L组)作用小鼠VSMCs 24 h,检测VSMCs增殖情况,一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)含量和VSMCs中磷酸化p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;VSMCs分别加入Allicin 5、20、40 mg/L(Allicin 5、20、40 mg/L组)、p38 MAPK通路阻滞剂SB203580 20μmol/L(SB203580 20μmol/L组)和Allicin40 mg/L与SB203580 20μmol/L(Allicin+SB203580组),检测Allicin的干预作用及机制。结果与空白对照组比较,PM2.5 100、200、400 mg/L组均诱导VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量升高,NO分泌减少(P0.05,P0.01),细胞内p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达增加(P0.05),尤其200 mg/L组效果显著(P0.05,P0.01);与PM2.5 200 mg/L组比较,Allicin 20、40 mg/L组、SB203580 20μmol/L组、Allicin+SB203580组可抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P0.01),VSMCs中p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达降低(P0.05,P0.01);与Allicin 20 mg/L组比较,Allicin+SB203580组可进一步抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P0.01,P0.05),VSMCs中p-p38MAPK及PCNA蛋白表达降低(P0.01)。结论 Allicin可能通过抑制p38 MAPK信号通路,抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖。     

黄芩苷对幽门螺杆菌诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞损伤的保护作用及机制

目的:探讨黄芩苷(baicalin)对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞(human gastric epithelial GES-1 cells)损伤的保护作用及机制研究。方法:采用Hp感染GES-1细胞,加入baicalin(15,30,60 mg·L~(-1))和p38分裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580 20μmol·L~(-1)共培养。噻唑蓝(MTT)比色法测细胞增殖、流式细胞术测细胞凋亡、酶联免疫吸附法(ELISA)测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-8水平、比色法测细胞乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性、蛋白免疫印迹法(Western blot)测细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2,p-p38 MAPK及total-p38 MAPK(T-p38 MAPK)蛋白表达。结果:与空白组比较,Hp可抑制GES-1细胞增殖,促进GES-1细胞凋亡,诱导GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8并增加LDH活性,增加GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并降低Bcl-2蛋白表达(P0.01);与Hp感染组比较,中、高浓度baicalin组可促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.01);与高浓度baicalin组比较,SB203580可进一步促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:baicalin可通过抗炎、促增殖并抗凋亡减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤,其机制可能与抑制p38 MAPK通路有关。     

预针刺对阿尔茨海默病样大鼠学习记忆能力及海马区NLRP3炎性小体相关蛋白的影响

目的:观察预针刺对阿尔茨海默病(AD)样大鼠海马区核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、白介素1β(IL-1β)以及活化的小胶质细胞(MG)数量的影响,探讨预针刺防治AD的作用机制。方法:将36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组,每组12只。模型组、电针组采用连续8周腹腔注射D-半乳糖溶液(120 mg·kg^-1·d^-1)的方法制备AD样大鼠模型。电针组同时予"百会""足三里"穴电针刺激,连续波,频率50 Hz,电流1 mA,每次20 min,每日1次,连续干预8周。干预结束后采用Morris水迷宫实验评估各组大鼠空间学习记忆能力,Western blot法检测各组大鼠海马组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平,免疫荧光标记法检测海马组织活化的MG数量。结果:与空白组比较,模型组大鼠平均逃避潜伏期延长(P<0.01),平台穿越次数减少(P<0.01),目标象限探索时间缩短(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠平均逃避潜伏期缩短(P<0.01),...     

补肺益肾方对COPD大鼠气道黏液高分泌及肺组织Notch3，HES1的影响

目的:观察补肺益肾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道黏液高分泌及Notch信号通路相关蛋白Notch3,HES家族发状分裂相关增强子1(HES1)的影响,探讨其作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肺益肾方组和氨茶碱组,每组12只。第1~12周,采用香烟烟雾暴露联合反复细菌感染方法制备COPD稳定期大鼠模型;第13~20周,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,治疗组给予相应药物灌胃(补肺益肾方组3.7 g·kg^-1·d-1,氨茶碱组54 mg·kg^-1·d-1)。第20周灌胃结束后取材,观察肺组织病理,检测大鼠肺功能,肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),黏蛋白5AC(MUC5AC)和肺组织Notch3,HES1,MUC5AC mRNA与蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠肺功能显著降低(P<0.05,P<0.01),平均肺泡数显著降低(P<0.01),肺泡平均截距显著升高(P<0.01),肺泡灌洗液TNF-α,IL-6和MUC5AC显著升高(P<0.01),肺组织Notch3,HES1和MUC5AC基因与蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,补肺益肾方组和APL组肺功能和肺病理损伤显著改善(P<0.05,P<0.01),肺泡灌洗液TNF-α,IL-6和MUC5AC显著降低(P<0.01),肺组织Notch3,HES1和MUC5AC基因与蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补肺益肾方抑制COPD大鼠气道黏液高分泌,其机制与调控Notch3,HES1蛋白有关。     

大黄灵仙方调控TAK1与TRAF6相互作用及共定位对胆管细胞炎症反应的影响

目的:观察大黄灵仙方(DHLX)对大鼠胆管上皮细胞的修复作用,探讨其作用机制是否通过调节转化生长因子-β(TGF-β)激活激酶1(TAK1)与肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的相互结合,调控核转录因子-κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化而发挥作用。方法:将20只SD大鼠随机分为正常组和DHLX组,分别予生理盐水及DHLX(320 mg·kg^-1·d^-1)灌胃8 d,制备正常血清及含DHLX血清;从正常SD大鼠中提取胆管上皮细胞,取胆管上皮细胞分为9组:正常组、模型组(20 mg·L^-1)、脂多糖(LPS)+DHLX组(20 mg·L^-1+10%含药血清)、LPS+PDTC组(20 mg·L^-1+200μmol·L^-1)、LPS+SB203580组(20 mg·L^-1+0.5μmol·L^-1)、LPS+PDTC+SB203580组(20 mg·L^-1+200...     

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素的干预研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化中的作用及大黄素的干预效应。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)分为对照组、IL-1β诱导组、IL-1β+SB 203580组和IL-1β+大黄素组。培养48 h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、角蛋白(CK)、p38MAPK及磷酸化-p38MAPK(p-p38MAPK)的表达情况。结果IL-1β可诱导部分NRK52E由卵圆形转变为梭形,同时CK表达减弱,α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达增强。SB 203580阻断p38MAPK通路后可显著抑制IL-1β诱导的细胞形态改变,同时上调CK表达,下调α-SMA及p-p38MAPK的表达。大黄素对IL-1β诱导的细胞形态改变及α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达也有明显抑制作用,其抑制作用与SB 203580的阻断作用相比无显著性差异。结论p38MAPK参与介导IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化过程,大黄素可通过干扰p38MAPK信号通路抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

银杏蜜环口服溶液作用p38 MAPK调节eNOS/NO信号途径保护人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤

目的:评估银杏蜜环口服溶液对缺氧复氧损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用;从p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)/一氧化氮(NO)信号途径探讨银杏蜜环口服溶液保护受损HUVECs的药效机制。方法:缺氧缺糖/复氧复糖法建立体外HUVECs缺血再灌注损伤模型。分为正常组、模型组、银杏蜜环口服溶液高质量浓度组(75 mg·L-1,简称银蜜高),低质量浓度组(36 mg·L-1,简称银蜜低),p38 MAPK抑制剂SB203580组,银蜜高+SB203580组,e NOS抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)组,银蜜高+L-NAME组。细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)及微量酶标法检测细胞活力及细胞损伤;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)/p38 MAPK和磷酸化e NOS(p-e NOS)/e NOS蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),可溶性细胞间黏附分子-1(s ICAM-1),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)含量;硝酸盐还原酶法检测NO含量。结果:银蜜高、银蜜低组可显著提高缺氧复氧损伤HUVECs活力、降低细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量(P0.05,P0.01);抑制受损细胞p38的磷酸化(P0.05),降低细胞培养上清中TNF-α,s ICAM-1含量(P0.05,P0.01)。在给予银蜜高或(和)SB203580后,受抑制的e NOS磷酸化表达水平显著升高(P0.05);银蜜高可显著提高受损细胞NO含量,在加入e NOS抑制剂L-NAME后,银蜜高可拮抗L-NAME降低细胞NO生成和升高Caspase-3的作用(P0.05)。结论:银杏蜜环口服溶液可提高氧复氧损伤HUVEs活力,具有抗炎、调节内皮系统、抑制细胞凋亡的作用,机制与其作用于p38 MAPK进而调节e NOS-NO信号途径相关。     

基于Hippo-YAP信号通路探讨黄芩苷干预膝骨关节炎大鼠的疗效和作用机制

目的:探讨黄芩苷干预膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)大鼠的疗效和作用机制。方法:将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷联合抑制剂组,每组10只。将假手术组以外的大鼠采用切断前交叉韧带和切除内侧半月板的方法建立右膝关节KOA模型,假手术组大鼠于右膝关节内侧做一切口后缝合。造模成功后,低剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组大鼠分别按照50 mg·kg^-1、100 mg·kg^-1的剂量给予黄芩苷生理盐水溶液灌胃;高剂量黄芩苷联合抑制剂组大鼠按照100 mg·kg^-1的剂量给予黄芩苷生理盐水溶液灌胃,并按照1 mg·kg^-1的剂量给予XMU-MP-1溶液腹腔注射;假手术组和模型组大鼠均给予等量生理盐水灌胃。每天给药1次,连续给药30 d。分别于给药前、给药15 d时、给药30 d时测量大鼠双侧膝关节肿胀程度。给药结束后处死大鼠,取大鼠右侧膝关节软骨组织,采用苏木精-伊红染色和番红O-固绿染色观察膝关节软骨组织病理变化,采用Mankin评分标准...     

基于PI3K/Akt信号通路探讨温肾助阳调周法对肾阳虚证PCOS患者性激素、胰岛素及排卵的影响

目的:探讨肾阳虚证多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜组织中胰岛素的磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路中Akt的表达及其活化程度,并分析温肾助阳调周法对PCOS患者性激素、胰岛素及排卵的影响。方法:选取贵州中医药大学第一附属医院2017年2月至2018年7月收治的60例肾阳虚证PCOS患者,按随机数字表法分为两组,各30例。对照组采取口服炔雌醇环丙孕酮片治疗,观察组在对照组的基础上给予温肾助阳调周法治疗,两组均治疗3个月后随访。测定所有患者的性激素水平、空腹血糖及胰岛素水平,采用稳态模型评估法计算的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),运用蛋白免疫印迹法检测子宫内膜组织中Akt,p-Akt蛋白的表达水平。观察两组治疗前后性激素、胰岛素及排卵的情况。结果:与本组治疗前比较,治疗后两组卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)水平均下降,雌二醇(E2)性激素水平上升(P<0.05),观察组治疗后FSH,LH水平均低于对照组,E2性激素水平高于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组FPG,FINS均明显降低(P<0.05),观察组治疗后FPG,FINS水平明显低于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组患者的HOMA-IR及血清脂联素均有明显下降(P<0.05),观察组治疗后HOMA-IR及血清脂联素明显低于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组卵巢体积、窦卵细胞数目均明显降低,子宫内膜厚度增加(P<0.05),观察组治疗后卵巢体积、窦卵细胞数目明显低于对照组,子宫内膜厚度明显大于对照组(P<0.05);与本组治疗前比较,治疗后观察组与对照组子宫内膜Akt和p-Akt蛋白明显降低,观察组治疗后子宫内膜Akt和p-Akt明显低于对照组(P<0.05)。结论:采用温肾助阳调周法可有效的改善肾阳虚证PCOS患者性激素水平,调控胰岛素,促进卵巢功能恢复,这可能与阻断Akt磷酸化,抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。     

三黄泻心汤抑制危险脂肪因子7-keto诱导血管内皮NLRP3活化引起的功能紊乱的机制分析

目的:研究三黄泻心汤(SHXXT)能否通过抑制7-酮基胆固醇(7-keto)诱导的血管内皮细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)活化恢复内皮功能。方法:培养小鼠主动脉血管环组织,实验组分为正常组,模型7-keto组,三黄泻心汤含药血清1%,2%,5%不同浓度给药组,观察小鼠血管舒张功能;培养微血管内皮细胞,按照上述实验分组,另设置NLRP3抑制剂异甘草素(ISO),通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内皮一氧化氮合酶(e NOS),NLRP3,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1),白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达量的变化,除此之外,利用一氧化氮(NO)定量试剂盒检测NO的浓度。结果:与正常组比较,模型组显著降低血管环内皮依赖性舒张功能(P<0.01),给药组明显恢复内皮依赖性血管舒张功能,且成浓度依赖性(P<0.05,P<0.01);同时研究显示,与正常组比较,模型组微血管内皮细胞e NOS蛋白表达明显降低(P<0.05),NLRP3,Caspase-1,IL-1β蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),NO浓度显著降低(P<0.01);与模型组比较,给予三黄泻心汤血清治疗后,明显升高e NOS蛋白表达和NO浓度,明显降低NLRP3,Caspase-1,IL-1β蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:三黄泻心汤能改善7-keto引起的内皮依赖性血管功能损伤,且是通过抑制内皮NLRP3炎症小体活化介导的NO信号通路实现的。     

细胞焦亡与溃疡性结肠炎及中医药调控的研究进展

细胞焦亡是不同于细胞坏死、凋亡、自噬的细胞程序性死亡的一种新形式,表现为细胞不断肿胀直至胞膜破裂,导致细胞内容物的释放进而激活强烈的炎症反应。细胞焦亡信号通路分为依赖于半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的经典途径和依赖于半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-4,5,11(Caspase-4,5,11)的非经典途径,其中经典途径中Caspase-1的激活依赖于炎性小体发挥作用,非经典途径则是直接激活Caspase-4,5,11,最终导致gasdermin D(GSDMD)蛋白裂解,诱导膜孔隙的形成,白细胞介素-1β(IL-1β),IL-18成熟及释放,细胞膜破裂而发生焦亡。溃疡性结肠炎是一种消化系统常见的疑难病,具有病程长、易复发、难治愈等特点。目前其发病机制尚未完全清楚,但近年研究发现细胞焦亡对溃疡性结肠炎的发生发展有重要作用。中医药防治该病由来已久,临床疗效显著,研究发现中药防治该病的作用机制与炎症小体、焦亡产物IL-1β,IL-18等关系密切,中医药调控溃疡性结肠的分子机制与细胞焦亡存在一定相关性。故本文就细胞焦亡与溃疡性结肠炎之间关系及中医药的调控作用进行综述。     

基于TXNIP/NLRP3/GSDMD信号通路探讨当归补血汤对糖尿病肾病大鼠足细胞焦亡的影响

目的:观察当归补血汤对糖尿病肾病(DKD)大鼠足细胞焦亡的影响,探讨其防治DKD及足细胞焦亡的可能作用机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为造模组42只和正常组8只,造模组大鼠高糖高脂饮食6周结合链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg^-1一次性腹腔注射制备2型糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组、当归补血汤低剂量(0.72 g·kg^-1)组、当归补血汤高剂量(1.44 g·kg^-1)组、厄贝沙坦(0.017 g·kg^-1)组进行灌胃,正常组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续干预20周。给药期间定期检测各组大鼠空腹血糖(FBG),24 h尿蛋白(24 h-UTP);给药结束后采用过碘酸六胺银(PASM)染色观察肾组织病理形态学变化;透射电镜(TEM)观察足细胞超微结构变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18)水平;原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠肾组织细胞DNA损伤情况;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾组织硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1),消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平;免疫荧光(IF)三标法检测核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)及肿瘤蛋白-1(WT-1)在足细胞的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路蛋白及足细胞突触足蛋白(Synaptopodin)表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,24 h-UTP显著升高,肾小球肥大,系膜增生,系膜外基质增加,基底膜增厚,出现K-W结节,肾小管上皮细胞空泡变性,足突融合或丢失,血清中IL-1β,IL-18含量明显升高,肾组织TUNEL阳性细胞明显增多,NLRP3在足细胞表达增多且WT-1在足细胞表达减少,Synaptopodin蛋白表达水平显著降低,TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,当归补血汤高剂量组明显降低FBG,24 h-UTP水平,明显改善肾组织病理学,改善足细胞的损伤和丢失,减少肾组织TUNEL阳性细胞数,NLRP3在足细胞表达减少且WT-1在足细胞表达增多,升高Synaptopodin蛋白表达水平,降低TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:当归补血汤可能通过调控TXNIP/NLRP3/GSDMD信号通路,抑制足细胞焦亡以减少蛋白尿,从而延缓DKD的发展进程。     

敦煌平胃丸及其拆方对SCG-7901胃癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及对PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:研究敦煌平胃丸及其拆方对胃癌荷瘤小鼠的抑瘤作用,并从磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路研究敦煌平胃丸及其拆方可能的作用机制。方法:建立SCG-7901胃癌皮下荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,敦煌平胃丸组(14.04 g·kg^-1·d^-1),活血解毒组(6.50 g·kg^-1·d^-1),温中散寒组(3.64 g·kg^-1·d^-1)和顺铂组(2 mg·kg^-1·d^-1),每组8只。接种第8天开始给药,连续10 d,隔日小鼠称体质量并观察一般情况;末次给药后次日处死小鼠,剥取肿瘤称质量,计算抑瘤率;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织病理学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和免疫组化法(IHC)分别检测肿瘤组织中PI3K,Akt,mTOR mRNA和蛋白表达情况。结果:接种第10天开始,顺铂组小鼠一般情况较差,体质量下降,模型、敦煌平胃丸、活血解毒和温中散寒组小鼠一般情况尚可,体质量增长,组间差异无统计学意义;敦煌平胃丸、活血解毒、温中散寒和顺铂组抑瘤率分别为30.74%,24.80%,4.19%和63.84%,除温中散寒组外,其余给药组瘤质量均较模型组显著降低(P<0.01),其中敦煌平胃丸与活血解毒组间差异无统计学意义;敦煌平胃丸和活血解毒组能明显降低肿瘤细胞密度,引起肿瘤细胞坏死;与模型组比较,敦煌平胃丸、活血解毒和顺铂组PI3K,Akt,mTOR mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05,P<0.01),其中敦煌平胃丸与活血解毒组差异无统计学意义。结论:敦煌平胃丸及其拆方(活血解毒方)对SCG-7901胃癌荷瘤小鼠具有一定的抑瘤作用,其机制可能与下调PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子表达有关。     

茵栀黄注射液基于FXR调控MDR3治疗肝内胆汁淤积的作用机制

目的:通过研究茵栀黄注射液(Yinzhihuang injection,YZH)对人正常肝细胞系HL-7702细胞的法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR),多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance associated protein 3,MDR3)基因表达的影响,探讨茵栀黄注射液调控肝脏胆汁酸代谢的作用靶点及机制,为茵栀黄注射液治疗肝内胆汁淤积的临床应用提供实验依据。方法:不同浓度茵栀黄注射液干预HL-7702,采用细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)探索茵栀黄注射液对HL-7702的活性影响,结合实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法确定茵栀黄注射液的理想干预浓度和时间;用GW4064(FXR激动剂)促进FXR基因的表达,分为茵栀黄注射液组,GW4064组,GW4064+茵栀黄注射液组,正常组,DMSO组;小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默FXR基因,分为siRNA组,siRNA+茵栀黄注射液组,正常组,阴性组。Real-time PCR法、蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测FXR,MDR3 mRNA及蛋白质的相对表达量,免疫荧光(IF)检测FXR蛋白的表达。结果:研究结果表明茵栀黄注射液对HL-7702的理想干预浓度1.08%,理想干预时间为15.47 h;茵栀黄注射液对HL-7702活性影响呈剂量依赖性;与正常组比较,GW4064组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与正常组比较,siRNA组抑制FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与GW4064组比较,GW4064组+茵栀黄注射液组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与siRNA组比较,siRNA+茵栀黄注射液组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01)。结论:茵栀黄注射液促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达,茵栀黄注射液通过FXR促进MDR3 mRNA和蛋白的表达来调控肝脏胆汁酸的代谢,本实验为其临床应用于治疗肝内胆汁淤积提供实验依据。     

美洲商陆抗病毒蛋白及其在艾滋病治疗中的应用

美洲商陆抗病毒蛋白是一种天然的广谱抗病毒试剂，其抗HIV活性，已引起国内外学者的广泛兴趣和重视。旨在综述美洲商陆抗病毒蛋白的结构、核糖体失活活性、抗病毒活性及其在艾滋病治疗中的应用，并展望其在临床上的应用前景。     

车前子水煎液对痛风性肾病大鼠的肾保护作用及机制

目的:观察车前子水煎液对痛风性肾病大鼠的药效学指标及对肾组织半胱氨酸蛋白酶-1(cysteine-aspartic acid protease-1,Caspase-1),Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)和凋亡相关点样蛋白(fapoptosis-associated specklike protein,ASC)表达的影响,探讨车前子水煎液对痛风性肾病大鼠的肾保护作用和初步机制。方法:60只SD大鼠随机分为6组,分别为正常组,模型组,阳性药组(别嘌醇,50 mg·kg~(-1)),车前子水煎液高、中、低剂量组(1.62,0.81,0.27 g·kg~(-1)),除正常组外,其余各组采用腺嘌呤和酵母联用的方法制作痛风性肾病大鼠模型,给予车前子水煎液,观察肾脏特征;计算肾重指数;检测大鼠血清中尿酸(uric acid,UA),尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),肌酐(creatinine,SCr),丙氨酸氨基转移酶(cereal third transaminase,ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST),碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP);采用光镜观察肾脏病理形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western bolt)和免疫组化法(immunohistochemical methods)测定肾组织中NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达量。结果:与模型组比较,别嘌醇组和车前子水煎液各剂量组的肾脏体积减小,别嘌醇组和车前子中剂量组肾重指数降低,车前子高剂量组肾重指数降低明显,别嘌醇组和车前子水煎液各剂量组血清UA,BUN,SCr,ALT,AST,ALP明显降低(P0.05,P0.01),肾组织病变程度均有一定减轻,其中车前子高、中剂量组最好,别嘌醇组和车前子水煎液高剂量组中NLRP3,ASC和Caspase-1蛋白的表达明显降低(P0.05,P0.01),车前子水煎液中剂量组中NLRP3蛋白的表达降低(P0.05)。结论:车前子对痛风性肾病大鼠具有较好肾保护作用,可能与其下调肾组织中NLRP3,ASC和Caspase-1蛋白表达,抑制下游炎性细胞因子释放有关。     

白及多糖对GU模型大鼠胃组织PI3K/Akt的影响

目的:探讨白及多糖对胃溃疡(GU)模型大鼠胃组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt) m RNA及蛋白,以及其介导细胞因子白细胞介素-2受体(IL-2R),白细胞介素-4(IL-4)表达水平的影响。方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,模型组大鼠采用乙酸直接烧灼法复制GU模型,将GU模型大鼠按随机数字表法分为模型组、盐酸雷尼替丁组和白及多糖高、中、低剂量组共5组,每组10只。空白组和GU模型组大鼠给予10 m L·kg~(-1)·d~(-1)蒸馏水灌胃,白及多糖高、中、低剂量组分别予0. 5,0. 25,0. 125 g·kg~(-1)·d~(-1)白及多糖灌胃,盐酸雷尼替丁组给予0. 3 g·kg~(-1)·d~(-1)盐酸雷尼替丁灌胃,治疗15 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠血清一氧化氮(NO)含量及胃组织胃蛋白酶活性及细胞因子IL-2R,IL-4含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测胃溃疡病灶组织PI3K及Akt m RNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃溃疡病灶组织PI3K及Akt蛋白表达水平。结果:与空白组比较,胃组织细胞因子IL-2R,IL-4含量及m RNA表达显著升高,PI3K,Akt m RNA及蛋白表达水平显著升高(P 0. 01);与GU模型组比较,白及多糖高、中、低剂量组IL-2R,IL-4含量及m RNA表达均降低,以白及多糖高剂量组降低显著,PI3K,Akt m RNA及蛋白表达水平均降低,以白及多糖高、中剂量组降低显著(P 0. 05,P 0. 01)。结论:白及多糖可通过下调PI3K及Akt m RNA和蛋白表达水平,抑制细胞因子IL-2R及IL-4异常分泌而发挥保护胃黏膜的作用。     

清燥救肺汤对肺癌JAK2/STAT3信号通路及其下游凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察清燥救肺汤对肺癌细胞凋亡和Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路及其下游凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠50只,随机分为环磷酰胺(CTX)组,模型组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,共5组,每组10只。在小鼠右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组分别以清燥救肺汤11,5.5,2.75 g·kg^-1·d^-1,造模前2周开始灌胃给药,CTX组以CTX 50 mg·kg^-1·(2 d)-1腹腔注射给药,模型组以等体积的生理盐水灌胃给药,接种后继续给药,2周后处死各组小鼠并取瘤组织;免疫组化法(IHC)检测肺癌组织JAK2蛋白磷酸化水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测STAT3,Bax,Cyclin D1的表达;透射电镜(TEM)观察肺癌细胞的凋亡情况。结果:与模型组比较,清燥救肺汤高、中剂量组,CTX组肺癌细胞JAK2,STAT3蛋白磷酸化水平明显降低,Bax蛋白表达明显升高,Cyclin D1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。透射电镜结果显示,与模型组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组和CTX组均出现显著的凋亡现象。结论:清燥救肺汤能明显促进肺癌细胞凋亡,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路,上调其下游Bax蛋白表达,下调其下游Cyclin D1蛋白表达有关。