RNA干扰沉默CXCR4基因对胃癌细胞SGC7901增殖和侵袭力的影响

目的探讨特异性抑制胃癌细胞SGC7901中趋化因子受体4(CXCR4)的表达及RNA干扰对胃癌细胞SGC7901细胞增殖及侵袭力的影响。方法将腺病毒载体CXCR4-shRNA转染至胃癌细胞SGC7901,RT-PCR检测转染后CXCR4 mRNA的表达量;MTT法检测癌细胞增殖情况;Transwell小室侵袭实验对胃癌细胞侵袭力进行检测。结果 (1)成功将CXCR4-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901;(2)空白组与对照组细胞增殖迅速,两组之间无显著性差异(P>0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比有显著性差异(P<0.05);(3)shRNA-CXCR4腺病毒载体和空白组及对照组相比能显著抑制SGC7901细胞的侵袭力(P<0.05),抑制率为57.01%。空白组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论重组腺病毒载体CXCR4-shRNA能有效抑制胃癌细胞SGC7901的侵袭,并在一定程度上抑制癌细胞增殖。     

长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码(lnc)RNA核仁小分子RNA宿主基因(SNHG)1在胃癌中的表达水平及其对胃癌细胞增殖和侵袭过程的影响。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG1在胃癌细胞SGC7901、BGC823和正常胃上皮细胞NGEC中的表达水平及采用SUHG1的小干扰RNA(si-SNHG1)干扰后SNHG1的表达水平;噻唑蓝(MTT)法检测沉默SNHG1对SGC7901、BGC823细胞增殖的影响,Transwell小室检测沉默SNHG1对SGC7901、BGC823细胞侵袭能力的影响。Western印迹法检测沉默SNHG1前后增殖标志物Ki67和侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9在SGC7901、BGC823中的表达变化。结果 SNHG1在胃癌细胞株中的表达显著高于正常胃上皮细胞株(P0.05);沉默SNHG1能显著抑制Ki67、MMP-2、MMP-9的表达。结论 lncRNA SNHG1在胃癌细胞中高表达,沉默SNHG1对胃癌细胞的增殖、侵袭起抑制作用,SNHG1可能成为治疗胃癌的一个有效靶点。     

RNA干扰沉默Twist基因对人胃癌细胞系SGC7901细胞增殖能力的影响

目的 探讨Twist基因沉默后对人胃癌SGC7901细胞增殖能力的影响.方法 利用脂质体转染法将携带有Twist干扰片段的pGenesil/Twist载体导入人胃癌SGC7901细胞,G418筛选阳性克隆,经RT-PCR,Western印迹法检测干扰效果.通过绘制生长曲线、流式细胞术检测细胞周期等反映Twist对SGC7901细胞增殖能力的影响.结果 生长曲线结果显示Twist基因沉默组细胞生长速度较两对照组缓慢.细胞周期结果显示Twist基因沉默组S期细胞数明显较对照组减少,增殖能力下降.结论 Twist基因沉默后可抑制SGC7901细胞的分裂增殖,可能成为临床胃癌基因治疗的新靶点.     

Med19基因沉默对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 研究Med19基因在胃癌MGC-803细胞中沉默后对细胞增殖和周期的影响.方法 应用shRNA慢病毒载体感染胃癌MGC-803细胞沉默Med19基因,通过MTT和克隆形成实验观察Med19基因在胃癌细胞增殖中的作用,并用流式细胞术验证抑制Med19基因对细胞周期的影响.结果 构建的shRNA慢病毒载体感染MGC-803细胞后细胞增殖能力显著降低、细胞克隆形成能力明显减弱,同时,细胞周期阻滞于G1期.结论 Med19基因沉默后胃癌细胞的增殖能力和细胞周期均受到显著影响,提示Med19在肿瘤形成过程中具有重要作用.     

RNA干扰沉默survivin基因对人肺癌细胞侵袭和Akt信号通路的影响

目的 探讨survivin基因小干扰RNA(siRNA)对肺癌细胞A549侵袭和Akt信号通路的影响.方法 应用survivin siRNA转染处理人肺癌细胞系A549后,采用实时定量PCR和Western印迹检测survivin基因mRNA和蛋白水平,采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭能力,采用Western印迹检测Akt磷酸化水平.结果 与对照组比较,转染组survivin基因mRNA和蛋白水平下调.Western印迹检测结果显示,转染组Akt磷酸化水平受到明显抑制.结论 survivin siRNA可抑制人肺癌细胞侵袭,抑制Akt磷酸化水平是其机制之一.     

干扰RNA靶向抑制埃兹蛋白对胃癌细胞增殖的影响

目的探讨埃兹蛋白(ezrin)对胃癌细胞生长和侵袭转移能力的影响。方法选取胃癌细胞系(AGS)作为研究材料,构建ezrin干扰载体,脂质体转染下调ezrin的表达,分别通过RT-PCR和Western blot法检测阻抑效应。以噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖。结果RT-PCR和Western blot结果显示,脂质体转染对ezrin mRNA和蛋白表达水平均有显著下调作用。下调ezrin蛋白后,AGS细胞的增殖受到显著抑制,与干扰前比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论ezrin在胃癌生长过程中发挥重要作用,有可能成为抑制胃癌发生发展的新靶点。     

槲皮素对胃癌细胞增殖及侵袭的调控作用及机制

目的探讨抗肿瘤药物槲皮素对胃癌细胞增殖及侵袭能力的调控作用及其可能的分子机制。方法以不同浓度的槲皮素处理胃癌细胞SGC-7901,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察胃癌细胞增殖情况,采用Transwell小室法观察胃癌细胞的侵袭情况,并用Western印迹法检测胃癌细胞相关蛋白Caveolin(Cav)-1的表达情况。结果槲皮素不同浓度组胃癌细胞的增殖抑制率和侵袭细胞数量及Cav-1蛋白的表达均显著低于对照组(均P<0.05),且胃癌细胞的增殖、侵袭能力和Cav-1的表达情况均与槲皮素的浓度呈现依赖性(均P<0.05)。结论槲皮素对胃癌细胞的增殖及侵袭有一定的抑制作用,其机制可能与Cav-1表达下降有关。     

槲寄生多糖调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

背景胃癌(gastric cancer, GC)是严重危害人体健康的恶性肿瘤,其发病率和死亡率分别占世界恶性肿瘤的第5位和第3位.中医药治疗能够减轻患者病痛,改善术后复发,槲寄生多糖(viscum coloratum polysaccharide,VCP)是槲寄生抗肿瘤的主要活性成分之一,能够抑制癌细胞增殖并诱导凋亡.目的观察VCP对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响并探讨其潜在作用机制.方法以不同浓度(20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL)VCP干预SGC-7901人GC细胞48h,MTT法检测细胞活力.以100μg/mLVCP干预SGC-7901细胞, Western blot、Transwell小室分别检测细胞中周期蛋白依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent proteinkinases4,CDK4)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)和核转录因子κB p65蛋白表达及细胞迁移和侵袭能力变化.结果不同浓度VCP均可抑制SGC-7901细胞活力(P0.05),呈浓度依赖性. Western blot和Transwell实验结果表明:与对照组相比, 100μg/mLVCP处理的SGC-7901细胞中CDK4、MMP-2、MMP-9、核转录因子-κB(nuclearfactorkappabeta,NF-κB)p65蛋白表达下调(P 0.05),同时视野内迁移和侵袭细胞数明显减少(P 0.05).结论 VCP对SGC-7901人GC细胞增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,其机制可能与NF-κB信号通路及CDK4、MMP-2和MMP-9蛋白有关.     

慢病毒介导的ADAM8基因沉默对胃癌MKN45细胞EMT、侵袭和迁移的影响

目的 研究慢病毒介导的解整合素和金属蛋白酶(ADAM)8基因沉默对人胃癌MKN45细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响.方法 采用慢病毒转染技术沉默MKN45细胞中ADAM8基因,构建稳定沉默ADAM8的MKN45细胞株,转染空载作为阴性对照组(sh-NC组),转染ADAM8 shRNA为实验组(sh-AD...     

小干扰RNA SOX5对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

[目的]探讨Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5(SOX5)的小干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞BGC823增殖及凋亡的影响。[方法]通过qRT-PCR和Western-blot分别检测胃癌细胞系(SGC7901,BGC823,AGS,HGC27)及正常胃上皮细胞GES-1中SOX5 mRNA和蛋白的表达情况;取对数生长周期的胃癌细胞BGC823,通过Lipofiectamine2000将设计合成的SOX5的特异性siRNA以及NC转染BGC823细胞,作为siSOX5组和NC组,不做任何处理的细胞作为空白对照组。qRT-PCR检测各组细胞中SOX5 mRNA的表达情况;Western-blot检测各组SOX5及CyclinD1、P21、Bax、Bcl-2蛋白的表达;MTT检测转染12 h、24 h、48 h、72 h后,各组细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染72 h后各组细胞的凋亡情况。[结果]与正常胃上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC7901,BGC823,AGS,HGC27中SOX5 mRNA和蛋白表达升高(P0.05);转染siSOX5后,siSOX5组SOX5 mRNA及蛋白表达降低(P0.05);MTT结果显示:与空白对照组和NC组相比,siSOX5组细胞增殖受到抑制,且CyclinD1蛋白表达水平显著下降,p21蛋白表达显著升高(P0.05);流式细胞检测结果显示:与空白对照组和NC组相比,siSOX5组细胞凋亡率升高,且Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P0.05)。[结论]干扰SOX5能够降低胃癌BGC823细胞中SOX5的表达,抑制BGC823细胞的增殖并促进凋亡。     

RNA干扰Cdx2基因沉默对人胃癌裸鼠耐药模型Survivin和C-myc表达的影响

目的观察携带人尾型同源盒转录因子2（Cdx2）基因沉默的重组慢病毒颗粒（Cdx2-RNAi-LV）对人胃癌耐顺铂细胞SGC-7901／DDP裸鼠皮下移植瘤中Survivin和C—myc表达的影响。方法建立人胃癌耐顺铂细胞SGC-7901／DDP裸鼠皮下移植瘤模型,36只裸鼠随机分成3组（n=12）：PBS组、LV-RNAi组、Cdx2．RNAi-LV组;各组瘤体内分别注射磷酸盐缓冲液、慢病毒颗粒（0．5×10^8TU／m1）、含Cdx2基因重组慢病毒颗粒（0．5×10^8TU／m1）相应药物100μl,1次／3d,共6次;同时所有裸鼠腹腔注射药物顺铂（25mg／kg）,隔天1次,共10次;注射Cdx2-RNAi-LV病毒颗粒第20天后脱颈椎法处死裸鼠,完整切取肿瘤组织,并应用PT-PCR和Westernblot技术检测移植瘤中Survivin和C．myc基因的表达。结果Cdx2．RNAi．LV组、LV．RNAi组和PBS组的细胞均有Survivin、C—myc的mRNA和蛋白的表达,但各组细胞对应的Survivin、C—myc的mRNA和蛋白的表达水平有差别;Cdx2-RNAi—LV组Survivin、C．myc的mRNA和蛋白的表达量较PBS组和LV．RNAi组明显下调（P〈0．05）,而PBS组和LV—RNAi组比较差异元统计学意义（P〉0．05）。结论Cdx2基因沉默重组慢病毒颗粒瘤内注射下调人胃癌耐顺铂细胞裸鼠移植瘤Survivin和C-myc表达,可能是Cdx2基因沉默逆转肿瘤的耐药性机制之一。     

RNA干扰沉默HDAC1基因对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的: 研究下调HDAC1的表达对大肠癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响. 方法: 设计合成HDAC1的特异性shRNA, 将其插入至pSilencer载体中, 并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染SW480细胞株. 用RT-PCR和Western blot检测shRNA对细胞内HDAC1基因表达的影响, 同时采用Western blot对细胞周期相关基因进行检测. 采用MTT法检测生长抑制作用. 运用流式细胞术检测细胞的凋亡情况和细胞周期分布. 结果: 成功构建和筛选出HDAC1特异性的shRNA质粒载体, 与空白对照组相比, 转染HDAC1-shRNA的大肠癌细胞HDAC1 mRNA蛋白质表达水平明显下降(30.4%±4.5% vs 64.6%±4.4%, P<0.01; 27.4%±4.5% vs 58.1%±3.3%, P<0.01), p21(/WAF-1/CIP-1)表达增加(97.4%±2.6% vs 62.6%±3.4%, P<0.01), CdK2和Cyclin E蛋白下降(CdK2: 27.7%±6.0% vs 42.6%±4.1%, P<0.01; Cyclin E: 42.0%±8.5% vs 82.8%±3.7%, P<0.01), 细胞生长抑制率增加(24 h: 35.9%±4.9% vs 1.2%±0.6%, P<0.01; 48 h: 47.5%±7.0% vs 1.3%±0.6%, P<0.01; 72 h: 45.7%±6.2% vs 1.0%±0.5%, P<0.01; 96 h: 48.2%±4.7% vs 1.2%±0.7%, P<0.01), 凋亡率明显增加(31.3%±2.8% vs 3.9%±0.7%, P<0.01), G0/G1期和G2/M期细胞比例增加(G0/G1: 64.5%±0.9% vs 57.8%±1.8%, P<0.01; G2/M: 17.4%±1.3% vs 14.5%±0.6%, P<0.05), S期细胞比例相应下降(17.5%±1.0% vs 27.7%±1.5%, P<0.01). 结论: HDAC1特异的shRNA能够有效下调HDAC1基因, 诱导大肠癌细胞发生凋亡和细胞周期阻滞, 从而抑制细胞的增殖.     

体外RNA干扰抑制RegⅣ基因表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:拟探讨RegⅣ基因在胃癌细胞中的表达及干扰该基因对胃癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:应用实时定量PCR方法检测九株胃癌细胞株中RegⅣ基因的mRNA表达. 针对RegⅣ基因设计三条小干扰RNA片段(siRNA1、siRNA2、siRNA3), 瞬时转染高表达胃癌细胞株, 实时定量PCR方法检测转染后RegⅣ基因的mRNA的表达水平, CCK-8法检测细胞增殖能力, 流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:以永生化正常胃黏膜细胞株GES-1作为参照, 除MKN-45和SNU-1胃癌细胞株外, 其余胃癌细胞株中RegⅣ表达水平均升高5倍以上, 尤以SNU-16细胞株明显, 其RegⅣ的表达水平高出GES-1细胞数千倍, 遂选用SNU-16细胞进行RNA干扰. 合成的三对siRNA对RegⅣ基因表达均有明显抑制作用, 抑制率分别为79.3%、77.4%和60.4%. 选用siRNA1干扰SNU-16细胞株后96 h和120 h, 其细胞增殖率受到明显抑制( P = 0.0057, 0.0173). 流式细胞仪检测显示72 h细胞凋亡率明显增加( P =0.0231).结论:干扰RegⅣ基因具有抑制胃癌细胞增殖,促进凋亡的作用, RegⅣ基因可能成为胃癌基因靶向治疗的分子靶点.     

RNA干扰沉默HIF-1α基因对舌癌Tca8113细胞侵袭和迁移的影响

目的 观察RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α （HIF-1α）基因对人舌癌细胞Tca8113侵袭和迁移的影响.方法 将3个shRNA序列质粒导入pGCsi-H1/Hygro/GFPshRNA质粒表达载体,并将重组质粒经脂质体介导转染人舌癌细胞Tca8113（siHIF-1α组）,转染阴性对照质粒的细胞作为空载组.半定量RT-PCR及Western blot法检测HIF-1α的mRNA及蛋白,细胞侵袭实验和划痕实验检测Tca8113的侵袭和迁移能力,同时采用Western blot法检测其上皮-间质转化（EMT）相关标志蛋白和黏着斑激酶（FAK）、磷酸化FAK（P-FAK）.结果 测序证实成功构建了HIF-1α shRNA重组质粒（分别为sh1、sh2、sh3）,将sh3,转染Tca8113后进行低氧培养,HIF-1α基因表达显著被抑制.与空载组相比,转染sh3的siHIF-1α组穿透Matrigel胶的细胞数明显减少,且迁移能力也显著下降,两组相比,P均＜0.05.与对照组（未转染质粒的Tca8113）相比,siHIF-1α组EMT相关标志蛋白和p-FAK蛋白表达下降,两组相比,P均＜0.05.结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因能有效抑制舌癌细胞的侵袭和迁移,在一定程度上可以逆转舌癌细胞的恶性表型.     

抑制TUBB3基因表达对胃癌细胞增殖 、凋亡 、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的探讨抑制3型β微管蛋白(TUBB3)基因的表达对人胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法将TUBB3 siRNA和阴性对照分别转染人胃癌SGC-7901细胞,记为TUBB3 siRNA组和阴性对照组(NC组),将未行转染的细胞记为Control组,转染48 h后,通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达水平。结果与NC组相比,TUBB3 siRNA组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,PNCA和MMP-2蛋白表达明显下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。Control组与NC组细胞的上述各指标的差异均无统计学意义(P均0.05)。结论抑制TUBB3基因表达能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其作用机制与调控细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、MMP-2蛋白表达水平有关。     

重组腺病毒RNA同时干扰3个基因对胃癌细胞增殖的实验研究

目的应用能同时表达3种不同基因（血管内皮生长因子VEGF、人端粒酶逆转录酶hTERT、抗凋亡基因bcl-x1）的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）的重组腺病毒对胃癌细胞系（BGC-823）进行RNA干扰,观察重组腺病毒对胃癌细胞增殖活性及细胞周期的影响。方法构建能同时表达3种不同的的重组腺病毒Ad—shVEGF—shTERT—sh bcl—x1,同时构建单独表达上述3个基因的重组腺病毒,将上述4种重组腺病毒同时感染BGC-823,MTF法检测BGC-823细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,蛋白印迹检测目的蛋白的表达。结果重组腺病毒感染胃癌细胞后,3个目的基因的蛋白表达显著下调,细胞增殖明显受抑制,大量细胞凋亡。表达3个基因的重组腺病毒生长增殖抑制作用强于表达单个基因的重组腺病毒。结论相对于单独沉默1个基因,同时沉默3种不同基因,对胃癌细胞的生长抑制作用更强。同时沉默多个基因的表达是胃癌基因治疗研究的一个新的有效途径。     

RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖侵袭及STAT3信号通路的影响

目的探讨RNA干扰CST1基因表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭及信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 Western blotting法检测人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞及正常结肠NCM460细胞中CST1的蛋白表达。以Lipofectamine~(TM) 2000为载体,将设计合成的CST1的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染HCT116细胞(si-CST1组和NC组),并设置空白对照组。转染48 h,MTT法检测细胞活力,Transwell小室检测穿膜细胞数,Western blotting法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达。结果人结直肠癌SW480、HCT116、Caco2和HT29细胞中CST1蛋白的表达均显著高于正常结肠NCM460细胞(P0.05)。si-CST1组HCT116细胞中CST1蛋白的表达显著低于空白对照组(P0.05)。与NC组比较,si-CST1组细胞活力和侵袭能力显著降低,p-STAT3、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著降低(P0.05)。结论 RNA干扰CST1基因表达可抑制结直肠癌细胞增殖和侵袭,其机制可能与下调STAT3信号通路有关。     

沉默LAIR-1表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭功能的影响

目的探讨白细胞相关免疫球蛋白样受体(LAIR)-1在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法采用RT-PCR方法检测乳腺癌细胞系和组织标本中LAIR-1 mRNA的表达情况。采用电穿孔转染法,将LAIR-1 siRNA转染MCF-7细胞,通过Western印迹检测LAIR-1在MCF-7细胞中的表达情况。通过四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)增殖实验检测LAIR-1对MCF-7细胞增殖的影响。通过伤Boyden小室检测LAIR-1对MCF-7细胞侵袭能力的影响。结果同癌旁组织相比,乳腺癌组织中LAIR-1 mRNA的表达量显著降低(P0.01);且同非转移性乳腺癌组织相比,转移性乳腺癌组织中LAIR-1 mRNA的表达量亦显著降低(P0.01)。转染LAIR-1 siRNA可显著抑制MCF-7细胞中LAIR-1的表达。抑制LAIR-1表达后,MCF-7细胞的增殖和侵袭能力均显著升高(P0.01)。结论 LAIR-1具有抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭的作用,乳腺癌组织中LAIR-1的低表达可能与乳腺癌的发生发展相关。     

miRNA-21调控胃癌细胞增殖及侵袭的机制

目的探讨靶向沉默miRNA-21表达对胃癌细胞增殖及侵袭的影响和机制。方法将人胃癌SGC-7901细胞分为正常对照组、转染siRNA Control的阴性对照组和转染siRNA miRNA-21基因的沉默组,按照Invitrogen公司的脂质体Lipofectamine~(TM)2000方法进行转染,48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达。结果转染siRNA miRNA-21后能显著降低miRNA-21的表达(P<0.01);与正常对照组及转染阴性组比较,沉默组细胞存活率、细胞侵袭数显著降低,MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论靶向沉默miRNA-21表达能显著降低胃癌细胞的增殖及侵袭能力,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的 研究RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞周期和增殖的影响.方法 体外构建Twist基因的shBNA表达载体,Li-pefectamin 2000介导转染膀胱癌T24细胞,采用RT-PCR和Western印迹方法检测特异性shRNA对Twist基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shR-NA对细胞增殖的作用;应用PI单染流式细胞术分析细胞周期的改变.结果 Twist基因的shRNA表达载体有效下调Twist基因表达(P<0.05).与对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时引起细胞G1期阻滞,RNA干扰后,G1期细胞从(48.17±1.62)%增加到(74.34±3.24)%(P<0.05),s期细胞从(33.71±3.54)%减少到(11.58±1.02)%(P<0.05).结论 Twist-shRNA表达载体可以特异高效地抑制膀胱癌T24细胞Twist基因的表达,从而调控肿瘤细胞周期,抑制肿瘤细胞增殖.