基于大鼠体内吸收分布的吴茱萸指标成分选择及测定

目的基于大鼠体内吸收分布情况选择吴茱萸(石虎Euodia rutaecarpa[Juss.]Benth.var.officinalis[Dode]Huang)指标成分,并测定其含有量。方法建立该药材TLC及HPLC色谱图,分析其在大鼠体内吸收分布情况,能被吸收入血的成分确定为指标成分,HPLC-UV法测定其含有量。结果柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱为指标成分,主要分布于肺组织中,其次在肝、脑、脂肪,而尿中较少。TLC与HPLC相比,有着直观、高通量的特点。柠檬苦素在5.5~545.0μg/m L(r0.999 9)、吴茱萸碱在0.6~79.8μg/m L(r0.999 9)、吴茱萸次碱在0.4~46.4μg/m L(r=0.999 9)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为101.6%(RSD=1.05%)、98.1%(RSD=0.99%)和100.5%(RSD=0.72%)。结论该方法具有可行性,能对该药材质量进行评价与控制。     

吴茱萸指纹图谱研究和3种成分的含量测定

目的:建立不同产地和品种吴茱萸药材的高效液相色谱指纹图谱,并同时测定吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素3种主要成分的含量。方法:采用反相高效液相色谱法,Agilent Eclipse C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),乙腈-[四氢呋喃-0.02%磷酸水溶液(13∶65)]梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长220 nm,采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)"处理分析,建立了不同产地和品种吴茱萸药材的HPLC指纹图谱,并同时测定3种主要成分的含量。结果:24批药材的HPLC指纹图谱共标定了15个共有峰,不同产地、不同品种药材指纹图谱相似度差异不大,但3种主要成分含量差异较大。结论:该方法准确可靠,重复性好,指纹图谱结合含量测定可以更好地控制吴茱萸药材的质量。     

高速逆流色谱法分离制备吴茱萸中的柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱

目的:制备柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱化学对照品.方法:采用高速逆流色谱法分离纯化吴茱萸二氯甲烷萃取物,溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5:5:5:5),上相做固定相,下相做流动相,流速2.0mL·min<'-1>,仪器转速855rpm,进样量400mg,所得样品由高效液相色谱法检测纯度.结果:一次分离可制备6.2mg柠檬苦素、10.4mg吴茱萸碱、10.5mg吴茱萸次碱,其纯度分别为96.2%、98.1%和95.4%.结论:该方法操作简单,可作为柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱化学对照品的制备分离方法.     

高速逆流色谱法分离制备吴茱萸中的柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱

目的:制备柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱化学对照品。方法:采用高速逆流色谱法分离纯化吴茱萸二氯甲烷萃取物,溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5∶5∶5∶5),上相做固定相,下相做流动相,流速2.0mL.min-1,仪器转速855rpm,进样量400mg,所得样品由高效液相色谱法检测纯度。结果:一次分离可制备6.2mg柠檬苦素、10.4mg吴茱萸碱、10.5mg吴茱萸次碱,其纯度分别为96.2%、98.1%和95.4%。结论:该方法操作简单,可作为柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱化学对照品的制备分离方法。     

吴茱萸药材HPLC含量测定方法的优化

目的:优化吴茱萸药材HPLC含量测定方法.方法:流动相[乙腈-四氢呋喃(25:15)]-0.02%磷酸水溶液(35:65),流速1 mL·min-1,检测波长220 mm.结果:柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱色谱峰与其它色谱峰分离良好,样品中柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱色谱峰的DAD光谱与对照品基本一致,进样量在0.1968～3.936,0.1536～3.072,0.0974～1.948μg线性关系良好,平均回收率分别为97.8%,100.7%,98.4%,RSD分别为1.7%,1.3%,1.1%(n=6).结论:建立的吴茱萸药材HPLC含量测定方法,测定结果准确,可信.     

基于聚类分析和主成分分析的吴茱萸及制吴茱萸指纹图谱研究

目的 建立吴茱萸生品与炮制品HPLC指纹图谱,通过计算相似度,结合化学模式识别方法,评价吴茱萸和制吴茱萸的质量,探讨炮制前后化学成分的差异,阐释吴茱萸炮制后毒性降低的机制。方法 通过高效液相色谱法建立吴茱萸及制吴茱萸的指纹图谱,运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)和SPSS17.0软件对相应图谱进行相似度评价、聚类分析(cluster analysis,CA)和主成分分析(principal analysis,PCA)。结果 吴茱萸和制吴茱萸的指纹图谱相似度均大于0.985,均含有12个相同的共有峰,指认出了其中的5个。以吴茱萸碱为参照峰,比较各共有峰的相对峰面积,发现吴茱萸炮制后除3号峰外,其余共有峰均有不同程度的下降,以2号峰和10号峰有显著性下降。聚CA结果显示,吴茱萸生品可分为2大类,其中来源于江西的为一类,来源于浙江和湖南的为一类;经PCA分析,前3个主成分因子的累积方差贡献率为87.405%,以2、5(绿原酸)、6(金丝桃苷)、7、8(柠檬苦素)、9(吴茱萸碱)、10(吴茱萸次碱)和12号峰对吴茱萸炮制前后化学成分差异变化的贡献较大。结论 吴茱萸HPLC指纹...     

正交试验法优选疏毛吴茱萸提取工艺

目的优选疏毛吴茱萸的提取工艺。方法以柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱为定量指标成分,采用HPLC法测定,以浸膏得率和指标成分平均提取率为指标,选择乙醇体积分数、提取时间、提取次数和粒度为考察因素,选用L9(34)正交表安排试验。结果疏毛吴茱萸最佳提取工艺为原药材以10倍量80%乙醇回流提取3次,每次1 h。结论优选的疏毛吴茱萸提取工艺合理可行,为实际生产提供参考。     

HPLC法同时测定吴茱萸中吴茱萸苦素和柠檬苦素的含量

目的 :建立吴茱萸中两种柠檬苦素类物质吴茱萸苦素和柠檬苦素含量的同时测定方法。方法 :采用反相高效液相色谱法 ,使用C18柱 ,乙腈 水 (36∶6 4 ,v/v)作为流动相 ,以 1 0ml/min流速洗脱 ,在 2 0 4nm波长下检测。结果 :吴茱萸中吴茱萸苦素和柠檬苦素分别在 4 0 4～ 4 0 4 μg·ml-1(r =0 9998,n =6 )和 3 96～ 39 6 μg·ml-1(r =0 9999,n =6 )范围内线性关系良好 ,加样回收率分别为 99 2 % (RSD 1 4 % )和 98 8% (RSD 1 2 % )。结论 :该方法准确 ,灵敏 ,便捷     

广东乐昌地区栽培吴茱萸质量及其影响因素研究

目的:考察广东乐昌地区栽培吴茱萸药材质量及其影响因素,为该地区规范化种植吴茱萸以及质量评价提供实验依据.方法:采用形态学方法进行品相评价,利用HPLC法测定指标成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素的含量.结果:乐昌产中花吴茱萸果实裂口小,洁净度高.综合评价3种指标成分,乐昌产吴茱萸所含吴茱萸碱、柠檬苦素含量与主产区江西、...     

基于传统煎煮方法的吴茱萸标准汤剂质量标准研究

目的 建立吴茱萸标准汤剂的质量标准。方法 按照传统煎煮方法制备15批吴茱萸标准汤剂,测定其出膏率。采用薄层色谱法以吴茱萸碱、吴茱萸次碱为对照品进行定性鉴别,采用超高效液相色谱法建立柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的含量测定方法,并计算其转移率。结果 15批吴茱萸标准汤剂出膏率均值为27.75%,薄层色谱斑点清晰,吴茱萸碱、吴茱萸次碱的分离度好,比移值适当,可同时鉴别小极性和大极性成分。柠檬苦素、吴茱萸碱、吴茱萸次碱平均转移率分别为26.10%、2.82%、3.76%。结论 建立了吴茱萸标准汤剂的质量标准,测定方法全面、准确,可为吴茱萸配方颗粒和含吴茱萸的中药经典名方标准的制定提供参考。     

吴茱萸水包油微乳巴布剂的体外透皮吸收特性

目的:考察水包油微乳巴布剂与常规巴布剂对吴茱萸脂溶性成分体外释放性能的差异,为巴布剂制备工艺的改进提供参考。方法:按吴茱萸提取物-肉豆蔻酸异丙酯-丙二醇-聚山梨酯80-氢化蓖麻油-水(0.3∶0.6∶3.6∶3.6∶3.6∶18)制备水包油微乳,将微乳添加至巴布剂基质制成水包油微乳巴布剂。采用体外扩散池法测定巴布剂中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的体外透皮累积渗透量。结果:吴茱萸水包油微乳巴布剂中的吴茱萸碱、吴茱萸次碱24 h单位面积累积渗透量分别为常规巴布剂的1.86,1.40倍。结论:采用微乳工艺制备的巴布剂中吴茱萸脂溶性成分的释放性能明显优于传统方法制备的巴布剂,适合中药水难溶性成分巴布剂的制备。     

吴茱萸成分在大鼠肝微粒体对盐酸小檗碱代谢的影响

 目的 研究大鼠肝微粒体温孵系统中盐酸小檗碱代谢动力学以及吴茱萸中多种化学成分对其代谢的影响。方法 采用体外肝微粒体温孵法研究盐酸小檗碱代谢的酶动力学,分别考察了温孵时间、微粒体质量浓度以及底物浓度对盐酸小檗碱代谢速率的影响,并探讨吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对其代谢的影响。结果 盐酸小檗碱在大鼠肝微粒体温孵系统中发生较强的代谢, 其在大鼠肝微粒体中37 ℃温孵0～60 min呈时间依赖的线性消除;当肝微粒体蛋白浓度在0.5～2.0 mg·mL-1,温孵时间为60 min时,盐酸小檗碱代谢速率表现出微粒体蛋白浓度依赖性增快;当底物盐酸小檗碱浓度大于10.0 μg·mL-1时,盐酸小檗碱的代谢速率不再随底物浓度的增加而增加,表现出明显的饱和特性。其表观酶促动力学参数,米氏常数Km为（2.41 ± 0.617) mg·mL-1,最大反应速度V_max为 (6.88±1.89) μg·g-1·min-1。吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯均能显著抑制盐酸小檗碱的代谢,3个组分对盐酸小檗碱的代谢抑制常数K_i分别为 (140.85±16.48), (15.34±3.04)和(25.98±6.47) μmol·L -1,其中吴茱萸次碱和吴茱萸内酯的代谢抑制作用明显强于吴茱萸碱（P＜0.001）。结论 盐酸小檗碱在大鼠肝微粒体内被迅速代谢;吴茱萸中化学成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸内酯对盐酸小檗碱的代谢有抑制作用,此结果有可能对小檗碱体内药动学产生影响。     

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??OBJECTIVE To investigate the in-vitro release behavior of venetoclax preparations, the pharmacokinetic processes and the correlations between in-vitro release and in-vivo absorption of venetoclax in Beagle dogs. METHODS The dissolution curves of venetoclax preparations in different dissolution media were studied. HPLC method was established for the determination of venetoclax in Beagle dogs, and the pharmacokinetics were studied for commercial venetoclax tablets in Beagle dogs under fed and fasted states.The IVIVC study was carried out by linear regression of cumulative in-vitro drug release and in-vivo absorption accumulation percentage data. RESULTS The in-vitro release behavior among venetoclax formulation in 4 dissolution media were significant difference. The simple, accurate and rapid analysis method for venetoclax blood samples was established. The fed group and the fasted group AUC_0???? were (32.38??5.87) and (27.70??6.32) mg??h??L^-1, the concentration of peak were (4.04??0.78) and (3.72 ??0.69) ??g??mL^-1, the peak time were (6.01??1.04) and (4.27??0.92) h, respectively, and there was obvious difference (P<0.05) in AUC_0???? and the peak time between two group. Percentage of in-vivo absorption was in good agreement with in-vitro release in pH 6.8 0.2%SDS media. CONCLUSION The study shows that food could improve the bioavailability of venetoclax formulation; 0.2%SDS pH 6.8 media (paddle, 75 r??min^-1) is the in-vivo release of venetoclax associated with the in-vitro release condition.     

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??OBJECTIVE To evaluate the anti-hepatitis B virus (HBV) activity of herpetrione nanosuspension (PEDX-NS) both in vitro and in vivo. METHODS HepG2 2.2.15 cells and duck hepatitis B virus (DHBV) infected ducks as in vitro and in vivo models were used to compare the anti-HBV activity of PEDX-NS and PEDX coarse suspension (PEDX-CS). RESULTS In the HepG2 2.2.15 cell, PEDX-NS effectively suppressed the secretion of the HBV antigens (HBsAg and HBeAg) in a dose-dependent manner with significant difference from PEDX-CS (P<0.05 or P<0.01). In the in vivo evaluation, PEDX-NS with high dose (100 mg??kg^-1) and middle dose (60 mg??kg^-1) significantly reduced the serum HBV DNA level (P<0.05 or P<0.01) and the effect was better than that of PEDX-CS (P<0.05 or P<0.01). CONCLUSION The result revealed that PEDX-NS exhibits anti-HBV activity both in vitro and in vivo and its effect was superior to that of PEDX-CS. The mechanism is probably that the small particle size of PEDX-NS provides a large specific surface area that resulted in better absorption in vivo, thus enhancing its anti-HBV activity.
     

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??OBJECTIVE To study evodiamine complex nanoemulsion oil-in-water (EPBCN) in vitro and in vivo evaluation, about release in vitro and pharmacokinetics. METHODS Release in pH 1.2 hydrochloric acid and pH 6.8 PBS solutions and oral bioavailability in rats of EPBCN would be studied. The bioequivalence between evodiamine (ED) and EPBCN was judged. RESULTS In vitro release of EPBCN was about 2.61 times higher than that of ED. The oral bioavailability of EPBCN was 7.35 folds than that of ED. 90% confidence interval of area under concentration-time curve (AUC_{0-72 h}) and peak concentration (??_max) exceeded the standard range. CONCLUSION EPBCN can remarkably increase the release in vitro and oral bioavailability in rats, and they do not have bioequivalence.     

灵芝多糖对小鼠胃肿瘤活性的体内外抑制作用

目的:通过体外肿瘤细胞抑制实验及体内抗肿瘤实验,探讨灵芝多糖体内外抗肿瘤作用,并阐明其作用机制。方法:体外实验,使用胃癌细胞株MKN45及AGS,分为空白组、顺铂组、灵芝多糖(20,10,5 g·L~(-1))组,加入药物孵育24,48 h后,使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化。体内实验,60只BALB/c裸鼠随机分为模型组、阿霉素组、灵芝多糖高、中、低剂量(200,100,50 mg·kg~(-1))组,除空白组外,其余各组使用Walker-256肿瘤细胞移植法建立胃肿瘤模型。1周后,除空白和模型组灌胃蒸馏水外,其余各组给予相应药物灌胃。4周后测量肿瘤大小,并取部分胃组织,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因的表达。结果:与空白组比较,灵芝多糖高、中、低剂量组作用24,48 h后,均可以明显抑制胃癌细胞株MKN45和AGS的生长(P0.05);灵芝多糖高、中剂量组作用24 h均可以有效促进胃癌细胞MKN45和AGS的凋亡(P0.05),可以抑制AGS胃癌细胞的细胞周期,使其停留在G1期(P0.05)。体内实验表明,灵芝多糖高、中剂量组可以有效抑制胃部肿瘤的生长,同时增加Bax基因表达量,抑制Bcl-2基因表达(P0.05)。结论:灵芝多糖具有体内外抑制胃肿瘤细胞生长的作用,其作用与增加Bax基因表达,抑制Bcl-2基因表达,从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

氯雷他定自微乳制剂的体内外评价

 目的研究氯雷他定自微乳制剂自乳化能力和体内药动学特征。方法绘制三元相图,考察最优处方的粒径、Zeta电位、稳定性。比较氯雷他定自微乳制剂与市售片剂的体外溶出度。采用LC-MS/MS测定Beagle犬血药浓度,与市售片剂比较,研究氯雷他定自微乳制剂的相对生物利用度。结果氯雷他定自微乳制剂加水乳化后的平均粒径为（28.15±1.65）nm。以蒸馏水为溶出介质,15min溶出80%以上。比格犬体内药动学结果表明,自微乳制剂的最大血药浓度ρ_max是片剂的9倍,并且AUC_0-t是片剂的5.3倍。结论自微乳制剂可以显著提高氯雷他定的体外溶出度和体内吸收。     

HPLC-MS/MS分析黄连碱在大鼠体内外的代谢产物

目的:探讨黄连碱的体内外代谢产物及其代谢途径。方法:体内代谢采用单次灌胃大鼠黄连碱(剂量25 mg·kg~(-1)),收集给药后0～48 h的尿液和粪便,0～24 h的胆汁以及给药0. 25,1,2 h后的血浆和脑组织样品;体外代谢采用大鼠肝微粒体及肠道菌群孵育的方法;运用高分辨HPLC-MS/MS技术对生物样品中的药物原型及代谢物进行鉴定。选用ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(4. 6 mm×150 mm,5μm),以乙腈-0. 1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1. 0 mL·min~(-1),柱温25℃。质谱使用电喷雾离子源(ESI),正、负离子检测模式,扫描范围m/z 50～1 200。对各色谱峰质谱图进行分析,根据准分子离子峰判断相对分子质量,进一步根据各色谱峰的主要碎片离子、保留时间等信息,与文献数据进行比较,推测化合物的结构。结果:在大鼠尿液、粪便、胆汁、血浆、脑组织、肝微粒体温孵和肠道菌群温孵样品中发现了黄连碱的17个代谢产物,Ⅰ相代谢产物11个,Ⅱ相代谢产物6个。这17个代谢产物是黄连碱在大鼠体内羟基化、去甲基化和脱氢作用、硫酸酯化、葡糖糖醛酸化后产生的。结论:黄连碱可在大鼠体内发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢反应,代谢物主要存在于尿液中,主要代谢部位为肝脏;黄连碱胃肠道吸收较差,代谢少,大部分经粪便以原型排泄,为黄连碱的药效学和药理学研究提供了一定的物质基础。     

中药吴茱萸炮制工艺及质量标准研究

目的：考察不同炮制工艺对中药吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的影响。方法：采用反相－ＨＰＬＣ色谱法,吴茱萸以乙腈－水（４３：５７）为流动相,ＵＶ检测波长：２９０ｎｍ。结果：不同的炮制工艺,吴茱萸中有效成分吴茱萸碱及吴茱萸次碱无显著差别。结论：各省地区不同的炮制工艺规范对其有效成分吴茱萸碱及吴茱萸次碱基本一致。     

贵州和浙江产吴茱萸指纹图谱分析及含量测定

目的:应用UPLC-UV指纹图谱方法,结合吴茱萸中有效成分柠檬苦素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量测定,评价不同品种及产地的吴茱萸药材质量,为控制市场上吴茱萸药材质量提供依据。方法:采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相乙腈-水梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1,检测波长210 nm,柱温25℃。收集了24批不同产地不同种吴茱萸样品进行指纹图谱分析,结合主成分分析及有效成分含量测定,对吴茱萸药材整体质量进行评价。结果:建立了吴茱萸UPLC-UV指纹图谱,标定了9个共有峰。指纹图谱相似度评价结果显示贵州产吴茱萸质量较稳定、统一,浙江产吴茱萸质量稍不统一。主成分分析结果表明,吴茱萸药材不同种之间成分上存在差异性。产地对吴茱萸药材中柠檬苦素和生物碱含量有影响。结论:指纹图谱结合有效成分含量测定的方法可用于吴茱萸药材的整体质量评价,对吴茱萸药材的品种鉴定及质量控制具有指导意义。