miR-183通过靶定EPHA4调控老年前列腺癌细胞的转移

目的探讨微小RNA(miR)-183对老年前列腺癌细胞转移中的影响及其与靶基因促红细胞生成素产生肝细胞受体(EPH)A4的价值。方法对老年前列腺癌和癌旁组织中miR-183和EPHA4的表达水平通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法进行检测。老年前列腺癌细胞系PC3和LNCaP能够转染miR-183抗链球菌溶血素(AS)O,通过与阴性对照及Transwell迁移和侵袭实验对其细胞的运动和侵袭能力进行评价。再通过使用RT-PCR、Western印迹、绿色荧光蛋白(GFP)报告载体3种实验验证miR-183对其靶基因EPHA4的调控。结果 RT-PCR显示miR-183处于高表达水平(P<0.01)。转染miR-183 ASO细胞的迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.01)。生物信息学显示EPHA4 3'UTR含有miR-183的潜在结合位点。转染miR-183 ASO组细胞EPHA4 3'UTR荧光强度显著低于对照组(P<0.01),miR-183 minmcs增加EPHA4 3'UTR的荧光强度(P<0.01),而对突变的3'UTR无明显影响。miR-183 ASO中EPHA4 mRNA水平降低,miR-183 mimics中EPHA4 mRNA水平升高。miR-183 ASO组EPHA4的蛋白含量较对照组显著下降(P<0.01)。结论 miR-183通过EPHA4对老年前列腺癌细胞的迁移和侵袭进行调控,发挥着癌基因的作用。     

前列腺癌组织miR-221和miR-222的表达及临床意义

目的探讨前列腺癌(PCa)组织中miR-221和miR-222的表达及其临床意义。方法采用茎环RT-PCR的方法检测8例正常前列腺组织、74例PCa组织及其对应的癌旁组织中miR-221和miR-222的表达情况,并结合临床病理资料进行统计学分析。结果 miR-221和miR-222在PCa组织中的表达显著高于其对应癌旁组织(P<0.05)及正常前列腺组织(P<0.05),其中miR-221的水平还与癌组织分化程度(P<0.05)以及远端转移情况(P<0.05)相关。结论 miR-221和miR-222在PCa组织中表达量升高,其中miR-221的水平还与癌组织分化程度与转移相关,可能作为PCa诊断和预后的指标。     

miR-214通过抑制TOM1表达促进肝星状细胞活化和迁移

背景:肝星状细胞(HSCs)持续激活所致的细胞外基质过度沉积是肝纤维化发生、发展的关键环节。MicroRNAs(miRNAs)是一类重要的生物调节分子,为HSC的分化、增殖、凋亡、脂肪蓄积以及胶原生成所必须。既往对HSCmiRNAs表达谱的分析显示,miR-214在HSC活化过程中表达显著增高。目的:探讨miR-214在HSC中的生物学功能及其可能机制。方法:以real time PCR检测静息和完全活化状态大鼠HSC的miR-214 mRNA表达;应用miR-214封闭慢病毒载体感染HSC以敲除miR-214表达,以Transwell细胞迁移实验、蛋白质印迹法检测感染前后HSC迁移、活化能力的变化;应用荧光质粒报告系统对TargetScan(http://www.targetscan.org/)预测的miR-214靶基因进行验证。结果:miR-214 mRNA在HSC活化过程中表达显著增高(P<0.01)。miR-214敲除组HSC Transwell小室迁移细胞数较阴性对照组显著减少(P<0.001),HSC活化标记物α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白表达显著下调(P<0.01)。预测显示TOM1为miR-214的靶基因,并得到荧光质粒报告系统证实;miR-214敲除组HSC TOM1蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论:miR-214参与促进HSC的活化和迁移,进而促进肝纤维化进程;miR-214在HSC中的生物学功能至少部分是通过抑制TOM1表达实现的。     

穿心莲内酯通过调控miR-206/STC2抑制前列腺癌细胞增殖并诱导凋亡的机制

目的探讨穿心莲内酯对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其潜在分子机制。方法以10μmol/L穿心莲内酯干预PC-3人前列腺癌细胞,噻唑蓝(MTT)、流式细胞仪和qRT-PCR实验检测细胞活性、凋亡及细胞中miR-206表达。将miR-206模拟物转染至PC-3细胞,检测细胞活性及凋亡率。采用qRT-PCR和免疫组化法检测前列腺癌组织中miR-206和斯钙素(STC)2表达,Targetscan在线预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-206和STC2的靶向关系。结果以10μmol/L穿心莲内酯干预PC-3细胞,细胞活性下降、凋亡率增加、miR-206表达上调;过表达miR-206能够降低细胞活性并促进细胞凋亡。在前列腺癌组织中,miR-206低表达而STC2高表达;Targetscan在线预测和双荧光素酶报告基因实验结果表明STC2是miR-206的靶基因。抑制miR-206表达可逆转穿心莲内酯对PC-3细胞活性和STC2表达的抑制及凋亡的促进作用。结论穿心莲内酯能够抑制PC-3细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能是通过上调miR-206并抑制STC2表达而实现的。     

miR-455在前列腺癌中的相关功能研究

目的探讨miR-455在前列腺癌中的表达及相关功能。方法定量PCR检测前列腺癌患者血清和正常组中miR-455表达水平,同时基因转染抑制前列腺癌细胞系中miR-455表达,细胞划痕实验、CCK-8实验检测前列腺癌细胞系功能变化。结果前列腺癌患者血清中miR-455表达水平高于正常组。miR-455被抑制后,前列腺癌细胞增殖和迁移能力降低。结论 miR-455高表达利于前列腺癌细胞增殖,是前列腺癌发生发展的重要因素。     

miR-134通过介导CCND1表达下调抑制食管癌细胞增殖

目的探讨人食管鳞状细胞癌组织中miR-134的表达及对癌症细胞增殖、凋亡的影响。方法食管癌组织及体外培养细胞中的miR-134表达水平采用PCR法检测;在TE-1细胞内过表达miR-134,细胞活力检测采用噻唑蓝(MTT)实验,细胞增殖检测采用平板克隆实验;细胞凋亡检测采用流式细胞仪;PCR及蛋白免疫印迹检测miR-134潜在靶点CCND1表达变化。结果 miR-134在食管癌组织中的表达水平较食管黏膜组织显著降低(P0.001);过表达miR-134能够抑制食管鳞状细胞癌TE-1的细胞活力(P=0.023)和增殖能力(P=0.029),并促进细胞凋亡(P=0.010);过表达miR-134后显著抑制TE-1细胞中CCND1 mRNA(P=0.011)及蛋白(P=0.042)的表达水平。结论食管鳞状细胞癌组织中miR-134表达水平降低,过表达miR-134能够通过下调CCND1的表达发挥抗食管鳞状细胞癌生长作用。     

miR-138通过促进PDK1和激活AKT信号通路促进胶质母细胞瘤细胞增殖

目的 检测miR-138在胶质母细胞瘤中的表达水平并研究其对肿瘤细胞增殖的影响.方法 收集胶质母细胞瘤患者的临床标本,RT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-138和PDK1的表达,并分析二者表达水平的相关性.培养T98G、H4、U251和U87细胞,并分别转染miR-control、miR-138 mimic或inh...     

miR-381通过下调SETDB1抑制结肠癌细胞转移

目的探讨人结肠癌组织中miR-381的临床意义及对结肠癌转移能力的影响。方法荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测结肠癌及癌旁组织中miR-381的表达量;通过人工合成的miR-381模拟物在SW480细胞中构建miR-381过表达细胞株;通过划痕愈合试验、Transwell侵袭小室检测细胞迁移及侵袭情况;PCR及蛋白免疫印迹检测miR-381潜在靶点组蛋白赖氨酸N端甲基转移酶SET结构域分支型(SETDB)1的表达变化;免疫组化染色检测SETDB1在结肠癌组织中的表达及与miR-381的表达相关性。结果 miR-381在结肠癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(t=10.080,P0.001);过表达miR-381能够抑制结肠癌SW480细胞的迁移(t=4.223,P=0.027)及侵袭能力(t=3.651,P=0.033);提高SW480细胞内miR-381的表达后显著下调了SETDB1 mRNA(t=10.521,P=0.008)及蛋白(t=4.811,P=0.027)在SW480细胞内的表达水平,并抑制了MMP-2的表达水平(t=3.472,P=0.036)。结肠癌组织内SETDB1表达升高(t=4.811,P=0.027),且与miR-381的表达水平呈负相关关系(r=-0.325,P=0.021)。结论 miR-381在结肠癌中表达降低,miR-381能够通过抑制结肠癌中SETDB1而发挥抗肿瘤转移作用。     

lncRNA CCDC183-AS1通过靶向miR-1301-3p调控胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭

背景长链非编码RNA(long non-coding RNA, lnc RNA)CCDC183-AS1在肝细胞癌中表达上调,促进肝细胞癌进展.但lnc RNA CCDC183-AS1对胃癌的影响及其分子机制还未知. Star Base预测显示, lnc RNA CCDC183-AS1可能靶向结合miR-1301-3p.本研究假设lnc RNA CCDC183-AS1可靶向调控miR-1301-3p影响胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,进而影响胃癌发展进程.目的探讨lnc RNA CCDC183-AS1对胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其分子机制.方法选取本院30例胃癌组织及匹配的癌旁组织;实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR)检测lnc RNACCDC183-AS1和miR-1301-3p表达及变化;四甲基偶氮唑盐比色法(methy l thiazolyetelrazlium,MTT)检测细胞增殖, Transwell检测细胞迁移侵袭,蛋白质印迹(Western blot)检测细胞周期素D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2, MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)和p21蛋白的表达; AGS细胞中分别转染si-CCDC183-AS1、miR-1301-3p,并利用上述检测细胞增殖、迁移侵袭能力的变化;Star Base预测显示lnc RNACCDC183-AS1的序列中含有与miR-1301-3p互补的核苷酸序列,双荧光素酶报告实验鉴定其靶向关系.结果与癌旁组织比较,胃癌组织中lnc RNA CCDC183-AS1和miR-1301-3p的表达水平分别显著升高和降低(P 0.05).抑制lnc RNACCDC183-AS1表达或过表达miR-1301-3p后, AGS细胞的增殖和迁移侵袭能力下降, Cyclin D1、MMP-2和MMP-9表达水平降低, p21表达水平升高(P0.05). lnc RNA CCDC183-AS1靶向调控miR-1301-3p表达(P 0.05).下调miR-1301-3p表达逆转了抑制lnc RNA CCDC183-AS1表达对胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论抑制lnc RNA CCDC183-AS1通过靶向上调miR-1301-3p表达调控胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭.     

miR-20a对前列腺癌细胞的侵袭及其机制

目的探讨miR-20a在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞侵袭的作用机制。方法实时定量PCR检测前列腺癌和正常组织,以及正常前列腺细胞和4种癌细胞中miR-20a的表达。将miR-20a的抑制剂miR-20a ASO转染PC-3和DU145细胞,实时定量PCR验证抑制效果,然后检测细胞的增殖和侵袭。GFP报告载体实验和免疫印迹验证miR-20a的靶基因。细胞转染靶基因ABL2的siRNA后,免疫印迹验证沉默效果并检测其对细胞侵袭的影响。结果与对照组相比,miR-20a在前列腺癌组织和细胞中表达显著升高。miR-20a ASO组中miR-20a的水平降低,细胞增殖减慢,细胞穿过膜的数目明显减少。ABL2是miR-145的直接靶基因,受其负调控。敲降ABL2的表达后,细胞侵袭能力增强,并且可以挽救由miR-20a ASO引起的细胞侵袭能力的降低。结论抑制miR-20a在前列腺癌转移的分子治疗中具有潜在功能。     

miR-155通过靶向调控TGFBR1和TGFBR2抑制AMI诱导的心肌纤维化

目的 探讨miR-155对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌纤维化进程及心肌成纤维细胞(CFs)细胞增殖和周期的影响,分析miR-155对转化生长因子(TGF)-β信号Ⅰ型/Ⅱ型跨膜受体(TGFBR1/TGFBR2)调控作用,阐明miR-155在AMI中的作用及其工作机制。方法 qRT-PCR检测miR-155在AMI患者和AMI小鼠血清中的表达。心脏超声,Masson染色和天狼星红染色分别检测miR-155对AMI小鼠左室射血分数及心肌纤维化程度的影响。Western印迹检测CFs细胞在缺氧条件下miR-155对TGFBR1,TGFBR2,P-smad2和P-smad3表达的影响。TargetScan和双荧光素酶报告基因试验筛选并验证TGFBR1和TGFBR2是否为miR-155的靶基因。qRT-PCR和Western印迹检测miR-155对TGFBR1和TGFBR2表达的影响。CCK8法和流式细胞法分别检测miR-155对CFs细胞增殖和周期的影响。结果 miR-155在AMI患者及AMI小鼠血清中的表达均明显降低,miR-155过表达能促使AMI小鼠左室射血分数升高,下调心肌组织中N...     

miR-539通过靶向调控DCLK1抑制非小细胞肺癌的侵袭能力

目的 探讨非小细胞肺癌组织中miR-539的表达水平及其抑制肺癌细胞侵袭的作用机制.方法 通过基因表达数据库dbDEMC分析miR-539在非小细胞肺癌组织及正常肺组织中的表达量差异.根据235例miR-539高表达的非小细胞肺癌患者和102例miR-539低表达的非小细胞肺癌患者随访资料,分析miR-539与非小细胞...     

miR-92对前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨miR-92对前列腺癌细胞增殖以及凋亡的影响。方法首先利用实时荧光定量PCR技术检测32个前列腺癌组织和26个良性前列腺增生组织中miR-92的表达水平;人工设计合成miR-92的反义寡核苷酸,利用脂质体LipofectamineTM2000转染PC-3和DU-145两种细胞系,利用实时荧光定量PCR检测转染后细胞内miR-92的表达水平,并通过噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测细胞的增殖和凋亡情况。结果与良性前列腺增生组织相比,miR-92在前列腺癌组织中表达水平升高;与转染对照寡核苷酸的细胞相比,两种癌细胞转染anti-miR-92后,miR-92的水平降低,MTT检测发现细胞的活性降低,流式分析仪检测发现增殖的细胞数降低,并且细胞凋亡增加(均P<0.05)。结论抑制miR-92的表达导致细胞增殖减慢,凋亡增加,miR-92具有作为临床前列腺癌检测及治疗分子标志物的潜在功能。     

LC通过调控miR-4500表达对前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨细梗香草总皂苷(LC)对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡的影响及其对miR-4500的调控作用。方法 采用不同剂量的LC处理DU145细胞,分别将miR-NC、miR-4500 mimics转染至DU145细胞,分别将anti-miR-NC、anti-miR-4500转染至DU145细胞后加入LC处理细胞;噻唑蓝(MTT)、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测前列腺癌组织、癌旁组织及DU145细胞中miR-4500的表达量。结果 LC可明显提高细胞增殖抑制率、凋亡率(P<0.05),且呈剂量依赖性;前列腺癌组织中miR-4500的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);LC可明显提高细胞中miR-4500的表达水平(P<0.05);转染miR-4500 mimics可明显提高细胞增殖抑制率及凋亡率(P<0.05);转染anti-miR-4500可明显逆转LC对DU145细胞增殖及凋亡的作用(P<0.05)。结论 LC可通过上调miR-4500的表达诱导前列腺癌DU145细胞凋亡。     

lncRNA DLX6-AS1靶向miR-195-5p调控前列腺癌细胞增殖、侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(lnc RNA)DLX6-AS1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用机制。方法 qRT-聚合酶链反应(PCR)检测前列腺癌细胞PC3、正常前列腺上皮细胞RWPE-1中DLX6-AS1、miR-195-5p的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-DLX6-AS1组(转染si-DLX6-AS1)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-195-5p组(转染miR-195-5p mimics)、si-DLX6-AS1+anti-miR-NC组(共转染si-DLX6-AS1和anti-miR-NC)、si-DLX6-AS1+anti-miR-195-5p组(共转染si-DLX6-AS1+anti-miR-195-5p)用脂质体法转染至PC3细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光活性。结果 与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,前列腺癌细胞PC3中DLX6-AS1的表达显著上调,miR-195-5p的表达显著下调(P<0.05);抑制DLX6-AS1、过表达...     

miR-185通过靶向BRCA1抑制三阴乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的探讨miR-185是否通过靶向人类乳腺癌易感基因(BRCA)1抑制三阴乳腺癌细胞的生长与侵袭及其抗肿瘤机制。方法采用Target Scan软件预测miR-185靶基因、将野生型或突变型E2F6的3'-UTR区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(E2F6-wt或E2F6-mut)并分别与miR-185模拟物(miR-185 mimics)及其无关对照寡核苷酸序列(scramble)、抗miR-185寡核苷酸序列(miR-185-LNA)及其无关对照寡核苷酸序列(control)共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基因E2F6、qRT-PCR检测转染后靶基因的mRNA表达水平、Western印迹检测转染后靶基因的蛋白表达水平。MTS和Transwell验证不同转染后,三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞生长增殖活性和侵袭能力。结果在共转染miR-185mimics和E2F6-wt、scramble和E2F6-wt两组中,miR-185组荧光素酶活性强度降低了约41.3%(P<0.05)。转染miR-185后,E2F6的蛋白和mRNA水平均显著下调,BRCA1的蛋白和mRNA水平均显著上调(P<0.05)。在细胞增殖试验中,转染miR-185后,三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长速度显著低于scramble组(P<0.05);与vector组比,BRCA1组可显著抑制三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长(P<0.05),且miR-185+BRCA1组比BRCA1组对细胞生长的抑制作用更加明显(P<0.05)。Transwell侵袭实验中,转染miR-185和BRCA1组在36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(100±6)和(100±9),而对照组即转染scramble和转染vector组穿膜细胞数分别为(210±13)和(180±14),即miR-185和BRCA1能明显抑制三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的穿膜能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-185通过靶向调控BRCA1表达而抑制三阴乳腺癌细胞的生长与侵袭。     

miR-381、HMGB1、NGAL与食管癌病理特征相关性研究

目的 探究miR-381、高迁移率蛋白B1(HMGB1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)同食管癌病理特征的相关性.方法 收集2019年5月至2021年4月西安市第一医院行食管癌根治术治疗的40例患者的食管癌及癌旁组织,采用SP免疫组织化学染色法分别检测miR-381、HMGB1、NGAL在人食管癌组织中的...     

抑制LncRNA MALAT1靶向促进miR-200a表达减少心肌细胞凋亡

目的研究肺腺癌转移相关转录因子(MALAT)1对心肌细胞凋亡的影响和机制。方法使用过氧化氢(H_2O_2)处理心肌细胞,Realtime PCR方法检测MALAT1表达差异。在心肌细胞中转染MALAT1 siRNA,流式细胞术测定细胞凋亡,试剂盒测定超氧化物歧化物酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。预测MALAT1与miR-200a有互补结合位点,用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在心肌细胞中共转染MALAT1 siRNA和miR-200a inhibitor,用上述方法检测其对H_2O_2条件下心肌细胞凋亡和SOD、MDA的影响。结果 H_2O_2处理后心肌细胞中MALAT1表达水平升高。MALAT1 siRNA抑制H_2O_2条件下心肌细胞中MALAT1表达。MALAT1 siRNA抑制H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡和MDA含量升高,提高细胞中SOD活性。MALAT1靶向负调控miR-200a表达。miR-200a inhibitor可逆转MALAT1 siRNA对心肌细胞凋亡和MDA合成抑制作用,降低SOD活性。结论抑制MALAT1靶向促进miR-200a表达,减少H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡和氧化损伤。     

COL8A1通过竞争性结合miR-876调控SUZ12的表达从而促进胃癌细胞增殖

目的 筛选胃癌中具有显著临床意义的潜在靶基因,探究其在胃癌发生发展中的功能和潜在分子机制.方法 通过GEPIA数据库检索对胃癌发生发展具有重要意义的目的基因;采用免疫组化染色法及qRT-PCR检测目的基因在胃癌组织及胃癌前病变组织中的表达;通过siRNA介导敲低目的基因,利用细胞增殖实验和克隆形成实验验证其在胃癌发生发...     

过表达LncRNA LINC00261通过靶向miR-362-5p调控前列腺癌细胞增殖、凋亡的机制

目的 探讨长链非编码RNA LINC00261(LncRNA LINC00261)调控微小RNA-362-5p(miR-362-5p)表达影响前列腺癌细胞增殖及凋亡的机制.方法 实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测LINC00261和miR-362-5p在前列腺癌细胞系中的表达情况.双荧光素酶报告基因检测...