成牙本质细胞的分化指标

成牙本质细胞源于神经嵴 ,牙乳头细胞在来自上皮源性的生物分子作用下 ,依照特定的时空式于钟状期晚期开始分化 ,其主要功能是合成和分泌牙本质细胞外基质 ,并促进矿化[1] 。成牙本质细胞在成熟过程中表现出特定的形态 ,与其发挥的分泌功能相适应。细胞形态学特征和成牙本质细     

新生大鼠成牙本质细胞及牙本质形成的光、电镜观察

目的:探讨成牙本质细胞的发育变化以及牙本质的结构发育特点.方法:取不同日龄新生大鼠的下颌切牙牙胚进行光、电镜观察.结果:成牙本质细胞由低柱状变为高柱状,并发生极化,细胞器渐增多,有分泌颗粒出现,细胞突起逐渐形成;形成的前期牙本质和牙本质在6～9 d达最厚,且胶原纤维较丰富而密集,牙本质小管多;成牙本质细胞突起贯穿前期牙本质和牙本质,并进入牙釉质中.结论:0～9 d日龄大鼠的下颌切牙牙胚正处于牙体组织的分泌形成期,是研究牙齿发育过程的很好的动物模型.     

人牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化中细胞周期变化

目的 建立成牙本质细胞样细胞体外培养体系,观察体外培养的牙髓细胞向成牙本质细胞分化过程中细胞周期的变化.方法 利用组织块酶解法培养人牙髓细胞并进行鉴定,使用矿化诱导液诱导其向成牙本质细胞样细胞分化.对细胞增殖情况使用流式细胞仪进行细胞周期测定.结果 ①获得的牙髓细胞均为波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证明为中胚层来源的细胞.②诱导分化的牙髓细胞在2周左右进入复层生长期;3周左右开始有细胞结节形成,周围细胞呈放射状排列,部分细胞出现细长突起并呈极性排列;4周左右细胞团中央Von Kossa染色为阳性.③在诱导开始后1周,细胞处于活跃的增殖期,以后细胞增殖变慢,3周后多数细胞处于G0G1期.结论 实验成功建立了成牙本质细胞样细胞体外培养体系,所获得的成牙本质细胞样细胞具有成牙本质细胞的部分形态和生物学功能,诱导分化后细胞增殖变慢,是研究成牙本质细胞的较好模型.     

过量氟对大鼠牙髓成牙本质细胞显微和亚显微结构的影响

目的:观察过量氟作用下大鼠牙髓成牙本质细胞显微、亚显微结构的改变。方法:选择30只Wister大鼠,随机分为两组,每组15只。Ⅰ组为对照组,蒸馏水灌胃。Ⅱ组为实验组,20 mg/(kg.d)氟化钠水灌胃。8周后处死动物,利用磨片、HE染色、透射电镜技术观察过量氟对大鼠切牙形态、成牙本质细胞显微和亚显微结构的影响。结果:实验组切牙牙釉质牙本质厚度明显变薄,髓腔内侧前期牙本质宽于对照组,球间牙本质增多。釉质生长线、釉柱横纹明显,牙本质生长线明显。透射电镜观察实验组大鼠牙髓成牙本质细胞体积较小,细胞器减少,一些细胞呈现凋亡迹象。结论:过量的氟作用下大鼠牙髓成牙本质细胞分化和分泌基质都受一定程度的阻遏,成牙本质细胞细胞器减少,细胞凋亡。     

ACVR1对成牙本质细胞极性及牙本质形成的作用

目的 研究Ⅰ型骨形态发生蛋白(BMP)受体活化素A受体1(ACVR1)调节小鼠成牙本质细胞极性及促进牙本质形成的作用机制.方法 通过Cre-loxP系统,以Osterix为启动子激活Cre重组酶,敲除小鼠牙源性间充质细胞的Acvr1基因.于小鼠出生后21 d收集标本,观察成牙本质细胞形态、排列及牙本质的形态;免疫荧光染...     

巢蛋白在大鼠牙齿发育过程中表达的免疫组化研究

目的:探讨巢蛋白(Nestin)在大鼠牙齿发育过程中的表达模式和可能作用。方法:制备大鼠牙齿发育各阶段标本,采用SP法进行巢蛋白的免疫组织化学染色。结果:巢蛋白主要表达于功能性成牙本质细胞。结论:巢蛋白参与人牙齿的发育过程,特别是成牙本质细胞分化和基质分泌。     

乳牙牙本质小管管壁纤维与管内膜样结构的电镜观察

目的观察乳牙牙本质小管内膜样结构,探讨其结构形态与周围组织的关系及相应功能.方法运用扫描及透射电镜对16颗乳牙牙本质小管及其管壁纤维进行观察.结果乳牙牙本质小管壁基质纤维的排列既与小管平行又相互交织成网.牙本质经过酸处理后,发现在小管管壁与成牙本质细胞突起之间,有一层呈管状膜样结构存在.此结构可能由未被钙化的或钙化不全的管壁基质纤维和成牙本质细胞突起的分枝组成.结论管状膜样结构可能参与调节牙本质小管管壁的矿化,继而阻止牙本质小管因过度钙化而引起的闭锁.     

强气流吹干牙本质对成牙本质细胞影响的实验研究

目的:利用强度不同气流吹干制备完全的深龋洞后充填窝洞,研究强气流吹干牙本质对成牙本质细胞的影响。方法:选取20颗健康成人第三磨牙,表现为无对颌或是阻生齿,均未患有牙体牙周疾患。将选取的20颗牙齿分别制备洞型致剩余牙本质厚度约0.25mm,将20颗牙齿随机分为2组,一组使用轻到中度强度气流吹干窝洞后进行充填作为对照组,另一组使用强气流。显微图像分析系统计算台盼兰染色率以判断强气流对成牙本质细胞的影响,并做统计学分析。结果:利用强气流吹干窝洞可造成龋洞对应髓室顶或髓室壁的成牙本质细胞及其突起萎缩、坏死,周围区域成牙本质细胞形态良好。结论:使用强气流吹干切割完全的牙本质可伤害成牙本质细胞,临床治疗深龋应避免使用强气流吹干生活牙本质。     

体外人牙髓细胞的连续培养

目的 探讨体外连续培养过程中人恒牙牙髓细胞向成牙本质样细胞分化的可行性。方法 采用细胞连续培养、酶动力学法、透射电镜观察、免疫组化等方法，对体外人牙髓细胞在连续培养过程中的生物学特性进行研究。结果 部分人牙髓细胞在体外可以出现复层生长，形成细胞结节，并可进一步钙化；与成牙本质细胞相似，它们具有高碱性磷酸酶活性，可合成Ⅰ型胶原，其超微结构有许多与成牙本质细胞相似的特征，胞间基质中可见膜被基质小泡，某些基质小泡内含针状晶体。结论 体外连续培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化，此过程可作为研究体内牙髓损伤修复细胞增殖、分化的体外模型。     

牙本质形成的研究进展

牙本质形成包括细胞分化、成牙本质细胞分泌细胞外基质及基质矿化。目前认为这一过程有很多因素参与调控，如特异性蛋白、骨形成蛋白(BMP)及多种生长因子。现就近年牙本质形成有关影响因素的报道作一综述。     

小鼠钟状期牙胚中Frizzled蛋白的表达

目的 观察牙胚发育钟状期时Frizzled蛋白的表达情况,探讨Wnt/Frizzled信号分子的作用及机制.方法 取胚胎17 d和19 d的胎鼠,另取生后2 d的幼鼠,分别制作下颌第1磨牙的切片,运用免疫荧光技术显示Frizzled蛋白的阳性分布部位,并在荧光显微镜下观察.结果 胚胎17 d时Frizzled蛋白在成釉器的内、外釉上皮有弱阳性分布,胚胎19 d时在前成釉细胞和前成牙本质细胞的顶端有Frizzled蛋白的阳性表达,生后2 d的标本上成釉细胞和成牙本质细胞的顶端Frizzled蛋白呈强阳性表达.结论 Wnt/Frizzled信号分子参与了成釉细胞和成牙本质细胞的分化过程的调节.     

热休克蛋白27在大鼠牙髓炎中的免疫组化研究

目的：研究内毒素（LPS）诱导大鼠牙髓炎模型中HSP27在不同时间的动态表达及定位情况，观察HSP27在牙髓炎中的表达特点，推测它在牙髓炎发生、发展中的意义。方法：通过对LPS诱导的大鼠磨牙实验性牙髓炎组织连续进行切片，同时超敏免疫组化分析。结果：1d组HSP27在成牙本质细胞呈中度阳性表达，成纤维细胞、血管壁及内皮细胞中均呈阳性表达，3、5、7d组中HSP27在成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞及内皮细胞表达减少，2周以后，成牙本质细胞、成牙本质细胞突、修复性牙本质和牙髓成纤维细胞可见HSP27阳性表达，3、4周以后，成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、修复性牙本质呈弱阳性表达，5周以后，牙髓组织变性、坏死，呈均质弱阳性染色。结论：HSP27在牙髓炎早期能够保护牙髓细胞，限制炎症发展，在损伤晚期则可能参与牙齿矿化修复过程。     

TRAF6蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23中的表达

目的：研究成牙本质细胞中是否表达肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptorassociated factor6，TRAF6)。方法：通过免疫组化和免疫荧光法研究TRAF6在成牙本质样细胞系MDPC-23中的表达。结果：免疫荧光和免疫组化法均表明TRAF6在MDPC-25细胞浆呈阳性表达。结论：本实验从蛋白水平证实了成牙本质样细胞MD—PC-25表达TRAF6，提示TRAF6可能是一种新发现的影响成牙本质细胞分化的胞内信号转导分子。     

细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达

目的：研究细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育中的可能作用。方法：取13.5、14.5、16.5和18.5d（E13.5、E14.5、E16.5和E18.5）的小鼠胚胎以及出生后1和5d（PN1和PN5）的小鼠,分离头部,固定、脱钙、脱水、石蜡包埋、切片,HE染色观察牙胚的组织形态表现,采用免疫组织化学染色方法观察CDC42及PAR3在牙胚发育过程中的表达。结果：HE染色观察,E13.5~E18.5分别为小鼠牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期和钟状晚期,PN1小鼠的牙胚中可见分化成熟的成牙本质细胞和成釉细胞,PN5小鼠牙胚可见牙冠部发育完成。免疫组织化学染色,CDC42在E13.5、E14.5和E16.5小鼠牙胚中有广泛表达,在E18.5小鼠牙胚中表达较E13.5、E14.5和E16.5减少,在PN1和PN5小鼠牙胚中主要表达于成牙本质细胞和成釉细胞的分泌端;PAR3弱表达于E13.5和E14.5小鼠牙胚,在E16.5和E18.5小鼠牙胚上皮处表达明显增强,在PN1和PN5小鼠牙胚中表达较E18.5减弱。结论：CDC42和PAR3参与小鼠牙发育的过程,在牙胚发育早期可能参与小鼠牙胚的增殖及迁移,在牙胚发育晚期可能参与了成牙本质细胞和成釉细胞的分化,尤其在成牙本质细胞和成釉细胞极性的形成与维持中可能具有重要作用。     

肝细胞生长因子在大鼠修复性牙本质形成过程中的表达研究

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)在大鼠修复性牙本质形成过程中的作用.方法 以窝洞预备形成大鼠修复性牙本质模型,免疫组织化学染色法检测HGF在窝洞预备后3 d、15 d、30 d的大鼠牙髓组织中的表达,采用积分光密度值(IOD)定量修复性牙本质形成不同阶段HGF的表达.结论 窝洞预备后3 d,HGF在大鼠牙髓细胞及成牙本质细胞胞浆中呈强阳性表达(IOD为8.995±0.943);窝洞预备后15 d,HGF在两种细胞的表达仍呈阳性(IOD为5.624±0.951), 但弱于3 d组(P＜0.01);30 d组(4.073±0.127)和正常对照组(4.279±0.348)大鼠牙髓细胞及成牙本质细胞胞浆中HGF均呈弱阳性表达,两者间差异无统计学意义.结论 HGF参与了牙髓损伤早期修复及修复性牙本质形成的过程.     

牙髓牙本质复合体体外培养模型的建立

目的建立牙髓牙本质复合体体外培养模型。方法取20~30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙,纵向将牙齿切成厚约2 mm的片状结构,每片牙片均包含牙釉质、牙本质和牙髓,运用DMEM培养液进行体外培养,隔天换液,连续培养21 d。分别在培养的第7、14、21天,通过光镜和电镜观察,并行免疫组化检测,对模型进行鉴定。结果光镜和电镜观察显示,成牙本质细胞和牙髓细胞在培养的第7天和第14天时,均保持良好的细胞形态;培养第21天时,部分细胞开始发生变性。免疫组化检测表明,成牙本质细胞牙本质涎磷蛋白表达阳性。结论该模型能够在体外进行较长时间的培养,为人类牙髓牙本质复合体的体外研究提供了一种新的方法。     

脱矿牙本质对修复性牙本质形成的诱导作用

自从 1 96 5年 Urist等建立了骨诱导理论以来 ,人们对与骨有相似化学组成的牙本质是否具有诱导能力产生了浓厚的兴趣 [1] 。大量研究表明 ,脱矿牙本质 (demineralized dentin)不仅具有骨诱导作用 ,而且还具有诱导修复性牙本质形成的作用 [2、3、4 ] 。因此 ,对脱矿牙本质诱导修复性牙本质形成的研究 ,既具有临床应用价值 ,又将对细胞分化理论的认识产生深远的影响。1　脱矿牙本质的种类和制备1 .1　同种脱矿牙本质基质 (allogeneicdemineralized dentin matrix,DDM.)取年龄 3 5岁以下供体的无龋坏、无牙周病的阻生牙、多生牙、埋伏牙或因…     

骨连结蛋白在大鼠正常牙髓和牙髓修复中的基因表达

目的 :利用原位杂交技术 ,观察骨连结蛋白 (osteonectin ,ON)在大鼠正常牙髓和牙髓修复过程中的基因表达特征。方法 :在Wistar大鼠上下颌第一磨牙近中面制备一单面洞。分别观察 3d和 15d后处死动物。组织学处理后切片。体外转录合成单链RNA探针并标记地高辛 (Digoxigenin)。将标记探针与标本进行原位杂交。利用生物素标记的抗地高辛抗体和SABC标记 ,DAB显示杂交信号。苏木素复染。结果 :正常牙髓组织中 ,ON基因表达于牙髓成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞内。ON在备洞 3d后的成牙本质细胞和成牙本质细胞层下方的牙髓细胞内表达强阳性。 15d后 ,可见修复性牙本质形成。修复性牙本质下方的成牙本质细胞样细胞表达ON。结论 :在牙髓修复过程中 ,ON在牙髓修复过程中通过自分泌途径 ,参与了修复性牙本质的形成和矿化     

牙髓牙本质复合体体外培养模型的建立

目的 建立牙髓牙本质复合体体外培养模型.方法 取20～30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙,纵向将牙齿切成厚约2 mm的片状结构,每片牙片均包含牙釉质、牙本质和牙髓,运用DMEM培养液进行体外培养,隔天换液,连续培养21 d.分别在培养的第7、14、21天,通过光镜和电镜观察,并行免疫组化检测,对模型进行鉴定.结果 光镜和电镜观察显示,成牙本质细胞和牙髓细胞在培养的第7天和第14天时,均保持良好的细胞形态;培养第21天时,部分细胞开始发生变性.免疫组化检测表明,成牙本质细胞牙本质涎磷蛋白表达阳性.结论 该模型能够在体外进行较长时间的培养,为人类牙髓牙本质复合体的体外研究提供了一种新的方法.     

活髓治疗中盖髓材料的研究现状及方向

牙髓不仅可以通过成牙本质细胞和细胞突提供氧、营养物质以及牙本质液来保持牙本质的活力,还具有终生不断地形成牙本质的功能,因此,保存活髓是保证患牙健康的基础.活髓保存治疗的主要方法是盖髓术,盖髓术成功的组织学标志是牙本质桥的形成和牙髓组织修复正常.要使活髓保存治疗取得满意疗效,需要有良好的盖髓材料以便将牙髓与感染组织隔离,并为牙髓组织的自身修复提供良好的生物学环境.