产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的基因型分型及耐药分析

[目的]了解大连市中心医院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌耐药基因型及耐药情况。[方法]收集该院2005年11月-2006年2月连续不重复产ESBLs大肠埃希菌40株,采用美国国家临床实验室标准化委员会推荐的表型确认方法进行筛选。在此基础上,分别用针对TEM、SHV、CTX-M-Ⅰ、CTX-M-Ⅱ、CTX-M-Ⅲ、CTX-M-Ⅳ型β-内酰胺酶基因的六对特异性引物对每株细菌进行聚合酶链反应（PCR）,毛细管电泳方法检测所有产ESBLs大肠埃希菌的TEM、SHV、CTX-M基因。应用K-B纸片扩散法检测产ESBLs大肠埃希菌对临床常用抗生素的耐药性。[结果]毛细管电泳结果显示,40株产ESBLs大肠埃希菌中,仅携带一种基因型的分别为SHV型1株（2.50%）,CTX-M-Ⅰ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅱ型7株（17.50%）,CTX-M-Ⅲ型2株（5.00%）,CTX-M-Ⅳ型4株（10.00%）。有18株（46.15%）同时携带两种或两种以上基因型,且多为CTX-M型与TEM型或SHV型共同存在;药物敏感试验结果显示,产ESBLs大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素均表现出较高的耐药性,对碳青霉烯类药物（亚胺培南和美洛培南）的耐药率最低。[结论]该院产ESBLs大肠埃希菌近期流行的主要基因型别为CTX-M型,而且多基因携带情况常见;碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物。     

肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布

目的阐明广州地区肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分布。方法用药敏纸片法对67株耐三代头孢菌素类抗生素的肺炎克雷伯菌进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型筛选,采用PCR检测β-内酰胺酶耐药基因,对部分ESBLs菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)。结果 67株菌中有58株菌ESBLs表型阳性,β-内酰胺酶基因检测显示,44株产CTX-M、43株产SHV(其中10株产超广谱的SHV)、14株产OXA-1群、38株产TEM,7株菌产AmpC。产CTX-M的菌株有20株产CTX-M-1群(包括15株产CTX-M-15)和24株产CTX-M-9群(包括14株产CTXM-14)。PFGE结果显示产ESBLs菌株同源性低。结论广州地区耐三代头孢肺炎克雷伯菌以产CTX-M-1群和CTX-M-9群ESBLs为主。     

临床大肠埃希氏菌耐药性检测及超广谱β-内酰胺酶流行病学调查

目的了解广州地区临床大肠埃希氏菌耐药及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的流行情况。方法对临床分离鉴定的57株大肠埃希氏菌进行5大类15种抗菌药物的耐药性检测。通过表型确认试验筛选出产ESBLs菌株,采用PCR法检测15种临床重要且常见的耐药基因。结果 57株大肠埃希氏菌对15种抗菌药物产生了不同程度的耐药性。其中有23株产ESBLs,ESBLs产生率为40.4%;24株产TEM,13株产CTX-M(其中,8株产CTX-M-55、4株产CTX-M-14、1株产CTX-M-27),2株产OXA-1。结论广州地区大肠埃希氏菌耐药情况依然严峻。同时,ESBLs流行趋势发生了变化:以前以流行CTX-M-9型为主,现在以CTX-M-1型和CTX-M-9型同时流行为主要特征。     

产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型分析

目的 了解我院临床分离大肠埃希茼产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率和基因型分布情况.方法 确证试验鉴别临床分离大肠埃希菌中产ESBLs株,PCR扩增CTX-M耐药基因,PCR.RFLP和DNA测序确定CTX-M基因型.结果 确证实验证明,88株大肠埃希菌中有57株ESBLs阳性,其中54株CTX-M基因扩增阳性.PCR-RFLP分析发现,10株携带CTX-M-1组基因,39株携带CTX-M-9组基因,另外5株同时携带CTX-M-1和CTX-M-9组基因.测序证实7株CTX-M-9组扩增产物均为CTX-M-14型,3株CTX-M-1组扩增产物均为CTX-M-3型.结论 大肠埃希菌中产CTX-M型ESBLs的检出率较高,其基因型以CTX-M-14和CTX-M-3型为主.     

南京地区产超广谱β-内酰胺酶菌的流行病学调查

目的:了解南京地区产ESBLs菌基因型的流行情况。方法:用TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型ESBLs的特定引物进行扩增并对扩增产物进行测序分析确定基因型。结果:30株产ESBLs大肠埃希菌和30株产ESBLs肺炎克雷伯菌未发现TEM型、SHV型、OXA型ESBLs,51株产CTX-M型ESBLs,主要为CTX-M-3、CTX-M-14。9株未扩增到ESBLs基因型。结论:南京地区产ESBLs菌基因型主要以CTX-M型为主。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性及基因型分析

目的:了解某医院分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药性和基因型,为临床合理用药提供依据。方法:收集大肠埃希菌544株,其中161株为产ESBLs菌株。采用VITEK 2 Compact分析仪进行药敏检测,双纸片协同试验确证产ESBLs菌株,PCR法扩增耐药基因。结果:产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药率高于不产ESBLs菌株（P<0.05~P<0.01）。161株产EBSLs菌株携带CTX-M-9型基因98株、TEM型84株、CTX-M-1型62株、OXA-2型15株、OXA-10型7株、SHV型5株。CTX-M-1型和TEM+CTX-M-1型菌株对头孢他啶的耐药率分别为43.5%、59.1%明显高于CTX-M-9型和TEM+CTX-M-9型菌株15%、11.8%的耐药率（P<0.05和P<0.01）。结论:该院产ESBLs大肠埃希菌的基因型主要为CTX-M与TEM型,产ESBLs菌株对多数抗菌药物的耐药性高于不产ESBLs菌株。     

血液中大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶耐药基因型研究

目的 了解本地区血液标本中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的分离率、耐药性和基因型.方法 收集临床血液标本分离的产ESBLs的大肠埃希菌26株,应用PCR基因扩增技术分别检测SHV、TEM、CTX-M、PER、CTX-M-2、Ampc、GES基因,DNA测序确定CTX-M、TEM基因型.结果 在26株菌株中15株为CTX-M型,占57.69%,11株为TEM型,占42.31%.结论 本地区临床血液标本分离的产ESBLs大肠埃希菌流行的主要基因型是CTX-M型和TEM型.     

基于MALDI-TOFMS鉴别产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的应用研究

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）快速区分不同基因型产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的可行性。方法收集2019年1至12月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院各类无污染体液标本中分离的肠杆菌目菌株共368株。采用MALDI-TOFMS进行菌种鉴定,通过VITEKIICompact进行常规药敏试验及ESBLs筛查试验,筛选产ESBLs以及产碳青霉烯酶的肠杆菌目细菌（CRE）。采用PCR检测CTX-M-1、CTX-M-9、TEM、SHV基因,同时利用ClinProTools3.0软件对各基因型菌株的质谱峰图进行分析。结果368株肠杆菌目细菌中共有169株产ESBLs,其中CTX-M型130株,以CTX-M-1型的CTX-M-55亚型（39株,占30.0%）、CTX-M-15亚型（34株,占26.2%）和CTX-M-9型的CTX-M-14亚型（38株,占29.2%）为主。共检出大肠埃希菌255株,其中产ESBLs大肠埃希菌152株,以CTX-M-1型（75株,占49.3%）和CTX-M-9型（58株,占38.2%）为主。通过ClinProTools3.0软件分析发现产CTX-M-9型大肠埃希菌在质荷比为6415m/z和13664m/z处具有特征性蛋白峰。结论产ESBLs菌株主要为大肠埃希菌,基因型主要为CTX-M-1型与CTX-M-9型。MALDI-TOFMS可以快速鉴别CTX-M-9型大肠埃希菌,对尽早指导临床用药具有一定意义。     

肠杆菌属细菌高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的表达状况研究

目的 研究超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和高产AmpC酶在肠杆菌属细菌的表达状况以及ESBLs的基因型,了解肠杆菌属细菌对β-内酰胺类抗生素的耐药机制。方法 采用酶提取物三维及抑制试验检测121株肠杆菌属细菌高产AmpC酶和产ESBLs的情况;采用聚合酶链反应检测产ESBLs菌株的基因型。结果 在121株肠杆菌属细菌中,酶提取物三维及抑制试验共检出产ESBLs菌株29株（24.0%）,高产AmpC酶并产ESBLs菌株14株（11.5%）,高产AmpC酶并产ESBLs的菌株占总高产AmpC酶菌株的43.8%（14/32）。在25株PCR扩增阳性菌株中,TEM型为7株,SHV型10株,CTX-M-1组6株,CTX-M-13组7株,OXA组为阴性,其中有5株同时检测出两种ESBLs基因型。结论 除高产AmpC酶外,产ESBLs也是肠杆菌属细菌对β-内酰胺类抗生素耐药的重要因素之一。肠杆菌属细菌产ESBLs的基因型包括TEM、SHV、CTX-M型,以CTX-M型为主。     

深圳市大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的基因分型

目的分析深圳市大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的主要基因型。方法对50株产ESBLs大肠埃希菌分别用TEM、SHV、CTX-M和OXA-1群基因引物进行PCR扩增,并对PCR产物进行序列分析。结果 92%菌株检出CTX-M型ESBLs,测序结果显示,以CTX-M-14型ESBLs为主,其次为CTX-M-55型。结论 CTX-M-14型和CTX-M-55型是深圳地区大肠埃希菌ESBLs的主要基因型。     

应用DHPLC技术分析浙江沿海地区ESBLs基因类型的研究

目的应用变性高效液相色谱（denaturinghigh—performanceliquidchromatography,DHPLC）技术检测超广谱β-内酰胺酶（extendspectrumβ-lactamases,ESBLs）基因型,了解浙江沿海地区ESBLs基因型分布情况。方法收集171株多重耐药肠杆菌及标准菌株采用多重PCR进行头孢克肟-M型（CTX—M）扩增,扩增产物经DHPLC分析．确定临床菌株基因分型。结果171株多重耐药肠杆菌经表型试验有142株Il缶床菌株ESBLs表型阳性,经多重PCR扩增109株携带CTX—M基因,其中52株为CTX—M-1产物,57株为CTX—M-9产物．检出率达76．8％（109／142）。其中大肠埃希菌携带CTX—M基因比例最高（92．3％）,其次是肺炎克雷伯菌（72．3％）和阴沟肠杆菌（60．0％）。109株临床菌株PCR产物经DHPLC分析检测出4种CTX—M基因型,33株携带CTX—M-3、19株携带CTX—M-15、5株携带CTX—M-9、52株携带CTX—M-14。结论CTX—M型ESBLs菌株检测出4种基因型,CTX—M-3、CTX—M-15、CTX—M-9和CTX—M-14,其中CTX—M-14型是CTX—M型ESBLs主要型别。浙江沿海地区携带CTX—M型ESBLs的细菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌为多见．     

深圳市观澜地区产超广谱β-内酰胺酶菌株基因分型及耐药性分析

目的:了解深圳观澜地区产超广谱β-内酰胺酶菌株基因型分布情况,并分析其耐药性。方法:利用PCR技术扩增产ESBLs菌株质粒DNA的基因,统计分析各基因型阳性率。应用琼脂稀释法检测所有菌株的最低抑菌浓度(MIC)。结果:81株基因分型,SHV型检出率为34.6%,TEM型检出率为9.9%,CTX-M-1型检出率为11.1%,CTX-M-9型检出率为44.4%。药敏试验结果显示亚胺培南MIC90为0.25μg/ml,敏感率为100%。阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦,MIC90分别为8μg/ml和16μg/ml,敏感率为86.1%和90.1%。结论:深圳观澜地区流行产ESBLs菌株主要为CTX-M型,其次为SHV型。亚胺培南对ESBLs菌株抗菌活性最强,其次为阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦,氨苄西林/舒巴坦抗菌活性差。     

新生儿科产ESBLs大肠埃希菌的基因型研究

目的分析我院新生儿病房分离的大肠埃希菌产ESBLs基因型,为临床合理用药提供依据。方法ESBLs表型筛选、确证试验采用K—B法,采用PCR方法对ESBLs基因型进行检测。结果90株产ESBLs大肠埃希菌进行PCR引物扩增,TEM型引物扩增阳性79株,占87．8％;SHV型引物扩增阳性76株,占84．4％;CTX—M型引物扩增阳性90株,占100％;OXA型引物扩增阳性7株,占7．8％。而72株同时产TEM型、SHV型CTX—M型3种酶。结论在本院新生儿科分离的大肠埃希菌中流行ESBLs的基因型主要是CTX—M型,且同时存在产3种酶,应引起临床重视。     

产CTX型超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌基因分析及耐药特征

目的 探讨产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌blaCTX-M基因分型及相应耐药特征。方法 采用双纸片法检测ESBLs, PCR检测blaCTX-M及blaCTX-M-1、-2、-8、-9、25组基因,肉汤稀释法检测抗菌药物MIC值。结果 83株大肠埃希菌中,45株ESBLs表型确证实验阳性,PCR扩增结果显示44株blaCTX-M扩增阳性,其中12株单独检测出blaCTX-M-1组,29株单独检测出blaCTX-M-9组,3株同时具有blaCTX-M-1组和blaCTX-M-9组,未检测出blaCTX-M-2、-8、-25组。所有菌株对亚胺培南皆敏感,对头孢唑林、头孢噻肟、头孢曲松皆耐药。CTX-M-1组菌株对头孢他啶、头孢吡肟的耐药率皆为91.6%(11/12),氨曲南耐药率为100%,左旋氧氟沙星、庆大霉素耐药率分别为100%和83.3%(10/12)。CTX-M-9组菌株对头孢他啶、头孢吡肟耐药率分别为44.8%(13/29)、41.4%(12/29),氨曲南耐药率为55.2%(16/29),左旋氧氟沙星耐药率为89.7%(26/29)、庆大霉素耐药率为58.6%(17/29)。CTX-M-1、-9两组菌株对头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南耐药率差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 产ESBLs大肠埃希菌基因型以blaCTX-M为主, blaCTX-M-9组在blaCTX-M基因中占优势。CTX-M-9组菌株对头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南敏感性高于CTX-M-1组。     

苏州地区临床产超广谱 β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的耐药特征和耐药基因分型

目的分析苏州地区临床产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的耐药特征和耐药基因型分布情况。方法收集苏州地区5家医院2006年至2009年间自临床标本中分离的肺炎克雷伯菌512株,按CLSI规定的ESBLs初筛和确证试验检测ESBLs,以K-B琼脂扩散法进行药物敏感试验,用PCR方法对分离的产ESBLs菌株进行TEM、SHV和CTX-M基因型检测。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌检出率为35.7%（183株）,其中62.8%（115株）携带TEM型基因,36.1%（66株）携带SHV型基因,78.7%（144株）携带CTX-M基因。另外,有41.5%（76株）同时携带两种以上的基因。产酶株的耐药率均明显高于非产酶株（均P〈0.05）。产酶株除对第4代头孢菌素和对加克拉维酸或他唑巴坦等第3代头孢菌素耐药率相对较低外,对其他抗生素均有相当高的耐药率。但无论是产酶株还是非产酶株对亚胺培南的耐药率均为0。结论苏州地区临床产ESBLs肺炎克雷伯菌已达到了较高的比例,并具有多重耐药的特点,其中CTX-M型是最主要的流行基因型。临床上严格控制和合理使用第3代头孢菌素已刻不容缓。     

呼吸道肺炎克雷伯菌耐药性与 CTX-M 型 ESBLs 的研究

目的：探讨来源于呼吸道肺炎克雷伯菌(KP)耐药性与CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的关系。方法采用PCR 扩增和测序分析检测 KP 质粒和染色体上的 CTX-M 型 ESBLs 基因;采用纸片扩散法检测抗菌药物敏感性;使用χ2检验分析相关数据。结果有 CTX-M-1群酶和 CTX-M-25群酶检出,CTX-M 型 ESBLs 的总检出率为39.02%(48株),其中质粒和染色体上同时携带 CTX-M-1群酶的检出率为26.02%(32株)。β-内酰胺类抗菌药物头孢唑林、氟喹诺酮类抗菌药物左旋氧氟沙星、磺胺类抗菌药物复方磺胺甲恶唑等在 CTX-M 型 ESBLs 阳性组的耐药率明显高于阴性组(P <0.05)。结论在来源于呼吸道的 KP 中,在质粒和染色体上同时携带 CTX-M-1群酶基因最常见,CTX-M 型 ESBLs 与 KP 对某些抗菌药物产生耐药性关系密切。     

长春地区部分医院革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的基因类型及分布

目的:了解长春地区部分医院超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)基因在革兰阴性杆菌中的分布及类型,为合理使用抗生素提供依据。方法：对165株临床分离革兰阴性杆菌采用 PCR方法分别扩增SHV、TEM和CTX基因片段。PCR产物经测序后,登录GenBank查询并比较基因类型。结果：在165株革兰阴性杆菌中检出耐药基因及多重耐药基因68株, 其中 TEM型检出率最高（12.12%）,其余依次为CTX-M-1型（4.24%）,SHV型（3.64%）和CTX-M-9型（3.03%）;同时检出 SHV+TEM型、TEM+CTX-M-1型、TEM+CTX-M-9型、TEM+CTX-M-1+CTX-M-9型和 SHV+TEM+CTX -M-1+CTX-M-9型等多组多重耐药基因。随机选择扩增阳性的 PCR产物进行测序,得到 SHV-11亚型、TEM-1亚型、CTX-M-3亚型、CTX-M-15亚型、CTX-M-14和CTX-M-18亚型。结论:长春地区部分医院革兰阴性杆菌ESBLs的基因类型主要为TEM-1亚型、SHV-11亚型、CTX-M-14亚型和CTX-M-18亚型。