深圳市HIV-1毒株的流行状况

目的了解深圳地区人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)毒株亚型及流行情况,分析其传染来源和传播规律。方法应用巢式聚合酶链反应技术,对122例在深圳市发现的HIV-1感染者外周血单个核细胞中的env基因和gag基因进行扩增,并对各基因区核苷酸序列进行测定和分析。结果122份样本中共存在CRF01_AE、CRF08_BC、CRF07_BC3种重组毒株以及B'、B、C3种亚型,其在所有分析样本中的比例分别为45.1%(55/122)、31.1%(38/122)、6.6%(8/122)、14.8%(18/122)、1.6%(2/122)和0.8%(1/122)。CRF01_AE、CRF08_BC、CRF07_BC、B和B'亚型间的组内离散率分别为(4.455±1.478)%、(2.997±1.345)%、(4.380±2.024)%、(5.186±2.487)%和(4.869±2.638)%,与部分国内和国际参考株01AE.TH.90.CM240、97CNGX-9F、CN.97.C54A、B.US.83.JRFL、RL42核苷酸序列间的离散率分别为(5.228±0.823)%、(3.634±1.073)%、(4.233±1.119)%、(4.950±2.564)%、(5.795±2.198)%。CRF07_BC和CRF08_BC亚型以吸毒人群为主,CRF01_AE重组亚型以性途径和吸毒人群为主,B和B'亚型主要分布在静脉吸毒、性传播和献/输血人群。结论深圳地区有3种亚型和3种重组亚型HIV-1毒株流行,CRF01_AE、CRF08_BC重组亚型和B'亚型为主要流行毒株,CRF01_AE是性传播人群中的主要流行毒株,CRF08_BC和CRF01_AE是静脉吸毒人群中的主要流行毒株。     

深圳部分吸毒人群HIV感染者HIV-1分子流行病学调查

目的对深圳市2008年吸毒人群进行HIV-1分子流行病学调查研究,了解本地区吸毒人群HIV-1流行情况、亚型种类、毒株来源、变异情况等,为预防和控制HIV在吸毒人群中的流行提供有价值的资料。方法收集深圳市2008年份吸毒人群HIV-1抗体阳性样本21例,应用巢式聚合酶链式反应（nested—PCR）技术,对该样本膜蛋白基因（env基因）和核心蛋白（gag基因）进行扩增,并对其各基因区核苷酸序列进行测定和分析。结果21例HIV-1阳性样本中共存在CRF01-AE 1种重组毒株以及A11种亚型,其在所有分析样本中的比例分别为90．5％和9．5％;其中12份Env基因样本中,10份为CRF01-AE重组亚型,与国际参考株01AE．TH．90．CM240最近,基因离散率为（9．910±2．432）％,组内离散率为（12．747±3．066）％;2份为A1亚型,与国际参考株a1．gu.92．92ug037最近,基因离散率为（17．15±0．354）％,组内基因离散率0．900％。21份Gag基因样本中,19份为CRF01-AE重组亚型,与国际参考株01AE．TH．90．CM240最近,基因离散率为（5．083±1．341）％,组内离散率为（6．072±1．968）％;2份A1亚型,与国际参考株01ae．en．97．97cngx2f最近,基因离散率为（11．550±0．636）％,组内离散率为2．200％。结论2008年深圳地区HIV-1抗体阳性吸毒人群中HIV-1流行株以CRF01-AE重组亚型为主,并首次在深圳地区吸毒人群中发现A1亚型。     

北京市部分男男同性恋人群中HIV-1分子流行病学研究

目的了解北京市部分男男同性恋(men who have sex with men,MSM)人群HIV-1的分子流行情况,监测该地区人群HIV毒株的最新流行情况。方法提取17例男男同性恋者HIV-1抗体阳性样本全血基因组DNA,直接进行巢式PCR扩增HIVenv基因C2-V5区及gag基因P17-P24区,对PCR产物进行核苷酸序列测定和分析,确定基因亚型。结果17例患者中,共存在CRF01-AE、B亚型和CRF07-BC3种亚型,其中CRF01-AE9例(52.94%),B亚型5例(29.41%),CRF07-BC3例(17.65%)。结论小样本量的流行病学调查显示,北京地区部分男男同性恋人群中主要存在CRF01-AE、B和CRF07-BC3种亚型;CRF01-AE已取代B亚型而成为北京市MSM人群中HIV主要流行亚型,CRF07-BC重组亚型在北京市MSM人群中增长迅速。     

深圳市528例HIV-1感染者的分子流行病学特征

目的 研究深圳市HIV-1病毒亚型、传播途径的分布特征,为艾滋病的整体防控工作提供帮助.方法 采集528例HIV-1病毒感染阳性病例的流行病学信息及标本,运用逆转录巢式聚合酶链反应方法对病毒基因进行扩增、测序,确定基因亚型,并进行统计分析.结果 528例HIV-1感染者中86.6％为性传播途径感染.528份样本中共发现CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC、CRF02_ AG等4种毒株及B、B’、C、A1等4种亚型,其中以CRF01_AE、CRF07_BC、B为主要流行毒株或亚型,其构成情况为54.5％(288/528)、25.0％(132/528)、9.3％(49/528).CRF01_AE在男男同性恋感染者、异性性途径感染者、吸毒感染者的构成比分别为51.2％、59.3％、66.0％.结论 深圳市HIV-1感染者以性传播途径为主.病毒型别呈现多样性特征,性传播、吸毒感染人群中以CRF01_AE为主要流行毒株,血液途径感染人群以B亚型为主要流行毒株.     

沈阳市1份人类免疫缺陷病毒的基因序列分析

目的 :对 2 0 0 4年我院门诊检出的 1例艾滋病感染者体内的HIV 1病毒进行基因序列分析和亚型鉴定。方法 :从HIV 1感染者的全血标本中提取脱氧核糖核酸 (DNA)作为PCR扩增的模板 ,套式引物扩增HIV 1前病毒DNA的p17与p2 4交界部分的基因片断并进行测序。所测定序列与各亚型国际参考株及亚洲流行参考序列进行比较 ,确定被检标本的亚型 ,并进行基因序列分析。结果 :该患HIV 1病毒属于B’亚型毒株 ,经输供血途径感染。该毒株与泰国B’亚型参考株B TH 92 92TH0 14的基因距离最为接近。结论 :在沈阳市有效地控制艾滋病经输供血途径传播应引起我们高度的重视     

2015年河南省新确证HIV-1感染者耐药传播状况研究

目的调查2015年河南省新确证人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者中HIV耐药株的流行情况。方法对河南省4个地区2015年1—6月新确证HIV-1感染者确证时的信息资料进行整理,随后进行血样采集,基因型耐药检测和数据的分析。结果共收集到117例患者的样本和信息,得到63例患者的基因型耐药检测结果。63例患者中有11例被检测到携带耐药株,耐药传播率为17.46%。男性的耐药传播率高于女性(P<0.05),20~39岁病例的耐药传播率高于其他年龄段(P<0.05),B亚型的耐药传播率高于其他亚型(P<0.05),郑州地区病例的耐药传播率高于其他地区(P<0.05)。非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)和核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)耐药突变的发生率分别为15.87%(10/63)、4.76%(3/63)。NRTI耐药突变有M184V、K65R和F227FL,NNRTI耐药突变有V106I/V/M、V179D/V/E、G190E、V108I、Y181C和H221Y。2例病例同时携带NNRTI和NRTI耐药突变。CRF07-BC亚型占比最高,为36.51%(23/63),其次为B亚型[34.92%(22/63)]和CRF01-AE[26.98%(17/63)]。结论河南省新确证HIV-1感染者中已经出现了一定程度的耐药传播,CRF07-BC和CRF01-AE已经成为主流毒株亚型。     

河北省辖区SEN病毒D和H亚型感染的分子流行病学调查

目的了解河北省辖区健康人群中SEN病毒(SENV)感染状况与急、慢性肝病之间的关系。方法以SENV读码框架1区(ORFI)核苷酸序列设计引物,建立巢式聚合酶链反应(nPCR)方法。对348例9种不同人群血清中进行SENV-D和H亚个检测。结果SENV-DNA总感染率为27.O%(94/348),D和N型混合感染占总感染病例的30.8%(29/94)。9种人群中SENVDNA感染率的高低依次为丙型肝炎(47.6%)、非甲-非戊型肝炎(40.0%)、慢性乙地肝炎(31.5%)、单纯乙肝抗体阳性者(28.6%)、急性甲型肝炎(25.8%)、健康人群(22.9%)、急性乙型肝炎(21.2%)、乙肝病毒健康携带者(20.0%)和肝硬化患者(1.7%)。丙型肝炎组和正常人群之间存在显著差异(P<0.01),与急性乙型肝炎、乙肝病毒健康携带者和肝硬化患者也有差异(P<0.05)。非甲-非戊型肝炎与正常人群及各组之间均无统计学差异。结论　在河北省辖区SENV感染广泛存在,而且同一患者存在两种亚型的复合感染。丙型肝炎感染率较高,SENV和HCV可能有相似的传播途径。     

柳州市吸毒者HIV-1病毒流行株34例检测分析

目的 了解流行于柳州市吸毒者艾滋病病毒HIV-1毒株的亚型及各种亚型的分布特点.方法 对34例HIV感染者进行详细的流行病学调查,并采集外周静脉防凝血,提取前病毒DNA进行体外扩增,获得包膜蛋白(env)、核心蛋白(gag)、tat区基因的核酸片段,并对各基因区核苷酸进行测定和分析.结果 发现在所有目标人群中共存在B、C 2种亚型以及CRF07-BC(44.12%)和CRF01AE(55.88%)2种重组毒株.结论 柳州市HIV-1亚型以B、C为主,重组毒株以CRF07-BC和CRF01-AE几乎各占一半,柳州市HIV-1亚型比较单一,控制柳州市HIV-1亚型的多样性,做好防艾任重而道远.     

2003年广州市登革1型病毒流行株的分离及NS2基因序列分析

目的对广州市区2003年仲夏—批疑似登革病毒感染的患进行确诊，并从基因水平分析流行株的可能来源。方法用免疫层析法(ICT)检测早期疑似患的DV—IgN和IgG抗体；同时用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、细胞培养病毒分离分别进行病原的分离和鉴定；对所分离到的毒株进行基因克隆、测序，并与国际参考株及国内流行株相应的序列进行同源性分析，结合患的流行病学资料推测本次流行株的可能来源。结果发病5d内患DV—IgM抗体阳性率为56．5％(13／23)，发病5～10d的患DV—IgM抗体阳性率为66．7％(16／24)；DV—IgG抗体无1例阳性。从18份发病5d内患的血标本中分离病毒7份，经RT—PCR和基因测序检测证实为DVI感染；用RT—PER检测30份早期患血标本，患的阳性率为83．3％(25／30)。基因序列分析表明，2003年流行株与登革1型病毒柬埔寨流行株及我国1997、1999年登革1型病毒流行株的同源性最高，分别为97％、97％、98％。所有患在发病前两个月均在广州市区某大院内居住，无输血史、无外出史。结论2003年广州登革热流行为登革1型病毒感染所致，推测广东可能存在登革1型病毒的疫源地。     

HIV-1 CHLJBF06044包膜特性分析

目的 分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)原代分离株CHLJBF06044包膜糖蛋白的变异性及表型特征.方法 从一名HIV阳性感染者外周血单个核细胞提取DNA,采用保守引物进行HIV病毒包膜直接克隆,进行序列分析及系统树分析.构建一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行感染实验,观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征.结果 共获得2个有功能全Env克隆,分别命名为CHLJBF06044c7和CHLJBF06044c8.获得2个有完整包膜基因的克隆,用全Env氨基酸序列与国内分离株进行系统发育分析结果 表明,该株为B'亚型.对包膜蛋白结构分析结果 显示,分离株CHLJBF06044c7和CHLJBF06044c8包膜在抗原性和亲水性上没有明显差别.感染性检测结果 显示该病毒只能感染U87.CD4.CCR5细胞,不能感染U87.CD4.CXCR4细胞.结论 黑龙江省一名HIV-1阳性者克隆到HIV-1 CHLJBF06044病毒的包膜基因,该病毒属于B'亚型(泰国亚型),为CCR5亲嗜性毒株.     

深圳国际旅行人员HIV-1基因型分析

目的监测深圳口岸国际旅行人员中HIV感染者HIV-1亚型的流行状况。方法从69份HIV-1抗体阳性血浆中提取病毒总RNA,通过逆转录和巢式PCR技术扩增HIV—1 gag和p02基因,再对PCR产物进行核苷酸序列测定,并对所获得的序列进行分析来确定基因亚型。结果69份样品中共发现9种HIV-1亚型和重组亚型,其中CRF01-AE重组亚型28份,B亚型21份,CRF02_AG重组亚型4份,C亚型4份,G亚型3份,CRF07_BC重组亚型3份,CRF08_BC重组亚型3份,A1亚型2份,D亚型1份。这些不同亚型的感染者来自包括中国在内的19个不同国家。结论深圳国际旅行人员中HIV-1亚型和重组亚型种类复杂多样,监测国际旅行人员中HIV感染者基因型分布情况,对及时发现新型毒株,预防和控制艾滋病十分重要。     

深圳地区120株HIV-1膜区和结构蛋白区基因变异分析

目的研究深圳地区HIV-1病毒株在膜区和结构蛋白区基因变异情况,比较不同亚型毒株之间基因离散率的差异。方法收集HIV-1感染者新鲜血浆,提取血浆中HIV-1病毒株RNA,RT-PCR套式扩增env区和gag区基因,基因测序后进行序列比对和分析,构建基因进化树,计算基因离散率。结果各亚型毒株在env区相互之间基因离散率最大的是B亚型和07-BC亚型,最小的是07-BC亚型和08-BC亚型;各亚型毒株在gag区相互之间基因离散率最大的是01_AE亚型和07-BC亚型,最小的是07-BC亚型和C亚型。结论 07-BC、08-BC及C亚型在两个基因片段上基因距离均最近,说明这三个亚型可能有共同的起源。     

辽宁省99例人类免疫缺陷病毒1感染者gag-pol区基因序列分析

目的 研究辽宁省人类免疫缺陷病毒／艾滋病（HIV／AIDS）患者gag-pol区的基因序列特征。方法采集辽宁省99例HIV-1感染者外周静脉血,提取前病毒DNA,经巢式PCR方法扩增gag—pol区2．6kb片段,与HIVS序列数据库中亚型参考序列共同构建系统进化树以区分亚型,并计算gag—pol区不同编码区域的基因离散率和Ks／Ka比值。结果 在辽宁省99例HIV-1感染者中发现A、B’、B、C、G5种亚型,循环重组型CRF01_AE、CRF03_AB、CRF06_cpx、CRF07_BC、CRF08_BC5种循环重组型和循环重组型间的重组ICR07／08。以B’亚型最多见,其次为CRF01_AE。在gag—pol区内,p17区、p2-p6区基因离散率高于p24区、蛋白酶及逆转录酶编码区。但B亚型p24区基因离散率处于较高水平。CRF07_BC和CRF08_BC在gag-pol各区基因离散率及同义替换、错义替换普遍处于较低水平。各亚型毒株的p2-p6区的Ks／Ka值最低,其均值〈1,而CRF01_AE毒株RT区的Ks／Ka值高达10．45。结论 辽宁省流行的HIV-1 gag—pol区亚型十分复杂。p24、蛋白酶及逆转录酶编码区是更为保守的区域。B亚型毒株的p24区承受较大的正向选择压力,CRF01_AE毒株RT区承受了较大的负向选择压力。CRF07_BC和CRF08_BC传入辽宁省的时间较短,奠基者效应明显。     

中国HIV-1 B/C重组病毒的gag-pol区基因序列特征分析

目的对6株中国人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)B／c重组病毒的完整gag基因和部分pol基因进行序列分析,从基因水平上分析是否存在新模式的B／C重组病毒并与其母本毒株进行比较研究,尝试对其不同的生物学表型进行解释。方法从确诊的HIV感染者的全血样本中,提取样本基因组DNA,经套式聚合酶链反应(PCR)扩增后,将扩增产物进行纯化和测序。然后将所得序列进行系统进化树和氨基酸变异分析。用Simplot软件进行序列重组分析并确定重组断点区域;用MEGA软件按断点分段做基因进化树分析以验证该断点的正确性;用GCG软件包的Distance程序计算基因距离。并分析所研究的HIV-1B／C重组毒株长2550bp基因区段的分区段的基因离散率及基因重组对其功能可能造成的影响。结果新疆5份样本均未发现重组断点的变化,而重庆1份样本的逆转录酶区内的B／C断点发生了160个核苷酸的移动。氨基酸序列分析显示,我国流行的B／C重组株与其母本B、C毒株之间发生第286位(R—K／N)和第799位(A—T)的变化。结论我国现在流行的HIV-1 B／C重组病毒仍以CRF07-BC和CRF08-BC两种模式为主,在本研究涉及的基因区内尚未发现新模式重组毒株的流行。初步分析表明我国B／C重组毒株286位和799位氨基酸的变异可能为B／C重组株在我国流行中获得传播优势的原因。     

河南省部分地区HIV流行毒株的基因序列测定及亚型分析

目的:了解河南省内HIV-1流行株的亚型及序列变异特征.方法:在河南省尉氏县采集42例有偿献血HIV-1感染者静脉血,分离单个核细胞(PBMC),用套式聚合酶链反应(nest-PCR)对单个核细胞中前病毒脱氧核糖核酸(DNA)的膜蛋白(env)基因进行扩增,并对其C2-V3及邻区350～450个核苷酸序列进行测定和分析.结果:42份样品间的基因离散率为7.4%.与国际A-E亚型参考序列及部分地区B'亚型代表株序列相比较,河南省尉氏县的42个毒株及流行与我国云南德宏、四川等地的B'亚型毒株序列接近,均属于泰国B'亚型,基因离散率为6.72%系统树分析显示,42份样品仍和泰国B'亚型聚集,远离其他国际亚型.对V3环四肽序列的分析表明,具有泰国B'亚型基因型GPGQ的30例,具有欧美B'亚型的GPGR的7例.结论:根据以上数据及其它资料提示,目前河南省尉氏地区的既往献血人群中,泰国B'亚型依然占主导地位,该流行区毒株的传入与流行在云南德宏州的相同亚型HIV-1毒株密切相关.但是根据其离散率及系统树的结果提示,既往献血人群中泰国B'亚型有向其他亚型进一步变异的趋势,应引起有关部门的注意.     

贵州省新发现HIV-1毒株亚型特征研究

目的 分析研究贵州省HIV-1亚型毒株分布及流行特征,为艾滋病防治及疫苗研制提供科学依据.方法 用套式基因扩增方法(PCR)扩增HIV-1毒株gag基因和env基因并测序分析.结果 128例样本扩增、测序成功119例,其中CRF01-AE亚型62例,CRF07-BC重组亚型49例,CRF08-BC重组亚型2例,B亚型6例.结论 本次研究贵州省HIV-1毒株以新发现的CRF01-AE重组亚型流行为主,CRF07-BC重组亚型次之,多亚型并存;分析结果提示贵州省HIV-1毒株亚型向性传播转变.     

人类免疫缺陷病毒1型AE重组亚型毒株全长gp120基因序列分析

目的研究人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)AE重组型(CRF01-AE)毒株全长gp120基因的变异特征,为针对CRF01-AE重组型的免疫学研究和疫苗的研制提供帮助。方法应用巢式PCR对福建省2004至2005年期间100例HIV-1CRF01-AE感染者随机抽取21份血样的外膜蛋白全长gp120进行扩增、回收、克隆至T载体后测序,应用MEGA、DNASIS、CLUSTAL1·83、N-GLYCOSITE等软件对HIV-1全长gp120序列进行分析。结果基因系统树显示这21份样本属于CRF01-AE重组型HIV-1株,样本组内基因距离为9·5%±2·5%。V3环顶端四肽存在4种类型:GPGQ(71·43%),GPGR(19·05%),GPGH(4·76%),GQGQ(4·76%)。根据V3环关键氨基酸推测辅助受体使用情况的结果显示,16份(76·19%)可能使用CCR5作为辅助受体,1份(4·76%)样本可能使用CCR5/CXCR4序列,4份样本(19·05%)不能做出预测。21条HIV-1全长gp120氨基酸序列中,C1-C5比较保守,而V1-V5变化较大,其中V3相对保守。N糖基化位点分析发现大多数位点较为保守,少数发生糖基化位点丢失和增加。结论福建省大部分CRF01-AE重组型毒株与东南亚代表株关系密切,来源较为复杂,大部分CRF01-AE重组毒株为NSI型,gp120基因变异大,该研究为以后的病毒免疫学和疫苗的研究提供丰富的材料和基础数据。     

密码子优化的中国HIV-1流行亚型gp120共识序列核酸疫苗的构建及其免疫原性的初步研究

目的:构建能表达密码子优化的中国HIV-1流行亚型AE、Bc和B'gp120共识序列的核酸疫苗,并研究其免疫原性.方法:根据HIV-1的分子流行病学资料和包膜糖蛋白的氨基酸序列分析,设计了针对中国流行的AE,BC和B'(ThB)亚型的gp120共识序列.按哺乳动物细胞偏好的密码子对AE.BC和ThB 3个亚型的gp120共识序列分别进行密码子优化,合成优化基因.将密码子优化的gp120基因克隆到核酸疫苗载体pSW3891,构建重组质粒核酸疫苗.将重组质粒转染293T细胞,并以重组质粒疫苗免疫新西兰兔.应用蛋白质免疫印迹法检测转染细胞中gp120蛋白的表达.ELISA方法检测免疫后兔血清中gp120特异性抗体的产生.结果:3个密码子优化的gp120核酸疫苗,均能正确表达gp120.这些gp120核酸疫苗免疫家兔后,能产生HIV-1包膜糖蛋白特异性的抗体.结论:成功构建3个密码子优化的、表达HIV-1中国流行亚型AE,BC和ThB的共识序列的gp120核酸疫苗,能诱导HIV-1包膜蛋白特异的免疫反应.