奥曲肽对人肝癌BEL-7402细胞生长调控的实验研究

目的 观察生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对人肝癌BEL-7402细胞生长调控的影响.方法 培养人肝癌细胞株BEL-7402至对数生长期.MTT比色分析法测定OCT对BEL-7402细胞增殖的影响;流式细胞术分析OCT在10～6mol/L时对BEL-7402细胞周期和凋亡的影响;HE染色观察10-6mol/L OCT作用后BEL-7402细胞形态学改变.结果 1)OCT在一定浓度范围内呈剂量依赖性方式抑制肝癌BEL-7402细胞的生长;2)BEL-7402细胞经10-6mol/L OCT作用后细胞周期发生明显改变.3)10-6mol/L OCT作用后BEL-7402细胞形态学发生明显改变.结论 OCT在抑制肝癌细胞增殖,促进凋亡中起着重要的作用.     

三氧化二砷对肝癌细胞株的体外抑制作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测用As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长及抑制率的影响;凋亡电泳检测电泳条带,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率变化。结果在0.1~50.0μmol/L的浓度范围内As2O3对BEL-7402、HepG2细胞的生长均有明显的抑制作用,且有时间和浓度的依赖性;凋亡电泳显示5μmol/L As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402凋亡率分别是46.7%和53.1%;流式细胞仪DNA组方图上可见细胞G1前期出现亚二倍峰。结论As2O3可抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的生长,且在一定的范围内,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性;As2O3对BEL-7402细胞株的生长抑制作用大于HepG2;As2O3抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长的作用与细胞凋亡有关。     

儿茶素单体EGCG与ECG体外抗人肝癌细胞BEL-7402的作用

目的研究儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)抗人肝癌细胞BEL-7402的作用。方法形态学观察EGCG、ECG作用后BEL-7402细胞的生长;MTT法检测EGCG、ECG对BEL-7402细胞生长的抑制;流式细胞术(FCM)检测EGCG、ECG诱导BEL-7402细胞凋亡水平;RT-PCR检测增殖相关信号分子Gli2和凋亡受体Fas的表达水平。结果 EGCG、ECG均能以时间依赖和浓度依赖的方式抑制BEL-7402细胞生长,并诱导细胞凋亡。EGCG对BEL-7402细胞的生长抑制和诱导凋亡作用均较ECG强。EGCG和ECG均能下调Gli2的表达,但对Fas表达无影响。结论EGCG抗人肝癌BEL-7402细胞作用较ECG强。     

绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞株BEL-7402的杀伤效应

目的探索绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402的杀伤效应。方法采用MTT法检测不同浓度的绿脓杆菌制剂对人肝癌细胞BEL-7402增殖的作用,同时利用电子显微镜、透射电镜观察细胞BEL-7402的形态学变化。结果MTT检测表明：绿脓杆菌制剂为10×107/mL、5×107/mL、2.5×107/mL时对肝癌细胞生长杀伤作用与对照组比较差异有高度统计学意义（P〈0.01）;电子显微镜、透射电镜观察发现肝癌细胞BEL-7402于12、24 h出现凋亡形态学改变,40 h形态学表现为凋亡与坏死并存。结论绿脓杆菌制剂对肝癌细胞BEL-7402生长有抑制作用,诱导细胞凋亡及坏死可能是主要作用机制。     

干扰素-α对人肝癌细胞的抑制作用的研究

目的研究人干扰素-α对人肝癌细胞系BEL-7402增殖及转移的抑制作用，探讨其抗肿瘤作用的机制。方法常规培养的人肝癌细胞株BEL-7402细胞加入人干扰素-α共同孵育，作用24h后，以MTr法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响；Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化。体内实验中以BEL-7402细胞10^6个皮下接种于BALB／C裸鼠，肉眼可见成瘤后以干扰素-α隔天瘤旁皮下注射，观察小鼠的一般状态并测量肿瘤体积的变化；小鼠处死后，HE染色检测肿瘤细胞向附近淋巴结及其它脏器的转移情况，免疫组化法检测肿瘤细胞增殖核抗原的表达：Tunel法检测肿瘤细胞的凋亡。结果人干扰素-α可以明显抑制体外BEL-7402细胞的增殖（抑制率为20．2％）；干扰素-α作用后在Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显减少；干扰素-α治疗组荷瘤小鼠肿瘤体积明显小于对照组；所有小鼠都有近侧腋窝淋巴结的肿瘤转移，未见有其它脏器的转移；干扰素-α组裸鼠生长肿瘤细胞增殖核抗原的表达明显下降，凋亡明显增加。结论干扰素-α可以直接抑制体内、外肝癌细胞株BEL-7402的增殖，对BEL-7402细胞的侵袭有明显的抑制作用；可以抑制裸鼠移植肿瘤细胞增殖核抗原的表达并诱导细胞凋亡；但对BEL-7402细胞局部淋巴结转移无抑制作用。     

姜黄素单体影响肝癌BEL-7402细胞凋亡及其周期蛋白D表达的研究

目的 采用细胞学实验观察3种姜黄素单体对肝癌细胞株BEL-7402的抑制增殖及诱导细胞凋亡的作用强度和机制.方法 以四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Annexin Ⅴ-FITC双标记及流式细胞术(FCM)实验观察3种姜黄素对肝癌细胞株BEL-7402增殖的抑制作用与细胞周期变化,采用 Western blot实验分析3种姜黄素对肝癌细胞株BEL-7402细胞周期蛋白D表达的影响.结果 (1)3种姜黄素均可通过诱导肝癌细胞凋亡而有效抑制肝癌细胞生长增殖,存在时间与剂量效应,以姜黄素Ⅲ抑制效果最强.(2)3种姜黄素通过影响细胞周期生长的调控信号、降低细胞周期蛋白D表达量致使肝癌细胞停滞于G1/S期.结论 3种姜黄素均可通过抑制肝癌细胞周期蛋白D表达而诱导细胞凋亡,有效地抑制肝癌细胞生长增殖,具有很高的临床治疗价值.     

硒蛋氨酸对肝癌细胞株SMMC7402凋亡的诱导作用

目的:研究硒蛋氨酸对肝癌细胞株SMMC7402生长的影响及其作用机制。方法:采用MTT比色法、流式细胞术、DNA片段分析法,研究硒蛋氨酸对肝癌SMMC7402细胞生长、增殖及凋亡的影响。结果:硒蛋氨酸呈时间-剂量依赖性方式抑制SMMC7402细胞生长增殖;G1期前出现亚倍体凋亡峰,细胞阻滞于G0/G1期;DNA电泳出现特征性凋亡梯带。结论:硒蛋氨酸可抑制肝癌细胞株SMMC7402的生长增殖,诱导细胞凋亡。     

粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防己碱（Tetrandrine）对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响，初步探讨粉防己碱对肝癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、集落形成实验观察粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、细胞凋亡荧光染色法及流式细胞术检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用，以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响。结果：MTT比色法、集落形成实验显示，粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖有抑制作用，其抑制效应具有剂量依赖的特点，细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术表明，粉防己碱可诱导7402细胞凋亡，免疫细胞化学法显示，粉防己碱上调Bax蛋白表达，下调Bcl-2蛋白表达。结论：粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应具有剂量依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

纯中药制剂"卡宁"对肝癌细胞的作用

目的：观察抗癌中药“卡宁”对体外培养的肝癌细胞株BEL-7402细胞的凋亡抑制基因bcl-2的影响,探讨其抗肿瘤治疗的作用机制。方法：取体外培养的对数生长期BEL-7402细胞,随机分为4组：对照组,5-氟尿嘧啶组,含药“卡宁”血清1组（10％含药血清组）和含药“卡宁”血清2组（15％含药血清组）;采用MTT比色法观察不同浓度含药血清对体外培养的人肝癌细胞株BEL-7402细胞的抑制能力,PCR检测其对凋亡抑制基因bcl-2的影响。结果：PCR结果显示．“卡宁”1、2组bcl-2的活性明显低于对照组（P=0．038）;MTT结果显示,细胞生长抑制率随含药血清作用时间及浓度的增加而增大（P〈0．05）,15％含药血清72h的作用最强。结论：对肿瘤细胞bcl-2的抑制可能是抗癌中药“卡宁”诱导肿瘤细胞凋亡作用机制的一部分。     

二硫化二砷对肝癌细胞凋亡和坏死的影响

目的观察二硫化二砷（As2S2）对人肝癌细胞株（BEL-7402）凋亡和坏死的影响。方法人肝癌细胞株BEL-7402经不同浓度A82s2处理后,采用MTT法进行细胞增殖抑制率的测定,台盼蓝排染法观察As2S2对肝癌细胞的细胞毒作用,通过流式细胞仪定量检测细胞凋亡和坏死的情况,同时检测凋亡相关蛋白Fas和Apo2．7的表达。结果As2S2对细胞有明显细胞毒作用,并且可诱导细胞凋亡的产生,上调Apo2．7和Fas蛋白的表达。结论A22S2具有促肝癌细胞凋亡和坏死的作用。     

反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染对人肝癌细胞增生及凋亡的影响

为研究胰岛素样生长因子 I(IGF I)反义寡核苷酸转染对人肝癌细胞增生、分化及凋亡的影响 ,探讨寡核苷酸转染治疗肝癌的可行性 ,利用反义核酸技术 ,合成针对IGF I的寡核苷酸片段 ,利用脂质体包裹反义IGF I寡核苷酸片段瞬时转染人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞 ,MTT法检测细胞增生 ;放免法检测培养细胞上清中AFP、CEA的分泌量 ;采用末端标记 (Tunel)法检测细胞凋亡的变化。结果发现转染反义IGF I寡核苷酸可使人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞增生下降 ,AFP、CEA表达降低 ,凋亡细胞数量增多。反义IGF I寡核苷酸转染人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞可以降低细胞增生、减少细胞去分化并诱导肝癌细胞凋亡     

Hepsin蛋白对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨Hepsin蛋白对肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法:运用RT-PCR技术检测肝癌组织样品肝癌细胞系中Hepsin基因的表达水平,并从原发性肝癌患者的癌组织中扩增Hepsin基因编码区序列,该序列被克隆并构建pCMV-tag-HS表达质粒。将pCMV-tag-HS表达质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞、Bel-7402细胞,观察Hepsin蛋白对肝癌细胞的增殖能力和细胞凋亡效应的影响。结果:Hepsin基因在临床肝癌组织和人正常肝细胞L-02细胞中高表达,在人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和临床肝癌癌旁组织不表达或低表达,Hepsin蛋白可以增强肝癌细胞系的增殖能力,同时抑制肝癌细胞凋亡。结论:Hepsin蛋白促进肝癌细胞生长并抑制肝癌细胞凋亡。     

亚砷酸体外对人肝癌细胞株BEL-7402影响的初步研究

目的 体外培养人肝癌细胞株BEL－7402,从多个角度探讨三氧化二砷（As2O3）的抗肿瘤作用及其机制。方法 应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透谢电镜、流式细胞仪,分别对不同浓度加药组及对照组BEL－7402细胞的存活。形态学改变,细胞DNA含量的分布进行了观察和测定。结果 0.5、1、2μmol/L As2O3均能抑制人肝癌细胞株BEL－7402细胞的生长增殖。流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0／G1期细胞减少,S期细胞增多;电镜下,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹,0.5μmol/L As2O3组细胞核质比减少、核变圆、胞浆内出现分化良好的细胞器, 0.5、1、2μmol/L As2O3组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成。结论 三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖,而且诱导细胞凋亡。     

缺氧时三氧化二砷对肝癌细胞株BEL-7402生长的影响

目的 探讨由二氯化钴(CoCl2)诱导的化学性缺氧条件下,不同浓度三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株BEL-7402生长的影响.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法,测定常氧和缺氧条件下,不同浓度As2O3对肝癌细胞BEL-7402的生长抑制作用.结果 不同浓...     

雄黄抗人肝癌BEL-7402细胞作用

目的:观察雄黄体外抗人肝癌BEL-7402细胞作用和作用机制.方法:采用MTS法和细胞克隆实验法观察雄黄对BEL-7402细胞增殖的影响,应用PI/Hoechest33258双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分光光度计检测细胞内钙和线粒体膜电位.结果:与阴性对照组比,雄黄能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞的生长和...     

抗坏血酸促进三氧化二砷诱导的肝癌细胞毒性及其相关机制研究

目的：探讨抗干血酸(AA)对三氧化二砷(AT)诱导人肝癌细胞凋亡的协同效应，为改善三氧化二砷临床治疗人肝癌细胞提供理论基础。方法：体外培养人肝癌细胞株BEL-7402，用MTT和免疫印迹的方法分别评价AT和(或)AA对其生长抑制和胞内两个信号分子的影响。结果：微摩尔剂量的AT能抑制人肝癌细胞BEL-7402的异常生长，通过caspase-3的激活诱导其凋亡，并激活了ERKs信号蛋白，其作用有明显的剂量依赖性。AA对BEL-7402无明显的作用，但能有效的通过caspase-3而不是ERKs的激活促进AT对肝癌细胞的凋亡效应。结论：ERKs和caspase-3信号蛋白可能分别参与了砷剂诱导的人肝癌细胞促分化和凋亡效应，AT和AA对肝癌细胞的作用有协同性，他们通过caaspase-3而不是ERKs的激活进一步抑制了肝癌的生长。诱导其凋亡。     

紫杉醇、5-氟脲嘧啶抑制肝癌细胞BEL-7402生长和诱导凋亡的比较

OBJECTIVE: To investigate the effect of paclitaxel and 5-flurouracil (5-Fu) on growth inhibition and apoptosis of human hepatoma BEL-7402 cells. METHODS: Growth inhibition of BEL-7402 cells treated with paclitaxel and 5-Fu, respectively, was measured by ATP-tumor chemosensitivity assay (ATP-TCA), and the cell cycle kinetics and apoptosis were analyzed by flow cytometry and microscopic examination. RESULTS: BEL-7402 cells were highly sensitive to paclitaxel with growth inhibition observed in both dose- and time-dependent manners (IC(50)=5.58 x 10(-7) mol/L). Paclitaxel induced significantly higher rate of cell apoptosis than the control group (P<0.05) but significantly lower rate than that induced by 5-Fu (P<0.01). Necrosis was observed predominantly in paclitaxel-treated cells whereas 5-Fu caused mainly cell apoptosis (P<0.05). Levels of apoptosis increased in proportion to the decrement of paclitaxel concentration but directly proportional to increment of 5-Fu concentration. CONCLUSIONS: Paclitaxel and 5-Fu are effective in inducing growth inhibition and apoptosis of BEL-7402 cells. While 5-Fu causes mainly apoptosis in hepatoma cells, the anticancer mechanism of paclitaxel is predominantly through induction of necrosis.     

紫杉醇、5-氟脲嘧啶抑制肝癌细胞BEL-7402生长和诱导凋亡的比较

目的 研究紫杉醇、5-氟脲嘧啶(5-Fu)抑制肝癌细胞BEL-7402增殖和诱导凋亡的效果。方法 采用ATP生物发光法检测肝癌细胞株的药物敏感性,以流式细胞术、形态学方法分析细胞凋亡和细胞周期。结果 BEL-7402对紫杉醇高度敏感,对5-Fu低度敏感,抑制作用均存在剂量、时间效应。紫杉醇组3种浓度诱导细胞凋亡率均明显高于无药对照组(P<0.05),但低于5-Fu组(P<0.01);紫杉醇组细胞死亡率显著高于5-Fu组(P<0.05)。紫杉醇诱导凋亡率随药物浓度降低而增加,而5-Fu诱导凋亡率随药物浓度降低而降低。结论 紫杉醇可抑制BEL-7402肝癌细胞增殖和诱导凋亡。5-Fu抑癌以诱导细胞凋亡为主,紫杉醇则以引起细胞坏死为主。     

缺氧时三氧化二砷对5-氟尿嘧啶抗肝癌细胞株BEL-7402敏感性的影响

目的探讨缺氧条件下,不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-FU)联合0.5μmol/L浓度三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株BEL-7402生长抑制的影响。方法用二氯化钴(CoCl2)诱导细胞培养的化学性缺氧条件,及四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定缺氧条件下不同浓度5-FU及5-FU联合As2O3对肝癌细胞BEL-7402的生长抑制作用。结果在化学性缺氧条件下,不同浓度5-FU联合As2O3对肝癌细胞株BEL-7402生长抑制作用比单用5-FU有统计学差别(P﹤0.05),呈剂量-效应依赖关系。结论在CoCl2诱导的化学缺氧条件下,非细胞毒剂量As2O3具有改善缺氧状态下5-FU对人肝癌细胞BEL-7402化疗敏感性下降的作用。