结直肠癌淋巴微转移的判定及相关因素分析

目的探讨结直肠癌患者淋巴结微转移灶的特点及与临床病理参数间的关系。方法收集2010年1月至2014年1月我院收治的65名结直肠癌患者的临床资料,对其淋巴结进行免疫组化检测,分析微转移灶与临床病理特征间的相关性。结果对65例结直肠癌患者的624枚淋巴结进行了CK19及CEA免疫组化染色。结果显示:淋巴结阳性表达率为21.79%(136/624),52.31%(34/65)的患者淋巴结呈阳性表达;CK19阳性表达率为15.54%(97/624),46.15%(30/65)的患者淋巴结染色为阳性;CEA阳性表达率为20.19%(126/624),47.69%(31/65)的患者淋巴结染色为阳性。淋巴结CK19及CEA阳性表达与肿瘤大小相关(P0.05),而与年龄、性别、肿瘤部位、TNM分期、分化程度及有无血管浸润无显著相关性(P0.05)。结论免疫组化方法是检测结直肠癌微转移的有效手段,结直肠癌的微转移的发生与有无淋巴结浸润及肿瘤大小相关。     

非小细胞肺癌患者淋巴组织CK19、TTF-1的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌患者淋巴组织的细胞角蛋白19(CK19)、甲状腺转录因子1(TTF-1)表达情况及其临床意义。方法选取2002年1月至2008年12月我院确诊的非小细胞肺癌Ⅱ期患者68例作为研究对象,收集患者手术切除的淋巴结标本进行HE染色和免疫组化染色,将HE染色和免疫组化染色检测结果任一阳性的患者设为淋巴转移组,HE染色和免疫组化染色检测结果均为阴性的患者设为非淋巴转移组。采用免疫组化染色法检测淋巴转移组和非淋巴转移组患者的CK19、TTF-1表达情况。将淋巴组织CK19、TTF-1检测结果均为阳性的患者设为微转移组,将CK19、TTF-1检测结果单阴性或全阴性的患者设为无微转移组,随访3年,比较微转移组和无微转移组患者的3年生存率。结果淋巴结转移组患者淋巴组织的TTF-1、CK19阳性表达率明显高于无淋巴结转移组患者,差异有统计学意义(P 0. 05)。淋巴结微转移组患者的3年生存率(57. 14%)明显低于无微转移组患者(88. 89%),差异有统计学意义(P 0. 05)。结论非小细胞肺癌患者淋巴组织中CK19、TTF-1的表达与患者淋巴结转移和术后生存的关系密切,与肺癌发生微转移有关。     

巢式RT-PCR技术检测肺癌患者外周血及淋巴结中微量转移癌细胞

目的　建立检测肺癌患者外周血及淋巴结中微转移癌细胞的敏感分子检测方法 ,并探讨其临床应用价值。方法　采用巢式反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术特异引物扩增细胞角蛋白 19(CK19) m RNA,检测76例肺癌患者外周血及淋巴结中 CK19m RNA的表达情况。结果　 76例肺癌患者中 39例外周血 CK19m RNA阳性 ,阳性率为 5 1.3% (39/ 76 ) ,2 7例肺良性病变中仅 1例阳性 ,阳性率 3.7% ,15例健康对照者均为阴性。全部肺癌患者 15 7枚淋巴结中 CK19m RNA阳性率 38.9% (6 1/ 15 7) ,常规病理方法检测淋巴结阳性率 14 .6 % (2 3/15 7) ,两者相比 ,P<0 .0 5 ;HE染色阴性的 134枚淋巴结中 ,经巢式 RT- PCR技术检测证实存在癌转移的阳性率为 2 8.3% (38/ 134) ,两者相比 ,P<0 .0 5。结论　巢式 RT- PCR技术是一种特异性和敏感性均较高的微量癌细胞转移检测方法 ,可能有助于肺癌微转移的早期诊断     

CK-19与GPC-3联合检测在肝细胞癌和胆管细胞癌诊断中的价值

目的探讨免疫组化联合检测细胞角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)及磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(glypican-3,GPC-3)在肝细胞癌和胆管细胞癌诊断中的价值。方法采用CK-19及GPC-3免疫组化法对85例肝细胞癌组织和72例胆管细胞癌组织进行检测,比较CK-19及GPC-3在不同组织中的表达情况。结果在GPC-3免疫组化检测中,肝细胞癌组织中检测出75例阳性,阳性表达率高达88.24%,且中低分化组织阳性表达率明显高于高分化组织(P0.01)。而胆管细胞癌组织中仅有11例表达阳性,阳性表达率为15.28%,两种组织阳性表达率比较差异有统计学意义(P0.01)。在CK-19免疫组化检测中,胆管细胞癌组织呈现高阳性表达,表达率为94.44%,且中低分化组织阳性表达率明显高于高分化组织,而肝细胞癌表达均为阴性,与胆管细胞癌阳性表达率比较差异有统计学意义(P0.01)。结论GPC-3在肝细胞癌中呈现高表达,而CK-19仅在胆管细胞癌表达,联合检测CK-19与GPC-3对鉴别诊断肝细胞癌和胆管细胞癌有参考价值。     

VEGF和CD44v6过表达与乳腺癌浸润转移的关系

目的检测血管内皮生长因子(VEGF)和转移相关黏附分子44v6(CD44v6)在乳腺癌中的表达情况,探讨两者与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组化SP法检测92例乳腺浸润性癌中VEGF、CD44v6的表达情况。结果 VEGF在正常乳腺组织和乳腺癌中的阳性表达率分别为6.7%(3/45)和90.2%(83/92),且VEGF在淋巴结转移组中的阳性表达率(53/55)明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)。CD44v6在正常乳腺组织及乳腺癌中的阳性表达率分别为8.9%(4/45)和85.9%(79/92),而且CD44v6在淋巴结转移组中的阳性表达率(51/55)明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)。VEGF和CD44v6表达呈正相关关系(r=0.497,P<0.05)。结论 VEGF、CD44v6在乳腺癌组织中高表达,且均与淋巴结转移有关(P<0.05),两者可能在乳腺癌的远处转移中起协同作用。     

AKP染色鉴别组织内死活血吸虫虫卵的条件探索与效果观察

目的探索碱性磷酸酶(AKP)染色条件,观察其对宿主组织内死活血吸虫虫卵的鉴别效果。方法采用偶氮偶联法和NBT/BCIP两种AKP酶染色方法对血吸虫感染后第45 d鼠(未治疗组10只)和经吡喹酮治疗后3个月鼠(治疗组10只)的肝、肠组织内完整虫卵,冰冻切片虫卵和石蜡切片虫卵进行比较检测和分析;收集12份有近、远期变性虫卵的血吸虫病患者肠黏膜活检标本,进行虫卵染色,计数虫卵阳性数,评价两种AKP染色法对血吸虫死卵和活卵鉴定的效果。结果两种AKP染色方法对未治疗组小鼠组织内完整虫卵染色仅半数阳性,其阳性反应主要取决于完整虫卵是否裸露。未治疗组小鼠肠组织石蜡切片和冰冻切片偶氮偶联染色法阳性率分别为97.72%和92.47%,NBT/BCIP染色法阳性率分别为97.65%和98.49%;肝组织两种染色法的阳性率分别为81.17%、86.55%和74.36%、95.32%。在冰冻切片中,肝、肠组织偶氮偶联检测的敏感性均低于NBT/BCIP法;治疗组两法的阳性率均为0。12份临床标本,偶氮偶联法检出1例阳性,NBT/BCIP法检出3例阳性。结论 NBT/BCIP AKP染色法可用于鉴别组织切片中血吸虫虫卵的死活,但在实际应...     

女性乳腺癌原发灶前哨淋巴结微转移与nm23-H1的表达

目的探讨如何早期发现处于亚临床阶段的乳腺癌隐匿转移灶。方法取手术切除乳腺癌原发灶标本51例，采用前哨淋巴结活检（SLNB）方法，HE染色法，免疫组织化学染色（IHC）法。结果HE法检测前哨淋巴结（SEN）的结果同IHC法结果比较，fHC法检出率明显高于HE法，（P〈0．05）。结论以CK-19为探针的IHC法检测能提高乳腺癌SLN微转移的检出率，降低其假阴性率，nm23-H1在乳腺癌中呈高表达。     

肝素酶基因表达与食管癌转移的关系

目的　探讨肝素酶基因表达与食管癌转移的关系。方法　采用逆转录聚合酶链反应技术 ( RT-PCR)检测 5 4例食管癌组织、癌旁组织及正常粘膜中肝素酶基因的表达。结果　有淋巴结转移的食管癌癌组织中肝素酶基因阳性表达率为 90 .5 % ( 19/ 2 1) ,癌旁组织为 6 1.9% ( 13/ 2 1) ,正常粘膜为 0 ( 0 / 2 1)。无淋巴结转移的食管癌癌组织中肝素酶基因阳性表达率为 15 .2 % ( 5 / 33) ,癌旁组织为 6 % ( 2 / 33) ,正常粘膜为 0 ( 0 / 33)。有淋巴结转移的食管癌组织及癌旁组织中肝素酶基因阳性表达率均高于无淋巴结转移者 ,二者相比差异均有显著性 (癌组织 P<0 .0 0 1,癌旁组织 P<0 .0 5 )。结论　肝素酶基因表达可能与食管癌发生转移有关 ,其可能成为预测食管癌转移的指标     

血管内皮生长因子、微血管密度与食管鳞癌临床病理及预后的关系

为探讨血管内皮生长因子 (VEGF)、微血管密度 (MVD)与食管鳞癌临床病理和预后的关系 ,对 4 4例原发食管鳞癌、6例食管不典型增生及 10例正常人的食管组织石蜡切片进行血管标记和染色 ,检测 VEGF表达及 MVD。结果显示 ,食管鳞癌患者 VEGF阳性表达率为 6 5 .9% (2 9/ 4 4 ) ,VEGF表达与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移及 TNM分期显著相关 ;MVD与分化程度、淋巴结转移、TNM分期明显相关 ;VEGF表达阳性组 MVD(47.34± 11.5 7条 )明显高于阴性组 (33.73± 11.33条 ) ,VEGF表达与 MVD具有相关性 ;VEGF阴性组和阳性组术后 3年生存率有显著差异 ,高 MVD者和低 MVD者术后 3年生存率有显著差异 (P<0 .0 1)。认为食管鳞癌VEGF表达增强 ,MVD增高 ;VEGF表达在食管鳞癌的生长、浸润和转移过程中起重要作用 ;VEGF和 MVD对于判断食管鳞癌预后有重要参考价值     

XIAP、c-Jun在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨X-连锁调亡抑制蛋白(XIAP)和氨基端激酶(c-Jun)在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌的关系。方法应用免疫组织化学法检测50例乳腺癌组织及50例乳腺纤维腺瘤组织中XIAP和c-Jun的表达,并分析其临床意义。结果 XIAP和c-Jun在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为76%(38/50)和82%(41/50),在乳腺纤维腺瘤中的阳性表达率分别为30%(15/50)和22%(11/50),在乳腺癌中的阳性表达明显高于乳腺纤维腺瘤(P<0.01)。XIAP和c-Jun的阳性表达均与有无淋巴结转移密切相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤直径、组织学分级及临床分期均无明显相关(P>0.05);XIAP的阳性表达和c-Jun的阳性表达呈正相关。结论 XIAP和c-Jun在乳腺癌的发病中具有协同作用,其高表达可能促进淋巴结转移。     

乳腺癌外周血细胞角蛋白19 mRNA的检测及临床价值

目的应用荧光定量RT-PCR检测乳腺癌外周血中的表达情况,并评价其表达的临床意义。方法用荧光定量RT-PCR方法检测49例乳腺癌患者外周血CK19mRNA表达。结果49例乳腺癌患者外周血中CK19mRNA检测阳性28例,阳性率57.1%,统计结果显示乳腺癌患者外周血CK19mRNA的表达阳性率在患者不同年龄、病理类别、临床分期、ER、PR状态的各组差异无显著性(P>0.05),在淋巴结转移状态间有显著差异。结论CK19mRNA可作为RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血微转移的分子标志物,有助于早期预测乳腺癌发生血道微转移,指导临床治疗。     

基因检测胃癌区域淋巴结微转移的实验研究

目的　探讨 RT- PCR检测胃癌区域淋巴结微转移及其意义。方法　以病理组织学和 RT- PCR扩增角蛋白 1 9(K1 9)对 1 8例胃癌患者的癌组织标本及 78个淋巴结进行检测。结果　 1 8例胃癌癌组织均有 K1 9m RNA表达 ,78个淋巴结中 ,组织学阳性 1 6个 ,而 RT- PCR阳性达 2 6个。结论　 RT- PCR扩增 K1 9m RNA检测胃癌区域淋巴结微转移是一种敏感、特异的检测方法 ,结合淋巴结微转移的情况 ,对胃癌患者手术淋巴结清扫范围有一定的参考价值 ,有助于更精确的分期及对预后的判断。     

Molecular diagnostic tools for the detection of nodal micrometastases in prostate cancer patients undergoing radical prostatectomy with extended pelvic lymph node dissection: a prospective study

Background: Routine pathological examination can miss micro-metastatic tumor foci in the lymph nodes (LN) of patients with prostate cancer (PCa) that undergo radical prostatectomy and pelvic lymph node dissection (PLND). The aim of the present prospective study was to evaluate the impact of micrometastases assessed by serial section (SS), immunohistochemistry (IHC), and Real-time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) in patients undergoing radical prostatectomy with extended PLND. Materials and methods: 32 consecutive patients who underwent radical prostatectomy with extended PLND (obturator, internal/external and distal 2cm common iliac lymph-nodes (LN)) for intermediate (clinical T1c-T2 and PSA:10-20 ng/mL and clinical Gleason Score = 7) or high (clinical stage T3 or PSA>20 or clinical Gleason Score = 8-10) PCa were enrolled. The nodes were processed by the one uropathologist, both according to the routine pathological examination (analysis of the central section for 4 mm nodes or every 2 mm for LN>4 mm), which served as comparative method, both according to SS, IHC with antibodies against PSA and broad-spectrum Cytokeratins (BSCK), and quantitative RT-PCR targeting PSA, PSMA (PS Membrane Antigen), and Glucuronidase-S-Beta (GUSB) mRNA, that are over-expressed in prostatic cancer cells. Results: A total of 628 LN were analyzed, with a mean number of LN removed of 19.6 (SD = 7.2). Applying the routine pathological examination, 10 (31.2%) patients and 23 (3.9%) LN resulted positive for nodal involvement, with mean positive LN of 2.2 (SD = 1.4). After applying the SS and the molecular method of analysis (IHC and RT-PCR), micrometastases were found in 7 LN (SS showed micrometastases in 3 of them, IHC in 6 of them and RT-PCR in 7 of them); a total of 3 (9.3%) node-negative patients showed micrometastases at routine pathological examination (in 2 patients with RT-PCR and in 1 with IHC). Conclusions: The significance of micrometastases in PCa and the potential therapeutic role of PLND is not yet clarified, but the molecular analysis of the LN can detect a significant percentage of patients who harbor micro-metastatic PCa missed at routine pathological examination, and can enhance the accuracy of lymphadenectomy as a staging method.     

细胞角蛋白-19基因在甲状腺癌中的表达及意义

目的探讨细胞角蛋白-19（CK-19）mRNA在甲状腺癌中的表达及其意义。方法用RT—PCR方法检测甲状腺癌（27例）、良性甲状腺疾病（18例）及正常甲状腺（9例）组织中CK-19mRNA的表达。结果CK-19mRNA在甲状腺癌组中表达为2．63±2．14,与非癌组相比．P〈0．05;在有淋巴转移的甲状腺癌组的表达为3．41±2．63,明显高于无转移者的1．79±0．97,P〈0．05。结论CK-19mRNA在甲状腺癌组织中表达明显增强,且与淋巴结转移有关,提示CK-19可能参与了甲状腺癌的发生发展,并对肿瘤转移有促进作用。     

CEA mRNA在乳腺癌患者外周血中的表达及临床意义

目的以套式RT—PCR方法检测癌胚抗原（CEA）mRNA在乳腺癌患者外周血中的表达,并探讨其在乳腺癌诊断与治疗中的意义。方法收集乳腺癌患者52例（乳腺癌组）、乳腺增生性病变患者40例（增生组）、健康查体者20例（对照组）,采集外周血样本。分别用套式RT—PCR法检测其外周血中CEAmRNA的表达。结果乳腺癌组外周血CEAmRNA阳性率为40．4％,增生组及对照组分别为5．0%和0,两两比较均有显著差异（P均〈0．01）;乳腺癌组TNMⅢ期、Ⅳ期患者CEAmRNA阳性表达率明显高于Ⅰ期、Ⅱ期患者,外周血CEAmRNA阳性表达与淋巴结转移密切相关。结论外周血CEAmRNA表达可作为乳腺癌转移的一个辅助监测指标。     

乳腺癌前哨淋巴结活检假阴性原因分析

目的 探讨染料注射法识别乳腺癌前哨淋巴结（SLN）活检时出现假阴性的原因。方法 本组67例原发性乳腺癌患者,应用美蓝进行前哨淋巴结定位和活检,随后行腋窝淋巴结清扫（ALND）,行SLN、腋淋巴结（ALN）病理学检查。结果 67例乳腺癌患者中,64例（95.5%）检测到SLN,SLN预测ALN状态的敏感性为91.2%（31/34）,准确性为91.0%（61/67）,假阴性8.8%（3/34）。结论 假阴性与原发肿瘤过大、肿瘤位置、年龄、病理学检查方法有关。     

Detection of disseminated pancreatic cells by amplification of cytokeratin-19 with quantitative RT-PCR in blood, bone marrow and peritoneal lavage of pancreatic carcinoma patients

AIM To evaluate the diagnostic potential of cytokeratin-19 (CK-19) mRNA for the detection of disseminated tumor cells in blood, bone marrow and peritoneal lavage in patients with ductal adenocarcinoma of the pancreas.METHODS Sixty-eight patients with pancreatic cancer (n = 37), chronic pancreatitis (n = 16), and non-pancreatic benign surgical diseases (n = 15, control group)were included in the study. Venous blood was taken preoperatively, intraoperatively and at postoperative d 1 and 10. Preoperative bone marrow aspirates and peritoneal lavage taken before mobilization of the tumor were analyzed. All samples were evaluated for disseminated tumor cells by CK-19-specific nested-PCR and quantitative fluorogenic RT-PCR.RESULTS CK-19 mRNA expression was increased in 24 (64%) blood samples and 11 (30%) of the peritoneal lavage samples in the patients with pancreatic cancer.In 15 (40%) of the patients with pancreatic cancer,disseminated tumor cells were detected in venous blood and bone marrow and/or peritoneal lavage. In the peritoneal lavage, the detection rates were correlated with the tumor size and the tumor differentiation. CK-19 levels were increased in pT3/T4 and moderately/poorly differentiated tumors (G2/G3). Pancreatic cancer patients with at least one CK-19 mRNA-positive sample showed a trend towards shorter survival. Pancreatic cancer patients showed significantly increased detection rates of disseminated tumor cells in blood and peritoneal lavage compared to the controls and the patients with chronic pancreatitis.CONCLUSION Disseminated tumor cells can be detected in patients with pancreatic ductal adenocarcinoma by CK-19 fluorogenic RT-PCR. In peritoneal lavage, detection rate is correlated with tumor stage and differentiation. In the clinical use, CK-19 is suitable for the distinction between malignant and benign pancreatic disease in combination with other tumor-specific markers.