脑出血后细胞凋亡和Caspase-3的关系

目的:研究脑出血后血肿周围水肿带细胞凋亡随出血时相点的变化规律,以及脑出血后神经细胞凋亡和Caspase-3的关系,为脑出血的治疗提供理论依据. 方法:健康雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组、Ⅳ型胶原酶/肝素钠组,分为术后6 h, 12 h, 24 h, 3 d, 7 d共5个时相点. 术后制作冰冻切片,对切片进行TUNEL染色,以及Caspase-3免疫组化和原位杂交染色,之后利用图像分析仪,观察阳性细胞数. 结果:脑出血后6 h后血肿周围出现TUNEL阳性细胞,3 d左右TUNEL阳性细胞范围最广. Caspase-3的表达和细胞凋亡的变化趋势一致. 结论:脑出血后存在细胞凋亡,且细胞凋亡和Caspase-3表达变化趋势一致,提示Caspase-3的表达决定脑出血后细胞凋亡的发生.     

微创血肿抽吸术后大鼠脑出血周围组织细胞凋亡的研究

目的探讨脑出血周围组织神经细胞凋亡相关基因热休克蛋白70(HSP70)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化规律及微创血肿抽吸干预治疗对神经细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠75只分为假手术组、脑出血组、血肿抽吸组,各组又分为12 h、1 d、2 d、3 d、7 d 5个时间点。假手术组注入尾状核2μL生理盐水,脑出血组注入大鼠尾状核2μLⅣ胶原酶。血肿抽吸组是在脑出血模型制作6 h后进行血肿抽吸。各组分别于各时间点处死大鼠取脑组织,采用免疫组织化学染色测定各组大鼠脑出血周围HSP70、Caspase-3蛋白的表达并进行统计学处理。结果 HSP70、Caspase-3含量脑出血组较血肿抽吸组及假手术组均明显增高(P<0.05),血肿抽吸组比假手术组明显增高(P<0.05)。HSP70表达在12 h出现,3 d达高峰,随后表达逐渐减少。Caspase-3蛋白的表达在12 h出现,在3 d时达高峰,第7天表达明显减少。结论 Caspase-3蛋白高表达说明在脑出血第3天神经细胞凋亡和损害达到高峰,随后逐渐降低,HSP70高表达对出血脑组织具有明显的保护效应,且对Caspase-3蛋白的表达具有抑制作用,而且在早期对脑出血进行微创血肿抽吸干预治疗可以减少脑出血后神经细胞的凋亡。     

大鼠脑出血后细胞凋亡和bcl-2表达间关系的研究

目的研究脑出血后血肿周围水肿带内细胞凋亡与bcl-2表达的关系.方法使用胶原酶法建立大鼠脑出血模型.于脑出血后6、12、24 h、3、7 d选取血肿灶周围脑组织制成冰冻切片,对切片进行相应染色:用TUNEL法观察血肿灶周围细胞凋亡,通过免疫组化和原位杂交方法分别从mRNA和蛋白的水平观察bcl-2的表达.对染色结果进行图像分析及统计学处理,分析细胞凋亡与bcl-2表达的关系.结果脑出血6 h后血肿周围出现TUNEL阳性细胞,此时bcl-2的表达降低;之后凋亡细胞数量逐渐增加,至3 d达到高峰,此时bcl-2的表达仍处于低水平;3 d至7 d凋亡细胞数量减少,而bcl-2的表达增加.结论脑出血后血肿周围存在细胞凋亡,而bcl-2的表达降低是脑出血后发生细胞凋亡的重要步骤.     

凝血酶与出血性脑组织损伤的相关性动物实验研究

目的 观察大鼠脑内注入凝血酶或全血后神经细胞凋亡和脑组织水肿的动态改变，并观察凝血酶特异性抑制剂（水蛭素）能否减轻凝血酶对脑组织的损伤。方法 成年168只SD大鼠随机分为5组，即凝血酶组、脑出血组、凝血酶加水蛭素组、脑出血加水蛭素组和生理盐水对照组，分别向大鼠右侧基底节区注入凝血酶、全血、凝血酶加水蛭素、全血加水蛭素和生理盐水，于注射后6、24、72h，7d取脑组织，检测脑组织水含量（干湿重法）、神经细胞的凋亡情况（Tunel法）。结果 与生理盐水对照组比较，凝血酶组和脑出血组的脑组织水含量及凋亡细胞数明显增加。时效学研究显示脑出血组脑组织水肿和神经细胞凋亡开始于术后6h，72h达高峰，7d后下降；凝血酶组开始于术后6h，24h达高峰，72h下降。与生理盐水对照组比较，脑出血组术后6h凋亡细胞数无统计学差异（P〉0、05），凝血酶组注入凝血酶后6h凋亡细胞数有明显增加（P〈0、05）。水蛭素干预后脑出血组和凝血酶组的脑组织水含量和神经细胞凋亡数明显降低（P〈0、05）。结论 大剂量凝血酶诱导的组织水肿和细胞凋亡在24h达高峰，脑出血后组织水肿及细胞凋亡均于72h达高峰可能与脑出血后凝血酶逐渐由血肿释放有关，水蛭素能显著减轻脑组织水肿和神经细胞凋亡。     

大鼠实验性脑出血后细胞凋亡和神经损伤的关系

目的　研究脑出血后血肿周围水肿带细胞凋亡随出血时相点的变化规律 ,以及脑出血后神经细胞凋亡和神经功能的关系。方法　健康雄性Wistar大鼠体质量 2 0 0～ 2 5 0g ,随机分组 ,脑内尾状核注射分别Ⅳ型胶原酶 肝素生理盐水溶液、单纯生理盐水 ,分为术后 6、12、2 4h、3、7d共 5个时相点。术后在相应时相点评价大鼠神经功能缺损后 ,制作冰冻切片 ,对切片进行HE染色和TUNEL染色 ,之后利用图像分析仪 ,观察阳性细胞数。结果　脑出血后动物出现不同程度神经功能缺损 ,在 3d神经功能损害最严重。出血 6h后血肿周围出现TUNEL阳性细胞 ,3d左右TUNEL阳性细胞范围最广。结论　脑出血后细胞凋亡与神经功能损害程度一致 ,细胞凋亡在脑出血后神经功能损伤中起重要作用。     

大鼠脑出血蛋白激酶C与细胞凋亡关系的实验研究

目的研究大鼠脑出血后血肿周围蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）及神经细胞凋亡的表达及其多粘菌素B（polymyxin B,PMB）对上述表达的影响。方法将100只SD大鼠随机分为四组：假手术组、脑出血组、小剂量多粘菌素B干预组[0.4mg/（kg.d）]、大剂量多粘菌素B干预组[0.8mg/（kg.d）],立体定位仪定位注射自体不凝血制造大鼠脑出血模型,分别为术后6、12、24、72、120h处死,免疫组织化学法检测血肿周围区PKC、TUNEL阳性细胞（凋亡细胞）数的表达、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）含量、NO（一氧化氮）含量以及大小剂量PMB对其干预后的影响。结果假手术组PKC少量表达,偶见凋亡细胞;脑出血组自6h起PKC、凋亡细胞及TNF-α、NO含量大量增加,72h达高峰,PKC在120h基本降至假手术组,但凋亡细胞TNF-α、NO含量仍处于较高水平,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;大小剂量多粘菌素B干预组均明显抑制PKC、凋亡细胞、TNF-α含量的表达,有统计学意义（P〈0.01）;但PMB剂量的大小差异无统计学意义（P〉0.05）。结论脑出血后血肿周围存在大量PKC表达上调、神经细胞凋亡、TNF-α、NO含量增加,PMB能够明显抑制PKC激活,TNF-α、NO释放,减少血肿周围细胞凋亡,起到神经元保护作用。     

1,6-二磷酸果糖对血肿周围组织能量代谢产物及凋亡的影响

目的 探讨1,6-二磷酸果糖(FDP)对脑出血后血肿周围脑组织能量代谢产物及神经细胞凋亡的干预作用.方法 健康家兔随机分成4组:正常组,脑出血组,治疗组,假手术组.其中脑出血、治疗组、假手术组又分成1、6、12、24、48、72h组.采用二次注血法制备兔自体血脑出血模型.治疗组予果糖二磷酸钠注射液(4.4ml/kg)治疗.高效液相法测定三磷酸腺苷(ATP)含量,TUNEL法测定6、24、72h组血肿周围组织神经细胞凋亡.结果 治疗后1、6、12h各组间校正后的ATP含量无显著性差别,24h后治疗组血肿周围组织ATP含量明显增高,并在48、72h保持较高水平,明显高于脑出血组,但仍低于正常组及假手术组,差异均有统计学意义.脑出血后6h有少量凋亡细胞出现,24h明显增多,72h凋亡细胞大量出现, FDP治疗后,各时间点凋亡细胞均较模型组明显减少(P＜0.05).结论 FDP可改善血肿周围组织能量代谢,使血肿周围组织凋亡细胞减少.     

大鼠脑出血蛋白激酶C与细胞凋亡关系的实验研究

目的：研究大鼠脑出血后血肿周围蛋白激酶C（Protein kinase C,PKC）及神经细胞凋亡的表达及其多黏菌素B（polymyxin B PMB）对上述表达的影响。方法：将100只SD大鼠随机分为四组：假手术组、脑出血组、小剂量多黏菌素B干预组（0.4mg/kg.d）、大剂量多黏菌素B干预组（0.8mg/kg.d）,立体定位仪定位注射自体不凝血制造大鼠脑出血模型,分别为术后6h、12h、24h、72h、120h处死,免疫组织化学法检测血肿周围区PKC、TUNEL阳性细胞（凋亡细胞）数的表达、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）含量、NO（一氧化氮）含量以及大小剂量PMB对其干预后的影响。结果：假手术组PKC少量表达,偶见凋亡细胞;脑出血组自6h起PKC、凋亡细胞及TNF-α、NO含量大量增加,72h达高峰,PKC在120h基本降至假手术组,但凋亡细胞TNF-α、NO含量仍处于较高水平,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;大小剂量多黏菌素B干预组均有明显抑制PKC、凋亡细胞、TNF-α含量的表达,有统计学意义（P〈0.01）;但PMB剂量的大小无明显差异性（P〉0.05）。结论：脑出血后血肿周围存在大量PKC表达上调、神经细胞凋亡、TNF-α、NO含量增加,PMB能够明显抑制PKC激活,TNF-α、NO释放,减少血肿周围细胞凋亡,起到神经元保护作用。     

脑出血大鼠颅内压及Bcl－2、Bax表达的变化与血肿周围水肿区细胞凋亡的关系

目的：采用基于F－P与FBG集成的微型化光纤传感系统,实时动态监测脑出血大鼠的颅内压,观察脑出血大鼠的颅内压动态变化规律;观察脑出血大鼠血肿周围水肿区细胞凋亡数量的变化及Bcl－2、Bax的表达,探讨脑出血大鼠颅内压变化与血肿周围水肿区细胞凋亡的关系。方法将43只健康的雄性成年SD大鼠,随机分为4组,分别为生理盐水对照组（A组）、生理盐水测颅内压组（B组）、脑出血模型组（C组）、脑出血测颅内压组（ D组）及1只为空白对照。处死大鼠后取大脑固定,用HE染色法观察各组大鼠大脑半球形态变化,用HE染色观察血肿周围水肿区大脑组织形态,用TUNEL法观察各组血肿周围水肿区细胞凋亡数量的变化,用免疫组织化学方法观察各组血肿周围水肿区Bcl－2、Bax的表达,用实时聚合酶链反应观察各组血肿周围水肿区Bcl－2的表达。结果 HE染色及TUNEL染色发现：大鼠脑出血后会引发细胞凋亡,并可在血肿周围水肿区明显观察到细胞凋亡,并可以持续一段时间;造模后3 d A组和C组的TUNEL阳性细胞计数及凋亡指数均与造模后1 d A组有显著差异（P＜0．05）,而造模后3 d的C组与A组差异有统计学意义（P＜0．05）,造模后7 d的C、D组与A、B组相比差异有统计学意义（P＜0．05）。 B组和D组均在造模后出现颅内压升高,但差异无统计学意义（P＞0．05）,B组随后颅内压呈下降趋势,而D组的颅内压随后并没有一直下降,与B组比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。与A组比较,B、C、D组的Bcl－2、Bax表达的IOD值差异有统计学意义（ P＜0．05）。 C、D组的Bcl－2相对表达量比A、B组要少,差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论大鼠脑出血后颅内压明显上升,并会在3～5 d里保持相对高峰趋势;大鼠脑出血后会引发细胞凋亡,并可在血肿周围水肿区明显观察到细胞凋亡,并可以持续一段时间;大鼠脑出血后颅内压高峰期与凋亡高峰期接近,提示颅内高压可能会导致神经元凋亡。     

涤痰汤对大鼠脑出血后血肿周围组织中活化caspase-3表达的影响

目的探讨大鼠脑出血后血肿周围神经元活化caspase-3的表达及涤痰汤的干预作用。方法用Ⅶ胶原酶脑内立体定位注射诱导大鼠脑出血模型，免疫组织化学法检测神经元线粒体内caspase-3的释放情况。结果Ⅶ胶原酶造模后模型组血肿周围于6h出现阳性表达细胞，ld阳性细胞计数达高峰，3d出现轻度下降，5d明显下降。与假手术组比较差异明显（P〈0．01）。涤痰汤组与同时间模型组比较在6h、ld计数无明显差异，3、5d时阳性细胞减少明显（P〈0．01）。结论大鼠脑出血后血肿周围神经元活化caspase-3表达明显上调；涤痰汤能减少活化caspase-3的表达，阻止神经元的凋亡。     

大鼠脑出血灶周水肿变化与缺血改变的研究

目的：通过观察大鼠脑出血模型不同时段的脑含水量,灶周缺血区,凋亡细胞指标的改变,探讨血肿灶周水肿、缺血的变化。方法：自体动脉血注入法制作大鼠脑出血模型,于脑出血（ICH）损伤后3、5、7、14、21 d时间点进行脑含水量测定,2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色,原位末端标记（TUNEL）法检测凋亡细胞,应用图像处理软件,结合病理组织学改变,比较各个时间点ICH模型血肿灶周水肿与缺血的演变过程。结果：TTC染色,血肿周围色淡染,梗死带内径逐渐扩大,14 d后变化最为显著[3 d组（0.31±0.06）mm;14 d组（2.03±0.13）mm]（P〈0.01）。手术组3～21 d血肿面积逐渐减小,14 d后变化显著[3 d组（19.17±1.52）mm2;14 d组（6.91±0.59）mm2]（P〈0.01）。脑含水量,手术组含水量均高于对照组13 d手术组（82.23±2.71）%;3 d对照组（68.56±1.70）%]（P〈0.01）。手术组3～7 d脑含水量达最高值,而后下降,至14 d后基本恒定[3 d组（82.23±2.71）%;14 d组（72.98±1.81）%]（P〈0.01）。凋亡细胞,手术组均高于对照组[3 d手术组（20.25±2.50）个;3 d对照组（1.90±0.51）个]（P〈0.01）;手术组3～14 d凋亡细胞持续高表达,14 d后开始下降[3 d组（20.25±2.50）个;14 d组（15.55±2.60）个]（P〈0.01）。结论：大鼠脑出血后,灶周是一种水肿缺血混合区域,3～14 d以水肿为主,14 d后水肿相对恒定,以缺血为主。     

槲皮素对脑出血大鼠神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的作用研究

目的通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的动态变化及槲皮素的干预作用,探讨槲皮素可能的神经保护作用及机制。方法以雄性健康SD大鼠通过自体血注入法制备大鼠脑出血模型,并随机分为假手术组、脑出血模型组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组,共4组,每组30只;槲皮素低剂量组和槲皮素高剂量组分别给予槲皮素10、50 mg/(kg·d)腹腔内注射,假手术组和脑出血模型组给予同等体积生理盐水腹腔内注射,每日1次,连续7 d;各组大鼠分别在术后第6小时、1天、2天、3天、7天通过前肢放置试验评分法评估神经功能缺损,采用TUNEL法检测血肿周围神经细胞凋亡,采用Western blot法检测血肿周围Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果与模型组比较,槲皮素低剂量组在脑出血后第3天、7天及槲皮素高剂量组在第2天、3天、7天的前肢放置试验评分和Bcl-2蛋白表达均明显增加(P<0.01);与模型组比较,槲皮素低剂量组在第3天、7天及槲皮素高剂量组在第1天、2天、3天、7天的神经细胞凋亡率和Bax蛋白表达均明显降低(P<0.01)。结论槲皮素能减轻脑出血后神经功能损伤,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,从而减少神经细胞凋亡有关。     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素(minocycline)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响.方法成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组),损伤后不同时间点取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化;用免疫组化染色检测iN-OS的表达变化;原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞;采用开放场地试验BBB评分和斜板试验,评价神经功能.结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组.A、B两组均发现凋亡细胞及iNOS表达,神经细胞凋亡指数及iNOS表达均为B组＞A组(P＜0.05).治疗组神经功能改善优于B组.结论二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡.     

大鼠脑出血灶周围细胞凋亡与胶质纤维酸性蛋白的表达

目的：观察大鼠实验性脑出血后神经细胞的凋亡及胶质纤维酸性蛋白（glial fibfillary acidic protein,GFAP）的表达。方法：将成年SD大鼠随机分为正常组、假手术组和脑出血组。脑出血组大鼠通过立体定向术向脑内注入自体动脉血制成脑尾壳核出血模型,并按不同的再喂养时间（1、3、7、14及30d）分为5个亚组。采用Hoechst和免疫组织化学染色分别观察各组大鼠出血灶周边区神经细胞凋亡和GFAP的表达。结果：与正常组和假手术组相比,脑出血组大鼠的细胞凋亡数显著增高（1-30d时P〈0．05）,并在3d时达高峰;脑出血1dGFAP表达开始增加,7d达高峰,以后逐渐下降,但30d时仍明显高于正常组和假手术组。结论：脑出血可诱导神经细胞凋亡,同时也促进出血灶周边区星形胶质细胞增生,这可能是脑出血后神经组织重塑的重要方式。     

大蒜精油对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及PKCδ表达的影响

[目的]观察大蒜精油对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及PKCδ的影响.[方法]应用链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病模型组、大蒜精油低、中和高剂量组,同时设正常对照组.大蒜精油各剂量组按不同浓度比例喂饲大蒜精油.连续干预16d后测血糖水平,处死、剪取左心室组织,TUNEL检测心肌细胞凋亡情况,Western blotting检测PKCδ表达情况.[结果]模型组血糖升高明显、心肌细胞凋亡明显、PKCδ表达增加,大蒜精油各组情况得到改善.[结论]大蒜精油可有效降低糖尿病大鼠心肌PKCδ表达,抑制心肌细胞凋亡.     

神经生长因子对氧合血红蛋白诱导小鼠神经细胞凋亡及神经生长因子受体表达的影响

【目的】研究神经生长因子（NGF）对氧合血红蛋白（Oxynb）诱导的小鼠神经细胞凋亡以及P75NTR和TrkA表达的影响,并进一步探讨Oxynb诱导细胞凋亡及NGF对神经细胞保护作用的可能机制。【方法】雄性健康ICR小鼠随机分为损伤组（24只）、损伤给药组（24只）,脑皮层局部蛛网膜下腔注射Oxynb建立蛛网膜下腔出血的动物模型,尾静脉注射神经生长因子,使用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测P75NTR和Tr—kA表达的情况。【结果】注射0xy硒后出现神经细胞凋亡,P75NTR表达增加,TrkA表达无明显改变,在NGF给药组,神经细胞凋亡数明显减少,P75NTR表达明显降低,TrkA的表达无明显改变。【结论】P75NTR表达的增加提示,其参与了Oxynb诱导的小鼠神经细胞凋亡,而静脉注射NGF可以抑制OxyHb诱导的细胞凋亡,其机制可能是通过与受体结合,从而降低P75NTR表达水平以实现其保护作用。     

胰岛素对大鼠脊髓损伤细胞凋亡及iNOS、COX-2表达的影响

目的 观察胰岛素对急性脊髓损伤后细胞凋亡及相关炎症因子表达的影响,探讨胰岛素对脊髓损伤保护作用的分子机制.方法 60只SD大鼠随机分为损伤对照组和胰岛素治疗组,建立SCI模型;术后8 h、1d、3 d、7 d、14 d处死动物取材,采用原位末端标记(TUNEL)和免疫组织化学观察脊髓细胞凋亡及iNOS、COX-2表达变化,并进行比较分析.结果 术后各时相胰岛素治疗组TUNEL阳性细胞的数目明显少于损伤对照组;胰岛素治疗组iNOS、COX-2的表达率明显比对照组降低,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01).结论 初步研究表明胰岛素对急性脊髓损伤有保护作用,抑制炎症因子iNOS、COX-2的表达是其可能作用机制之一.     

卡维地洛与培哚普利联合干预心肌梗死后心力衰竭对心肌细胞凋亡和肌浆网Ca^2＋泵活性的影响

目的：探讨β受体阻滞剂卡维地洛与血管紧张素转换酶抑制剂培哚普利联合干预心肌梗死（MI）后慢性心力衰竭对心肌细胞凋亡和肌浆网（SR）Ca^2＋泵活性的影响及意义．方法：通过结扎大鼠左冠脉建立慢性心力衰竭模型,术后1wk开始分别给予卡维地洛[6mg／（kg·d）]、培哚普利[4ms／（kg·d）]、特拉唑嗪[2mg／（kg·d）]、卡维地洛[6mg／（kg·d）]及培哚普利[4mg／（kg·d）]联合干预9wk,对照观察血流动力学、左室心肌细胞凋亡、SR Ca^2＋泵活性的变化．结果：与假手术组（SH组）相比,心力衰竭组（HF组）左室舒张末压（LVEDP）显著升高（P〈0．01）,＋dp／dtmax,-dp／dtmax显著降低（P〈0．01）,心肌细胞凋亡指数增高,SR Ca^2＋泵活性显著降低（P〈0．01）．卡维地洛、培哚普利单独及联合干预均降低LVEDP（P〈0．01）,升高＋dp／dtmax,-dp／dtmax（P〈0,01）,使左室心肌细胞凋亡比例降低,并使左室心肌SR Ca^2＋泵活性增高（P〈0．01）,联合干预变化更明显（P〈0．01）．特拉唑嗪组（Ter组）对上述指标无明显影响．结论：卡维地洛和培哚普利长期联合干预MI后慢性心力衰竭,能够改善血流动力学,抑制心肌细胞凋亡,并改善心肌SR Ca^2＋泵活性,优于任何单一药物干预．