亚溶解型补体C5b-9复合物与细胞内信号转导通路

在某些免疫相关的疾病中,补体系统活化后能产生膜攻击复合体,即C5b-9复合物参与组织细胞损伤等多种反应.就C5b-9作用靶细胞的方式而言,现认为有全溶解型（lytic）和亚溶解型（sublytic）之分.近些年来,随着人们对亚溶解型C5b-9（SC5b-9）研究的不断深入,愈来愈多的证据表明SC5b-9可作为疾病的启动原激活细胞内多条信号转导途径.由于SC5b-9的研究是目前医学界关注的热点问题,故本文着重就SC5b-9激活细胞时介导几条主要的信号转导途径的研究进展作一综述.     

补体C5b-9复合物促进树突状细胞成熟

探讨补体C5b-9复合物对树突状细胞成熟及免疫学功能的影响。rhGM-CSF+rhIL-4体外诱导单核细胞分化为不成熟树突状细胞,体外于不成熟树突状细胞表面用补体蛋白纯品组装CSb-9,37℃,5%CO_2温育96 h,流式分析细胞表型及抗原捕获能力;与同种异体CD4~+和CD8~+T细胞共培养检测其免疫刺激功能;ELISA检测细胞因子分泌。结果显示,亚溶解型C5b-9处理DC表面标志CD83、HLA、CD80、CD86、B7-H1、B7-H3、B7-H4以及BTLA等表达上调;DC分泌IL-12及TNF-α上调,抗原捕获能力降低;C5b-9处理DC刺激CD4~+T细胞活化及分泌IFN-γ、IL-2能力增强。结论:补体C5b-9复合物可以促进树突状细胞成熟,衔接天然免疫和特异性免疫。     

4种肾炎模型大鼠尿液中补体C5b-9复合物排泄的比较研究

目的: 探讨不同类型的免疫复合物肾炎大鼠尿液中补体C5b-9复合物检出的意义。方法: 复制大鼠被动型Heymann肾炎(PHN)、抗胸腺细胞血清性肾炎(ATSN)、抗肾小球基底膜性肾炎(AGBMN)及慢性血清病肾炎(CSDN)4种动物模型。用双抗体夹心ELISA法定期检测各种肾炎大鼠血液及尿液中补体C5b-9的含量,同时观察大鼠肾小球中C5b-9的沉积情况。结果: 4种肾炎模型鼠血浆C5b-9复合物均见上升,肾小球内也有C5b-9复合物的沉积,但尿液中C5b-9含量升高仅见于罹患PHN的大鼠。此外,尿液中C5b-9复合物的升高先于PHN大鼠尿蛋白的升高。结论: 尿液中C5b-9复合物的检测可作为PHN早期诊断和鉴别诊断的一种敏感性较高的免疫学指标。     

补体C5b-9复合物介导肾小球炎性损伤的研究进展

Ｃ５ｂ９复合物是补体活化后的攻膜单位。全溶量Ｃ５ｂ９复合物能够导致肾小球细胞的溶破坏死,而亚溶量的Ｃ５ｂ９复合物致肾小球细胞的损伤则主要通过其促进一些生物活性介质包括细胞因子的释放。在某些肾小球炎症中,其组织损伤的程度往往与Ｃ５ｂ９复合物形成的数量有一定的关系。     

补体C5b-9复合物诱导大鼠肾系膜细胞iNOS mRNA表达的实验研究

观察人血清补体C5b 9复合物对大鼠肾小球系膜细胞 (MC)表达诱生性一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA的影响。方法 :首先提取人血清补体C5b 9复合物 ,然后用人C5b 9复合物刺激培养的大鼠MC ,检测MC在受C5b 9复合物刺激后3、6、2 4和 48h时iNOSmRNA的表达情况。同时检测其培养上清液中一氧化氮 (NO)代谢产物———硝酸根 (NO3- )和亚硝酸根(NO2- )含量的变化。结果 :用人C5b 9复合物刺激培养大鼠的肾MC能使其表达iNOSmRNA ,培养上清液中NO3- NO2- 含量也明显升高。人C5b 9复合物对MC的刺激作用能部分被相应的抗人C5b 9复合物抗体和RNA合成抑制剂———放线菌素D所抑制。结论 :人补体C5b 9复合物具有刺激大鼠肾MC合成NO的作用。     

补体活化在动脉粥样硬化形成中的意义

补体系统由复杂的血浆蛋白质构成,为体液免疫系统的固有部分,其活化引起一系列的级联反应,最终产生多种促炎分子。该系统亦含有活化过程中产生的补体片段和调控分子的受体。在ＡＳ病变形成过程中有两种突出的细胞现象：单核细胞募集（之后形成泡沫细胞）和平滑肌细胞活化。内皮下ＬＤＬ的沉积为上述事件的重要刺激。大量的证据表明,补体活化可能为脂蛋白沉积和之后病变的形成之间的桥梁。     

抗C5b-9复合物抗血清对大鼠ATS性肾炎病变的抑制作用

给大鼠注射抗胸腺细胞血精（ATS）复制系膜增生性肾小球肾炎即ATS性性肾炎（ATSN）模型。同时应用兔抗大鼠补体C5b-9复合物抗血清进行处理,然后定期观察各组大鼠24h尿蛋白总量、肾小球内细胞总数、增殖细胞核抗原（PCNA）、a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）的表达及肾小球内C5b-9复合物的沉积情况。结果发现,用C5b-9抗血清处理的ATSN组上述各项指标均较未用C5b-9抗血清处理的ATSN组低。提示：抗鼠C5b-9复合物抗血清对大鼠ATSN病变有抑制作用。     

补体C5b—9复合物介导肾小球炎性损伤的研究进展

Ｃ５ｂ－９复合物是补体活化后的攻膜单位,全溶量Ｃ５ｂ－９复合物能够导致肾小球细胞的溶破坏死,而亚溶量的Ｃ５ｂ－９复合物致肾小球细胞损伤则主要通过其促进一些生物活性介质包括细胞因子的释放,在某些肾小球肾炎症中,其组织损伤的程度往往与Ｃ５ｂ－９复合物形成的数量有一定的关系。     

补体C5b—9复合物诱导大鼠肾系膜细胞iNOS mRNA表达的实验 …

目的 观察人血清补体Ｃ５ｂ－９复合物对大鼠肾小球系膜细胞（ＭＣ）表达诱生性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡ的影响。方法 首先提取人血清补体Ｃ５ｂ－９复合物,然后用人Ｃ５ｂ－９复合物刺激培养的大鼠ＭＣ,检测ＭＣ在受Ｃ５ｂ－９复合物刺激后３、６、２４和４８ｈ时ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达情况。同时检测其培养上清液中一氧化氮（ＮＯ）代谢产物－硝酸根（ＮＯ３＾－）和亚硝酸根（ＮＯ２＾－）含量的变化。结果 用人     

亚溶量C5b-9可诱导足细胞的保护性自噬应答

目的:通过亚溶量补体C5b-9(s C5b-9)攻击足细胞的离体模型,探讨自噬在免疫介导足细胞损伤过程中的作用。方法:建立s C5b-9攻击足细胞体外模型,采用单丹磺酰尸胺(MDC)染色标记自噬泡,瑞氏-吉姆萨染色光镜下观察细胞形态,免疫荧光检测nephrin的表达及分布,Western blotting检测LC3-II和LC3-I的表达,MTT法检测细胞存活率,Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果:成功建立s C5b-9攻击足细胞体外模型,将细胞溶破率≤5%定义为亚溶量攻击。MDC染色和自噬标志LC3-II的检测均显示造模后48 h足细胞的自噬活动明显活跃。抑制自噬可明显加重s C5b-9所致的足细胞形态异常。s C5b-9攻击可使足细胞nephrin的表达量明显减少,并且异常分布,而抑制自噬可进一步下调nephrin的表达。抑制自噬可促进s C5b-9所诱导的足细胞凋亡。结论:s C5b-9可直接诱导足细胞自噬活动增强,而自噬则在s C5b-9介导的足细胞损伤过程中发挥着保护作用。     

血清补体溶解免疫复合物能力与小儿肾小球疾病的关系

测定了７４例肾小球疾病患儿血清补体溶解免疫复合物能力（ＣＭＳＣ）．结果为单纯性肾病患儿血清ＣＭＳＣ无明显变化，急性肾炎、肾炎性肾病和紫癜性肾炎患儿血ＣＭＳＣ显著下降；除急性肾炎患儿血ＣＭ－ＳＣ与血ＣＨ＿５０、Ｃ＿３、Ｃ＿４呈正相关外，其他疾病患儿未发现相关性。     

补体攻膜复合物细胞非致死性效应及其信号转导机制

有核细胞能通过自身机制抵抗同源补体溶破,同时亚溶破MAC在细胞膜上沉积后,能刺激多种细胞的多种生物学活性改变,包括产生活性氧、释放花生四烯酸及其代谢产物、产生多种细胞因子、诱导膜蛋白表达和诱导细胞进入细胞周期等,此称MAC的细胞非致死效应。这些效应是由MAC活化细胞跨膜信号转导机制介导的。     

补体C5b-9抗血清对抗胸腺细胞血清性肾炎大鼠肾组织一氧化氮合成及其病变的影响

目的: 探讨抗鼠补体C5b-9复合物抗血清对系膜增生性肾炎大鼠肾组织合成一氧化氮 (NO)及其病变的作用。方法: 复制大鼠系膜增生性肾小球肾炎即抗胸腺细胞血清性肾炎 (ATSN)模型 ,用抗大鼠C5b-9复合物抗血清处理 ,观察其对ATSN大鼠NO相关指标及其病变的影响。结果: 抗鼠C5b-9复合物抗血清既能减少ATSN大鼠肾组织诱生性NO合酶 (iNOS)mRNA的表达和大鼠尿液中硝酸盐 /亚硝酸盐 (NO₃^- /NO₂^- )排泄量 ,还能减低大鼠肾组织病变的程度。NOS抑制剂L -NAME也可降低尿NO₃^- /NO₃^- 排泄量 ,同时减轻肾组织病变程度。结论: 抗鼠C5b-9复合物抗血清能够抑制肾细胞NO的合成及其肾小球系膜细胞的增生。     

补体攻膜复合物与Heymann肾炎

Heymann肾炎是研究人类膜性肾病的经典动物模型,补体攻膜复合物与Heymann肾炎的发病密切相关,在Heymann肾炎的发病中,插入肾小球上皮细胞膜的补体攻膜复合物可造成细胞的亚溶解性损伤,进而介导血栓素A2、活性氧和转化生长因子β等炎症介质的释放,通过不同的作用机制导致肾小球滤过屏障的损伤和蛋白尿的产生.     

人补体C_(5b～9)复合物对大鼠肾系膜细胞一氧化氮生成的影响

目的 :探讨人补体C5b～ 9复合物对大鼠肾小球系膜细胞 (MC)合成一氧化氮 (NO)的影响。方法 :首先提取人补体C5b～ 9复合物 ,同时培养出大鼠肾小球MC。然后用C5b～ 9复合物刺激MC ,观察刺激后 6h、2 4h、和 48h培养上清液中NO代谢产物 -硝酸根 (NO-3 )和亚硝酸根 (NO 2 )量的变化 ,并测定刺激后 2 4h、48h时MC内环鸟苷酸 (cGMP)的水平。结果 :用人C5b～ 9复合物刺激大鼠MC后可致培养上清中NO 3 /NO 2 含量增加 ,细胞内cGMP水平上升。NO合成增多能够被NO合酶 (NOS)抑制剂—─ -NG-硝基 -L -精氨酸甲基酯 (L -NAME)所抑制。结论 :人C5b～ 9复合物能够增加大鼠肾MC的NO合成。     

人补体C5b~9复合物对大鼠肾系膜 细胞一氧化氮生成的影响

目的:探讨人补体 C_5b~9复合物对大鼠肾小球系膜细胞(MC)合成一氧化氮(NO)的影响。方法:首先提取人补体C_5b~9复合物,同时培养出大鼠肾小球MC。然后用C_5b~9复合物刺激MC,观察刺激后6 h、24 h、和48 h培养上清液中NO代谢产物-硝酸根(NO₃^-)和亚硝酸根(NO₂^-)量的变化,并测定刺激后24 h、48 h时MC内环鸟苷酸(cGMP)的水平。结果:用人C_5b~9复合物刺激大鼠MC后可致培养上清中NO₃^-/NO₂^-含量增加,细胞内cGMP水平上升。NO合成增多能够被NO合酶(NOS)抑制剂—─-N^G-硝基-L-精氨酸甲基酯(L-NAME)所抑制。结论:人C_5b~9复合物能够增加大鼠肾MC 的NO合成。     

抗胸腺细胞血清性肾炎模型大鼠肾小球中C5b-9的沉积及NO、TNFα含量分析

目的: 探讨抗胸腺细胞血清性肾炎(ATSN)大鼠肾小球内C5b-9复合物的沉积与某些炎症介质和细胞因子如:一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量情况。 方法: 大鼠一次性静脉注射抗胸腺细胞抗血清(ATS)建立ATSN模型,定期对ATSN大鼠肾小球中的补体C5b-9复合物进行免疫组化染色定位、显微图像扫描半定量分析;并对有C5b-9包绕的肾小球系膜细胞(MC)进行计数。测定ATSN大鼠肾中诱生型NO合酶(iNOS) mRNA的表达、尿液中NO的代谢产物(NO^-₂／NO^-₃)及TNFα的排泄量。 结果: ATSN模型大鼠肾小球MC先溶解坏死后继发增生,病变早期(溶解时相)补体C5b-9复合物主要定位于肾小球系膜区及MC表面;随着病程的进展,被C5b-9包绕的MC逐渐减少, 病程初期ATSN大鼠肾小球MC有明显的 iNOS mRNA表达, 尿液中NO^-₂／NO^-₃ 和TNFα的排泄量也明显增加。在ATSN病变的增生阶段(一般7 d后),上述指标的变化逐渐趋缓。 结论: ATSN模型大鼠肾小球中MC逐渐溶解与补体C5b-9沉积及NO和TNFα的合成与释放有一定关系。     

肾癌荷瘤小鼠组织中补体 C5a / C5aR 通路活化与肿瘤高凝状态 的关系及其机制研究

目的 研究肾癌荷瘤小鼠组织中补体 C5a / C5aR 通路活化与肿瘤高凝状态的关系及其机制。 方法 收集 2016 年 7 月至 2019 年 10 月于唐山市人民医院收治的 32 例经病理学活检确诊的肾癌患者的癌组织和 癌旁组织。 采用 Western 印迹法检测组织中 C5a / C5aR 通路活化相关蛋白表达情况。 于 BALB/ c-nu / nu 裸鼠 前肢腋窝皮下接种人 ACHN 肾癌细胞株, 接种成功后随机分为干预组、 模型组, 其中干预组尾静脉注射 C5a 联合 C5aR 阻断剂 (C5aR antagonist, C5aRA), 模型组等体积注射生理盐水, 另取 6 只空白小鼠作为对 照组。 观察小鼠肿瘤生长情况, 检测高凝状态相关指标水平。 脱颈处死小鼠, 收集癌组织, 采用 Western 印迹法检测组织中 C5a / C5aR 通路活化相关蛋白表达情况。 结果 两组小鼠肿瘤体积于荷瘤 6 ~ 21 d 差异具 有统计学意义, 且干预组的肿瘤体积明显低于模型组 ( P< 0. 05)。 3 组小鼠于荷瘤第 1 天的血清 D-D、 vWF、 TF 水平差异无统计学意义, 荷瘤第 14 天、 第 21 天干预组、 模型组血清凝血指标水平明显增加, 其 中干预组均明显低于模型组 (P< 0. 05)。 干预组癌组织中 C5aR、 C5b-9、 FGL2、 P38、 p-P38 的表达水平均 明显低于模型组 (P< 0. 05)。 肾癌患者癌组织中 C5aR、 C5b-9、 FGL2、 P38、 p-P38 的表达水平均明显高于 癌旁组织 (P< 0. 05)。 32 例肾癌患者中高凝状态患者 14 例, 非高凝状态患者 18 例, 高凝状态组癌组织中 C5aR、 C5b-9、 FGL2、 P38、 p-P38 的表达水平均明显高于非高凝状态组 (P< 0. 05)。 结论 补体 C5a / C5aR 通路可通过调控 FGL2 的表达而诱导肾癌的高凝状态, 进而参与肾癌的发病过程。     

补体C5b-9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞合成NO的机制探讨

目的:探讨人C5b-9复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞(MC)合成一氧化氮(NO)的机制。方法:用人C5b-9复合物刺激培养的大鼠肾小球MC诱生肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素1β(IL-1β),并用抗TNFα或抗IL-1β单克隆抗体进行处理。在上述基础上,分析处理3 h、6 h及24 h时与NO升高有关的某些指标的变化。结果:经C5b-9复合物刺激6、24 h后的MC(C5b-9组)产生TNFα明显高于对照组,并能被TNFα单抗逆转。用C5b-9复合物刺激MC未见IL-1β的产生。另用C5b-9刺激3 h时可见MC表达iNOS mRNA,而在刺激6 h和24 h时,MCiNOSmRNA表达,MC内cGMP含量及培养上清液中NO³_-/NO²_-含量均显著高于对照组。不过,C5b-9刺激时加用TNFα单抗处理,这些指标在6 h、24 h时均较C5b-9组低。结论:C5b-9复合物早期(3 h)能诱导MC表达iNOS mRNA,而6h后NO的升高则与MC释放的TNFα作用有关。     

miR-106b-5p通过靶向MMP-9调控HTR-8/SVneo细胞生物学行为的研究

目的 探讨miR-106b-5p对HTR-8/SVneo细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其与基质金属蛋白酶-9(MMP-9的靶向关系。方法 收集80例子痫前期（PE）及30例正常孕妇胎盘组织。选取HTR-8/SVneo细胞,分为Vector组、MMP-9组、Scramble组、si-MMP-9组、miR-106b-5p组、si-miR-106b-5p组、miR-NC组、NC组、miR-106b-5p+si-NC组及miR-106b-5p+si-MMP-9组。CCK-8实验检测增殖能力,Transwell实验检测侵袭能力,划痕实验检测迁移能力,荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞MMP-9基因mRNA及miR-106b-5p表达水平,Western blot检测细胞MMP-9蛋白表达水平,TargetScan在线网站预测miR-106b-5p与MMP-9结合位点,双萤光素酶报告基因实验验证miR-106b-5p与MMP-9的靶向关系。结果 轻度、重度PE孕妇胎盘组织MMP-9基因mRNA、蛋白及miR-106b-5p表达水平低于正常孕妇（P<0.01）。重度PE孕妇胎盘组织MM...