番茄红素抑制食管癌细胞EC109增殖及其作用机制的研究

目的探讨番茄红素抑制食管癌细胞EC109增殖及可能的作用机制。方法通过体外细胞培养,采用MTT法检测番茄红素对经PPARγ抑制剂GW9662处理前后的食管癌细胞EC109活力的影响,Western blotting检测番茄红素对PPARγ蛋白表达水平的影响。SPSS17.0软件对结果进行统计学处理。结果番茄红素可抑制食管癌细胞EC109的活力,并呈剂量-效应关系和时间-效应关系(P0.05),与番茄红素处理组比较,GW9662和番茄红素联合处理组食管癌细胞活力高(P0.05),而PPARγ蛋白表达水平低(P0.05),与DMSO对照组比较,番茄红素处理组PPARγ蛋白表达水平高(P0.01)。结论番茄红素可抑制食管癌细胞EC109的增殖,通过上调PPARγ蛋白的表达是实现其抑制作用的途径之一。     

罗格列酮对胃癌AGS细胞株生长的影响

目的探讨PPARγ配体罗格列酮对胃癌AGS细胞株增殖、凋亡的作用及其分子机制。方法采用MTS法测定罗格列酮对胃癌AGS细胞株存活率的影响,流式细胞术检测罗格列酮对AGS细胞凋亡的影响,荧光定量PCR及Western blot法检测罗格列酮对PPARγ、HCaRG及DLK1 mRNA及蛋白的表达。结果不同浓度罗格列酮（1—100μM）处理AGS细胞株24h及48h,细胞的存活率明显降低,其作用呈浓度及时间依赖性,预先加入PPARγ拮抗剂GW9662可部分逆转罗格列酮的作用;不同浓度罗格列酮处理AGS细胞株48h,细胞凋亡百分率明显高于对照组（t≥2．97,P〈0．05）,GW9662不能逆转罗格列酮的作用;罗格列酮诱导AGS细胞株PPARγ、HCaRG及DLK1的表达,并呈剂量依赖,GW9662能阻断罗格列酮诱导DLK1表达的作用,而不能阻断其诱导HCaRG表达的作用。结论罗格列酮通过PPARγ依赖及非依赖两种途径抑制胃癌AGS细胞株生长,诱导DLK1及HCaRG表达可能是罗格列酮抗胃癌作用机制之一。     

Vanin对胰岛NIT细胞保护机制的探讨

目的探讨泛酰巯基乙胺酶Vanin对胰岛NIT细胞的保护作用及机制。方法培养胰岛B细胞株NIT细胞,以5ng／ml IFN-1,50pg／ml IL-1β,10ng／ml Vanin处理细胞,分为IFN-γ＋IL-1β[3＋Vanin组、IFN-γ＋IL-1β组、Vanin组、对照组（DMEM）。4组干预因素分别作用于对数生长期细胞24h后采用MTF法检测各组NIT细胞的增殖抑制率,化学发光法检测上清液中胰岛素（Ins）水平,硝酸还原酶法检测上清液中一氧化氮（N0）水平。结果经IFN-γ＋IL-1β处理的NIT-1细胞增殖受抑制,抑制率为60．11％;予Vanin预处理组细胞增殖抑制率为36．98％,较IFN-γ＋IL-1β处理组降低（P〈O．01）。经IFN-γ＋IL-1β破坏的NIT-1细胞分泌胰岛素较其他3组减少（P〈O．05,P〈0．01）,NO产生较其他3组增多（P〈0．05,P〈0．01）。而接受Vanin预处理组再予IL-1β＋IFN-γ破坏的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ叫组比较,分泌胰岛素增加（P〈0．05）、NO水平降低（P〈0．05）。结论Vanin可减轻IFN-γ＋IL-1β对NIT细胞的损伤作用,保护NIT细胞的胰岛素分泌功能。     

油酸对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响及PPARγ介导机制

目的探讨油酸对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响及PPARγ介导的机制。方法不同浓度油酸处理体外培养成熟的3T3-L1脂肪细胞24h,并选取100μmol/L油酸加与不加过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)拮抗剂GW 9662处理3T3-L1脂肪细胞,运用实时荧光定量PCR方法检测处理前后脂联素及PPARγmRNA的表达水平,并用western-blotting法测定脂联素蛋白表达水平。结果与对照组相比,油酸在浓度为25、50、100μmol/L时上调脂联素及PPARγmRNA的表达,随着浓度的增加脂联素和PPARγmRNA的表达下降;油酸中加入GW 9662处理后脂联素mRNA及蛋白的表达水平分别降低77%、78.01%(P<0.05)。结论油酸在一定浓度范围内能上调3T3-L1脂肪细胞脂联素及PPARγ基因表达,且呈剂量依赖关系,加入PPARγ拮抗剂GW9662后能够阻断这种上调作用,提示油酸可通过激活PPARγ来调节脂肪细胞脂联素的表达。     

抑制PPARγ对游离SiO_2诱导肺泡巨噬细胞CD36表达及脂质蓄积的调节作用

[目的]探讨在游离SiO_2诱导大鼠肺泡巨噬细胞泡沫化过程中抑制过氧化物酶增殖体激活性受体(PPARγ)对CD36表达以及脂质蓄积的调节作用。[方法]常规体外培养大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞,给予PPARγ特异性抑制剂GW9662阻断PPARγ信号通路,观察细胞的泡沫化情况;细胞分为抑制剂组(GW9662)、溶剂对照组(DMSO)、实验组(GW9662+SiO_2+ox-LDL)、模型组(DMSO+SiO_2+ox-LDL),培养36 h。油红O染色镜下观察脂质蓄积情况;酶法测定细胞中总胆固醇、游离胆固醇表达情况,计算胆固醇酯占总胆固醇的比例,鉴定泡沫细胞的形成;应用Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应技术分别检测PPARγ和CD36的蛋白和基因表达情况。[结果]实验结果显示,与模型组[(31.41±1.36)mg/g]比较,实验组[(8.78±0.49)mg/g]、抑制剂组[(6.23±0.27)mg/g]和溶剂对照组[(6.99±0.30)mg/g]细胞内总胆固醇含量明显降低(P0.05);且实验组(28.43%)、抑制剂组(27.02%)和溶剂对照组(24.92%)的胆固醇酯占总胆固醇比例均小于50%,3组之间差异没有统计学意义(P0.05);与模型组相比,实验组泡沫细胞数目明显减少。实验组CD36蛋白(0.55±0.13)和m RNA(1.30±0.39)表达也较模型组[分别为(1.08±0.31)和(3.38±0.70)]明显降低(P0.05)。[结论]游离SiO_2所诱导的CD36表达可能是由PPARγ介导所致。     

血管紧张素-（1-7）对转化生长因子-β1诱导系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

目的探讨血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导大鼠系膜细胞（GMC）增殖和细胞外基质分泌的影响。方法选择对数生长期GMC,分为对照组、Ang-（1-7）组、TGF-β1组、TGF-β1＋Ang-（1-7）组,采用WST-1检测系膜细胞增殖,RT-PCR法和放射免疫法检测细胞外基质层粘蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（COLIV）的表达。结果与对照组相比,Ang-（1-7）组细胞数目和细胞外基质减少（P〈0．05）;与TGF-β1组相比,Ang-（1-7）可抑制TGF-β1诱导的系膜细胞增殖、使细胞内LNmR-NA、COLⅣ mRNA表达量明显下调、同时导致上清液中细胞外基质LN、COLⅣ含量显著减少（P〈0．05）。结论Ang-（1-7）能抑制基础和TGF-β1诱导的GMC细胞增殖及细胞外基质的分泌,可能在抑制肾脏纤维化过程中发挥作用。     

蒿甲醚对Lewis肺癌小鼠移植瘤的生长抑制及机制探讨

目的探讨蒿甲醚对Lewis肺癌小鼠移植瘤的作用及其相关机制。方法建立Lewis肺癌小鼠模型,40只C57小鼠随机分为4组:生理盐水组(NS组)、蒿甲醚组(ARE组)、PPARγ特异性抑制剂组(GW9662组)、ARE+GW9662组(联合组)。计算抑瘤率,评估蒿甲醚对肺癌移植瘤生长的影响,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法及RT-PCR法检测各组瘤组织中PPARγ、NF-κB、Caspase-3的表达。结果 (1)抑瘤率:ARE组64.51%,联合组45.14%,GW9662组与NS组比较瘤重差异无统计学意义(P=0.128),但平均瘤重有减小趋势;(2)蒿甲醚单药组细胞凋亡率为(13.90%±0.94%),联合组的细胞凋亡率为(7.74%±0.59%),生理盐水组细胞凋亡率为(3.80%±0.57)%;(3)Western blot:PPARγ蛋白:ARE组上调明显;NF-κB蛋白:ARE组明显下调;(4)RT-PCR:PPARγm RNA及NF-κB m RNA表达水平与蛋白表达水平一致;Caspase-3在各组的表达未发现明显的特异性;结论蒿甲醚可抑制Lewis肺癌小鼠移植瘤的生长,其机制是通过激活PPARγ调控NF-κB的表达下调,进而促进肿瘤细胞凋亡。     

生长抑素对脂多糖刺激的大鼠库普弗细胞抑制作用的观察

目的探讨生长抑素（SST）对脂多糖（LPS）刺激的原代培养大鼠库普弗细胞NO、TNFα和5-脂氧合酶（5-LO）表达的影响。方法分离培养SD大鼠库普弗细胞,分为对照组、LPS刺激组、SST干预组;于12、24、48h收集不同实验组细胞培养上清液,硝酸还原酶法测定NO水平,ELISA法检测TNFα含量,半定量RT-PCR法检测细胞5-LO mRNA的表达。结果分离的库普弗细胞产生低水平的NO、TNFα和5-LO mRNA,LPS刺激后各时间点NO、TNFα和5-LO mRNA含量均明显高于对照组（P〈0.05）;SST干预后各时间点NO、TNFα和5-LO mRNA含量低于LPS刺激组（P〈0.05）,其中NO、TNFα含量在各时间点均高于对照组（P〈0.05）,5-LO mRNA表达在12、24h时间点高于对照组（P〈0.05）,而在48h时间点与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论生长抑素能抑制LPS诱导的库普弗细胞NO,TNFα和5-LO的表达。     

Janus激酶抑制剂AG490对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察Janus激酶(JAK)抑制剂AG490对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化以及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),分别给予高糖和高糖 AG490干预,Western印迹检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘素(E-Cadherin)及信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化STAT1(phospho-STAT1,p-STAT1)和p-STAT3的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌。结果与低糖组比较,高糖培养的HKC中α-SMA、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调;E-Cadherin表达明显下调;TGF-β1mRNA表达增加;细胞培养上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显下调p-STAT1和p-STAT3表达的同时,明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E-Cadherin表达下降程度;降低TGF-β1mRNA表达及TGF-β1、Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK参与高糖诱导的HKC转分化,并刺激TGF-β1和细胞外基质的分泌,JAK抑制剂AG490能有效的拮抗其作用。     

重组人生长激素对内毒素诱导人巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β含量的影响

目的研究重组人生长激素（rhGH）对内毒素（LPS）诱导巨噬细胞产生炎性因子的影响。方法培养人单核巨噬细胞株U937细胞，体外经PMA（phorbol 12-myristate 13-acetate）诱导成熟后，设为5组：空白对照组、LPS组（给予40μg／mL LPS）、rhGH低剂量组（给予2U／L rhGH＋40μg／mL LPS）、rhGH中剂量组（给予4U／L rhGH＋40μg／mL LPS）及rhGH高剂量组（给予8U／L rhGH＋40μg／mL LPS），采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组细胞上清液中炎性因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β的含量。结果经PMA分化成熟后的U937细胞在LPS诱导下，TNF-α、IL-1β的含量明显增加，LPS组与空白对照组比较，差异有显著性（P〈0．05）；rhGH各组TNF-α、IL-1β的含量则明显下降，与LPS组比较，差异有显著性（P〈0．05）。结论rhGH可抑制LPS刺激巨噬细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β，故rhGH对LPS所致疾病如脓毒血症等可能有潜在的治疗作用。     

蕨麻醇提取物对缺氧诱发的神经母细胞瘤细胞损伤效应的拮抗作用

目的 探讨蕨麻醇提取物对硫代硫酸钠(Na2S204)诱发的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞株缺氧损伤的拮抗作用.方法 取处于生长对数期的SH-SY5Y细胞,分别设空白对照(D-Hank液)组、缺氧模型(1 mmol/L连二亚硫酸钠)组及1、0.25、0.062 5g/L蕨麻醇提取物拮抗缺氧(1 mmol/L连二亚硫酸钠)组,于5％ CO2、37 ℃孵育4h后,采用MTT试验检测细胞活性,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活力,采用悬浮芯片蛋白法测定细胞内单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)水平7种细胞因子水平.结果 与空白对照组比较,缺氧模型组和各剂量蕨麻醇提取物拮抗缺氧组SH-SY5Y细胞活性下降,LDH外漏量和空泡细胞率增大,MCP-1、IL-1β、IFN-γ和TNF-α水平升高,VEGF、IL-6和IL-10含量下降.与缺氧模型组比较,各剂量蕨麻醇提取物拮抗缺氧组细胞活性升高,LDH外漏量和空泡细胞率减少,细胞因子水平发生逆转,其中,MCP-1、IL-6、IFN-γ的改变以1g/L组最为明显,IL-1β、IL-10、TNF-α、VEGF的变化以0.062 5 g/L组明显.结论 蕨麻醇提取物可拮抗连二亚硫酸钠所致SH-SY5Y细胞缺氧损伤效应.     

细胞因子在矽肺患者肺泡巨噬细胞培养上清液中的表达及其意义

目的探讨肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)分泌的6种与肺纤维化有关的细胞因子与矽肺发生发展的关系。方法以29例矽肺患者和3例异物吸入者及3例接尘时间不超过3个月的接矽尘工人为调查对象,收集其肺灌洗回收液,AM分离纯化后37℃培养24h,收集培养上清液,采用人的ELISA试剂盒检测培养上清液中的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素1β(interlukin,IL-1β)、IL-8、转化生长因子-β1(transforming growth factor beta,TGF-β1)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory protein 1α,MIP-1α)及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)的表达水平,分析其与矽肺的关系。结果矽肺患者AM培养上清液中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、IL-8及MCP-1水平均高于对照组(P<0.05),贰期以上患者TNF-α、MCP-1的表达水平高于壹期,TGF-β1则低于壹期患者(P<0.05);持续接触矽尘者IL-1β、TGF-β1和MIP-1α的表达水平高于脱尘者,TNF-α则呈相反的趋势;发病工龄<15a者IL-1β表达水平低于发病工龄≥15a者,MCP-1的表达水平则呈相反的趋势;IL-1β、TNF-α及MCP-1表达水平均与脱尘年限呈负相关。结论矽尘诱发的纤维化有关的炎性细胞因子的差异表达在矽肺发病及进展中起重要作用。     

1-脱氧野尻霉素对高糖培养小鼠系膜细胞增殖及细胞外基质合成作用研究

目的 观察1-脱氧野尻霉素(DNJ)对高糖培养小鼠系膜细胞增殖、合成细胞外基质(ECM)的影响。方法 体外培养小鼠系膜细胞,用MTT法检测细胞增殖,用ELISA法测定细胞上清液中Ⅳ型胶原、小鼠纤维连接蛋白(FN)含量,用半定量RT-PCR法检测TGF-β1mRNA、PPARγmRNA表达。结果 (1)高糖组(HG)48 h促细胞增殖(P<0.05);HG 72 h、96 h均抑制细胞增殖(P<0.05)。甘露醇组(MG)与正常糖组(NG)比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)DNJ抑制高糖培养细胞增殖作用呈剂量和时间依赖性。选定HG+5 mmol/L DNJ作用48 h进一步实验。(3)高糖组Ⅳ型胶原、FN合成、TGF-β1mRNA、PPARr mRNA表达均显著升高(P<0.05或P<0.01)。NG与MG相比差异无统计学意义(P>0.05)。(4)HG+DNJ 5 mmol/L组显著抑制高糖组Ⅳ型胶原、FN合成、TGF-β1mRNA表达升高(P<0.05),对PPARγ mRNA表达升高无影响。结论 DNJ可抑制高糖培养系膜细胞增殖及ECM合成增多,其机制与DNJ降低高糖培养系膜细胞TGFβ₁mRNA表达升高有关。     

高糖通过TGF-β1／Smad信号通路介导肾小管上皮细胞1型胶原合成的机制探讨

目的探讨高糖对肾小管上皮细胞Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ）合成影响的分子机制。方法体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E细胞）分为四组：甘露醇组、高糖组、高糖＋TGF-β1中和抗体组、高糖＋IgG1对照组。ELISA法检测细胞培养上清中TGF-β1的浓度，细胞免疫化学方法检测p-Smad2／3核表达水平，RT—PCR和Western blot方法分别检测CollagenⅠmRNA和蛋白的表达。结果高糖以时间依赖方式上调CollagenⅠmRNA表达。高糖刺激NRK52E细胞24h和48h后内源性TGF-β1合成明显增加，约为甘露醇对照组的3倍。与刺激前和甘露醇组比较，高糖刺激24h可显著上调NRK52E细胞p-Smad2／3核表达水平（t=4．2，t=3．25，P〈0．01）。TGF—β1中和抗体能抑制高糖介导的p-Smad2／3核表达及CollagenⅠ蛋白的表达（t=3．12，t=3．02，P〈0．01）。结论高糖通过TGF-β／Smad信号通路介导肾小管上皮细胞CollagenⅠ的合成。     

黄绿青霉素对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素的影响

目的观察黄绿青霉素(CIT)对血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-lβ)、IL-6和IL-8等细胞因子的影响,以及CIT上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞表达MCP-1、IL-lβ、IL-6和IL-8的作用。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),选择第5～6代进行试验,待细胞融合80%后随机分组,加入TNF-α(10μg/L)、CIT(2μmol/L)建立TNF-α组、CIT组、TNF-α+CIT联合处理组和空白对照组,处理时间24h。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8及MCP-1的含量;免疫荧光染色法测定细胞核转录因子κB(NF-κB)的激活表达;RT-PCR检测各组MCP-1 mRNA表达。结果在TNF-α组和TNF-α+CIT组,细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8、MCP-1浓度,细胞MCP-1 mRNA表达量,NF-κB P65蛋白表达量均高于空白对照组(P<0.05);且TNF-α+CIT组均高于TNF-α组(P<0.05)。结论 CIT可明显上调TNF-α诱导的内皮细胞MCP-1、IL-lβ、IL-6、IL-8表达和NF-κB的激活。     

激活蛋白-1介导二氧化硅诱导的巨噬细胞细胞因子的表达

目的 探讨SiO2诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达改变是否与激活蛋白-1(AP-1)活化有关.方法 用AP-1的抑制剂姜黄素处理巨噬细胞后,用Western blotting检测核蛋白AP-1(c-jun/c-fos)的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液中TNF-α、TGF-β1蛋白的含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α、TGFβ1 mRNA的表达.结果 10和20 μmol/L姜黄素处理组c-jun的核蛋白表达为1.150±0.020、1.010±0.108,c-fos的核蛋白表达为0.430±0.023、0.256±0.015,明显低于SiO2刺激组(1.550±0..029、0.860±0.036),差异有统计学意义(P《0.01),且呈剂量依赖关系.20μmo/L姜黄素处理组TNF-α、TGFo-β1蛋白表达分别为123.58±45.78、32.12±5.34,明显低于SiO2刺激组(1582.18±437.52、55.60±5.51);TNF-α、TGF-β1 mRNA表达水平分别为0.74±0.01、0.22±0.04,也明显低于SiO2刺激组(2.27±0.33、2.96±0.15),差异均有统计学意义(P《0.01).结论 SiO2刺激巨噬细胞生成TNF-α、TGF-β1与AP-1的活化有关.     

外源性TGF-β_1抗体对SiO_2刺激的小鼠肺成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨外源性转化生长因子β1(TGF-β1)抗体对SiO2刺激的小鼠肺成纤维细胞生长的抑制作用及细胞周期的影响。方法实验分为3组:空白对照,SiO2(100 mg/L)组,SiO2(100 mg/L)+TGF-β1(1.0μg/ml)抗体组。应用MTT法检测小鼠肺成纤维细胞增殖的变化,流式细胞仪检测细胞周期。结果各处理组细胞增殖差异有统计学意义(P0.05),SiO2组细胞增殖最明显,其次为SiO2+TGF-β1抗体组;与空白对照组比较,SiO2组G0/G1期细胞百分率显著降低,S期及G2/M期细胞百分率增加,差异均有统计学意义(P0.05),经TGF-β1抗体处理后,G0/G1期细胞百分率与SiO2组比较明显增加,S、G2/M期细胞百分率显著降低(P0.05)。结论 TGF-β1抗体可能通过阻止SiO2刺激的小鼠肺成纤维细胞由G0/G1期进入S期,从而抑制肺成纤维细胞增殖。     

双氢青蒿素抑制TGF-β1诱导的子宫内膜上皮细胞转分化的作用

目的研究双氢青蒿素(DHA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)作用的子宫壁的内膜层中上皮柱状细胞分裂和转分化的影响。方法于2019年6月1日—12月30日,分离正常生育期妇女的子宫壁内膜层中的上皮柱状细胞并调制其浓度为4×104个/mL,以200μL/孔的量滴入96孔的细胞培养板中,孵育24 h后,将其在96孔板中划分为4组,各组分别安排6个重复的孔。正常组:常规培养;TGF-β1组:常规培养液中加入TGF-β1;DHA组:常规培养液中加入DHA;TGF-β1+DHA组:常规培养液中加入TGF-β1和DHA。观察各组细胞的分裂增殖情况;ELISA分析培养细胞的上清液中Ⅰ型胶原及纤粘连蛋白的水平;免疫印迹法评估胞质里α-平滑肌肌动蛋白和E-钙粘蛋白的值。结果正常组与DHA组相比较,差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β1组与正常组相比,其上皮柱状细胞分裂的数量增多(0.127 4±0.003 1),上清液里的I型胶原(0.732 2±0.006 9)及纤黏连蛋白(0.682 0±0.008 9)的水平升高,细胞质里E-钙粘蛋白值(0.448±0.054)降低,而α-平滑肌肌...     

TGF-β1对人腹膜间皮细胞转分化影响的探讨

目的探讨TGF-β1刺激对人腹膜间皮细胞(HPMCs)转分化的影响机制。方法用5ng/m l TGF-β1刺激第三代HPMCs培养细胞,采用免疫组化法观察细胞内磷酸化Sm ad-2(p-Sm ad-2)的蛋白表达,W estern b lot法观察细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(COL-1)和p-Sm ad-2的蛋白表达,ELISA观察上清液纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达,以及RT-PCR观察α-SMA、FN和COL-1A1的mRNA表达水平。结果刺激组α-SMA、FN和COL-1A1的mRNA及α-SMA、FN、COL-1和p-Sm ad-2蛋白的表达显著增加,且均呈时间依从。结论TGF-β1能诱导HPMCs转分化为肌成纤维细胞,其可能的机制与激活了Sm ad信号通路有关。     

Bel7402肝癌细胞中共轭亚油酸异构体通过不同机制下调COX-2表达

[目的]采用体外细胞培养方法,研究c9,t11-CLA和t10,c12-CLA对肝癌细胞Bel7402的COX-2表达的影响和机制。[方法]采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Westernblot)方法检测c9,t11-CLA和t10,c12-CLA处理后的Bel7402细胞中COX-2 mRNA和蛋白质的表达以及PPARγ配体罗格列酮和GW9662对COX-2蛋白水平的影响。[结果]在100μmol/L的浓度下,c9,t11-CLA和t10,c12-CLA都可以降低COX-2mRNA和蛋白质的表达,罗格列酮可以下调COX-2蛋白水平,而PPARγ抑制性配体GW9662可以逆转c9,t11-CLA对于COX-2蛋白水平的下调作用,但是对于t10,c12-CLA的下调作用则没有影响。[结论]两种异构体对COX-2表达的下调作用很可能具有不同的机制。