前列腺癌及良性增生组织中DNA聚合酶β、PTEN及Ha-ras基因mRNA检测

目的:探讨前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β(polβ)、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达。方法:应用RT-PCR法检测12例Pca组织及20例BPH组织中polβ、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达状况。结果:与BPH组织比较,Pca组织中polβ、Ha-ras基因mRNA表达增高,PTEN基因mRNA表达降低(P均<0.01)。Pca组织中polβ与Ha-ras基因mRNA的表达呈正相关(r=0.67,P<0.05),PTEN与polβ、Ha-ras基因mRNA的表达呈负相关,r分别为-0.58、-0.71,P均<0.05,结果:polβ及Ha-ras的表达上调及PTEN的表达下调是Pca发生中的重要分子事件。     

食管正常、癌前及癌变组织中DNA聚合酶β mRNA检测

目的观察不同演进过程食管组织中DNA聚合酶β(polβ)mRNA的表达.方法采用含有内对照的半定量RT-PCR方法,检测31例食管浸润癌(鳞癌27例,腺癌4例)、4例原位癌、6例不典型增生以及31例正常食管黏膜组织中polβ mRNA的表达.结果食管浸润癌、原位癌和不典型增生组织中polβ mRNA的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),但均高于正常食管黏膜组织中的表达水平(P均＜0.05).食管鳞癌和腺癌组织中polβ mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结果在食管癌组织中存在着polβ的高表达,且发生于癌变早期.     

PTEN基因在喉鳞癌中的表达及意义

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)在喉鳞癌中的表达及其临床意义.方法:应用半定量RTPCR方法检测喉癌组织中PTEN mRNA的表达.结果:淋巴结转移组喉癌较正常喉组织PTEN mRNA表达下降有统计学意义(P＜0.05).病理低分化与高分化相比,PTEN mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PTEN基因表达下降在喉鳞癌演进中起重要作用.     

前列腺癌及良性增生组织中DNA聚合酶β基因突变检测

目的：研究前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β基因(polβ)的突变情况。方法：采用RT—PCR、DNA序列分析技术对12例Pca及20例BPH组织中的polβ进行检测,并利用DNASIS、OMIGA等软件分析测序数据。结果：Pca组织中polβ突变率为4／12,BPH组织中polβ突变率为1／20。突变形式如下：①点突变：325位A→G转换(71位Glu→G1)),721位A→G转换(203位Glu→Gly),768位C→T转换(219位Gln→终止码),801位A→G转换(230位Lys→Glu),853位A→G转换(247位Glu→Gly),1071位A→G转换(320位Phe→Leu),177．188位CT→AA(22位Leu→Asn)。②58bp片段缺失(181～238位),导致移码及提前终止。结论：Pca组织中polβ的突变以点突变A→G转换为主要突变形式。181～238位的58bp的大片段缺失系国内外首次发现的突变形式DNA polβ突变可能与Pca的发生、发展密切相关。     

PTEN、P27、TGF-β_1在宫颈腺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨抑癌基因PTEN、P27及转化生长因了β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在宫颈腺癌中的表达及三者之间的相关性.方法 采用免疫组化S-P法检测43例官颈腺癌,18例正常宫颈组织石蜡切片中 PTEN、P27及TGF-β1的表达.结果 43例宫颈腺痛组织PTEN、P27阳性表达率分别为62.79%、55.81%,均明显低于止常宫颈组织(P＜0.05).VFEN、P27的阳性表达率在临床分期为Ⅱa及以上官颈腺癌组织中明显降低(P＜0.01),且在高分化腺癌组织中呈高表达.TGF-β1.的阳性表达率在正常官颈组(11.11%)与宫颈腺癌组(5.88%)之间差异无统计学意义(P＞0.05),TGF-β1蛋白表达与官颈腺癌的临床及病理特征无统计学差异(P＞0.05).宫颁腺癌组织中PTEN与P27蛋白表达呈正相关(r8=0.808,P＜0.01),TGF-β1表达与PTEN、P27无关.结论 PTEN、P27对宫颈腺癌预后判断有一定参考价值.官颈腺癌的发生及进展nr能与TGF-β1蛋白表达无关.     

苯并［a］芘诱导的恶性转化细胞中DNA聚合酶β高表达的机制研究

目的 探讨苯并[a]芘(BaP)诱导的恶性转化细胞中DNA聚合酶β(polβ)表达增加的可能机制.方法 采用RT-PCR-单链构象多态性(RT-PCR-SSCP)分析及基因测序检测BaP诱导的恶性转化细胞(polβ-T细胞)中polβ基因外显子序列;基因测序检测polβ基因启动子序列.采用RT-PCR和Western blot检测polβ-T细胞和未经BaP处理的对照细胞(polβ细胞)中蛋白精氨酸甲基转移酶6(PRMT6) mRNA及蛋白质表达水平.结果 RT-PCR-SSCP和基因测序未发现polβ-T细胞中polβ基因外显子序列改变,但其启动子区域经基因测序证实5′端上游-10位和-61位分别存在插入突变(插入G)和点突变(C→A).此外,polβ-T细胞中PRMT6 mRNA和蛋白表达量均较对照polβ细胞增高(P＜0.05).结论 BaP诱导的恶性转化细胞中polβ基因的高表达不伴随其外显子序列的突变,但与启动子序列遗传学突变密切相关,PRMT6还可能通过表观遗传学途径导致polβ的高表达.     

结肠癌组织中存活素、PTEN、p53基因表达检测

目的:检测结肠癌组织中存活素(Survivin)、PTEN和p53基因的表达,并分析其与结肠癌发生发展、临床病理特征之间的关系.方法:应用免疫组织化学SP法检测59例结肠癌、20例结肠腺瘤、19例正常结肠组织中Survivin、PTEN和p53基因的表达,并结合患者的临床病理资料进行分析.结果:结肠癌组织中Survivin、PTEN、突变型p53的阳性表达率分别为64.4%、54.2%、66.1%,Survivin和突变型p53在正常结肠组织和结肠腺瘤组织中不表达, PTEN基因在正常结肠黏膜和结肠腺瘤组织中几乎全部呈阳性表达.3项指标在不同组织中的表达阳性率差异均有统计学意义(P均＜0.05).结肠癌组织中Survivin和突变型p53的阳性表达率均显著高于结肠腺瘤以及正常结肠黏膜组织 (P＜0.05).随结肠癌组织学类型的变化、淋巴结的转移, Duck's分期的增加,突变型p53的阳性表达率逐渐升高(P＜0.05), PTEN的阳性表达率逐渐降低(P＜0.05).Survivin蛋白在结肠癌组织中的表达与其临床病理参数无关.在结肠癌组织中Survivin蛋白与突变型p53蛋白的表达呈正相关((r=0.813 5,P＜0.05), 与PTEN蛋白的表达呈负相关(r=-0.773 5, P＜0.05), PTEN蛋白与突变型p53蛋白的表达呈负相关(r=-0.935 0,P＜0.05).结论:Survivin、PTEN和p53蛋白的异常表达与结肠癌的发生、发展和病理学特征有关.     

前列腺癌组织中PTEN蛋白的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系

目的:探讨抑癌基因PTEN蛋白在前列腺癌(Pca)组织中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系.方法: 采用免疫组织化学S-P法和DNA原位末端标记TUNEL法分别测定42例Pca及10例正常前列腺组织(NP)中PTEN蛋白的表达和肿瘤细胞凋亡,并分析PTEN基因表达缺失与肿瘤细胞凋亡的关系. 结果: NP组织中PTEN蛋白全部阳性表达;而Pca中PTEN基因表达缺失率达64.3%,且与肿瘤细胞分化程度、临床分期和有否淋巴结转移密切相关;PTEN基因表达缺失与肿瘤细胞凋亡成负相关(r=-0.746, P<0.001). 结论: 前列腺癌组织中PTEN表达缺失率较高;PTEN基因失活在Pca的发生发展中起重要作用,且导致肿瘤细胞凋亡减少;联合检测PTEN蛋白和凋亡指数,有助于对肿瘤细胞的分化程度作出正确评价,以指导临床治疗及估计预后.     

非小细胞肺癌组织中PTEN基因与Ki67蛋白的表达及其意义

目的:探讨第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白酶(PTEN)基因、Ki67蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义.方法:用免疫组化方法检测67例NSCLC组织以及41例癌旁正常肺组织中PTEN、Ki67蛋白的表达,并分析其与各临床病理指标及细胞增殖之间的相关性.结果:PTEN在正常肺组织中阳性表达率显著高于NSCLC组织(P＜0.05),PTEN表达与组织类型、细胞分化程度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05);肺癌组织中Ki67的过度表达与肺癌的临床分期、淋巴结转移相关(P＜0.05);PTEN表达与Ki67表达负相关(r=-0.239,P＜0.05).结论:PTEN蛋白表达的缺失与NSCLC的恶性侵袭有关.联合检测PTEN与Ki67的表达有助于判断NSCLC的预后.     

脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β、Fas、p53基因mRNA的表达

目的:研究脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β(polβ)、Fas、p53基因mRNA的表达。方法:采用RT-PCR扩增及半定量分析方法,对22例脑胶质瘤、7例良性脑肿瘤及其相应瘤旁正常脑组织中DNApolβ、Fas、p53基因mR-NA进行检测。结果:与相应瘤旁正常脑组织相比,脑胶质瘤及良性脑肿瘤组织中DNApolβ、Fas基因mRNA高表达,p53基因mRNA低表达(P均<0.01)。脑肿瘤组织中DNApolβ与Fas基因mRNA的表达呈正相关((r=0.611,P<0.05)),与p53基因mRNA的表达无关;p53与Fas基因mRNA的表达亦无关。结论:p53基因mRNA低表达及DNApolβ和Fas基因mRNA高表达与脑肿瘤的发生发展及恶性程度有关。     

双染鸡尾酒抗体在前列腺腺癌和前列腺上皮内瘤中的表达及临床意义

目的 探讨鸡尾酒抗体甲基酰基辅酶A消旋酶(AMACR)、高分子量角蛋白抗体(HMWCK)和p63在前列腺腺癌(Pca)、高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)及良性前列腺增生(BPH)组织中的表达及意义.方法 收集45例Pca、40例HGPIN和45例BPH标本,按常规方法石蜡包埋,制作蜡块,进行苏木素-伊红染色及AMACR、HMWCK和p63鸡尾酒抗体双重免疫组化染色.结果 Pca中AMACR阳性率为84.4%;HGPIN中AMACR阳性率为82.5%,与Pca中比较差异无统计学意义(P＞0.05);BPH中AMACR阳性率为24.4%,与Pca和HGPIN比较差异均有统计学意义(P＜0.05).HMWCK和p63在高分化Pca中均呈阴性,15.6%中分化和低分化Pca的癌巢周围可见,HGPIN和BPH中均呈阳性表达,但其分布方式不同,在HGPIN中呈连续或间断性分布,从HGPIN至癌移行腺体中逐渐减少至消失,在BPH中呈连续性分布.HMWCK和p63在Pca的表达与HGPIN和BPH比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 鸡尾酒抗体AMACR、HMWCK和p63对诊断高分化Pca有较高的特异性和敏感性,同时对高分化Pca和异型病变的鉴别诊断有价值.     

整合素αvβ3在前列腺癌的表达及临床意义

目的 探讨整合素αvβ3在前列腺癌(Pca)中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S-P法)检测整合素αvβ3在41例前列腺癌中的表达,另20例正常前列腺组织作对照.结果 免疫组织化学发现:在前列腺癌组织中整合素αvβ3表达上调, 正常组织与肿瘤组织表达差异有统计学意义(P＜0.01).整合素αvβ3在前列腺癌组织的表达随着Pca的病理分级、临床分期增加其表达上调(P＜0.05),与Pca的病理分化程度呈负相关(P＜0.01).在各术前血清PSA值组中,整合素αvβ3的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 整合素αvβ3可能在前列腺癌的发生、发展及恶性进展过程中起重要作用,检测整合素αvβ3有助于对Pca的恶性程度、转移潜能和预后的判断.     

永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子、细胞周期蛋白B1和PTEN的表达

目的 观察核于细胞因子(nucleostemin,NS)、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)及抑癌基因PTEN mRNA和蛋白的表达情况.方法 正常食管上皮细胞(shantou human embryonic esophageal epithelial cell line,SHEE)和永生化食管上皮恶变细胞(shantou human embryonic esophageal carcinoma epithelial cell line,SHEEC)连续传代培养,取对数生长期SHEE和SHEEC细胞,采用RT-PCR及Western blot方法检测细胞中NS、Cyclin B1及PTEN mRNA和蛋白的表达并做相关性分析,MTT法检测抑制NS表达后的细胞增殖活性.结果 以SHEE细胞中NS、Cyclin B1和PTEN mRNA的表达量为1,SHEEC细胞中对应的相对表达量分别为(2.047±0.507)、(2.214 ±0.213)及(0.668 ±0.188),两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);SHEE及SHEEC细胞中NS、Cyclin B1及PTEN蛋白表达量分别为(1.142±0.113),(3.161 ±0.108)、(1.585 ±0.056),(2.173 ±0.058)及(1.894 ±0.341),(1.162 ±0.524),两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);NS mRNA和蛋白与Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达呈正相关(r=0.832,P＜0.01;r=0.991,P＜0.05),与PTEN mRNA和蛋白的表达呈负相关(r=-0.924,P＜0.01;r=-0.769,P＜0.05);MTT检测结果显示,NS RNA干扰(RNA interference,RNAi)组与空白对照组和阴性对照组在干扰后12 h细胞增殖能力差异无统计学意义(P＞0.05),而在干扰后24、36、48 h差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SHEEC细胞中NS、Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达量均高于SHEE,而PTEN的表达量低于SHEE,NS可能对细胞恶变有影响.     

GSK-3β、PTEN 、PLK1在儿童急性髓系白血病中的表达及意义

目的探讨糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、与张力蛋白同源的位于第10号染色体磷酸酶基因(PTEN)、Polo样激酶1(PLK1)在儿童急性髓系白血病(AML)中的表达及意义。方法 RT-PCR方法检测实验组(33例初诊AML患儿的骨髓)和对照组(10例正常骨髓)骨髓单个核细胞(BMMNC)中GSK-3βmRNA、PTEN mRNA、PLK1mRNA的表达,ELISA方法检测GSK-3β蛋白及P-GSK-3β的表达。结果实验组中GSK-3βmRNA、GSK-3β蛋白、PLK1mRNA的表达量高于对照组(P=0.012;P=0.014;P=0.040);PTEN mRNA、P-GSK-3β的表达量低于对照组(P=0.012;P=0.002)。GSK3β蛋白与PTEN mRNA的表达呈负相关(r=-0.415,P=0.016);GSK-3βmRNA、GSK3β蛋白与PLK1mRNA的表达成呈正相关(r=0.388,P=0.026;r=0.427,P=0.013)。外周血白细胞计数增高者GSK-3β蛋白表达增高;临床危险度高者GSK-3βmRNA、GSK-3β蛋白的表达增高,P-GSK-3β的表达降低。结论在儿童AML中,GSK-3β和PLK1可能起癌基因的作用,PTEN可能起抑癌基因的作用。     

磷酸酶及张力蛋白同源基因蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及其临床意义.方法 收集30例OSCC及30例距癌组织边界＞2 cm的癌旁组织,Western blot测定上述组织PTEN蛋白含量,qRT-PCR测定mRNA的表达水平,免疫组化(immunohistochemistry,IHC)定性测定PTEN蛋白在上述组织细胞中的组织学定位与表达情况,并根据PTEN表达结果分析其与OSCC临床病理关系.结果 ①癌旁组织均为PTEN蛋白阳性表达,PTEN蛋白阳性表达主要为细胞浆内棕黄色或棕褐色染色.OSCC组织多为阴性表达.②OSCC癌组织中PTEN(蛋白和mRNA)的表达明显低于2 cm外的癌旁组织(P＜0.05).③不同年龄、不同性别、不同发生部位OSCC的PTEN(蛋白和mRNA)表达差异无统计学意义(P＞0.05).④PTEN在高分化鳞癌中的表达明显较中低分化鳞癌高(P＜0.05).⑤无淋巴转移的较有淋巴转移的表达高(P＜0.05).⑥临床Ⅰ+Ⅱ期表达明显高于Ⅲ+Ⅳ期(P＜0.05).结论 PTEN在OSCC癌组织中存在不同程度的异常表达,可能是口腔鳞癌发生、发展、侵袭转移过程中的一个重要因素.     

肝细胞肝癌组织中PTEN、CyclinD1及C-myc的表达及相关性研究

目的:通过检测PTEN、CyclinD1及C-myc蛋白在肝细胞肝癌(HCC)中的表达,了解其与HCC发生和发展的关系.方法:采用EnVisionTM plus免疫组织化学方法检测PTEN、Cyclin D1及C-myc蛋白在52例HCC及癌旁肝组织中的表达情况.结果:52例HCC中PTEN、CyclinD1及C-myc蛋白染色阳性表达率分别为42.3％(22/52)、48.1％(25/52)及53.8％(28/52),癌旁肝组织的阳性表达率为92.3％(48/52)、25.0％(13/52)及32.7％(17/52),PTEN、CyclinD1及C-myc在HCC及癌旁肝组织两者间差异有统计学意义(P＜0.05).在HCC中,PTEN与CyclinD1、C-myc的阳性表达均呈负相关(r=-0.3631,P=0.0197;r=-0.3697,P=0.0172);PTEN、CyclinD1及C-myc在人HCC组织中的阳性表达率与肝外转移、术后复发及肿瘤分化程度有关(P＜0.05).CyclinD1和PTEN的阳性表达率与门静脉癌栓有关(P＜0.05).结论:PTEN、CyclinD1及C-myc蛋白在HCC中过表达.PTEN与CyclinD1及C-myc阳性表达呈负相关,与HCC转移复发及肿瘤细胞分化有明显相关性.     

不同类型的DNA聚合酶β基因对CHO细胞的影响

目的:比较野生型和突变型(58 bp缺失)DNA聚合酶β(polβ)基因对真核细胞生长特性的影响. 方法:将表达人野生型和缺失型DNA polβ的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),用RT-PCR方法鉴定野生型和缺失型DNA polβ mRNA水平的表达,MTT法测生长曲线、流式细胞术测细胞周期. 结果:转染野生型和突变型DNA polβ的CHO细胞株中,都有外源基因mRNA水平的表达;转染突变型(58 bp缺失)polβ基因的细胞增殖速度和S期比例增高均高于未转染组细胞,差异有统计学意义(P<0.05). 而转染野生型polβ基因对细胞增殖速度和细胞周期无明显影响(P>0.05). 结论:高表达外源性野生型和突变型DNA polβ,对CHO细胞生长具有不同的影响.     

EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF PTEN MRNAAND SMAD4 MRNA IN PAPILLARY THYROID CARCINOMA

目的:探讨PTEN mRNA、Smad4 mRNA在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义.方法:采用FQPCR法检测94例PTC及癌旁组织,29例甲状腺腺瘤组织中PTEN mRNA和Smad4 mRNA的表达情况.结果:PTC高、中、低转移变型组PTEN mRNA和Smad4 mRNA的表达明显低于甲状腺腺瘸组及癌旁组,差异具有统计学意义(P＜0.05);且PTEN mRNA表达与Smad4 mRNA表达呈正相关(P＜0.05).结论:PTEN 和Smad4在PTC的发生发展过程中存在协调关系,二者的低表达可作为判断PTC预后不良的指标.     

实时荧光定量PCR检测CD258在前列腺癌组织中的表达

目的 应用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)法检测CD258(肿瘤坏死因子14,TNFSF14)在前列腺癌(PCa)组织中的表达,以探讨CD258基因与PCa的关系.方法 提取正常前列腺组织、良性前列腺增生(BPH)组织及经病理确诊的PCa组织中的总KNA,并逆转录为cDNA,应用RQ-PCR.法检测CD258的表达.结果 在正常前列腺、BPH及PCa组织,CD258的阳性表达率均为100%.在正常前列腺组织中,CD258基因平均相对表达强度为(10.2±1.53),BPH组织中为(9.91±2.01),而在PCa组织中为(3.14±1.72).BPH组及正常对照组比较无统计学差异(P＞0.05),Pca组与BPH组及正常对照组比较有统计学意义(P＜0.05).结论 CD258在PCa组织中出现较低的表达强度,提示其有可能与PCa的发病相关.