发性硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体9的表达及血清白介素-10水平的研究

目的研究Toll样受体9（TLR9）在多发性硬化（MS）患者外周血单个核细胞（PBMCs）上的表达水平及MS患者血清白介素-10（IL-10）水平，探讨其潜在的机制。方法分离23例活动期、19例缓解期MS患者及20例正常对照组PBMCs，用反转录一聚合酶链反应（RT-PCR）法检测PBMCs中TLR-9mRNA的表达水平，酶联免疫吸附试验法检测其血清白介素-10水平。结果活动期MS患者PBMCs的TLR-9mRNA表达水平高于缓解组（P〈0．01）及正常对照组（P〈0．01），缓解期和正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。MS缓解期患者血清IL-10水平显著高于活动期患者（P〈0．01），活动期和缓解期的患者均高于正常对照组（P〈0．01）。TLR-9mRNA表达水平与血清IL-10水平呈负相关（r=-0．224，P=0．013）。结论活动期MS患者PBMCs的TLR-9mRNA的表达水平增高，并且与MS患者血清IL-10水平呈负相关，TLR9在MS免疫发病机制中具有重要的作用，在MS中IL-10是一种保护性抑炎因子，可能有利于疾病的缓解。     

阿尔茨海默病患者外周血单个核细胞Toll样受体4和9的表达水平

目的 分析AD患者外周血单个核细胞Toll样受体(TLR)4和9的改变,寻找取材容易、特异性高的生物学标志物.方法 纳入72例AD患者,60例年龄、性别匹配的健康状况良好的体检者作为对照组.收集相关临床资料,采集外周血液,分离单个核细胞,采用流式细胞术检测TLR4和TLR9的蛋白表达,采用Real-time PCR检测其mRNA的表达.结果 Real-time PCR结果显示,与对照组相比,AD组TLR4的mRNA表达明显升高(1.43±0.27),而TLR9的mRNA表达明显降低(0.65±0.11),两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).流式细胞结果显示,AD组TLR4的蛋白表达明显升高[(31.5±15.1)％比(10.2±7.5)％],TLR9表达明显降低(17.3±13.2)％比(43.7±20.6)],差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 外周单个核细胞参与AD的炎性反应,其TLR4和TLR9的表达改变,有可能作为AD诊断的生物学标准物,为AD的诊断提供新的思路.     

多发性硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体9的表达及血清白介素-10水平的研究

目的 研究Toll样受体9(TLR-9)在多发性硬化(MS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)上的表达水平及MS患者血清白介素-10(IL-10)水平,探讨其潜在的机制.方法 分离23例活动期、19例缓解期MS患者及20例正常对照组PBMCs,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PBMCs中TLR-9mRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验法检测其血清白介素-10水平.结果 活动期MS患者PBMCs的TLR-9mRNA表达水平高于缓解组(P<0.01)及正常对照组(P<0.01),缓解期和正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).MS缓解期患者血清IL-10水平显著高于活动期患者(P<0.01),活动期和缓解期的患者均高于正常对照组(P<0.01).TLR-9mRNA表达水平与血清IL-10水平呈负相关(r=-0.224,p=0.013).结论 活动期MS患者PBMCs的TLR-9mRNA的表达水平增高,并且与MS患者血清IL-10水平呈负相关,TLR9在MS免疫发病机制中具有重要的作用,在MS中IL-10是一种保护性抑炎因子,可能有利于疾病的缓解.     

多发性硬化患者外周血单个核细胞转录因子Sp3基因的缺陷表达

目的：研究我国多发性硬化（MS）病人外周血单个核细胞（PBMC）转录因子Sp3基因表达情况及其与临床相关性。方法：采用反转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术，经2对引物扩增，检测了33例MS、30例非免疫 性其他神经系统疾病对照、30例神经系统其他自身免疫性疾病对照和30名健康对照组者PBMC的Sp3基因表达。结果：Sp3基因表达缺如，MS患者组（45％，15／33）明显高于其他3组（依次为16％，5／30，6％，2／30；10％，3／10，P均（＜0．01），可自Sp3表达阴性MS患者的DNA中扩增出相应Sp3片段。Sp3表达阴性MS患者改良的伤残状态量表（EDSS）评分显著高于表达阳性者。脑脊液的IgG24h合成率和血清可溶性白细胞介素－2受全稍高，4例MS患者治疗前病情重和治疗后病情轻时相比，未见其Sp3基因表达有明显变化。结果：汉 MS病人PBMC中有Sp3表达缺陷，Sp3阴性患者残疾程度和免疫功能紊乱程度明显高于阳性者，作 为转录调节因子Sp3的表达缺乏可能与免疫控制的异常启动有关。     

吉兰-巴雷综合征外周血单个核细胞DcR3 mRNA表达

目的研究吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barrésyndrome,GBS)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中凋亡相关基因诱骗受体(DCR3)mRNA的表达水平。探讨DcR3与GBS疾病严重程度及脑脊液免疫球蛋白(CSF-Ig,包括IgGI、gA、IgM)水平之间的关联性。方法以36例GBS患者和20名健康人为研究对象,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周静脉血PBMCs DcR3 mRNA表达水平,并对GBS患者CSF-Ig水平与疾病严重程度和DcR3 mRNA表达的相关性进行分析。结果 GBS患者PBMCs中DcR3 mRNA表达水平(0.40±0.08)明显高于健康对照组(0.17±0.04)(P<0.01),但轻型组和重型组患者表达水平(分别为0.39±0.07、0.41±0.05)间比较无统计学差异(P>0.05)。GBS患者轻型组IgG、IgA、IgM表达水平分别为(0.123±0.113)、(0.016±0.012)和(0.012±0.011)g/L,与重型组〔IgGI、gA、IgM分别为(0.128±0.112)(、0.015±0.011)和(0.013±0.013)g/L〕比较无统计学差异(均P>0.05)。DcR3 mRNA表达与CSF-Ig水平异常无相关性(rIgG=0.0083,rIgA=0.0056,rIgM=0.0015,均P>0.05)。结论 GBS患者PBMCs DcR3 mRNA表达增加,提示DcR3可能与GBS免疫细胞凋亡异常和免疫调节紊乱有关,可能参与了GBS的发病过程。DcR3与GBS病情严重程度和CSF-Ig的异常无相关性。     

急性脑梗死患者早期血清肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导剂水平与脑白质病变的相关性

目的 探讨急性脑梗死患者早期血清可溶性肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导剂(Soluble tumor nec-rosis factor like weak apoptosis inducer,sTWEAK)水平与脑白质病变(White matter lesions,WMLs)的相关性.方法 收集2018年2月-2019年12月...     

同种异体骨髓单个核细胞移植急性心肌梗死大鼠：心肌细胞凋亡及相关基因的表达

背景：细胞凋亡增加所导致的进行性心肌细胞丢失是引起急性心肌梗死后充血性心力衰竭的主要原因之一,通过降低 肿瘤坏死因子α浓度及Bax蛋白、PDCD5 mRNA表达可以抑制急性心肌梗死后心肌细胞凋亡。 目的：探讨同种异体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2006-01/11在华中科技大学附属协和医院完成。 材料：体质量为(240±20)g的Wistar大鼠60只,随机分为假手术组、模型对照组、细胞移植组,20只/组。另取体质量为100~150 g的Wistar大鼠60只用于制备骨髓单个核细胞。 方法：模型对照组、细胞移植组大鼠结扎冠状动脉左前降支,建立急性心肌梗死模型;假手术组大鼠仅开胸,不结扎冠状动脉左前降支。造模后,细胞移植组大鼠在梗死心肌周围分4点于心外膜下植入骨髓单个核细胞悬液,每点100 μL(107个细胞);假手术组、模型对照组同法注射等量DMEM培养基,培养4周。 主要观察指标：血清及非梗死区心肌组织中肿瘤坏死因子α的水平,左室非梗死区心肌细胞凋亡指数、Bax蛋白和PDCD5 mRNA的表达。 结果：移植后4周,细胞移植组在发生凝固坏死的宿主心肌内可以看到局灶BrdU标记阳性的骨髓单个核细胞。与假手术组比较,移植后4周模型对照组、细胞移植组血清和心肌组织中肿瘤坏死因子α水平均显著升高(P < 0.05),但细胞移植组升高幅度明显小于模型对照组(P < 0.05)。与假手术组比较,模型对照组和细胞移植组左心室非梗死区心肌细胞凋亡指数、Bax蛋白和PDCD5 mRNA(PDCD5/GAPDH)均明显升高(P < 0.05),但细胞移植组升高幅度明显小于模型对照组(P < 0.05)。 结论：同种异体骨髓单个核细胞移植可以抑制大鼠心肌梗死后心肌细胞凋亡的发生,其机制可能与其抑制肿瘤坏死因子α的表达、降低Bax蛋白和PDCD5基因的促凋亡作用有关。     

急性髓细胞性白血病患者外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达

背景：大量研究显示,肿瘤患者外周血T细胞表面共刺激分子CD28蛋白表达存在差异,提示共刺激通路异常可能与恶性肿瘤的发生进展有关。 目的：观察急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞共刺激信号分子CD28 mRNA在中的表达。 方法：急性髓细胞性白血病患者80例,其中M0型7例,M1型6例,M2型18例,M3型15例,M4型17例,M5型9例,M6型8例。并根据急性白血病疗效标准将80例患者分为完全治愈组、缓解组、未缓解组。采用Taqman探针实时荧光定量PCR检测80例患者及76名健康人群外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达。 结果与结论：急性髓细胞性白血病外周血单个核细胞M1,M3和M4亚型中的CD28 mRNA表达量低于健康人群 (P < 0.05);急性髓细胞性白血病未缓解组中CD28 mRNA低于健康人群 (P < 0.05),完全治愈组和缓解组中CD28 mRNA表达与健康人群差异无显著性意义。说明急性髓细胞白血病患者外周血单个核细胞存在CD28 mRNA表达缺陷,并与临床分期、病情进展及预后有关。     

人脐血单个核细胞静脉移植心肌梗死模型兔心肌组织肿瘤坏死因子α的表达

背景：有报道指出心肌梗死部位及其周围区域炎性细胞浸润和炎性因子渗出,参与心室重构、心功能损害的发生和发展,干细胞移植治疗心肌梗死与移植干细胞抑制心肌梗死后局部炎症反应相关。 目的：探讨静脉移植人脐血单个核细胞对兔心肌梗死后心肌组织炎症反应及炎性因子肿瘤坏死因子α表达的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-02/12在中南大学湘雅医院医学实验研究中心和中南大学实验动物学部完成。 材料：6份脐血来自中南大学湘雅医院产科身体健康足月分娩的产妇。健康纯种中国家兔45只,随机分为细胞移植组、模型组、假手术组,15只/组。 方法：Ficoll法分离培养人脐血单个核细胞,传至第2代用于移植,移植前24 h行BrdU标记,调整浓度至0.04×1013 L-1。细胞移植组、模型组兔结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型,假手术组兔左前降支穿线不结扎。造模后24 h,细胞移植组经耳缘静脉注入0.5 mL人脐血单个核细胞悬液,含2×107个人脐血单个核细胞;模型组、假手术组同法注入等量生理盐水。分别于细胞移植后1,2,4周取材。 主要观察指标：超声心动图测量结果,心肌组织切片白细胞计数,免疫组化检测心肌BrdU阳性细胞及肿瘤坏死因子α的表达水平,RT-PCR法检测心肌肿瘤坏死因子αmRNA的表达。 结果：与模型组比较,移植后1,2,4周细胞移植组心功能明显改善,左室短轴缩短率及左室射血分数均明显升高(P < 0.05);各时间点细胞移植组白细胞数均明显降低(P < 0.05)。移植后第4周,假手术组心肌细胞无肿瘤坏死因子α表达;模型组可见明显肿瘤坏死因子α表达;细胞移植组肿瘤坏死因子α表达程度明显减弱,且呈黄褐色的BrdU阳性细胞散在分布于梗死周边区域。与模型组比较,移植后1,2,4周细胞移植组肿瘤坏死因子αmRNA的表达水平均明显降低(P < 0.05)。 结论：静脉移植人脐血单个核细胞可改善兔心肌梗死后心功能,抑制心肌组织肿瘤坏死因子α表达,减轻心肌梗死后局灶性炎症反应。     

肿瘤坏死因子α诱导人髓核细胞凋亡的作用途径*

背景：在与细胞凋亡有关的众多因素中, 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)超家族成员发挥了重要的作用。但TNF是通过何种途径诱导椎间盘髓核细胞凋亡的机制尚未阐明。 目的：探讨TNF-α激活后,丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号转导通路中P38MAPK和应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(stress-activated protein kinase/c-Jun NH2-terminal kinase,JNK/SAPK)两条途径对人髓核细胞凋亡的作用。 方法：体外培养人髓核细胞,将细胞随机分成4组：TNF-α刺激组,P38MAPK阻断组,P-JNK/SAPK阻断组和对照组。采用TUNEL法检测髓核细胞凋亡情况,免疫荧光法检测P-P38MAPK和P-JNK/SAPK的表达及定位;Western Blot法检测P38MAPK,JNK/SAPK及其磷酸化形式的表达。 结果与结论：TUNEL法检测凋亡结果中,TNF-α刺激组较其他各组的凋亡细胞密度大(P < 0.01);免疫荧光结果显示TNF-α刺激组P-P38MAPK和JNK/SAPK在细胞质和细胞核的表达高于各阻断组和对照组(P < 0.01);Western Blot结果显示P38MAPK,P-JNK/SAPK在各组髓核细胞内均有表达,但无活化形式,TNF-α刺激组可见P-P38MAPK,P-JNK/SAPK表达,但相应阻断组无表达。结果表明,外源性TNF-α可通过P38MAPK和P-JNK/SAPK途径导致人髓核细胞凋亡。     

急性脑梗塞患者血清肿瘤坏死因子水平变化的观察

采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法对３０例正常对照和３６例急性脑梗塞患者血清肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）水平进行了检测。结果显示：急性脑梗塞组血清ＴＮＦ水平显著高于正常对照组，血清ＴＮＦ水平变化与脑梗塞容积大小密切相关，恢复期血清ＴＮＦ水平显著降低。结果提示，ＴＮＦ参与了脑梗塞发生后病理变化过程，检测血清ＴＮＦ对判定脑梗塞容积大小有一定的临床意义。     

Interferon-beta induces brain-derived neurotrophic factor in peripheral blood mononuclear cells of multiple sclerosis patients

Interferon-beta (IFN-beta) achieves its beneficial effect on multiple sclerosis (MS) via anti-inflammatory properties. In this study, we assessed the expression of the brain-derived neurotrophic factor (BDNF) in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS) patients treated or not with IFN-beta. Intracellular BDNF was measured by Western blot and ELISA and compared with serum BDNF. We found higher levels of BDNF in PBMC of IFN-beta-treated versus non-treated patients, whereas serum levels of BDNF were similar. We hypothesize that the increased intracellular BDNF secondary to IFN-beta is not released in the periphery. This release is probably not tissue specific but in MS patients, BDNF could be specifically delivered by PBMC at the site of re-activation, i.e. within the central nervous system.     

乙酰胆碱受体抗体阳性重症肌无力外周血单个核细胞miRNA表达谱

目的本研究对比乙酰胆碱受体抗体阳性重症肌无力患者(AchR-MG)和正常对照组外周血单个核细胞miRNA,预测对AchR-MG发病可能产生影响的通路,为进一步探讨发病机制打下基础。方法采用病例对照研究方法,基于高通量测序,筛选了AchR-MG特异性表达的miRNA。利用TargetScan、miRanda进行靶基因交叉预测,利用基因条目(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行富集分析。结果共筛选出差异性miRNA 28种,其中上调17种,下调11种。差异最显著的前5个为:mmu-miR-3968、miR-4785、miR-210-3p、miR-664a-3p、miR-2277-5p。miR-4785预测到METTL22、TMEM38A、ZNF324、ITGB4、CDC34等395种靶基因。最终识别了319条GO term(P 0.01),获得了119个的风险通路(P0.05)。结论 AchR-MG特异性表达miR-4785、miR-210-3p、miR-664a-3p、miR-2277-5p等28种miRNA。以Wnt信号通路为代表的多种通路可能参与AchR-MG的发病。     

阿尔茨海默病患者外周血巨噬细胞移动抑制因子的表达

目的 探讨阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者外周血中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的表达水平及其与病情程度的关系.方法 应用ELISA法和荧光定量PCR技术,测定64例AD患者和50名健康对照者外周血MIF的表达水平.根据简易精神状况检查量表(MMSE)评分将AD患者分为轻、中、重度3组.结果 血浆MIF的浓度和外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)MIF mRNA的表达水平AD组高于对照组,差别有统计学意义(P＜0.05);AD痴呆重度组分别高于轻、中度组,差别有统计学意义(P＜0.05);但轻、中度组之间差别无统计学意义(P＞0.05).蛋白和核酸两个水平MIF的浓度与MMSE评分成负相关(r蛋白=-0.34,r核酸=0.36,P＜0.01).结论 MIF可能参与AD的病理过程并发挥重要作用,其水平变化与痴呆严重程度相关.     

乙酰胆碱受体抗体阳性重症肌无力外周血单个核细胞miRNA表达谱

目的 本研究对比乙酰胆碱受体抗体阳性重症肌无力患者（AchR-MG）和正常对照组外周血单个核细胞miRNA,预测对AchR-MG发病可能产生影响的通路,为进一步探讨发病机制打下基础。方法 采用病例对照研究方法,基于高通量测序,筛选了AchR-MG特异性表达的miRNA。利用TargetScan、miRanda进行靶基因交叉预测,利用基因条目（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）进行富集分析。结果 共筛选出差异性miRNA 28种,其中上调17种,下调11种。差异最显著的前5个为：mmu-miR-3968、miR-4785、miR-210-3p、miR-664a-3p、miR-2277-5p。miR-4785预测到METTL22、TMEM38A、ZNF324、ITGB4、CDC34等395种靶基因。最终识别了319条GO term（P<0.01）,获得了119个的风险通路（P<0.05）。结论 AchR-MG特异性表达miR-4785、miR-210-3p、miR-664a-3p、miR-2277-5p等28种miRNA。以Wnt信号通路为代表的多种通路可能参与AchR-MG的发病。     

骨髓间充质干细胞下调类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8及TLR9的表达

背景：间充质干细胞能够缓解类风湿性关节炎小鼠的症状,但是其机制还不清楚。目的：观察骨髓间充质干细胞对类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9等的影响。方法：DBA/1J小鼠随机分3组,非造模组不造模,阳性对照组和实验组制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型。实验组尾静脉注射移植大鼠骨髓间充质干细胞。结果与结论：与阳性对照组比较,实验组小鼠关节直径明显减小,关节炎症细胞浸润程度明显降低,但比非造模组略高;小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8、TLR9和白细胞介素1β的水平较阳性对照组明显降低(P < 0.01或P < 0.05);阳性对照组与实验组中TLR8与TLR9的表达均无明显相关性(P > 0.05)。说明骨髓间充质干细胞下调了类风湿关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9的水平,但TLR8与TLR9的表达无相关性。     

Alzheimer病病人血清与脑脊液白细胞介素-1及肿瘤坏死因子水平检测的研究

目的　为探讨炎性细胞因子 (CK)在Alzheimer病 (AD)慢性炎性病理过程中的作用。方法　本研究采用ELISA法对AD病人 (1 1例 )、血管性痴呆 (VD)病人 (1 3例 )与正常对照 (1 3名 )的血清与脑脊液 (CSF)、白细胞介素 1 β(IL 1 β)和肿瘤坏死因子 (TNF α)的水平进行了测定。 结果　与VD(38 51± 1 4 39)pg/ml、正常对照 (33 98± 1 6 31 )pg/ml相比 ,AD病人血清IL 1 β水平 (60 1 3± 1 7 81 )pg/ml明显升高 ,P <0 0 1。AD病人血清TNF α水平 (81 2 0± 2 3 99)pg/ml虽较VD(71 77± 2 8 86)pg/ml和正常对照 (73 91± 1 7 69)pg/ml轻度升高 ,但并无统计学意义。AD病人CSFIL 1 β水平 (38 2 5±1 8 42 )pg/ml明显高于对照组 (2 0 2 5± 1 5 86 )pg/ml和VD病人 (32 1 8± 1 9 81 )pg/ml,P <0 0 5。AD病人CSFTNF α水平 (1 4 2 58± 1 1 46)pg/ml也明显高于VD病人 (1 1 5 46± 1 9 52 )pg/ml,P <0 0 5 )和对照组 (1 0 6 2 3± 2 6 1 3)pg/ml,P <0 0 1。结论　上述结果表明 ,炎性细胞因子IL 1 β和TNF α在AD的神经变性过程起着重要的作用 ,炎症可参与AD的发病机制。开发针对AD细胞因子网络的特异性治疗有着相当意义