兔化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损

目的：以化学去细胞兔神经移植修复大鼠坐骨神经缺损，从而探索化学去细胞异种神经移植修复神经缺损的可能性；方法：以30％TritonX-100和40%脱氧胆酸钠顺序处理新鲜取材的兔神经(直径15nm左右)，移植修复成年wistar大鼠l.0cm坐骨神经缺损．4个月后行电生理及组织学检查，观察神经再生情况；结果：移植神经未被宿主排斥，大量再生的神经纤维长过移植物，并恢复电传导功能；结论：化学去细胞异种神经可以作为修复周围神经缺损的一种很有前途的方法。     

组织工程神经修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的观察组织工程神经修复SD大鼠1．5cm长坐骨神经缺损的效果。方法用甘油处理10只SD大鼠2．0cm长坐骨神经，制备成同种异体脱细胞基质，备用。取SD乳鼠10只，分离坐骨神经，去神经外膜后，剪成小碎块，在DMEM中培养3周，扩增后的细胞鉴定、备用。3个月龄的SD雌性大鼠40只，单纯随机分成4个神经移植组（A、B、C、D），每组10只。A组：用扩增的雪旺细胞加同种异体脱细胞基质桥接，即组织工程化人工神经组。B组：用元雪旺细胞但具有内部支架结构的同种异体脱细胞基质桥接。C组：自体神经移植组。D组；空白对照组。术后12周，进行一般情况、小腿三头肌湿重、再生神经的组织学观察。结果完成对40只大鼠（每组10只）的实验评估。所有大鼠伤口瑚愈合，元死亡。A、B、C组大鼠足部元溃疡形成，D组7只足部有溃疡形成，所有组实验侧小腿三头肌较健侧萎缩，但以D组最明显。小腿三头肌湿重、神经电生理监测A组、C组差异无统计学意义（P〉O．05），A、C组与B、D组差异有统计学意义（P〈O．05），B组与D组差异有统计学意义（P〈0．05）。A组和C组的胫前肌中均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位（CMAP），B组、D组中则仅录到波幅很低的CMAP。A组和C组再生轴突已通过移植段神经全长，远端肌肉轻度萎缩。B组部分通过移植段神经；D组不能通过移植段神经，6例形成神经瘤。结论组织工程人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。     

组织工程化人工神经修复周围神经缺损的实验研究

目的　研究雪旺细胞和生物降解支架材料复合后构建成的组织工程化人工神经修复神经缺损的效果。方法　将雪旺细胞制成 1× 1 0 8/ml的ECM (extracellularmatrix,ECM)凝胶 ,与PLA无纺纤维布复合培养 7d ,置入PLA中空纤维管中 ,构建成组织工程化人工神经。建立大鼠坐骨神经缺损 1 0mm的动物模型 ,A组为人工神经组 ;B组为雪旺细胞复合ECM凝胶组 ;C组为单纯ECM凝胶组 ;D组为自体神经移植组。术后 8周、1 2周 ,行神经电生理和组织学检测评价疗效。结果　术后 1 2周A组的再生神经纤维已越过远端缝合口 ,有髓神经纤维数和神经纤维密度稍差于D组 ,但再生神经组织的面积显著高于后者 ;A、D组的髓鞘厚度和dLAT、NCV、AMP、AREA均无显著差别 ,但明显高于B、C组。结论　雪旺细胞、ECM凝胶和PLA多孔材料与PLA中空纤维管组合后构建成的组织工程化人工神经 ,修复周围神经缺损的效果接近于自体神经移植     

无细胞的异体神经修复鼠坐骨神经缺损

目的 通过化学萃取同种异体神经,去除髓鞘和雪旺细胞,形成无细胞基膜管后桥接鼠坐骨神经缺损,研究神经再生效果。方法 正常鼠坐骨神经用非变性生物剂处理后得到无细胞的基膜管,桥接鼠坐骨神经20mm缺损。实验分3组:无细胞基膜管移植组(A组),自体神经移植组(B组)和异体神经移植组(C组)。术后进行肌电图、光镜、电镜及图象分析仪检查。结果 A组再生神经有大量轴突通过移植体,术后2个月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅低于B组(P<0.05),术后3个月2组差异无显著意义。髓鞘厚度在术后3个月时亦低于B组,差异有显著意义(P<0.05)。轴突直径及数目两组无差异。C组因无神经再生,结果无法测量。结论 这种无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移,是一种良好的神经移植替代材料。     

静脉骨骼肌神经生长因子复合移植修复神经缺损的电生理研究

静脉骨骼肌神经生长因子复合移植修复神经缺损的电生理研究崔树森，尹维田，王冰，刘永茂，张文杰利用非神经组织移植修复神经缺损的研究已有许多报告，均是单一的一种非神经组织移植。由于各自的缺点所在，尚不能达到满意的效果。我们首先提出了复合体移植修复神经缺损的...     

雪旺细胞构建人工神经在大鼠长段神经缺损中的修复作用研究

[目的]研究雪旺细胞与PLGA构成的组织工程化人工神经修复大鼠周围神经缺损的效果。[方法]将雪旺细胞接种在内置polyglactin910纤维的PLGA中空管，构建成组织工程人工神经。将60只SD大鼠随机分3组，每组20只，建立大鼠坐骨神经缺损20mm的动物模型。A组用切下的自体神经段原位缝合，B组使用雪旺细胞组织工程人工神经进行修复，C组用未接种雪旺细胞的PLGA中空管进行修复。术后8、12周使用神经电生理和组织学观察分别进行效果评价。[结果]在大体观察、组织学观察中，B组的恢复表现与A组相近。在神经电生理检测、小腿三头肌肌肉重量测定、桥接物横切面神经纤维数量测定的结果分析中B组略低于A组但明显高于C组。B组大鼠桥接段远端辣根过氧化酶示踪后在脊髓前角可以看到被标记的神经元。透射电镜可见B组桥接物中段大量的再生神经纤维。[结论]用雪旺细胞和PLGA构建组织工程人工神经修复大鼠外周神经缺损，可以修复20mm的长段周围神经缺损，并可获得接近于大鼠自体神经修复的效果。     

人工皮在组织缺损修复中的应用

在现代工业高速发展的今天,各种复杂、严重的创伤均可出现,在行组织瓣保修重建之前创面的条件改善及保护是一较大的难题,常出现创面感染骨感染而为后期治疗带来了不小的困难,直接影响了后期修复重建的效果。自2003年4月～2006年12月,笔者采用了人工皮(PVA)覆盖保护创面结合后期     

甲状腺激素人工神经桥接大鼠坐骨神经缺损的组织学观察

目的对甲状腺激素人工神经外消旋聚乳酸-三碘甲状腺素原氨酸[Poly(dextrogyr-levogyr)lactideacide-triiodothyronine,PDLLA-T3]桥接大鼠坐骨神经缺损的效果进行组织学评价。方法将90只SD大鼠左侧坐骨神经切断造成1cm缺损,随机分为3组,每组30只。A组:自体神经移植组;B组:PDLLA-T3组;C组:不含甲状腺激素人工神经外消旋聚乳酸(PDLLA)组;桥接坐骨神经缺损。D组:正常对照组(大鼠右侧正常坐骨神经)。于术后2周,1、2个月收集标本,行透射电镜、HE染色、Bielschowsky神经纤维银染及S-100免疫组织化学染色,观察再生神经的数量和质量,经图像处理后进行统计分析。结果术后2周:组织学观察显示B、C组材料尚未完全降解,透射电镜下神经的髓鞘厚度较薄,约0.5μm,A、B、C组间差异无统计学意义(P>0.05);1个月:组织学观察见A组再生神经纤维等组织通过远端吻合口,其间有新生的血管,B、C组材料未完全降解,S-100免疫组织化学及Bielschowsky神经纤维银染显示B组PDLLA-T3成功桥接神经缺损,缺损段有再生神经通过,再生神经髓鞘厚度1.81±0.19μm,优于A、C组,但差异无统计学意义(P>0.05);2个月:B、C组材料完全降解,B组S-100免疫组织化学染色示神经纤维数110.00±8.75,Bielschowsky神经纤维银染显示再生有髓神经纤维数77.00±6.33,两者均优于C组(P<0.05),且与A、D组比较差异有统计学意义(P<0.05);髓鞘厚度为2.15±0.27μm,优于C组(P<0.05),但小于A、D组(P<0.05)。结论PDL-LA-T3桥接大鼠坐骨神经缺损,再生神经纤维数量和质量较好,是一种有前途的组织工程人工神经。     

含神经生长因子的羊膜基质管桥接修复神经缺损的实验研究

目的研究含神经生长因子的人羊膜基质微孔管(NGF·HAMM)、桥接修复周围神经缺损的效果。方法分别用含神经生长因子的人羊膜基质微孔管(NGF·HAMM)、人羊膜基质微孔管(HAMM)、自体神经移植修复60只Wistar大鼠坐骨神经1.2cm缺损;同时将大鼠按手术方法分为3组,每组20只。术后进行组织形态学、电生理学、伤肢功能恢复等检测。结果近端神经再生轴突生长通过1.2cm长的NGF·HAMM移植体,重新支配终末骨骼肌,其再生神经纤维生长速度、数量明显快(多)于单纯HAMM移植体,术后3个月时坐骨神经功能恢复良好。结论NGF和HAMM联合使用可促进轴突再生及其髓鞘化,对损伤神经及伤肢的功能恢复有明显协同促进作用;NGF·HAMM是一种很有希望的神经移植替代材料。     

大鼠陈旧性坐骨神经缺损修复期限的实验研究

目的 探讨大鼠陈旧性坐骨神经缺损的修复期限,观察自体神经移植对大鼠陈旧性坐骨神经缺损的修复作用.方法 清洁级SD大鼠36只,随机分为6组,每组6只.切除大鼠左侧部分坐骨神经,制作神经缺损模型.神经损伤后1、3、6个月用对侧自体神经修复神经缺损作为A1、B1、C1组,不予修复作为对照A2、B2、C2组.术后每周观察步态、足趾皮肤及腿部肌肉的变化.第2次术后3个月,进行电生理检查、荧光金(fluoro gold,FG)逆行示踪、腓肠肌Masson染色、再生神经亮绿.变色酸2R-磷钨酸法染色与透射电镜观察.结果 神经损伤后各组大鼠均有足部溃疡、跛行等失神经表现,修复术后2个月,A1、B1组溃疡愈合,跛行改善,其余各组仍有溃疡、跛行.修复术后3个月,A1、B1、C1组的运动神经传导速度分别为(21.84±6.74)、(20.02 ±4.17)、(16.09±8.21)m/s,组间差异无统计学意义(P＞0.05).复合肌肉动作电位(compound muscle action potential,CAMP)波幅分别为(12.68±4.38)、(9.20±3.43)、(1.22±0.39)mV,A1、B1组与C1组比较差异有统计学意义(P＜0.05):A2、B2、C2组未记录到CAMP.FG逆行示踪观察,A1组阳性细胞最多,胞体较大,B1组居中,C1组阳性细胞最少,胞体最小.腓肠肌Masson染色示A1、B1组腓肠肌纤维形态接近正常,G1、A2、B2、C2组肌纤维明显萎缩.A1、B1、C1组肌纤维横截面积为(340.73±118.46)、(299.88±119.75)和(54.33±53.43)μm2,A2、B2、C2组为(78.60±51.38)、(65.62±25.36)和(40.93±28.22)μm2.A1、B1组与C1、A2、B2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).神经形态观察,A1组再生有髓神经纤维数量多,直径粗,髓鞘厚;B1组再生神经纤维的数量和形态与A1组相似;C1组中再生的有髓神经纤维数量少,纤维细,髓鞘薄:A2、B2、C2组则仪见SC及增生的胶原纤维.结论 自体神经移植能不同程度修复缺损1个月和3个月的大鼠坐骨神经,但对缺损6个月的大鼠坐骨神经修复作用不明显.     

预变性周围神经移植和神经生长因子灌注对脊髓损伤后上行传导束再生的影响

目的：评价应用预变性周围神经移植（PPNG）和神经生长因子（NGF）灌注对大鼠脊髓损伤（SCI）后上行传导束再生的影响及两者协同效果.方法：50只SD大鼠分5组,每组10只,A组为PPNG和NGF灌注组;B组为PPNG组;C组为NGF灌注组;D组为单纯损伤组;E组为正常对照组.A、B组于脊髓损伤前1周取坐骨神经约3mm并置于DMEM中.1周后造成T10脊髓后索损伤并将预变性的外周神经植入,A、C组脊髓损伤后置管注射NGF,每日2μg,共2周;D组单纯损伤脊髓,E组不损伤脊髓.8周后行辣根过氧化物酶（HRP）示踪法计数再生的纤维,按照脊髓与移植物的关系分为脊髓尾端、尾端过渡区、移植物尾端、移植物头端、头端过渡区、脊髓头端六个区,简称Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ区.结果：在Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ区,A组标示的纤维数量显著高于B、C组（P＜0.05）,Ⅵ区均无示踪纤维;D组几无纤维通过移植物.结论：联合应用PPNG及NGF灌注可明显促进大鼠SCI后上行传导束的再生,使再生的纤维跨过两道瘢痕,重新长入脊髓白质内.     

去细胞异种神经复合神经生长因子修复神经缺损的实验研究

目的 应用含有神经生长因子(NGF)的去细胞异种神经基膜管作为神经移植替代物桥接大鼠坐骨神经缺损,观察其对神经再生的作用.方法 选用Wistar大鼠45只,随机分为3组,每组15只,于术制成右后肢坐骨神经长10 mm的神经缺损,取兔胫神经制成去细胞神经基膜管,电镜及HE染色观察神经基膜管超微结构,流式细胞仪检测去细胞前后神经主要组织相容性抗原Ⅱ(MHC Ⅱ)的变化情况.A组以含有NGF的去细胞异种神经基膜管桥接神经缺损,B组单纯采用去细胞异种神经基膜管桥接神经缺损,C组采用自体神经移植修复神经缺损.术后1个月行神经电生理检测即胫后肌群运动诱发电位,用HE染色、免疫组化染色、透射电镜等方法对移植体远端吻个口再生神经纤维进行形态学观察,并对再生有髓神经纤维的数量、密度、直径及雪旺细胞的密度进行量化分析.结果 移植前新鲜神经组MHC-Ⅱ检测值为72.14±19.88,去细胞组MHC-Ⅱ检测值为4.19±3.11,两组比较差异有统计学意义(t=3.817,P＜0.05);透射电镜观察显示为胶原性管道,无细胞成分.术后4周,处死前行运动诱发电位检测,神经传导速度A组为(21.16±2.31)m/s,B组为(13.37±1.89)m/s,C组为(21.43±2.18)m/s,A组与 C组比较差异无统计学意义(P＞0.05),A组与 B组比较差异有统计学意义(P＜0.05).组织学观察见3组移植体远端吻合口横切面再生神经纤维呈微束状,透射电镜观察再生神经纤维具有正常的形态和结构.A、C组再生神纤纤维数量及直径均优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 经化学萃取的去细胞兔胫神经基膜管能够移植于大鼠,成功修复大鼠坐骨神经缺损,而且复合NGF的去细胞基膜管在神经修复质量上优于单纯的去细胞神经基膜管,更加接近自体神经移植的效果.     

神经生长因子治疗周围神经损伤的前瞻性研究

目的观察神经生长因子(NGF)对周围神经损伤的近期治疗效果。方法2004年4月～2005年10月将48例周围神经损伤患者随机分为治疗组(NGF组,25例)和对照组(维生素B_(12)组,23例),4周后比较两组患者疼痛、麻木症状的改善情况,以及神经电生理变化。结果与对照组相比,治疗组患者的疼痛、麻木症状显著减轻,差异有显著性意义(P＜0．05)；感觉和运动电位的恢复率明显增高,差异有极显著性意义(P＜0．01)；恢复神经的感觉和运动电位的潜伏期均明显缩短,差异有显著性意义(P＜0．05)；波幅均显著增高,差异有显著性意义(P＜0．05),不良反应少。结论NGF早期可安全、有效地治疗周围神经损伤。     

化学去细胞异体神经复合肝细胞生长因子修复周围神经缺损的研究

目的 研究化学去细胞异体神经复合人肝细胞生长因子(HGF)修复周围神经缺损的作用.方法 体外试验检测携带人肝细胞生长因子基冈的重组腺病毒(Ad-HGF)对小鼠骨骼肌细胞的转染效率以及转染细胞对目的 蛋白的表达.化学玄细胞异体神经修复大鼠坐骨神经10mm缺损后,近、远端吻合口附近肌肉分别注射腺病毒介导的人肝细胞生长因子(Ad-HGF),与自体神经移植组对照,通过步态分析、肌肉湿重测定、轴突生长速率测定、神经电生理、计算机图像分析等指标评价神经移植后再生效果.结果 流式细胞仪结果表明,随着病毒滴度的增加,Ad-HGF对骨骼肌细胞的转染不断增加.骨骼肌细胞对目的 蛋白(HGF)的表达可以持续两周.大鼠动物实验术后16周,去细胞异体神经可以修复周罔神经缺损,同自体神经移植对比,肝细胞生长因子明显增强了去细胞异体神经的神经再生能力.结论 复合肝细胞生K因子的化学去细胞异体神经能促进神经轴突牛长速度,显著增加移植物内新生血管,满意修复一定长度周围神经缺损,可以成为一种有效的周围神经组织工程修复材料.     

结缔组织生长因子在周围神经慢性卡压损伤中的表达及其意义

目的 探讨大鼠坐骨神经慢性卡压损伤后其卡压神经段内结缔组织生长因子(CTGF)表达变化及其意义. 方法 2010年7月到2010年9月,将50只成年雄性SD大鼠随机分成:A组(假手术组),仅分离暴露坐骨神经;B组(卡压组),采用Mackinnon建立的坐骨神经卡压模型方法对大鼠右侧后腿坐骨神经行硅胶管卡压术.于卡压术后2、4、6、8、10周时间点,随机取A、B组大鼠各5只,取其卡压段坐骨神经行组织形态学、免疫组织化学观察及RT-PCR、Western blot定量测定CTGF及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(COL-Ⅰ、Ⅲ)含量. 结果 坐骨神经慢性卡压损伤后,有髓神经纤维发生瓦勒变性,胶原纤维增生,CTGF表达上调,并伴有COL-I、Ⅲ表达升高,与假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 慢性卡压损伤可致周围神经发生纤维化病变,CTGF参与了这一病理生理改变过程,提示CTGF在周围神经纤维化过程中具有一定作用.     

Vascular endothelial growth factor promotes peripheral nerve regeneration after sciatic nerve transection in rat

Objective：To evaluate the local effect of vascular endothelial growth factor （VEGF） on transected sciatic nerve regeneration.Methods：Sixty male white Wistar rats were divided into four experimental groups randomly （n=15）.In transected group the left sciatic nerve was transected and the stump was fixed to adjacent muscle.In treatment group the defect was bridged using a silicone graft filled with 10μL VEGF.In silicone group the graft was filled with phosphate-buffered saline.In sham-operated group the sciatic nerve was exposed and manipulated.Each group was subdivided into three subgroups with five animals in each and nerve fibers were studied 4,8 and 12 weeks after operation.Results：Behavioral test,functional study of sciatic nerve,gastrocnemius muscle mass and morphometric indices confirmed a faster recovery of regenerated axons in VEGF group than in silicone group （P〈0.05）.In immunohistochemical assessment,reactions to S-100 in VEGF group were more positive than that in silicone group.Conclusion：Local administration of VEGF will improve functional recovery and morphometric indices of sciatic nerve.     

微囊化SD大鼠周围神经组织移植促进周围神经再生的实验研究

目的　采用微囊化组织研究技术 ,研究微囊化神经组织移植对周围神经再生的影响。方法　将 12只SD大鼠随机分为实验组和空白组。切断SD大鼠左侧坐骨神经并行显微缝合 ,实验组 8只 ,加入制备好的微囊化同种异体周围神经颗粒无血清培养液 30 μl,约含微囊颗粒 30 0个 ;空白组 4只 ,加入不含微囊颗粒的无血清培养液 30 μl。术后 4周取材做组织形态学检查。结果　实验组周围神经再生明显优于空白组。结论　微囊化周围神经移植有促进周围神经再生的作用     

外源性神经生长因子对内源性神经生长因子的影响

目的：探讨外源性神经生长因子对内源性神经生长因子的影响，方法：采用大鼠坐骨神经硅管内再生室模型，靶器官内注射神经生长因子（实验组）或生理盐水（对照组）２周，注射后１天，１周天及２周，采用新生大鼠背根神经节细胞培养，测定硅管内液神经营养活性，用化学发光免疫检测法（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ＣＬＩＡ）测定神经生长因子含量，结果：实验组与对照组细胞存活数及神经生长因子含量     

组织工程化人工神经实验研究

目的 研究组织工程化人工神经修复大鼠2.5cm长坐骨神经缺损的效果。方法 21只2月龄Lewis lw雌性大鼠随机分成三个神经移植组,每组7只。A组:种植同源雪旺细胞并具有内部支架结构的胶原神经管,即组织工程化人工神经。B组:无雪旺细胞但具有内部支架结构的胶原神经管。C组:自体神经移植组。术后六个月,进行系列神经电生理监测,神经肌肉组织学观察,S-100和神经微丝蛋白(Neurofilament)免疫组化染色,轴突计数等检查。结果 在A组和C组移植神经上均能诱发出波幅明显的神经肌肉复合动作电位(CMAP),再生轴突已通过移植神经全长,远端肌肉轻度萎缩。而B组中没有或仅记录到极小波幅的CMAP,移植神经远端结缔纤维组织增生,再生轴突罕见,所支配肌肉明显萎缩。结论 初步结果显示:组织工程化人工神经可用来修复大鼠长段神经缺损。