抗PSMA7单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备抗蛋白酶体α7亚基(PSMA7)的单克隆抗体,为PSMA7的功能研究奠定基础。方法以纯化的重组蛋白PSMA7为抗原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备PSMA7单克隆抗体,并用间接ELISA法和Western blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定。结果成功建立两株稳定分泌抗PSMA7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为B013和B001。检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1∶128和1∶256,腹水效价为1∶25600和1∶32000。两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1。Westernblot及免疫组化实验证实,两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性PSMA7蛋白。结论成功建立了两株效价高、特异性好的抗PSMA7单克隆抗体杂交瘤细胞,制备的单克隆抗体可用于PSMA7蛋白的鉴定,为其生物学功能研究奠定了基础。     

夫妻ABO血型不合孕妇IgG抗体效价检测对母婴血型差异评估及与新生儿溶血病发生的关系

目的 分析孕妇免疫球蛋白G(IgG)抗体效价检测在夫妻ABO血型不合中对母婴血型评估的差异性,并分析检测孕妇IgG抗体效价与新生儿溶血病(Hemolytic disease of newborn, HDN)之间的联系。方法 选取2020年1月-2021年12月798例夫妻ABO血型不合孕妇,所有孕妇均在产前采用微柱凝胶法进行IgG抗体效价检测,并测定婴儿的血型,分析IgG抗体效价检测对夫妻ABO血型不合孕妇母婴血型差异评估及与HDN发生的关系。结果 798例夫妻ABO血型不合孕妇中,母婴血型不合率为50.50%,其中孕妇血型为O型占25.63%,高于A型8.52%、B型7.27%,孕妇血型为O型,丈夫为AB的母婴血型不合率为100.00%;798例夫妻ABO血型不合孕妇中,IgG抗体效价<1∶64占比为80.45%,1∶64占比为8.65%,1∶128占比为6.14%,1∶256占比3.26%,≥1∶512占比1.50%;其中O型血孕妇IgG抗体效价≥1∶64占比19.55%,A型3.13%,B型3.26%;IgG抗体效价≥1∶64诊断HDN的灵敏度84.44%(38/45),特...     

抗-HIV单克隆抗体的筛选与鉴定

我们用HIV抗体阳性者血浆包被聚苯乙烯条,加入纯化的HIV组织培养抗原,通过夹心ELISA法,筛选出3株能分泌抗HIV单克隆抗体杂交瘤细胞,传代稳定。培养上清经Western blot染色鉴定含有抗-HIV gag蛋白。夹心ELISA法测得杂交瘤细胞培养上清中单克隆抗体滴度达到1∶6400,接种BALB/C小鼠获腹水抗体效价为1∶2430000。实验表明,用此单克隆抗体检测HIV病人血清抗体敏感、特异、稳定、重复性好,是一种良好的试剂。     

孕妇IgG抗A或抗B效价与ABO系统新生儿溶血病的关系

目的探讨O型血孕妇IgG抗A或抗B抗体效价的高低与ABO系统新生儿溶血病发生率的关系。方法对360例ABO血型不合的孕妇进行血型抗体效价检测,并对其新生儿进行新生儿溶血病检测,对所得结果进行分析。结果当孕妇血型抗体效价分别为≤1:32、1:64、1:128、1:256、≥1:512时,ABO系统新生儿溶血病的发生率分别为10.9%、17.4%、52.0%、71.4%和81.3%,母亲IgG抗A或抗B效价与ABO系统新生儿溶血病的发生率呈正相关(r=0.885 6)。结论孕妇体内IgG抗A、抗B以及抗AB抗体的浓度,是影响ABO系统新生儿溶血病严重程度的因素之一,因此,对夫妇ABO血型不相合的孕妇,进一步检测其体内相应的IgG抗A和(或)抗B效价,为预测新生儿溶血病发病的可能性以及严重程度提供了一定的依据,有着比较重要的临床意义。     

抗—HIV单克隆抗体的的筛选与鉴定

我们用HIV抗体阳性者血浆包被聚苯乙烯条，加入纯化的HIV组织培养抗原，通过夹心ELISA法，筛选出3株能分泌抗HIV单克隆抗体杂交瘤细胞，传代稳定。培养上清经Westernblot染色鉴定含有抗-HIVgag蛋白，夹心ELISA法测得杂交瘤细胞培养上清中单克隆抗体滴达到1：6400，接种BALB/C小鼠获腹水抗体效价为1：2430000。实验表明，用此单克隆抗体检测HIV病人血清抗体敏感、特异、稳定、重复性好，是一种良好的试剂。     

分泌抗B型肉毒毒素单克隆抗体的产生与特性鉴定

以B型肉毒类毒素免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞进行细胞融合。用ELISA方法筛选有杂交细胞生长孔的上清液,其中有66.7％的孔可分泌肉毒毒素特异性抗体。用有限稀释法进行克隆化培养后,获得4株稳定的杂交瘤细胞系(3B10、3B11、3G12和4A5),在体外培养中均持续分泌抗体,培养液抗体效价达10~(-3)～10~(-5);注入BALB/C小鼠腹腔制备出富含抗体的腹水,抗体效价达10~(-6)～10~(-8)。经用A型和B型类毒素作特异性鉴定,表明抗体3G12及4A5与A型无交叉反应,为B型特异性的。抗体3B10及3B11与A型有弱交叉反应。Ig种类鉴定表明抗体3B10及3G12为IgG_1;抗体3B11及4A5为IgG_2。染色体检查证明4株细胞均为杂交瘤细胞。小白鼠体内进行中和保护力测定表明4种单克隆抗体对肉毒毒素均无保护作用。     

抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备和特性

目的建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisin B1, FB1)的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA)检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒.方法利用B细胞杂交瘤技术,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果用伏马菌素B1-牛血清白蛋白(FB1-BSA)偶联物免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立了1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株,命名为5A9.将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化,得到单克隆抗体.该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为2.56×106,参考工作浓度为3.2×105.纯化后抗体的IgG含量为10.4 g/L,亲和常数为8.3×10-8 mol/L.该抗体与其他结构类似物无交叉反应,具有较高的特异性.结论制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒.     

藏族士兵的ABO血型分布调查

由于遗传和种族的不同,ABO血型在人群中的分布也不同,笔者检测了从西藏高原应征入伍的237名藏族士兵ABO血型,旨在一方面了解藏族青年血型遗传特征,另外对战争情况下为藏族士兵血源种类的准备提供相关信息。现将结果报告如下。1材料与方法1.1调查对象237例士兵均为世居西藏拉萨、昌都、日喀则、林芝等地的藏族纯血统男性青年。年龄17~23岁。1.2调查方法(1)抗A抗B血型定型试剂(单克隆抗体):长春生物制品研究所生产。抗A抗B效价均>128,亲和力<10秒。(2)检测方法:采用静脉德国试管凝聚法和玻片凝聚法联合检验。先用玻片凝聚法做血型检验,凝…     

产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV-1 SM44株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/O融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12,2A8,1G8,1D10,2C5 5株细胞系用有限稀释法做2～5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV-1和HSV-2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)～10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)～10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV,CMV,JEV和HFRSV无交叉反应。     

鸡抗HBs抗体的制备及在人HBsAg检测中的应用

对所制备的抗鸡蛋黄IgY单克隆抗体1G11和3A6进行鉴定,标记后建立了检测鸡蛋黄IgY的间接ELISA方法.用乙型肝炎疫苗免疫25周龄蛋鸡,血清及蛋黄中第8d出现特异性抗体,在第60d效价达1×10~(-5).利用鸡抗HBs抗体,建立了检测血清HBsAg的夹心ELISA方法.检测HBsAg的最低浓度达0.5ng/ml.且特异性较目前商业化试剂盒高     

三黄汤对人A型红细胞免疫大鼠IgG抗体效价的影响

目的考察三黄汤对ABO血型抗体效价的影响。方法采用随机分组的方法,将SD大鼠分为A组(对照组12只)、B组(A型红细胞免疫组14只)和C组(三黄汤治疗组14只)。A组灌服生理氯化钠溶液;B组腹腔注射人A型红细胞,同时灌服等量生理氯化钠溶液;C组腹腔注射人A型红细胞,同时灌服三黄汤8 g·(kg·d)-1。以人A型红细胞免疫大鼠,通过Ig G型抗-A效价的检测观察3组大鼠体内Ig G型抗-A抗体的水平变化。结果 A组12只大鼠中8只未捡测出Ig G型抗-A抗体;B组大鼠均产生Ig G型抗-A抗体;C组中有1只未检测到Ig G型抗-A抗体,13只大鼠产生了Ig G型抗-A抗体。Ig G型抗-A效价的检测结果显示,A型红细胞B组和C组Ig G型抗-A水平均高于A组(P<0.01),C组抗-A水平低于A型红细胞B组(P<0.01),C组抗-A效价与A组比较无差异。结论大鼠实验证实三黄汤可降低ABO血型抗体的效价。     

抗T-2毒素单克隆抗体的制备及特性

目的 :建立敏感、特异和快速的针对T 2毒素的ELISA检测方法 ,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 :利用B细胞杂交瘤技术 ,建立抗T 2毒素的单克隆杂交瘤细胞株。结果 :用T 2 羊免疫球蛋白 (T 2 GIgG)偶联物免疫 8～ 10周龄雌性BALB/c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2 /0融合 ,经过 3～ 4次亚克隆建立了 2个稳定分泌抗T 2毒素抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为 2A7和 6E4。将上述 2株杂交瘤细胞分别注入BALB/c小鼠腹腔 ,获得含抗T 2毒素单克隆抗体的腹水 ,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化 ,得到 2A7和 6E4单克隆抗体。两株单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为 6 .4× 10 6和 1.1× 10 7,参考工作浓度分别为1.0× 10 6和 3.2× 10 6。纯化后 2A7抗体的IgG含量为 16 .4g/L ,亲和常数为 8× 10 -8mol/L。 2A7抗体与其他结构类似物无交叉反应 ,具有较高的特异性。结论 :制备了具有高特异性和亲和力的抗T 2毒素单克隆抗体 ,初步建立了针对T 2毒素的ELISA检测方法。     

抗A型肉毒毒素鼠源性单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备与鉴定抗A型肉毒神经毒素重链C端（ heavy chain of botulinum neurotoxin serotype A, BoNT／AHc）特异性鼠单克隆抗体。方法通过纯化BoNT／AHc抗原、免疫BALB／c小鼠并建立杂交瘤细胞以制备鼠单抗,用ELISA、Western印迹实验和抗体分型试剂盒进行分析鉴定,并通过ELISA检测鼠单抗与BoNT／AHc突变体结合,初步鉴定其在BoNT／AHc的结合表位。结果得到纯度较高的BoNT／AHc抗原,制备了4株特异性鼠单抗1A4、3H3、3H7、5H8。间接ELISA结果显示,单抗细胞上清效价均＞3．0×103;Western印迹检测结果显示,单抗均能与BoNT／AHc特异性结合;抗体亚型鉴定结果为1A4、3H7属于IgG1（Κ）,3H3属于IgM（Κ）,而5H8属于IgG2b （Κ）;叠加ELISA实验表明,4株单抗抗原识别表位相近;用ELISA检测单抗与BoNT／AHc突变体结合实验结果初步确定了4株单抗与BoNT／AHc的结合表位。结论对抗A型肉毒毒素鼠源性抗体完成了制备和鉴定,为肉毒毒素中和抗体的开发与阐明中和抗体的表位奠定了基础。     

抗人胃癌相关蛋白GCRG224多克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备胃癌相关蛋白GCRG224的多克隆抗体,为进一步深入研究其生物学功能及其在胃癌发生发展中的作用奠定基础.方法 在大肠杆菌中表达Thioredoxin/GCRG224融合蛋白,并以所获蛋白免疫新西兰兔,制备抗GCRG224的多克隆抗体.分别用ELISA、Western blot法鉴定抗体的效价及特异性.结果 在大肠杆菌中高效表达出相对分子量约为16.8kD的Thioredoxin/GCRG224融合蛋白,经凝胶回收法得到纯度近100%的蛋白产品.制备了抗GCRG224多克隆抗体.ELISA法检测抗体的效价达到1∶256 000,Western blot证实该抗体可与原核表达的GCRG224蛋白特异性结合.结论 成功地制备了胃癌相关蛋白GCRG224多克隆抗体.     

抗PEA受体结合区单克隆抗体的制备及鉴定

目的探讨绿脓杆菌外毒素A(PEA)中和性单克隆抗体在预防和治疗绿脓杆菌感染中的免疫保护作用.方法以重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法筛选细胞培养上清,采用有限稀释法对阳性孔进行克隆,3次克隆后获得4株能稳定分泌抗PEA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1C4,1D4,2E12和3C6.结果细胞培养上清ELISA效价为4000～8000,腹水ELISA效价可达25600～51200,其中3C6抗体在细胞上的中和试验显示具有较高的中和效价,其亲和常数为8.93×108.结论获得的单克隆抗体可在抗烧伤绿脓杆菌感染中发挥重要作用.     

破伤风毒素单克隆抗体的制备及鉴定

目的 一株抗破伤风毒素鼠源单克隆抗体的制备与鉴定.方法 从实验室前期以破伤风类毒素为抗原筛选得到的6株稳定细胞株中选取4E12进行制备及鉴定,首先将4E12细胞株扩大培养后腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水,经Protein G柱和PD10脱盐柱两步纯化鼠源单抗;其次通过SDS-PAGE电泳检测抗体纯度并通过分型试剂盒鉴定抗体轻重链亚型,免疫印迹法鉴定抗体结合区域及表位类型,非竞争ELISA法测定抗体亲和力常数以及小鼠中和实验评价抗体中和活性.结果 获得能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株4E12,其细胞培养上清效价为4×103,抗体轻重链分别为κ型和IgG1型,CDR3序列分别为SQSTHVPPT和ARKGTGTGFNY;4E12腹水抗体效价为3.2×104,抗体经纯化后纯度＞95％,以线性表位与TeNT/Hc结构域特异性结合,两者的亲和力常数为3.6×10-10 mol/L,小鼠中和实验结果显示,4E12抗体可部分中和破伤风毒素.结论 筛选到一株高亲和力的鼠源单抗,为破伤风毒素检测及中和抗体研发奠定了基础.     

介绍一种交叉配血新技术

目前我国多数医院只用盐水介质交叉配血仅能检出IgM抗体，而不能检出不完全抗体，只有少数大医院能做蛋白酶、抗人球蛋白或低离子强度介质交叉配血，虽能检出不完全抗体，但对多介质配血有很大局限性，操作繁琐，费时费力，试剂昂贵，来源不易，限制其广泛应用。为此我们研究了一种组合试剂，快速检测不完全抗体，经初步应用，效果良好。1材料和方法1．1材料（1）血型抗体：抗－D、抗－C、抗－c、抗－E、抗－e等（由成都中国医学科学院输血研究所提供）；（2）红细胞话细胞（购自成都中国医学科学院输血研究所）；（3）组合试剂：A液参照…     

抗人IgK和Igλ链单克隆抗体的制备及临床初步应用

用初乳和血清IgA免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP_2/O和NS-1瘤细胞融合,以ELISA双抗原夹心法检测获得5株杂交瘤细胞。其中3株(1D1、5C3、11A7)分泌抗人游离和结合型λ轻链;2株(4G12、14A6)分泌抗人游离和结合型K轻链。4G12与结合型K链反应比游离K链好。这些细胞株在长达1年的培养中仍能稳定分泌特异性单克隆抗体,经液氮冻存10个月后杂交瘤细胞仍保持原有的特性。用固相抗原竞争ELISA试验表明,两个抗K链McAb是针对不同的抗原位点,而3株抗λ链则针对相同的抗原位点。用于检测副蛋白和本周氏蛋白具有很好的特异性和敏感性。把McAb4G12-HRP和1D1-HRP混合,用于检测-EB病毒早期抗原(EA)和壳抗原(VCA)抗体被证明是满意的,同时试用于抗核抗体的检测也获得了初步的结果。     

钆标记单克隆抗体片段对荷瘤裸鼠MR免疫成像的研究

目的　探索标记钆(Gd)对抗体活性的影响并分析MR增强效果。方法　(1)取20只裸鼠制作荷大肠癌动物模型;(2)将C.DTPA(DTPA环二酸酐)与抗人大肠癌（CL-3）单克隆抗体片段F(ab)′2按C/P(DTPA环二酸酐与抗体片段的摩尔比值)=2∶1和5∶1分A、B两组,偶联制备Gd-F(ab)′2-DTPA;(3)MR扫描18只裸鼠随机分3组,作平扫和增强扫描,2只作瘤内直接注射,取T1WI信号强度数据,进行相对标准化处理。结果　标记后A、B两组抗体免疫结合率分别为74%和62%。增强扫描,肿瘤均有轻度强化,B组(31.67±1.12)比A组(24.45±1.92)明显。结论　随着C/P的增加,标记抗体片段的活性下降,但MR增强效果有所增加且F(ab)′2-DTPA-Gd的增强作用具有特异性。     

盐酸克仑特罗单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗盐酸克仑特罗(clenbuterol ,CL)的单克隆抗体并进行免疫学特性鉴定.方法:用重氮化法将盐酸克仑特罗偶联于载体牛血清白蛋白(BSA),形成的结合抗原BSA-CL作为免疫原免疫BALB/c小鼠,同时将CL与卵清白蛋白(OVA)偶联制备检测原(OVA-CL).应用杂交瘤技术建立分泌抗盐酸克仑特罗单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水并进行纯化.用竞争性ELISA法测定抗体的亲和常数及交叉反应性.结果及结论:获得了18株稳定分泌抗盐酸克仑特罗单克隆抗体的杂交瘤细胞株,挑选其中E9-C11、C11-E3、E7-G8三株高亲和力的细胞株进行免疫学特性鉴定.三株抗体的亚类均为IgG1.细胞上清的间接ELISA效价分别为1:1 280、1:1 000、1:800,三株腹水效价都约为1×10-6.亲和常数分别为2.4×10-8mol/L、2.83×10 -8 mol/L 、3.28×10-8 mol/L .E9-C11单抗对CL的IC50为6.1035μg/L;对沙丁胺醇的IC50大于781.25 μg/L,交叉反应性小于0.78%;对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素、莱克多巴胺及部分维生素和抗生素均无交叉反应性.蛋白免疫印迹分析证明三株单抗特异性均很高,可用于与其相关的免疫检测或应用研究.