多联实时荧光PCR定量方法检测四种肠道细菌的研究

目的 建立一种能同时检测空肠弯曲菌(CJ)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7、副溶血性弧菌(VP)和单核增生李斯特菌(LM)的多联实时荧光PCR定量方法。方法根据CJ的C基因序列、EHEC O157：H7的RFBE基因序列、VP的toxR基因序列和LM的iap基因序列的开放阅读框(ORF)，分别利用ABI primer experess 2．0和DNAStar中的Primer Seleet软件设计出了数对特异性的引物和探针，筛选出最佳的各组引物和探针组合，对引物、探针的浓度、Mg^2 浓度、Taq酶的用量、反应条件等进行优化，从而建立了检测临床标本中CJ、O157：H7、VP和LM的多联荧光PCR反应体系和检测方法。结果实验显示该方法具有特异性强，灵敏度高，均达到100copies／ml。结论多联实时荧光PCR方法可定量检测临床标本中CJ、0157：H7、VP和LM，该法快速简便，准确高效，有利于上述病原菌所致痰病的早期诊断和治疗。     

荧光PCR对从业人员肠道致病菌筛查的评价

目的评价荧光PCR法用于食品及公共场所从业人员肠道致病菌的筛查。方法随机采集12780份从业人员肛拭子标本用荧光PCR检测,以传统分离培养方法作为“金标法”进行对照,分析灵敏性和特异性。结果在12780份标本中,荧光PCR检测出沙门菌阳性14份,阳性率为1.10‰,培养法检测出10份,阳性率为0.78‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100％,特异性为99.97％。荧光PCR检测出志贺菌18份,阳性率为1.41‰,培养法检测出3份,阳性率为0.23‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100％,特异性为99.88％。结论荧光PCR法灵敏度性高,特异性强,简便快速,为从业人员健康检查提供了一套快速的筛查方法,值得广泛推广应用。     

四种儿童常见肠道致病菌的多重PCR检测

目的 对儿童感染性腹泻能进行四种常见病原菌如肠致病性大肠埃希菌（enteropathogenic Escherichia coli,EPEC）、沙门菌属（Salmonella spp.）、志贺菌属(Shigella spp.)、空场弯曲菌(Campylobacter Jejuni)的快速检测。方法 建立多重PCR检测体系。结果 该方法用一次PCR即可检测四种肠道致病菌,灵敏度达10~100CFU/ml;同时利用16S rRNA基因的保守区域作为内参照,有利于对粪便标本的扩增进行质量控制;对粪便标本,整个检测过程约5 h。结论 通过检测编码细菌的毒力因子或特异性生化反应相关的酶的基因,多重PCR体系能特异、灵敏、快速地检测四种肠道致病菌;icsA基因可以作为志贺菌属检测的特异性靶基因;该方法可进一步完善成体外基因诊断试剂盒。     

实时荧光PCR技术在肠道沙门氏菌快速检测中的应用研究

目的探讨实时荧光PCR技术应用于肠道沙门氏菌快速检测中的可行性。方法随机采集从业人员健康体检肛拭子标本,用实时荧光PCR法进行检测,并以传统分离培养方法作为"金标准"进行对照实验,比较两者间的差异。结果在1 346份标本中,实时荧光PCR法检出沙门氏菌阳性13份,阳性率为9.66‰;培养法检出5份,阳性率为3.71‰。经统计学分析,两者对沙门氏菌检测的阳性数的差异有统计学意义(χ~2=6.125,P0.05);荧光PCR检测法灵敏度为100.00%,特异性为99.40%。结论实时荧光PCR法灵敏度高、操作简便,可降低工作强度,缩短检测时间,可作为快速检测肠道沙门氏菌的方法在从业人员健康检查中广泛推广应用。     

实时荧光PCR方法快速检测空肠弯曲菌方法的建立

目的建立实时荧光PCR快速检测空肠弯曲菌的方法。方法以空肠弯曲杆菌HipO基因的保守序列为模板设计特异性引物探针,建立一种能快速检测样本中空肠弯曲杆菌的实时荧光PCR方法;对方法的特异性和敏感性进行评价,并以正常人粪便为空白样本,添加一定量空肠弯曲菌标准株菌液进行检测,以对方法的检测效果进行初步评价。结果该实时荧光PCR方法只对空肠弯曲杆菌进行特异扩增,同种属的结肠弯曲菌及其他常见食源性病原菌均不能扩增;整个检测过程只需要80min,对空肠弯曲菌菌悬液可检测至5个细菌,对加标粪便样本可检测至10～100个细菌。结论本研究建立的实时荧光PCR检测空肠弯曲菌方法不仅能实现对空弯菌的快速检测,而且还为空弯菌的快速诊断及其引起的食源性疾病的监控溯源提供有意义的参考。     

实时荧光PCR技术检测珠江水霍乱弧菌

目的 运用实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法,建立外环境水体霍乱弧菌快速检测方法,应用于珠江水的霍乱弧菌检测.方法 定期定点采集珠江河口水体,实时荧光PCR对样本进行筛查,结合常规分离培养、进行O1/O139群霍乱弧菌的检测.结果 共采集了567份标本,实时荧光PCR检测阳性184宗,分离培养阳性菌24株,霍乱弧菌检出率4.23%,明显高于前年同期常规分离培养方法的1.19%,差异有高度显著性(P<0.01).结论 实时荧光PCR检测霍乱弧菌可提高检测灵敏度,有效提高样本的检出率、检验及时性与准确性.     

实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义

目的对实时荧光定量PCR测定的472例HBV-DNA结果进行分析,以探讨其临床价值。方法对472份临床血清标本用ELISA法进行定性检测,并依据乙肝两对半定性结果进行归类分组,再用实时荧光PCR定量检测。结果92份HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中有89份HBV-DNA为阳性,阳性率为96.7%,其PCR定量拷贝数为(3.23±1.45)×107/ml;168份HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)标本有118份HBV-DNA阳性,阳性率达到70.2%,PCR定量拷贝数为(4.65±2.10)×105/ml;32份HBsAg(+)、HBcAb(+)标本中有11份HBV-DNA为阳性,阳性率为34.4%,PCR定量拷贝数为(1.92±1.54)×104/ml;62份HBsAb(+)的标本HBV-DNA阳性2例,阳性率为3.2%,PCR定量拷贝数为(5.45±1.14)×103;60份全阴性的标本HBV-DNA阳性1例,阳性率为1.7%,PCR定量拷贝数为(2.36±1.12)×104/ml。结论PCR定量测定HBV-DNA可以真实反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况,更有利于临床治疗和疗效观察。     

荧光PCR快速检测从业人员肠道致病菌结果分析

目的了解荧光PCR快速检测从业人员肠道致病菌效果。方法采集从业人员肛拭子样本用实时荧光PCR法检测沙门氏菌和志贺氏菌,检出的疑似阳性样本按国标法进行培养鉴定,分析荧光PCR检测方法的阳性检出率。结果采用实时荧光PCR方法共检测从业人员77 476人次,其中沙门氏菌阳性71例,阳性率0.916‰,志贺氏菌阳性62例,阳性率0.80‰。肠道致病菌合计阳性133例,阳性率1.717‰。结论荧光PCR快速检测方法用于从业人员体检,具有沙门氏菌、志贺氏菌的阳性检出率高、省时的效果。     

实时荧光定量PCR与酶联定量PCR技术在 HBV-DNA载量检测中的比较研究

目的:比较实时荧光定量PCR(RQ-PCR)与酶联定量PCR(ELQ-PCR)技术在检测HBV感染血清HBV-DNA载量的灵敏度,精确性.为乙型肝炎临床抗病毒治疗和评价药物疗效提供可靠的依据.方法:应用RQ-PCR方法检测212例(4组)HBV感染者血清,ELQ-PCR方法检测228例(4组)HBV感染者血清.结果:RQ-PCR和ELQ-PCR方法检测HBV-DNA,其阳性检出率分别为HBsAg,HBeAg,HBcAb-IgG( )组100%和82.61%;HBsAg,HBeAb,HBcAb-IgG( )组90.63%和73.21%;HBsAg,HBcIgG,HBcAb-IgM( )组80.00%和57.58%;HBsAg,HB-cAb-IgG( )组70.15%和51.43%.HBV-DNA载量的阳性检出率,经统计学处理有显著性差异(P＜0.05).结论:RQ-CPR方法检测HBV-DNA载量在实时监测,节时快速,高灵敏,高精确度等方面都更优于ELQ-PCR.     

实时荧光定量PCR法检测淋病奈瑟菌感染的临床价值分析

目的此次研究旨在探讨实时荧光定量PCR方法对淋病奈瑟菌基因的影响,以期为临床工作中淋病的筛查提供科学合理的依据。方法使用细菌培养法作为对照,将接种完成的含Poly Vite X巧克力的平板置于35℃含5%二氧化碳的培养箱中24~48 h,采用生化反应进行鉴定并使用APINH鉴定试条进行检验;实时荧光定量PCR的检测方法采用试剂盒提供的方法进行。结果此次研究中的200例临床样本53例呈淋病奈瑟菌阳性,其阳性率为26.5%。实时荧光定量PCR结果显示200例临床样本中共61例呈淋病奈瑟菌阳性,其阳性率为30.5%。以细菌培养法为评价依据,结果显示实时荧光定量PCR法其灵敏度为的灵敏度为100%(53/53),其特异度为95.77%(181/189),总符合率为96%(192/200)。结论采用实时荧光定量PCR法对淋病奈瑟菌感染患者进行筛查具有较好的开发价值,应对其进行深入研究。