细胞膜色谱法在中药研究中的应用进展

细胞膜色谱法(cell membrane chromatography,CMC)是由贺浪冲教授在1996年创建的一种新型的具有生物活性的亲和色谱技术.该技术将高效液相色谱、细胞生物学与受体药理学结合起来,通过将活性细胞膜固定在特定载体表面,制备成细胞膜固定相,用液相色谱的方法研究药物与固定相上细胞膜及膜受体的相互作用,利用药物与膜受体间存在的特异亲和力,将药物在体内的作用过程在色谱柱内进行动态模拟.该文重点针对CMC的原理、特性及在中药等方面的典型应用研究进行概述,为进一步深入研究和开发利用CMC提供理论依据和实践指导.     

细胞膜色谱与线粒体膜色谱技术的发展及应用

细胞膜色谱法是近年来迅速发展的一种生物亲和色谱方法。其以包覆含受体膜的载体为固定相,将配体与膜受体间相互作用转化为色谱过程。该方法具有生物仿生、高效、低成本等优势,已被广泛用于药物分子筛选和受体与配体相互作用研究。线粒体作为重要的细胞内膜系统,膜结构中分布有多种药物靶点,线粒体膜色谱技术近期也有重要研究进展。笔者综述了细胞膜色谱技术及其应用方面的进展,也对基于细胞膜色谱理论的线粒体膜色谱技术进行简介和展望。     

细胞膜色谱及其在中药活性成分研究中的应用

细胞膜色谱技术是生物色谱法的一个重要内容，Guangzhou，510632，China)其使药物效应成分的分离和筛选同步完成的优点，特别适合于中药及天然药物效应物质基础的研究。本文简要综述近5年来细胞膜色谱在此方面的研究进展，以便更好的利用此法为中药现代化服务。     

心肌细胞膜固定相色谱研究中药川芎提取液与受体的作用

目的 :研究中药川芎提取液与心肌细胞膜受体的作用。方法 :将家兔心肌细胞膜固定在硅胶载体上制成色谱固定相 ,通过川芎水提液和醇提液与心肌细胞膜上已知受体的部分激动剂和拮抗剂在心肌细胞膜色谱柱上保留特性的对比 ,以及流动相中加入心肌细胞膜上已知受体激动剂或拮抗剂时由于竞争结合而产生的对提取液色谱保留特性的影响 ,研究川芎提取液与心肌细胞膜受体的作用。结果 :水提液和醇提液在心肌细胞膜色谱柱上均有保留行为 ;水提液保留特性受α受体阻断剂竞争结合的影响 ,而不受 β₁受体激动剂的影响。结论 :川芎水提液中可能含有与α受体作用的有效成分、不含有与 β₁受体作用的有效成分 ,醇提液中亦含有与心肌细胞膜受体作用的成分。将细胞膜固定在色谱填料上 ,能够进行模仿药物在体内与受体作用的有关过程 ,不仅可以用于药物筛选 ,还可以用于揭示其所作用的受体类型。     

细胞膜色谱技术用于中药活性成分筛选的研究进展

细胞膜色谱技术是生物色谱法在中药活性成分研究中的一个热点,适用于中药及天然药物药效物质基础的筛选研究.简要综述了细胞膜色谱技术在中药活性成分筛选方面的研究进展,并探讨了细胞膜色谱技术在其发展中所面临的问题及对策.     

细胞膜色谱及质谱联用技术在中药活性成分筛选中的应用

由于中药作用的整体性、成分和作用机制的复杂性,化学成分(群)作为中药及其复方制剂发挥治疗作用的物质基础,因此,采用多种方法分离分析中药及其复方中的化学成分一直是中药治病防病研究中一个有待解决的关键重要问题。传统方法存在操作繁琐、耗时耗事、浪费溶剂和样品的不可逆吸附等缺陷,并且分离过程中无法给出药理参数的基本信息,因而无法对活性成分进行高效准确定位。近年来从细胞层次研究药物成分与受体的结合为中药活性成分的筛选研究提供了一种新的途径。目前研究二者相互作用的方法之一—细胞膜色谱法(CMC),将现有色谱及质谱技术、细胞生物学与受体药理学结合起来,能够正确反映活性部位、活性成分与细胞膜及膜受体的相互作用,对复杂中药体系中有效部位筛选、活性成分的分离和高通量筛选具有独特优势。该文综述了CMC的原理、特点、中药活性成分筛选领域中的细胞膜模型及其与气相色谱-质谱(GC-MS)及液相色谱-质谱(LC-MS)联用的研究现状,并对其今后研究方法和未来的开发前景进行了探讨,为CMC在中医药领域的深入研究和开发利用提供理论依据和实践指导。     

细胞膜色谱及其在中药活性成分研究中的应用

细胞膜色谱技术是生物色谱法的一个重要内容，其使药物效应成分的分离和筛选同步完成的优点，特别适合于中药及天然药物效应物质基础的研究。本文简要综述近5年来细胞膜色谱在此方面的研究进展，以便更好的利用此法为中药现代化服务，     

α1D受体cDNA转染细胞、大鼠主动脉组织及其培养细胞的细胞膜色谱研究

 目的为了增加细胞膜色谱法的选择性和特异性,用细胞膜色谱法分别研究不同浓度药物BMY7378(α_1D-AR亚型高选择性药物)与大鼠主动脉组织、原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞和α_1D-AR转染细胞膜色谱柱的生物亲和作用。方法根据大鼠主动脉细胞表达以α_1D-AR占优势,分别构建大鼠主动脉组织匀浆细胞膜色谱柱、培养大鼠主动脉平滑肌细胞膜色谱柱和受体质粒转染所得受体高表达HEK293α_1D细胞膜色谱柱。用细胞膜色谱法研究6种浓度的BMY7378与受体的亲和色谱特性,分别测定其容量因子并进行相关性分析。结果在大鼠主动脉组织制备的细胞膜固定相(cell membranestationary phase,CMSP)上,最小检测到的BMY7378浓度为1.00 mmol·L^-1;在大鼠主动脉平滑肌细胞CMSP上,最小检测到的BMY7378浓度为0.03 mmol·L^-1;在α_1D-AR细胞CMSP上,最小检测到的BMY7378浓度为0.10 mmol·L^-1。结论与组织器官制备的CMSP的传统细胞膜色谱法比较,培养的细胞或细胞株色谱系统具有更高的灵敏度。可扩大细胞膜色谱法的应用范围,试用于受体亚型选择性药物的高效筛选。     

细胞膜色谱法及其在药物研究中的应用进展

 目的 综述细胞膜色谱法（cell mumbrane chromatography, CMC）近几年的研究现状及发展。方法 查阅国内外有关文献,从CMC的基本原理、特点及其在药物研究中的应用等最新研究进展进行较为详细的介绍和总结,并探讨其在发展中所面临的问题及对策。结果 CMC已成功应用于中药药效物质基础研究、中药质量控制、单体化合物活性筛选、药物与受体及受体亚型亲和作用研究等方面,并且CMC在不断的发展和完善。结论 随着CMC研究的不断深入,其在药物研究、分析领域等方面具有广阔的发展前景。     

细胞膜色谱法与液相色谱-质谱联用筛选佛手的活性成分

目的从佛手中筛选对主动脉血管有舒张作用的有效成分。方法采用大鼠血管平滑肌细胞膜色谱模型(VSM/CMC)筛选,液相色谱-质谱(LC/MS)离线分析,并结合离体药理实验确定佛手舒张血管的有效成分。结果佛手柑内酯是佛手中作用于血管的活性成分,药理实验结果表明其具有舒张血管作用,化合物在VSM/CMC的保留特性和其药理作用有显著相关性。结论 VSM/CMC 模型可以反映化合物与细胞膜及膜蛋白(包括受体)的相互作用;VSM/CMC 和LC/MS技术联用,为从天然产物中快速寻找新的活性成分提供了途径。     

用细胞膜色谱法筛选研究红毛七中的有效成分

 目的筛选天然植物红毛七中对主动脉血管有舒张作用的有效成分。方法采用兔血管细胞膜色谱(cell membrane chromatography,CMC)模型筛选，液 固柱层色谱法分离，并结合离体药理实验确定红毛七中的有效成分。结果红毛七正丁醇部位(HMQ-4)是红毛七中对血管有舒张作用的有效部位，而由红毛七正丁醇部位中分离得到的成分(HMQ-44)则是其有效成分。结论血管CMC模型基本可以反映活性成分与细胞膜及膜受体的相互作用，而且活性成分在CMC体系中的保留特性与其离体药理作用有显著的相关性。     

用细胞膜色谱模型筛选长春七抑制HeLa细胞增殖的活性成分

 目的筛选药用植物长春七中具有细胞毒性作用的活性成分。方法用细胞膜色谱模型,筛选条件:红细胞膜色谱柱(50mm×2mm),流动相为三蒸水,柱温37℃,检测波长244nm,流速0.2 mL·min^-1,以阿霉素为对照进行筛选;对筛选得到的活性成分用紫外、红外和质谱方法测定结构,并与文献数据比较确定为蛇床子素;并用MTT法测定了其对HeLa细胞增殖的抑制作用。结果长春七所含蛇床子素在红细胞膜色谱模型系统中,具有类似于阿霉素的保留特性;蛇床子素可抑制HeLa细胞增殖,且随着浓度增加而抑制作用增强,最大抑制率达76.6%,半数抑制浓度为10.0～11.0μg·mL^-1。结论红细胞膜色谱模型可用于筛选药用植物中的细胞毒性成分,长春七所含蛇床子素能够作用于红细胞膜及膜蛋白表面,并对HeLa细胞增殖有较强的抑制作用。     

高速逆流色谱技术在药物研究开发中的应用

对高速逆流色谱(HSCCC)技术。在天然药用植物活性成分分离及标准品制备、中药指纹图谱分析、天然新药的研发和活性部位筛选等方面中的应用及其在生物药物以及药物工业化领域的应用发展趋势进行了综述。     

细胞膜色谱法筛选噻唑烷酸酯类化合物活性

 目的应用细胞膜色谱法(cell membrane chromatography,CMC)对实验室合成的10种取代噻唑烷酸酯类化合物进行活性筛选。方法细胞膜色谱筛选条件:心肌细胞膜色谱柱(2 mm×50 mm);流动相为25 mmol·L-1磷酸盐缓冲液,pH7.4;柱温37℃;流速0.3 mL·min^-1,不同波长下检测,以容量因子、保留时间等为指标,卡托普利(captopril)为阳性对照,根据化合物在细胞膜色谱柱上的保留特性判断其亲和活性的大小。并通过大鼠降压实验测定了化合物的降压作用。结果10种噻唑烷酸酯类化合物除2-(4-氯苯基)-噻唑烷-4-酸乙酯外,均在心肌细胞膜色谱柱上有特异性吸附,说明这些化合物均具有一定生理活性。进一步降压实验表明,除2-(4-二甲氨基苯基)-噻唑烷-4-羧酸乙酯、2-(3-硝基苯基)-噻唑烷-4-羧酸乙酯、2-(4-氯苯基)-噻唑烷-4-酸乙酯外均具有显著的降压作用(P<0.05)。结论细胞膜色谱法可作为一种定性的、初步筛选化合物的快速方法。部分取代噻唑烷酸酯类化合物能吸附于心肌细胞膜表面,并具有降压作用。     

受体色谱：中药靶向活性成分高效筛选技术

中药活性成分高效筛选技术是化学、生物学和医药学等众多领域的前沿研究问题之一。笔者课题组将G-蛋白偶联受体（GPCRs）识别药物的高特异性和高效液相色谱（HPLC）的高分离能力相结合,提出了 受体色谱概念,探索了多种受体固定化方法,建立了系列受体色谱模型,成功将其应用于药物-受体相互作用研 究及中药活性成分筛选,为中药受体靶向活性成分高效筛选提供了新方法。     

亲和色谱应用于天然活性成分筛选的研究进展

亲和色谱法(affinity chromatography)是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。利用化合物和固定相表面之间的某种特异性亲和力,将目标化合物从大量无亲和活性的化合物中分离出来。该方法可同时进行色谱分离和活性筛选,作为一种高通量筛选方法广泛应用于各种活性药物的筛选。该文主要针对亲和色谱的发展历史、筛选技术类型及其在天然活性成分筛选中的应用进行了综述。并就其应用前景进行讨论,以期更好地发挥亲和色谱在药物筛选中的应用。     

细胞膜色谱法筛选川芎-白芷中5-HT受体激动剂的研究

偏头痛是临床的常见病和多发病,研究表明,5-羟色胺(5-HT)受体在偏头痛的发病中起重要作用。实验通过大鼠纹状体组织制备得到色谱固定相,并利用细胞膜色谱与液相色谱的离线联用来特异性地识别川芎-白芷药对中可与固定相上受体相互作用的配体,发现了欧前胡素是其中潜在的活性成分。以不同浓度(2.42×10-8~4.84×10-7mol·L-1)的5-HT1D受体激动剂舒马普坦为模型药物,记录样品在模型中的容量因子,测得欧前胡素与5-HT1D受体作用的平衡解离常数为(4.59±0.33)×10-6mol·L-1,并采用硝酸甘油致大鼠偏头痛模型验证其药理活性。该研究为体外快速有效地研究药物与受体之间的相互作用提供了一种新方法。     

细胞膜色谱法应用于中药质量控制的思考

通常的中药质量控制方法存在检测指标单一,质控指标与药效作用相关性不强等问题,一般很难全面有效地控制中药质量。本文简述了细胞膜色谱法的特点与应用,并结合本实验室的研究基础,就细胞膜色谱法应用于中药质量控制的问题,谈一点体会。