轮状病毒肠道外感染的研究进展

近年来发现轮状病毒(RV)不仅引起腹泻,也可发生肠道外多器官的感染,主要见于中枢神经系统、呼吸系统、其他消化器官、循环及血液系统等,并且在部分受累器官已找到明确的的证据,甚至RV肠道外多器官的感染已成为导致死亡的重要原因之一,这提示着RV可能存在新的感染途径和感染机制,对临床诊断与治疗和预防提出了新的课题。     

轮状病毒感染乳鼠后细胞因子水平及肠道外损伤的影响

目的:建立BALB/c乳鼠肠道感染轮状病毒(RV)的动物模型,检测血Th1细胞因子Ⅰγ-干扰素(IFN-γ)和Th17细胞因子[白细胞介素-17(IL-17)]的水平,比较两类细胞因子在不同时间点变化的差异性,进一步探讨RV感染后机体的细胞免疫过程及相关细胞因子的关系,深入了解RV感染的免疫病理特点,为临床防治RV感染及肠道外损伤寻找新的办法.方法:以恒河猴胚肾细胞(MA-104)培养猴RV SA-11株,扩增.实验动物选用清洁级BALB/c乳鼠603,日龄3~5 d,雌雄不拘,随机分为2组,每组303,即观察组(RV感染模型组):胃内灌入100μL(1×10-4)TCD50感染性滴度的SA-11株RV;对照组:胃内灌入100μL0.9%氯化钠注射液.接种当天以第0天计,每天观察乳鼠情况,收集大便检测RV抗原.分别在接种后的第3天和第8天留取血清检测IFN-γ和IL-17水平.处死乳鼠,留取肝脏、心脏等光镜下观察形态学改变.结果:感染后第3天观察组IFN-γ水平高于对照组(P<0.05),第8天时水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05);感染后第3天观察组IL-17水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),第8天时水平明显高于对照组(P<0.01).光镜下观察组乳鼠第3天大部分肝细胞肿胀,中、重度空泡变性,灶状淋巴细胞浸润;心肌细胞浊肿,心肌间质水肿,心内膜、心肌层淋巴细胞浸润,第8天时个别肝脏细胞稍肿胀,轻度空泡变性,心肌细胞大致正常.对照组肝脏及心脏未见明显病理改变.结论:乳鼠感染RV早期以IFN-γ表达为主,且伴有不同程度的肠外脏器损害,但总体上程度轻.而后期IL-17应答占优势,说明IL-17可能在RV的控制上起一定作用,且对肠外脏器的损害有一定修复作用.     

轮状病毒感染致乳鼠肠外损害的实验研究

目的 探讨轮状病毒(rotavirus,RV)感染引起肠外脏器损害情况及其发病机制.方法 用MA104细胞培养猴RV sA-11经口感染生后7 d昆明小鼠乳鼠,实验组每只经口接种0.1 ml培养物冻融液(3.75×107pfu/ml),对照组经口接种0.1 ml正常对照细胞冻融液.接种后3 d处死乳鼠,光镜下观察脑、肺、心、肝、胰和肾组织病理改变,电镜下观察心肌细胞超微结构改变;以免疫荧光方法检测各器官RV抗原分布情况;以Phalloidin-TRITC对丝状肌动蛋白染色并经软件(Imageproplus5.1,IPP5.1)测量分析以观察心肌组织丝状肌动蛋白含量有无改变;以原位凋亡细胞检测方法检测肝细胞和心肌细胞凋亡情况;以巢式RT-PCR方法检测各器官内RV RNA分布情况.结果 在光镜下脑、肺、胰和肾组织未见明显病变,但可见心肌间质水肿,心肌细胞浊肿,肝细胞空泡变性;电镜下心肌细胞肌丝溶解,线粒体内室扩张,滑面内质网扩张,核周间隙增宽;Phalloidin-TRITC染色未见心肌组织丝状肌动蛋白含量改变;除脑组织外其他器官内见到RV抗原分布,而各器官内均有RV-RNA分布;肝细胞凋亡增加,而心肌细胞未见凋亡.结论 RV可播散到肠外脏器并引起病理损害,但总体上程度较轻.病毒感染导致丝状肌动蛋白解聚及细胞骨架损害、诱导细胞凋亡不仅是肠黏膜损伤的机制,同时也是肠外损害的机制.     

免疫低下小鼠轮状病毒肠道外感染的实验研究

目的 探讨免疫低下因素在诱发轮状病毒(RV)肠道外扩散中的作用，为临床防治提供参考后。方法 给健康昆明小鼠注射环磷酰胺制作免疫低下小鼠模型．经口服和腹腔注射两种途径给免疫低下小鼠接种RV，处死小鼠．光镜下观察其病理变化。各脏器原位杂交，原位PCR检测RV。结果 光镜下：口服RV组小肠绒毛、胃固有层、心肌细胞有改变：腹腔注射组除上述改变外，肝、肾也有改变。原位杂交：口服RV组小肠绒毛，腹腔注射组小肠绒毛、肾呈阳性。原位PCR；口服RV组小鼠的小肠绒毛，肠腺细胞，肾近曲小管和集合管上皮细胞呈阳性：腹腔注射组小鼠的肠、肾、肝、心、胰呈阳性；其余组动物各个组织器官均为阴性。结论 免疫低下可能是诱发和加重RV肠道外扩散和感染的重要原因之一。     

小儿轮状病毒感染致肠道外损害的148例临床分析

目的 探讨小儿轮状病毒(RV)肠炎肠道外损害的临床特征.方法 对279例确诊为RV感染的患儿进行回顾分析.结果 279例小儿轮状病毒肠炎,并发肠道外损害总计148例(53%),其中并发呼吸系统损害86例(58%),并发心脏损害74例(47%),并发其他系统损害25例(17%).结论 小儿轮状病毒肠炎肠道外损害发生率高,以呼吸系统及心脏损害较多.     

人类轮状病毒感染新生小鼠肠道外组织超微结构的变化

目的了解人类轮状病毒（RV）全身扩散后对机体肠道外脏器超微结构的影响，为临床的诊治提供有价值依据。方法选州对人类RV敏感的健康新生昆明小鼠，经腹腔注射接种RV，3d后处死小鼠，透视电镜下观察小肠、心、肺、肝、肾组织的病理变化，并与健康小鼠比较.结果电镜下RV腹腔注射组肠绒毛变短，核膜结构破坏，细胞内出现大量吸收小泡、自嗜泡，粗而内质网扩张；肝细胞线粒体肿胀-凝集病变尤为明显，细胞核固缩、崩解，嵴膜模糊不清，粗而内质网扩张．肝细胞中存在大量脂滴．细胞之间淋巴细胞和浆细胞侵润显著：毛细胆管明显扩张，微绒毛脱落；肾近曲小管线粒体轻度肿胀：心、肺末见明瞳改变结论不仅肠绒毛上皮是人类RV的易感组织，RV一旦向全身扩散，也可造成多脏器结构改变，其中肝脏组织的损害较为明显,提示肝脏也可能是人类RV的易感组织之一.     

轮状病毒致肠道外损害临床分析

目的探讨轮状病毒(RV)肠炎的肠道外损害的临床表现。方法对160例RV肠炎患儿的临床资料进行回顾性分析。结果RV肠炎的同时，出现呼吸系统表现，78例并鼻塞、流涕、咳嗽、气促等表现，急性喉炎2例，支气管炎30例，毛细支气管炎13例，肺炎5例；神经系统表现抽搐7例，8例伴皮疹；心肌酶谱检查110例，其中肌酸激酶同工酶增高85例；肝功检查丙氨酸转氨酶增高25例，天冬氨酸转移酶增高70例；X线胸片肺纹理增粗45例，双肺斑片影或点片影5例；心电图检查窦性心动过速38例，T波改变6例；脑电图检查9例中2例异常。结论RV可发生肠道外感染，以呼吸系统和中枢神经系统受累较多，病毒血症可能是轮状病毒多系统损害的途径。     

轮状病毒感染乳鼠致病机制的实验研究

目的 研究轮状病毒(rotavirus, RV)腹泻发病机制.方法 生后7 d乳鼠经口感染猴RV(SA-11)后不同时间点取小肠组织,观察形态学改变并用软件(Image pro plus 5.1, IPP5.1)测定;免疫组化染色观察RV抗原分布;Phalloidine染色观察小肠绒毛丝状肌动蛋白分布;肠上皮细胞原位凋亡检测.结果 乳鼠感染RV后小肠绒毛轻度充血水肿、上皮细胞广泛空泡状变性,顶部大量脂滴样结构,微绒毛排列紊乱或脱落,而细胞间连结未见明显结构改变;RV抗原分布主要在小肠绒毛的上部;肠组织丝状肌动蛋白含量有明显减少;小肠上皮细胞凋亡增加.结论 RV主要感染小肠成熟绒毛上皮细胞;腹泻的发生与小肠绒毛上皮细胞骨架损害、微绒毛损害、细胞凋亡脱落和绒毛萎缩相关,但与肠上皮细胞间连接损害关系不大.     

轮状病毒的检测及肠道外损害

轮状病毒(RV)A、B、C组均可感染人类,A组是婴幼儿、年幼动物的重要致病原.它可以在小肠粘膜分化上皮内复制,导致急性,自限性腹泻,其发病率和严重程度属秋冬季腹泻的首位.近年来,各国科学工作者不断发现RV不仅可以引起肠道内感染,而且发病早期即可发生病毒血症并引起全身多器官损害,并已引起了广泛关注.本文初步综述了近年来国内外对RV肠道外感染的研究进展,以期对临床和科研工作有所帮助.     

轮状病毒肠炎的胃肠道外表现

轮状病毒(Rotavirus,RV)属呼肠病毒科、轮状病毒属.根据病毒组抗原蛋白VP6抗原性的差异和病毒基因组RNA片段在聚丙烯酰胺凝胶电泳上的区带排列差异,RV可分A～G共7个血清组.7组病毒均能引起动物腹泻,但只有A、B、C组感染人,其中最常见的A组,主要感染对象为婴幼儿.在世界范围内估计5岁以内的儿童95%至少经历过1次RV感染,其中有1/5需到医院就诊,1/65需住院治疗,1/293死亡[1],大多数死亡病例出现在经济、社会不发达的国家和地区.     

轮状病毒感染全身扩散诱发因素的初探

目的 探讨免疫低下、肠道混合感染因素在诱发轮状病毒（RV）肠道外扩散中的作用,为研究肠道病毒肠道外扩散的机制,为临床的防治提供参考。方法 健康昆明小鼠腹腔注射环磷酰氨制作免疫低下小鼠模型,分别经灌胃和腹腔两种途径接种RV;健康昆明小鼠相继灌胃接种产毒性大肠杆菌和RV,制作肠道混合感染小鼠模型;猝死小鼠,光镜下观察病理变化：各脏器原位杂交,原位PCR检测RV;初步调查RV腹泻合并轮状病毒血症患儿健康状况,检测TNFα、IL-2及锌、铁、铜、铅、钙、锰、镁7种微量元素水平。结果 光镜下：免疫低下组心、肝、肾,混合感染组肝、肾组织有病理改变：原位杂交：免疫低下腹腔注射RV组、肠道混合感染组肾小管均呈阳性。原位PCR：肠道混合感染组肝、肾,免疫低下腹腔注射组心、肝、肾、胰呈阳性;轮状病毒血症患儿多数存在免疫与营养方面的异常。结论 免疫低下、肠道混合感染、营养素不足可能是诱发和／或加重RV肠道外扩散和感染的重要原因之一。     

环磷酰胺化疗导致小鼠卵巢功能损伤模型的建立

目的探索建立化疗后导致小鼠卵巢功能损伤模型的方法。方法以C57BL/6雌性小鼠为研究对象,以75 mg/kg的剂量一次性腹腔注射环磷酰胺,观察小鼠一般情况、动情周期、血清雌激素(雌二醇)水平以及卵巢组织的形态学改变、各级卵泡数变化、抗苗勒管激素分泌情况和组织纤维化程度。以未注射环磷酰胺小鼠作为对照。结果与对照组比较,环磷酰胺注射小鼠血清雌二醇水平降低,卵巢组织抗苗勒管激素分泌减少,卵巢组织间质增生、纤维化明显,各级卵泡数目减少。结论 75 mg/kg的剂量一次性腹腔注射环磷酰胺后可引起小鼠明显的卵巢功能损伤,小鼠生殖内分泌和卵巢组织学的变化与临床上化疗导致卵巢功能损伤患者的情况相似。该方法简便易行、造模时间短、成功率高、死亡率低,是建立化疗导致卵巢功能损伤动物模型的较好方法。     

轮状病毒腹泻患儿病毒血症和肠道外脏器感染的研究

目的探讨轮状病毒(RV)腹泻患儿是否会发生病毒血症,以及RV是否能感染肠道外脏器。方法以套式RT-PCR方法检测全部60例RV腹泻患儿的血浆标本和其中14例单个核细胞中的RV基因;以原位杂交和原位RT-PCR方法检测2例伴有RV感染的死亡患儿各脏器中的RV基因。结果从60例患儿中检测到病毒血症4例:1例血浆中检测到RV阳性,其PCR产物部分测序结果证实属RV序列,血清型III,未见变异;14例单个核细胞中检测到3例阳性,其相应的血浆标本RV阴性。从2例死亡患儿的小肠、肝脏、肺、肾脏中检测到RV基因。结论普通RV腹泻患儿可出现病毒血症,RV可以从肠道向其他脏器扩散,病毒血证实其扩散途径。     

人皮肤移植增生性瘢痕裸鼠模型的建立

目的建立一种具有人增生性瘢痕(hypertrophic scar, HS)的组织学特性,且能反映HS发展规律的HS动物模型,为HS的实验和临床研究提供重要手段.方法在裸鼠背部做2.0 cm×1.5 cm的全层皮肤缺损创面,移植人的全厚皮肤,并移植裸鼠的自体皮肤做对照.皮片存活后不给予烧伤,观察皮片干痂脱落后瘢痕增生的情况,然后进行增生瘢痕的组织学检查,并用PCR技术对其DNA进行扩增,鉴定其组织来源.结果 60只裸鼠中有54只出现明显的、持续的瘢痕增生(90.0%),增生的瘢痕色红质硬,明显高出皮面,组织学检查可见大量的胶原沉积和炎细胞浸润,PCR结果显示该瘢痕可以扩增出与正常人皮肤组织及人HS组织同等大小的特异性PCR产物.结论该模型制作简单,所产生的瘢痕增生明显,增生持续时间长,大体外观和组织学特点都和人的HS相似,且可观察自创面愈合至增生性瘢痕形成的全过程,是一种较为理想的HS动物模型.     

小鼠卵巢早衰动物模型的构建

目的 探讨用化学药物及放射性处理,建立小鼠卵巢早衰动物模型的方法.方法 将80只昆明小鼠分为化学药物处理组、放射组、对照组、去势组.化学药物组使用环磷酰胺和白消安干预,放射组采用60Coγ射线放射.通过观察阴道脱落细胞监测小鼠动情周期变化、雌激素水平、卵巢及子宫内膜组织学改变等指标,判断建模效果.结果 化学药物组、放射组与对照组相比动情期构成比降低、动情间期构成比增加(P<0.01);雌激素水平明显降低(P<0.01),接近去势组水平(P>0.05);两个处理组小鼠均可见卵巢萎缩、生长卵泡数明显减少、间质纤维化;卵巢未闭锁原始卵泡数显著减少(P<0.01),且随建模后时间的延长而呈进一步下降趋势,但化学药物组与放射组各相同时间段之间无明显差异.结论 以化学药物及放射方法能够成功建立小鼠卵巢早衰模型.     

人胰腺癌细胞CFPAC-1裸小鼠原位移植瘤模型的建立

目的:建立人胰腺癌裸小鼠原位移植瘤模型,并对其生物学特性进行研究.方法:将人胰腺癌细胞CFPAC-1接种于裸鼠皮下,并将皮下肿瘤组织原位移植于裸鼠胰腺,比较两种移植瘤的生长及转移情况.结果:胰腺癌皮下移植瘤模型与胰腺癌原位移植瘤模型的体内成瘤率、生长情况及形态学上均无显著差异.皮下移植瘤模型呈局限性生长,无一例发生远处转移;原位移植瘤模型远处转移率高达87.5%,发生75.0%腹膜转移,37.5%肝转移,12.5%肺转移,37.5%淋巴结转移,并保持分泌CA19-9的特性.结论:人胰腺癌裸小鼠原位种植瘤模型明显优于皮下移植瘤模型,较好地模拟了人胰腺癌自然生长和局部浸润及远处转移过程,是胰腺癌体内研究理想的动物模型.