精子发生阻滞不育患者睾丸雌激素受体α的表达

目的:探讨雌激素受体α(ERα)在睾丸的表达与精子发生阻滞的关系。方法:用HE染色技术检查120例不育症患者睾丸活检标本,其中精子发生阻滞患者标本应用免疫组化法检查ERα的表达,并以10例健康人睾丸组织作为对照。结果:120例标本中符合精子发生阻滞病理诊断标准者有31例(占25.8%)。正常健康人睾丸组织中,ERα在睾丸支持细胞、类肌细胞和间质细胞的细胞核内表达,生精上皮细胞不表达;而在精子发生阻滞的睾丸组织中,ERα也在睾丸支持细胞、类肌细胞和间质细胞的细胞核内表达,但表达较弱,生精上皮细胞不表达。两者表达强度存在显著性差异(P<0.05)。结论:雄激素与雌激素通过各自的受体发挥协调作用而共同促进精子发生。精子发生阻滞可能与包括雄激素受体、ERα及热休克蛋白90在内的一系列复杂的细胞信号转导障碍有关。     

Mahoganoid蛋白及其mRNA在大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:探讨M ahoganoid(Md)蛋白及其mRNA在成熟大鼠睾丸和附睾组织中的表达。方法:健康成年SD大鼠20只,取睾丸和附睾组织4%多聚甲醛固定,石蜡切片,用免疫组化SP法和原位杂交方法分别检测Md蛋白及其mRNA在睾丸和附睾组织中的表达。结果:免疫组化SP法显示:睾丸组织间质细胞、睾丸生精小管管周肌样细胞和各级生精细胞(精原细胞、初级精母细胞和精子细胞)、支持细胞呈阳性反应,Md蛋白主要表达于胞膜及胞质。在附睾组织,棕色免疫阳性反应物质可见于输出管的高柱状细胞、低柱状细胞的胞膜及胞质,以及附睾管的高柱状细胞、主细胞、基细胞的胞膜及胞质。其中,在附睾尾部的上皮细胞中仅见微弱的棕色免疫阳性反应物质。原位杂交方法显示:睾丸组织间质细胞、睾丸生精小管管周肌样细胞和各级生精细胞(精原细胞、初级精母细胞和精子细胞)、支持细胞上也均有Md mRNA阳性棕色颗粒杂交信号,主要表达于胞膜及胞质。在附睾组织,Md mRNA阳性棕色颗粒杂交信号也均可见于高柱状细胞、主细胞、基细胞的胞膜及胞质。结论:Md蛋白及其mRNA在成熟大鼠睾丸和附睾组织中均有表达,其生理功能尚有待阐明。     

Attractin蛋白在大鼠睾丸和附睾中的免疫组织化学定位

目的 :探讨Attractin蛋白在成熟大鼠睾丸和附睾组织中的分布。　方法 :健康成年雄性SD大鼠 2 0只 ,灌流取睾丸和附睾组织固定 ,石蜡包埋和冰冻切片。用免疫组化法和间接免疫荧光方法检测Attractin蛋白在成熟大鼠睾丸和附睾组织中的表达。　结果 :睾丸组织间质细胞、睾丸精曲小管管周肌样细胞和各级生精细胞 (精原细胞、初级精母细胞和精子细胞 )、支持细胞呈阳性反应 ,主要表达于胞膜及胞质。睾丸间质细胞表达略强于生精细胞。附睾头、体、尾均未见表达。　结论 :Attractin蛋白在成熟大鼠睾丸组织间质细胞和生精细胞中有较强的表达 ,其生理功能尚有待进一步探讨。     

成年大鼠睾丸Smad1和Smad5的免疫组织化学研究

目的 :探讨骨形态形成蛋白的细胞内信号传导分子Smad1和Smad5蛋白在成年大鼠睾丸内的表达。　方法 :应用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶 DAB 硫酸镍铵增强技术 ,检测成年大鼠睾丸Smad1和Smad5蛋白的表达和定位。　结果 :Smad1蛋白表达于大鼠睾丸精曲小管的各级生精细胞的胞质内 ,呈淡染的紫蓝色颗粒 ,胞核为阴性 ,免疫染色阳性细胞主要包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞 ;而Smad5蛋白阳性染色不明显 ,只有睾丸间质细胞呈弱阳性反应 ,免疫反应阳性物质主要定位于细胞质。　结论 :Smad1蛋白主要表达于睾丸精曲小管各级生精细胞 ,Smad5蛋白表达于间质细胞 ,为揭示TGF β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据。     

Attractin蛋白在不同病理分型无精子症患者睾丸组织中的表达

目的探讨Attractin蛋白在不同生精功能状态的人睾丸组织中的表达情况。方法对31例无精子症患者进行睾丸组织病理检查诊断,根据病理形态的不同分为:唯支持细胞综合征型(n=4),生精功能低下型(n=12),生精阻滞型(n=5),生精功能基本正常型(n=10)。选择上述各型结构完整的睾丸组织,分别应用免疫组化法(SP)观察Attractin蛋白在不同生精功能状态的睾丸组织中的表达。结果各组睾丸组织内均存在Attractin蛋白的表达,其分布特点为:睾丸生精小管和间质细胞、管周肌样细胞、支持细胞上均有Attractin蛋白的表达,主要表达于胞膜和胞质,胞膜表达强于胞质。Leydig细胞、Sertoli细胞、精原细胞、精母细胞及精子细胞均为阳性表达,呈棕黄色着染。Attractin的表达与生精功能有关,正常组表达明显高于其它组,唯支组表达明显低于其他组。结论 Attractin蛋白与男性生殖密切相关,但其具体作用环节尚有待进一步研究。     

大鼠精子发生过程中热休克蛋白70-2特异表达的研究

目的运用蛋白质组学方法,寻找大鼠精子发生相关蛋白质,找到目标蛋白质后,进一步用免疫组织化学方法做定位研究。方法用重力沉降法(STAPUT法)从9 d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞。分别提取这3种细胞的总蛋白质,进行双向电泳。对所得双向电泳凝胶扫描,分析并找出差异蛋白质。对挑选出的差异蛋白质做质谱分析,发现在这3种不同细胞的表达上有明显差异的蛋白。进一步做睾丸免疫组织化学组织定位、定量研究。结果双向电泳结果显示,HSP70-2在粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量较高, 在A型精原细胞则表达量极少。HSP70—2在粗线期精母细胞中表达量最大。用HSP70—2抗体对大鼠睾丸组织切片行免疫组织化学研究,发现粗线期精母细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞有阳性颗粒反应。HSP70—2主要表达于细胞质。结论 HSP70—2在精子发生过程中有明显的差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。     

SET在不同发育阶段小鼠睾丸的表达及其功能

SET蛋白是一个多功能蛋白，在调节包括DNA复制、核小体装配、染色体修饰、DNA转录、细胞周期、细胞凋亡等细胞生物学过程中起重要作用。前期研究发现，SET在卵巢中调节雄激素合成。然而，SET在睾丸组织中的表达及其功能仍然不明确。在此，我们检测不同年龄段小鼠睾丸组织中SET表达，探讨其在精子发生及睾酮生成方面的潜在功能。48只不同年龄段的雄性小鼠（1周龄的ICR雄性小鼠作为幼年期组，4周龄小鼠作为性发育前组，12周龄小鼠作为性成熟期组，12月龄作为老年组）。免疫组织化学方法观察SET各年龄段小鼠的定位表达；qRT-PCR和Western Blot分别检测睾丸中SET mRNA和蛋白水平表达。SET表达定位于生精小管中的精原细胞、精母细胞，在青春期前及成熟期的单倍体和四倍体生殖细胞中高表达；成熟期及老年期的睾丸间质细胞中也有SET的表达；支持细胞中很少量表达。青春期前SET的mRNA与成熟期相比表达量最高（P〈0．05），而SET蛋白在性成熟期小鼠睾丸中表达最高（P〈O．05）。SET主要表达于精原细胞和精母细胞，少量表达于支持细胞，表明SET可能与精子发生有关。SET还表达于睾丸间质细胞，则与睾酮生成有关。     

Attractin蛋白和mRNA在不同日龄大鼠睾丸中的表达

目的:已知成熟大鼠睾丸组织中有Attractin蛋白的广泛表达,本文旨在进一步探讨Attractin蛋白和AttractinmRNA在各年龄段大鼠睾丸组织中的分布。方法:取出生第1d(新生鼠)、第5d(青春前期)、第20d(青春中期)、第50d(青春后期)及第70d(成年期)大鼠睾丸和附睾组织固定,采用酶免疫组织化学和原位杂交方法检测Attractin和AttractinmRNA在大鼠睾丸组织中的表达。结果:免疫组化显示各年龄段大鼠睾丸生精小管和间质细胞、管周肌样细胞上均有Attractin蛋白的表达,分布于胞膜和胞质,精子和附睾上未见表达。随着日龄的增加,间质细胞的表达逐渐增强。原位杂交显示各年龄段大鼠睾丸生精小管和间质细胞、管周肌样细胞、支持细胞上也均有AttractinmRNA阳性棕色颗粒杂交信号,主要表达于胞核及胞质。且随着日龄的增加,睾丸生精细胞表达略强于间质细胞。精子和附睾上未见表达。结论:AttractinmRNA和Attractin蛋白在各日龄大鼠睾丸组织中均有广泛的分布,且分布一致。提示各日龄大鼠睾丸组织都具有合成Attractin蛋白的能力。其生理功能和机制尚有待进一步探讨。     

糖尿病对小鼠睾丸组织中PCNA表达的影响

为研究糖尿病对睾丸生殖细胞DNA合成的影响，应用免疫组化ABC法检测增殖细胞核抗原（proliferation cell nuleus antigen PCNA)在睾丸组织的表达。结果显示免疫阳性细胞包括精原细胞和初级精母细胞，少数支持细胞和肌样细胞胞核也有着色。PCNA阳性率随糖尿病病程进展呈明显下降趋势，而且每年龄段糖尿病组PCNA阳性率均明显低于相应正常对照组。由此得出结论，糖尿病对PCNA在睾丸组织中表达起抑制作用，且与糖尿病病程呈正相关，即糖尿病时生精过程受到明显抑制，这种抑制作用可能与糖尿病所导致的雄性生殖能力下降有关。     

β-肌动蛋白在大鼠精子发生过程中的特殊表达

目的:寻找大鼠精子发生相关蛋白,研究β-肌动蛋白在大鼠睾丸组织的表达和分布。方法:用牛血清白蛋白梯度沉降(STAPUT)法从9日龄雄性SD大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞;分别提取这3种细胞的总蛋白,进行双向电泳;对所得到的双向电泳图谱用Im ageM aster2D E lite图像分析软件分析,找出差异蛋白,对挑选出的差异蛋白做质谱分析。进一步用β-肌动蛋白抗体做免疫组化的睾丸组织定位研究。结果:在双向电泳图谱中,β-肌动蛋白在A型精原细胞、粗线期精母细胞中表达量较高,在圆形精子细胞中则表达量极少。免疫组化研究发现:A型精原细胞、粗线期精母细胞有阳性颗粒反应,圆形精子细胞则无阳性颗粒反应;在接近成熟的精子细胞中,呈现极强的阳性颗粒反应,并且越接近排放期的精子细胞,阳性反应越强。在接近成熟的精子头部,阳性颗粒反应最强。β-肌动蛋白主要在精原细胞和精母细胞的细胞质中表达;在接近成熟的精子细胞中主要表达在细胞核。结论:β-肌动蛋白在精子发生过程中有明显的阶段差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。     

精子发生中Alu序列的返座作用

目的 :克隆人类精原细胞和初级精母细胞特异表达的基因。　方法 :应用改良的mRNA表达图谱分析技术 ,对正常男性、唯支持细胞综合征和生精阻滞在初级精母细胞病人的睾丸进行mRNA表达图谱分析的差异显示 ,选择唯支持细胞综合征缺失的表达基因并克隆测序。　结果 :正常男性、唯支持细胞综合征和生精阻滞在初级精母细胞症病人的睾丸组织表达图谱存在显著的表达差异 ,目前已获得唯支持细胞综合征缺失的片段 88个。在已分析的 6个片段中 ,1个与人类的Alu序列家族 (Alufamily) 98%同源。　 结论 :Alu序列在生精细胞中通过返座作用形成新Alu序列 ,使其不断扩散     

精子发生相关基因SPATA48在人和小鼠睾丸组织中的表达研究

目的通过分析精子发生相关基因SPATA48在人和小鼠睾丸组织中的表达,探讨SPATA48在精子发生中的作用。方法收集2010年1月至2017年12月在深圳市第二人民医院就诊的非梗阻性无精子症患者和正常生育者睾丸活检样本各60例;腹腔注射白消安方法建立小鼠无精子症模型,小鼠在不同时期处死后解剖留取各个脏器;提取小鼠各脏器组织、两组睾丸组织以及人精母细胞、精原细胞和支持细胞中mRNA;并购买人肺、肾、肝脏、脾脏等组织mRNA样本。利用RT-PCR方法检测SPATA48基因在各种细胞和组织器官、两组人睾丸组织中的表达水平,并利用免疫组化方法检测SPATA48蛋白在各种细胞和两组人睾丸组织中的表达水平,对各检测指标进行相关统计分析。结果 RT-PCR结果表明SPATA48基因特异表达在睾丸组织中,肺、肾脏、肝脏、脾脏等其他组织中均不表达;非梗阻性无精子症患者睾丸组织中无SPATA48基因表达,三种睾丸细胞仅精母细胞存在阳性表达。无精子症模型小鼠,随白消安处理时间的延长,SPATA48基因表达显著减弱(P0.05)。免疫组化结果显示,在正常生育者睾丸中SPATA48蛋白主要表达在精母细胞和圆形精子细胞中,在非梗阻性无精子症患者睾丸中无SPATA48蛋白表达。结论 SPATA48特异表达在人和小鼠睾丸组织中,无精子发生的睾丸组织无表达,提示SPATA48基因在精子发生中具有重要作用。     

Smad1、Smad5在肾阳虚不育大鼠睾丸中表达的研究

目的: 观察Smad1、Smad5在腺嘌呤诱导的肾阳虚不育大鼠睾丸中的表达,探讨肾阳虚不育的病理机制,为防治男性不育提供可靠的实验依据。　方法: 60d雄性SD大鼠 48只,随机分为 6组(肾阳虚 7、14、21d组;正常对照7、14、21d组),每组 8只。以腺嘌呤 300mg/kg给大鼠灌胃,诱导肾阳虚不育大鼠模型,于灌胃第 7、14、21d,用免疫组化SABC法测定Smad1、Smad5在其睾丸中的表达。　结果: Smad1表达见于所有正常对照组及模型组大鼠睾丸各级生精细胞的胞质内,支持细胞及间质细胞未见表达;灌胃第 7、14d与正常对照组相比差异无显著性(P>0. 05),第 21d的表达较正常对照组及第 7、14d明显减弱(P<0. 05)。Smad5表达见于正常对照组及腺嘌呤灌胃第 7d大鼠睾丸的初级精母细胞及精原细胞的胞核内,两组比较差异无显著性(P>0. 05),其余各级生精细胞、支持细胞及间质细胞均未见表达;灌胃第 14、21d大鼠睾丸中未见Smad5表达。　结论: 肾阳虚大鼠睾丸中Smad1表达的减弱及Smad5的无表达,可能是导致其不育的病理机制之一。     

附睾分泌蛋白2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:探讨附睾分泌蛋白2(HE2/EP2)的一种异构体———HE2β1在青春期雄性大鼠睾丸和附睾中的表达及其意义。方法:应用免疫组化SP法检测15只青春期SD大鼠睾丸和附睾组织中HE2β1的定位及其表达情况。结果:HE2β1在青春期大鼠睾丸和附睾组织中均有表达。在附睾中,HE2β1主要表达于附睾管上皮主细胞胞质内,而在亮细胞、晕细胞及基细胞内未见阳性表达;其表达水平在附睾头部远段较弱,在体部近、中段及尾部较强,而在附睾始段未见阳性表达。在睾丸生精小管中,部分精原细胞核及支持细胞核均可见明显的棕褐色的阳性颗粒,其他生精细胞以及间质细胞均为阴性。结论:HE2β1在青春期雄性大鼠的睾丸和附睾上皮中均有表达,其定位及表达水平具有区域特异性和细胞特异性,提示其在大鼠精子发生、成熟及附睾上皮天然抗感染机制中发挥重要的作用。     

手机频率电磁辐射对大鼠睾丸超微结构损伤的研究

目的:观察手机频率(900 MHz)电磁辐射对雄性大鼠睾丸组织超微结构和生精细胞凋亡的影响。方法:将30只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为3组:正常组、辐射2 h组和辐射4 h组,每组10只。正常组不辐射,辐射2 h组和辐射4 h组每天暴露于900 MHz手机频率分别辐射2、4 h,连续辐射30 d。透射电镜观察睾丸组织超微结构的变化,原位末端标记(TUNEL法)检测生精细胞凋亡。结果:与正常组比较,辐射2 h组大鼠生精小管基膜肿胀,支持细胞紧密连接分开,细胞间隙明显增大,部分线粒体内出现空泡,见线粒体髓样化,生精细胞凋亡增多[(25.62±1.33)%vs(18.71±1.76)%,P0.05],以初级精母细胞凋亡为主;与辐射2 h组比较,辐射4 h组生精小管基膜肿胀,支持细胞紧密连接分开,细胞间隙明显增大,精原细胞胞膜不完整,可见胞质碎片、胞核固缩和切迹,核周隙轻度扩张,细胞内线粒体畸形,内有空泡,结构模糊,部分嵴融合或消失,其损伤程度增加,生精细胞凋亡增多[(29.93±1.46)%vs(25.62±1.33)%,P0.05],精原细胞、初级精母细胞和次级精母细胞均有凋亡。结论:手机频率电磁辐射可造成大鼠睾丸组织超微结构损伤,生精细胞凋亡增加,有时效关系;生精细胞凋亡可能与线粒体损伤有关。     

睾丸的主要功能及其调控

睾丸主要有产生精子和睾酮（T）两大功能。精子的发生场所为曲精小管，睾酮则是由睾丸间质细胞合成和分泌。1精子的发生精原细胞位于曲精小管的基膜上，为不成熟的精细胞。精原细胞经过几次有丝分裂产生大量的细胞，再以初级精母细胞进入减数分裂。有丝分裂也使干细胞（精原细胞）不断得以补充而使得精子的产生连续不断。第一次有丝分裂发生在胎儿睾丸；胎儿出生时，睾丸内就可见到精原细胞和初级精母细胞。这些精细胞不再进一步发育。直到青春期，出现性成熟时，血中促性腺激素和雄激素水平的升高，才促使睾九不断地产生精子。减数分裂为…     

Expression of toxin-related human mono-ADP-ribosyltransferase 3 in human testes

目的:研究单腺苷二磷酸-核糖基转移酶3(ART3)的 mRNA 在人类睾丸中是否表达其相应的蛋白,如果有表达是否细胞特异性表达。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)确定人类睾丸和精子中 ART3的mRNA 水平。用磷脂酶 C 处理转染了 ART3的 HEK-293-T 细胞,并通过它检测 ART3的糖基化磷酸肌醇链。用荧光激活细胞分类(FACS)分析和免疫组织学方法分别检测 ART3蛋白在成熟精子和睾丸中的表达。结果:ART3蛋白在睾丸和精母细胞中有表达,而在精原细胞、精子细胞和精子中未检测到,FACS 分析进一步确认精子中无 ART3蛋白。在精原细胞瘤和睾丸间细胞中也未检测到 ART3蛋白。结论:本研究首次发现ART3蛋白在睾丸中表达,尤其是在精母细胞中,这表明 ART3执行一个特定的功能,此功能只在精子发生的某个特殊阶段发挥作用。     

eNOS和P450在大鼠性成熟期睾丸的表达及意义

目的:探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和细胞色素P450(芳香化酶)在雄性SD大鼠性成熟期睾丸中的表达及意义。方法:选取出生后5周、7周和10周的雄性SD大鼠各6只,左侧睾丸行石蜡切片,运用免疫组化ABC法观察eNOS和P450在雄性SD大鼠性成熟期睾丸中的表达变化情况。结果:出生后5周、7周和10周,睾丸间质细胞胞质eNOS和P450免疫反应阳性,阳性程度皆为(+++)、(+)和(++);精母细胞胞质eNOS和P450免疫反应阳性表达,但细胞数量较少,且无规律可循。结论:在性成熟期雄性SD大鼠的睾丸间质细胞中,随着性成熟发育的进展过程,eNOS和P450的表达强弱有所不同,且两者具有关联性。     

内源性睾酮抑制对大鼠睾丸内α-catenin表达的影响

目的:检测十一酸睾酮注射致内源性睾酮抑制的大鼠睾丸内α-caten in的表达情况。方法:成年雄性SD大鼠10只,随机分为对照组(肌注生理盐水)和睾酮组[肌注十一酸睾酮19 mg/(kg.15 d)],共130 d。制作睾丸石蜡切片,采用抗α-caten in多克隆抗体进行免疫组化染色。结果:在对照组中,α-caten in主要表达于精子细胞顶体、管周肌样细胞和Leyd ig细胞胞质。睾酮组的Leyd ig细胞明显萎缩,-αcaten in的表达明显减弱或消失,而精子细胞顶体和管周肌样细胞胞质的-αcaten in表达无明显改变。结论:内源性睾酮抑制所致生精细胞排列疏松或脱落与粘附分子-αcaten in的表达无关。-αcaten in有可能成为识别Leyd ig细胞的标记物。     

Daxx基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:研究死亡结构域相关蛋白(Daxx)基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征,初步探讨其在生精过程中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR(q PCR)、Western印迹及免疫荧光等方法检测Daxx在不同周龄野生型小鼠睾丸组织以及成年睾丸支持细胞雄激素受体特异性敲除(SCARKO)和雄激素受体敲除(ARKO)小鼠睾丸中的表达特征。结果:q PCR、Western印迹和免疫荧光结果表明,Daxx基因在出生4周后小鼠睾丸中高表达,且主要定位于细胞核;与野生型小鼠相比,SCARKO小鼠睾丸中DAXX的表达差异不显著(0.853±0.058 vs1.000±0.015),但在生精细胞细胞核中呈极性分布;DAXX在ARKO小鼠睾丸表达显著降低(0.299±0.026 vs1.000±0.015,P0.01)。结论 :Daxx基因在小鼠睾丸发育中期时表达最高。ARKO小鼠中DAXX的表达与野生型相比显著降低,睾丸支持细胞中AR基因特异性敲除影响DAXX定位。DAXX可能参与调控小鼠的精子发生过程。