应用流式细胞术评分诊断骨髓增生异常综合征

目的 采用流式细胞术（FCM）评分对骨髓增生异常综合征（MDS）与非MDS（主要为非克隆性血细胞减少患者）患者进行鉴别.方法 应用FCM四参数（CD34＋髓系原始细胞占所有有核细胞百分比、B系祖细胞占CD34＋细胞百分比、髓系原始细胞CD45表达水平、成熟粒细胞SSC峰通道值）对50例MDS患者和20例非MDS患者进行评分,每个参数异常时计1分,评分≥2分时诊断为MDS.结果与非MDS对照组比较,MDS患者CD34＋髓系原始细胞比例增高,B系祖细胞比例降低,成熟粒细胞SSC水平降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;而CD34＋髓系原始细胞CD45表达水平差异无统计学意义（P=0.06）.MDS组FCM评分高于非MDS组,差异有统计学意义（P＜ 0.001）.45例患者用此方法正确诊断为MDS,敏感度为90％;1例患者为假阳性,特异度为95％.结论 采用FCM四参数评分可帮助诊断MDS,可行性好,简单方便.     

世界卫生组织标准在骨髓增生异常综合征诊断分型中的应用

 【摘要】　目的　依据世界卫生组织（WHO）标准对249例骨髓增生异常综合征（MDS）进行诊断分型。方法　根据WHO（2008）标准对249例MDS行细胞形态学、细胞遗传学、免疫表型分析及骨髓病理活组织检查诊断。结果　所有MDS病例外周血成熟红细胞均见有巨大形与椭圆形改变;幼红、幼粒细胞、Pelger样核异常细胞与无颗粒中性粒细胞检出率随分型进展而增高;骨髓发育异常细胞特点及比例随MDS亚型进展而更明显、更高; 经动态随访观察, MDS随分型进展其转急性白血病（AL）率增高（P＜0.05）;148例患者行免疫表型分析,随分型进展髓系特异性抗原（CD33）表达逐渐增加;138例患者行染色体检查,其中异常核型表达53例（38.7 %）,主要见于20q-和+8,复杂异常核型16例（28 %）,其中5q- 2例;180例患者同时行骨髓活组织检查,19例具有形态异常,符合MDS诊断,42例伴有骨髓纤维化。结论　依据WHO标准多指标联合检测MDS有助于更准确的分型及诊断,进行长期追踪随访有助于判断预后。     

维吾尔族和汉族骨髓增生异常综合征患者细胞形态学及免疫表型的对比分析

 【摘要】　目的　探讨新疆地区维吾尔族和汉族骨髓增生异常综合征（MDS）患者的细胞形态学和免疫表型特征。方法　对已确诊的67例MDS患者骨髓涂片进行系统观察分型,记录各系病态造血细胞,并进行流式细胞术（FCM）免疫表型检测。结果　67例MDS患者骨髓细胞的粒、红、巨核三系有不同程度的病态造血,依次为粒系[52例（77.6 %）]、巨核系[44例（65.7 %）]、红系[36例（53.7 %）],维吾尔族和汉族患者骨髓三系中出现病态造血表现的比例相近,两组差异无统计学意义（χ2值分别为1.02、0.30、0.02,均P＞0.05）。67例骨髓细胞病态造血改变类型的发生率依次为单圆核巨核细胞 [36例（53.7 %）]、假Pelger核异常粒细胞 [36例（53.7 %）]、红系巨幼样变[33例（49.3 %）]、粒细胞颗粒减少或缺失[27例（40.3 %）]等,维吾尔族和汉族患者发生率相似。67例MDS患者FCM免疫表型检测结果显示,随着MDS的难治性贫血／难治性贫血伴环形铁粒幼细胞向难治性贫血伴原始细胞过多（RAEB）／转化中的RAEB的进展变化,较成熟的CD15表达率逐渐降低,而较早期的CD34、CD117表达率逐渐升高（χ2值分别为6.23、12.06,8.95、7.37,8.95、8.08,均P＜0.05）,维吾尔族和汉族患者差异无统计学意义（χ2值分别为0.715、0.024、0.146,均P＞0.05）;同时维吾尔族患者CD56表达增高,汉族MDS患者HLA-DR增高,两组比较差异有统计学意义（χ2值分别为3.91、3.90,均P＜0.05）。结论　维吾尔族和汉族MDS患者骨髓细胞形态学病态造血改变相同,多数MDS有两系以上的病态造血。维吾尔族和汉族MDS患者免疫表型抗原表达部分不同,免疫表型的检测对MDS的诊断、分型及预后具有重要意义。     

骨髓增生异常综合征的免疫表型特征分析

 【摘要】　目的　评价免疫表型在骨髓增生异常综合征（MDS）诊断中的价值。方法　采用流式细胞术对27例MDS患者的骨髓细胞进行免疫表型检测。结果　随着MDS疾病的进展,CD+34细胞比例逐渐升高,分别为：难治性贫血／环形铁粒幼细胞性难治性贫血（RA／RAS）7.43 %,难治性贫血伴原始细胞增多（RAEB）36.81 %,难治性贫血伴原始细胞增多转化型（RAEB-T）56.45 %,3组差异有统计学意义（F＝51.197,P＝0.000）,且各组间差异均有统计学意义（P＜0.05）;髓系抗原CD33、CD13、HLA-DR表达逐渐增高,CD14、CD15抗原表达随着疾病的进展逐渐降低,3组间差异有统计学意义（P＜0.05）;B淋巴细胞表面抗原CD19、CD10的表达随着疾病进展而降低;T淋巴细胞表面抗原CD7表达随着疾病进展而增高,分别为RA／RAS 2.63 %、RAEB 10.79 % 和RAEB-T 11.00 %,3组间差异有统计学意义（F＝10.439,P＝0.001）,其中RA／RAS组与RAEB组、RAEB-T组之间差异有统计学意义（P＝0.000,P＝0.001）。结论　检测MDS患者骨髓细胞的免疫表型有助于MDS的诊断、分型和判断预后,从而为治疗提供依据。     

成人急性淋巴细胞白血病免疫表型及细胞遗传学特征分析

目的：对110例成人急性淋巴细胞白血病（ALL）患者进行免疫表型及细胞遗传学特征分析.方法：采用CD45/SSC参数设门四色流式细胞术检测110例成人ALL患者治疗前骨髓细胞的免疫表型,染色体R显带技术对其中的73 例进行核型分析.结果：110例ALL患者中,21.8%为T-ALL,78.2%为B-ALL.47.3%的ALL患者表达髓系抗原 （MyAg）,CD13是成人ALL中最常见的MyAg （32.1%）.T-ALL髓系相关抗原表达总的阳性率（45.8%）与B-ALL（47.7%）无统计学差异.可供核型分析的73例中核型异常者37例（50.7%）,最常见的遗传学异常为Ph染色体,占23.3%.结论：免疫表型对ALL的诊断与分型至关重要,免疫表型与患者的异常核型改变及临床特征关系密切.     

大颗粒淋巴细胞白血病三例并文献复习

目的 探讨大颗粒淋巴细胞白血病（LGLL）的临床特征及诊疗方法.方法 回顾性分析3例LGLL患者的临床资料并复习相关文献.结果 3例患者均以淋巴细胞增多起病,病情进展缓慢,其中2例为T-LGLL,免疫表型特征为CD3＋ CD4-CD8＋ CD56-CD57＋,1例为NK-LGLL,免疫表型特征为CD3-CD4-CD8-CD56＋ CD57-.2例患者暂时不需要临床干预,1例患者因粒细胞缺乏及反复感染给予环孢素治疗.结论 LGLL是一组异质性疾病,其临床特征及预后各不相同.流式细胞术免疫表型分析及TCRVβ基因谱型分析、TCR基因重排等检测有利于明确诊断.     

多参数流式细胞术对多发性骨髓瘤患者的诊断和预后预测价值

目的 研究多参数流式细胞术对多发性骨髓瘤(MM)患者的诊断和预后预测价值.方法 选取86例MM患者作为观察组,再选择同期自愿接受多参数流式细胞术检查的健康体检人群40例作为对照组.采用多参数流式细胞术检测两组受试人群免疫表型(CD19、CD117、CD56、CD138、CD38)异常克隆浆细胞表达情况,统计观察组总生存率及不同免疫表型阳性和阴性患者总生存率;使用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析不同免疫表型对MM患者的预后预测价值,并以CD45/SS设门,分析不同组合[CD38(+)/CD138(+)/CD19(-)、CD38(+)/CD138(+)/CD19(-)/CD56(+)、CD38(+)/CD138(+)/CD19(-)/CD117(+)]对MM患者的预后预测价值.结果 两组受试者CD138阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者CD19阳性率明显低于对照组,CD117、CD56、CD38阳性率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01).ROC曲线分析结果显示,CD19、CD117、CD138、CD38免疫表型对MM患者的预后预测价值有限(AUC<0.6),CD56免疫表型对MM患者有一定的预后预测价值(AUC>0.6).不同组合对MM患者的预后预测价值均高于免疫表型(P<0.05),且CD38(+)/CD138(+)/CD19(-)的AUC最大,提示其预后预测价值最高.结论 多参数流式细胞术中免疫表型分析可为MM患者诊断提供一定参考价值,不同组合在预后预测中有较高的应用价值.     

急性巨核细胞白血病20例临床分析

目的分析急性巨核细胞白血病(AMKL)患者的临床特征、免疫表型、分子生物学特征以及预后.方法应用多种单克隆抗体标记,对20例急性巨核细胞白血病患者的白血病细胞进行标记,采用间接免疫荧光技术或流式细胞术检测单个核细胞的免疫表型.结果 20例AMKL患者均表达CD41a和CD41b.所有病例均不表达T、B淋巴细胞相关单抗.7例有髓系相关单抗表达,10例有非随机性染色体核型异常.生存期0～13个月,中位生存期4个月.结论单克隆抗体免疫标记法是AMKL快捷、方便的诊断方法,AMKL疗效极差,是一种进行性预后不良的疾病.     

骨髓增生异常综合征免疫表型的研究

目的：评价免疫表型测定在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及分型中的价值。方法：应用单克隆抗体方法对55例MDS患者进行免疫表型检测。结果：MDS患者髓系抗原表达明显增高,FAB亚型的抗原表达呈现规律性改变,随着RA向RAEB／RAEB-t转化,较早期的髓系抗原(CD33)逐渐增加,较成熟的CD15抗原和T-淋巴细胞抗原逐渐减少;同时在RAEB/RAEB—t阶段CD34^ 细胞数明显增高;较早期的骨髓细胞表面抗原(CD38、HLA-DR)在MDS表达明显增加。结论：免疫表型的检测对MDS更精确的诊断和分型有重要意义。     

异常复杂核型改变的骨髓增生异常综合征——难治性贫血伴环形铁粒幼细胞增多一例

 目的　探讨细胞遗传学在骨髓增生异常综合征（MDS）中的重要意义。方法　对1例应用骨髓细胞形态学诊断为MDS-RAS的患者分别进行常规染色体反带核型分析和白血病细胞分化抗原检测。结果　患者原始粒细胞占0.03,红系有明显的病态造血,环形铁粒幼细胞占0.20;流式细胞术检测原始细胞群占0.036,CD34、CD33、CD117阳性,CD13部分阳性;染色体分析为44,XX,der(5)add(5)(q33),del(7)(q22),add(9)(p23),der(10)add(10)(q21),del(12)(p12),add(16)(q23),-17,-22[14]/46,XX[6]。结论　该病例具有异常复杂的核型改变,在MDS-RAS中尚属少见,且在国际预后评分系统（IPSS）中占较大的分值,提示细胞遗传学检查对MDS的诊断和治疗具有重要意义。染色体的异常可能要早于骨髓形态学和白细胞表面分化抗原的变化,能及早监测疾病的进展和转变。     

骨髓增生异常综合征T淋巴细胞异常与克隆造血

 目的　了解T淋巴细胞异常在骨髓增生异常综合征（MDS）克隆造血中的作用。方法　对76例MDS患者的染色体核型、T淋巴细胞亚群及激活状态进行分析。结果　正常核型36例,异常核型40例,异常发生率52.6 %。40例异常核型中,三体8（+8）24例,占异常核型的60.0 %。与健康对照组比较,MDS患者CD+3 CD-19、CD+3 CD-4 CD+8以及CD+3 HLA-DR+细胞百分率显著升高,CD-3（CD16 CD56）+细胞的百分率明显降低。将MDS患者进行核型分组,异常核型组CD+3（CD16 CD56）+细胞的百分率显著高于正常对照组。将+8核型从MDS异常核型中独立出来进行分析,CD+3 CD+4 CD-8细胞的百分率明显低于正常核型以及其他异常组,CD4／CD8的比值明显低于健康对照组。结论　MDS存在T淋巴细胞异常,异常核型MDS可能恶性克隆增殖更为优势,预后更差。+8 核型MDS存在更为严重的免疫监视功能下降,导致恶性克隆过度增殖与残存造血过度受抑。     

骨髓增生异常综合征原癌基因Bmi-1表达的检测

目的：检测原癌基因Bmil在骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome,MDS）患者中的表达,探讨其在MDS中的临床意义。方法：选择201009—04—2013—01-10在泰山医学院附属医院就诊的69例MDS患者及30例非恶性血液病患者骨髓标本,应用SYBRGreen相对定量RT—PCR方法,进行Bmi-1基因的检测。结果：Bmi—1基因在非恶性血液病患者中无表达。在69倒MDS患者中均有表达（2．28±0．84）,且表达水平明显高于非恶性血液病患者组,t=14．787,P〈0．001。其中,RA组明显高于对照组（P〈0．001）,RAEB组明显高于RA组,P=0．001。Bmil基因高表达组CD34＋CD38-CD123＋／CD34＋为（10．77±5．51）％,低表达组为（4．65±3．36）％,差异有统计学意义,t=5．741,P=0．037。Bmi-1基因高表达组,骨髓原始细胞≥5％的病例数（17例）高于低表达组（14例）,χ2=7．057,P=0．012;Bmi1基因高表达组具有预后不良染色体核型的有6例,Bmi-1低表达组仅有3例,但两组间差异无统计学意义,χ2=2．794,P=0．144。结论：MDS患者的骨髓单个核细胞中均存在Bmi-1基因不同程度的表达升高,为MDS的诊断及预后的评价提供了新的方向。     

肿瘤患者外周血调节性T细胞的检测及临床意义

目的：研究肿瘤患者外周血调节性T细胞水平的变化并探讨其临床意义,旨在了解肿瘤患者的免疫功能改变,为肿瘤患者临床治疗及判断预后提供依据。方法：采用流式细胞仪对40例肿瘤患者及40例正常人外周血CD4＋CD25＋T细胞、CD4＋CD25highT细胞及CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞水平进行检测。结果：肿瘤患者外周血中CD4＋CD25＋T细胞和CD4＋CD25highT细胞高于正常对照组（P〈0.05）;CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞亦明显高于对照组（P〈0.01）。结论：肿瘤患者细胞免疫功能明显异常,CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞增多可能是肿瘤患者免疫功能受抑的重要原因之一;调节性T细胞水平检测在评价肿瘤患者疗效及判断预后方面具有一定的临床价值。     

Flow cytometric scoring system as a diagnostic and prognostic tool in myelodysplastic syndromes

The aim of this study is to validate the clinical utility of the flow cytometric scoring system (FCSS), quantifying phenotypic aberrancies in the myelomonocytic lineages, in the diagnosis and prognosis for conventionally treated myelodysplastic syndromes (MDS) patients. The bone marrow samples from 56 consecutive newly diagnosed MDS patients were characterized by the FCSS and compared with findings in 27 non-MDS cytopenic patients. The FCSS scores were significantly higher in patients with MDS than those in the non-MDS control. A flow score of 2 or more allowed for a specificity of 100% with 75% sensitivity in distinguishing these two groups. The FCSS scores correlated directly with validated prognostic systems including WHO classification, International Prognostic Scoring System (IPSS), WHO-adjusted prognostic scoring system (WPSS) and transfusion dependency. The median survival of conventionally treated MDS patients was directly related to FCSS group; severe: 6 months; moderate: 19 months and normal/mild: not reached. The multivariate analyses suggested the FCSS risk categories were an independent prognostic factor after adjustment for sex, age (above or below 70 years), IPSS or WPSS risk categories. These results confirm that quantifying aberrancies in the myelomonocytic lineage by FCSS is useful in MDS diagnosis and extends the prognostic utility for conventionally treated/untreated patients, especially among patients classified within the refractory cytopenia with multilineage dysplasia (RCMD) subgroup.     

骨髓增生异常综合征患者外周血循环CD34+细胞计数的临床研究

目的 探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者外周血循环CD34+细胞计数在疾病分型及预后中的意义。方法 流式细胞仪测定16例健康者、40例MDS患者外周血循环CD34+细胞占有核细胞的百分比（简称CD34+细胞百分比）和绝对细胞数。依据WHO MDS诊断标准、染色体核型以及国际预后积分系统（IPSS）将MDS患者分别划分为RA／RARS／RCMD 组和RAEB Ⅰ／RAEB Ⅱ组,染色体良好组、中间组、不良组,中危Ⅰ组、中危Ⅱ组、高危组。结果MDS患者外周血循环CD34+细胞百分比、绝对数分别为0.67％和17.24个／μl,健康者分别为0.03％和1.63个／μl,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）。MDS患者中,RA／RARS／RCMD组CD34+细胞百分比及绝对数分别为0.05％和3.50个／μl,RAEBⅠ／RAEBⅡ组分别为3.09％和81.95个／μl（P＜0.01）;染色体良好组CD34+细胞百分比及绝对数分别为0.05％和3.50个／μl,中间组为1.29％和18.23个／μl,不良组为3.09％和133.10个／μl,随着不良核型的出现,CD34+细胞百分比及绝对数依次增高（P＜0.05）;中危Ⅰ组CD34+细胞百分比及绝对数分别为0.05％和3.50个／μl,中危Ⅱ组为1.57％和35.55个／μl,高危组为8.15％和192.05个／μl,随着IPSS分值的递增,CD34+细胞百分比及绝对数逐渐增高（P＜0.01）。结论 MDS患者外周血循环CD34+细胞计数存在异常增高现象,其计数水平的检测有助于MDS的分型和预后判断。     

伴有髓系分化抗原表达的神经母细胞瘤骨髓转移1例并文献复习

目的：报道伴有髓系抗原表达的神经母细胞瘤骨髓转移患儿1例,并进行文献复习。方法：取患者骨髓液进行细胞形态学分析及流式细胞术检测细胞分化抗原。结果：该患者骨髓形态学考虑为神经母细胞瘤髓内转移,经流式细胞术分析异常细胞同时表达髓系分化抗原CD13、CD15和CD11b,结合影像学检查确诊为神经母细胞瘤（Ⅳ期）。结论：复习相关文献并结合本例报道发现神经母细胞瘤细胞和造血细胞拥有一些相同的抗原决定簇,可伴有髓系及淋巴系分化抗原的表达,但其在神经母细胞瘤的分化程度、临床分期、疗效及预后判断上的作用尚需进一步研究。     

Tim-3分子在胃癌患者外周血NK细胞上的表达及临床意义

目的：检测Tim-3分子在胃癌荷瘤个体NK细胞上的表达,探讨Tim-3在胃癌发生发展中的作用。方法：收集2012年8月-2013年1月在苏州大学附属第一医院初治的原发性胃癌患者32例,健康体检者28例为正常对照组。流式细胞仪检测胃癌患者及正常对照组外周血NK细胞上Tim-3的表达,分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果：胃癌患者外周血CD56＋NK细胞上Tim-3的表达量为（49.27±21.06）%,显著高于健康对照组（37.00±17.16）%（P〈0.05）。有淋巴结转移者 Tim-3＋CD56＋NK 细胞高表达率（55%）高于无淋巴结转移患者（0%）;有远处转移患者Tim-3＋CD56＋NK细胞高表达率（100%）显著高于无远处转移者（40.7%）,差异均有统计学意义（P〈0.05）。Ⅲ-Ⅳ期胃癌患者Tim-3＋CD56＋NK细胞高表达率较Ⅰ-Ⅱ期患者高（73.7% vs 15.4%）,差异具有显著性（ P〈0.01）。结论：Tim-3在胃癌的发生发展中发挥着一定作用,是潜在的用于评估胃癌预后的指标。     

Maturation-associated immunophenotypic abnormalities in bone marrow B-lymphocytes in myelodysplastic syndromes

Recent studies concerning the pathophysiology of myelodysplastic syndromes (MDS) have shown evidences for the existence of complex interactions between hematopoietic stem cells and the bone marrow (BM) microenvironment. We analyzed the B-lymphocyte maturation in BM of patients with MDS. For this purpose, 41 newly-diagnosed patients were analyzed. Enumeration and characterization of CD34+ and CD34- B-cell precursors and mature B-lymphocytes was performed using multiparameter flow cytometry. BM from eight transplant donors and six orthopedic surgery patients were used as controls. CD34+/CD45(lo) B-cells were found in 17/22 patients with RA/RARS and in 5/13 with RAEB. In patients with RAEB-t and CMML no CD34+ B-cell precursors could be detected. A positive correlation was found between CD34+ and CD34- B-cell precursors (r=0.52). CD34+ B-cell precursors presented an inverse correlation with BM percentage of blasts and peripheral leukocytes and a positive one with hemoglobin. Asynchronous antigen expression (CD19+/CD79a- cells) was found in 7/11 cases of RA/RARS and 6/18 cases of RAEB in which this phenotype was examined. Abnormal patterns of expression for at least one antigen was found in 91% of RA/RARS cases and in 74% of RAEB. Underexpression of TdT and CD79a were the most frequent abnormalities. Our results present evidences of an abnormal B-cell maturation in MDS. This may be an evidence that B-lymphocytes are derived of the abnormal clone. But it may also be the consequence of influences of abnormalities of BM microenvironment leading to an impaired commitment and maturation of the B-cell line in MDS. Studies performed with purified well-characterized B-cells may further elucidate these abnormalities.