DC-CIK细胞抗肿瘤的研究进展

随着医学生物技术的发展,细胞免疫治疗已成为治疗肿瘤的一种崭新模式,已经进入临床应用阶段,并取得了良好的治疗效果,尤其是细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞联合树突状细胞(DC)对恶性肿瘤的治疗显现出明显效果.本文就CIK细胞和DC细胞的基础研究和临床应用现状加以综述.     

健康人和肿瘤患者CIK细胞的生物学特性比较及应用

目的 比较健康人和肿瘤患者外周血来源的CIK细胞的体外扩增速度、细胞表型和杀伤活性;观察健康人CIK细胞对裸鼠体内移植瘤的预防和治疗作用.方法 健康人和肿瘤患者外周血单个核细胞各10份,定向诱导成CIK细胞,直接活细胞计数法比较两者的扩增速度,流式细胞仪检测比较两者细胞表型,MTT法比较两者对K562和LOVO细胞株的杀伤活性.取30只裸鼠分为3个组,预防组:先尾静脉注射CIK细胞,后背部皮下接种A549细胞.治疗组:裸鼠于第1天接种A549细胞,第2天,根据注射方案不同,分为局部注射CIK细胞(局部注射组)、尾静脉注射CIK细胞(尾静脉注射组)、局部及尾静脉均注射CIK细胞(联合治疗组)3组,均连续治疗5 d.对照组:背部皮下接种A549细胞,注射生理盐水,连续5 d.4周后裸鼠,测量肿瘤大小,称重,计算肿瘤体积、抑瘤率,并做病理检查.结果 健康人CIK细胞的扩增速度显著高于肿瘤患者CIK细胞 (P<0.05),流式细胞仪检测显示健康人CIK细胞CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞百分比显著高于患者CIK细胞(P<0.05),健康人CIK细胞对K562、LOVO的杀伤活性强于患者CIK细胞(P<0.05).对照组各裸鼠背部皮下移植瘤出现较早,并且以相近速率快速生长,体积较大;CIK细胞预防组及治疗组中局部注射组和尾静脉注射组的移植瘤出现较晚,生长较慢,体积较小,联合治疗组治疗效果更佳(P<0.05).结论 体外实验中,健康人CIK细胞体外扩增快,CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例高,对肿瘤细胞的杀伤活性强于肿瘤患者CIK细胞.动物实验中,健康人CIK细胞对裸鼠移植瘤有预防和治疗作用.     

正常人CIK细胞对卵巢癌SKOV3ip细胞抗肿瘤的活性

目的　观察正常人CIK(cytokine inducedkiller)细胞对人卵巢癌细胞株SKOV3ip的体外细胞毒活性以及对卵巢癌腹水瘤模型的体内抗肿瘤作用。方法　取正常人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,加入细胞因子γ IFN、IL 2、抗 -CD3单抗和IL - 1,体外诱导成CIK细胞 ,用MTT法测定CIK细胞体外对人卵巢癌细胞株SKOV3ip的细胞毒活性 ,并与CD3AK作对比。在Babl/c裸小鼠腹腔内接种卵巢癌SKOV3ip细胞 ,观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。结果　体外实验证明 ,CIK细胞对SKOV3ip有明显的细胞毒活性 ,对比CD3AK其抑瘤率为 89.7%与 6 7.1% (P <0 .0 5 )。裸鼠卵巢癌腹水瘤模型体内实验表明 ,CIK细胞能够显著抑制癌性腹水生长 ,其抑制率可达 10 0 %。结论　CIK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞 ,具有较强的体内外抗卵巢癌细胞活性 ,具有明显的抑制癌性腹水生长的作用 ,有可能用于临床上卵巢癌腹水的过继性免疫治疗     

CIK细胞不同培养时间的生物学活性

目的探讨CIK细胞培养时间与细胞毒活性的关系。方法抽取恶性肿瘤患者的外周血分离单个核细胞（PBMC）,用细胞因子诱导培养CIK细胞,于培养第0、7、14、21、28、35、42天分别收取培养的CIK细胞。用流式细胞仪分析检测CIK细胞中CD3＋、CD56＋双阳性细胞的百分率及增值率,用MTT法测定其对肺癌细胞株A549杀伤活性。结果培养第21天细胞扩增倍数为（372±1.87）倍,培养第28天细胞扩增倍数为（410±6.52）倍,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）;培养第35天CIK细胞扩增倍数为（414±5.16）倍,与培养第28天细胞扩增倍数比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。培养至第28天CIK细胞中CD3＋、CD56＋双阳性细胞的百分率为（35.6±2.30）%,达最高峰,其后逐渐降低。用MTT法检验不同培养时间的CIK细胞对肺癌细胞株A549的杀伤活性,当效靶比为10∶1时,培养21 d的CIK细胞杀瘤率是95%,达最高峰;当效靶比20∶1时培养21 d的CIK细胞杀瘤率已达100%;当效靶比40∶1时培养14 d的CIK细胞杀瘤率即可达到100%。结论培养时间的延长有利于增强CIK细胞的细胞毒活性,CIK细胞的最佳培养时间应为28 d左右。增加效应细胞的数量,会大大提升对肿瘤细胞的杀伤力。     

细胞因子诱导的杀伤细胞的生物学特性及抗肿瘤作用研究

目的 探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的生物学特性及抗肿瘤作用。方法 用淋巴细胞分离液分离健康献血者血中单个核细胞,用IFN-γ、IL-1β、IL-2、CD3单抗诱导CIK细胞。以CD3AK细胞作为对照。流式细胞仪检测细胞表型;乳酸脱氢酶（LDH）释放法分析细胞毒活性。结果 CIK细胞和CD3AK相比,在前期细胞增殖能力无明显差异,但至第10～21天时CIK细胞的增殖能力显著高于CD3AK细胞（P〈0．05）。诱导14d时,CD3^＋细胞和CD3^＋CD56^＋阳性细胞显著增多（分别约占84．75％和33．45％）。不同效靶比例的CIK细胞对K562细胞、BeL-7402细胞和Hela3细胞的溶瘤率均显著高于CD3AK细胞（P〈0．01）,在40：1的效靶比时,其杀瘤活性最强。但CIK细胞对不同肿瘤细胞的杀伤率比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 CIK细胞是CD3^＋CD56^＋双阳性细胞群,其增殖能力及杀瘤活性明显优于CD3AK细胞。CIK细胞可作为一种新的广谱、高效的免疫效应细胞应用于临床。     

CIK细胞和DC的免疫生物学特性及抗肿瘤研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIK细胞)是由多种细胞因子如IL-2、IFN-γ和CD3单克隆抗体等诱导而成的对多种肿瘤具有杀伤活性的细胞毒性T细胞,其溶瘤活性具有非MHC限制性[1].CIK细胞在体内归巢于脾脏、淋巴结等,可特异地聚集于肿瘤局部发挥抗肿瘤作用;树突状细胞(DC)是功能强大的主要的抗原递呈细胞,分布于除脑和睾丸以外身体各部的任何组织.DC通过受体的方式摄取外来抗原,并能与这些抗原表面的MHCⅠ类和Ⅱ类分子结合,刺激初始型CD8 T细胞和CD4 T细胞活化.DC除了诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞外,还可通过直接或间接方式影响B细胞的增殖,活化体液免疫应答[2].因此,将具有高效杀伤活性的CIK细胞和具有强大肿瘤抗原递呈能力的DC联合应用治疗恶性肿瘤,可发挥协同抗肿瘤作用.本文就CIK细胞和DC的生物学特性及其抗肿瘤研究进展作一综述.     

CD3AK、LAK与CIK细胞生物学特性的研究

①目的探讨CD3AK、LAK及CIK细胞的诱导、增殖能力及杀伤活性的变化.②方法采用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞,用IL-2刺激诱生LAK细胞,采用第0天加入IFN-γ,第1天加入IL-1,CD3单抗,IL-2诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况;用MTT法以K562和H7402细胞为靶细胞,测定CD3AK、LAK及CIK细胞的杀伤活性.③结果CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P＜0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第19、22天时CIK细胞的扩增能力显著高于CD3AK的扩增倍数(P＜0.05).CD3AK和CIK细胞对K562和H7402细胞的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P＜0.05).④结论CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀瘤效应细胞.     

猪脾转移因子的制备和生物学活性研究

目的:采用冻融-透析法制备猪脾转移因子,并对其理化性质以及免疫学生物学活性、生物安全性进行初步检定。方法:采用低温匀浆反复冻融新鲜的猪脾脏、无菌离心匀浆脾脏组织液,取上清液透析制备转移因子;以改良Lowry法分别检测多肽含量,并进行理化指标、无菌试验、热原质试验及其生物学活性检测。结果:冻融-透析法制备猪脾转移因子的理化性状符合《中国生物制品》的要求;无菌试验、热原质试验均为阴性;安全试验合格;淋巴细胞转化试验和E花环形成试验证实其具有刺激淋巴细胞增殖生物学活性。结论:成功制备了猪脾脏转移因子,其各项理化指标符合生物制品规程的要求,同时具有较好的非特异性免疫学的生物学活性。     

细胞因子诱导杀伤细胞与抗原特异性细胞因子诱导杀伤细胞杀伤肿瘤效应比较的实验研究

目的：制备具有抗原特异杀伤活性的效应细胞。方法：反复冻融法提取肿瘤可溶性抗原，甲基噻唑基四唑（methyl thiazoly terrazolium,MTT)法检测效应细胞杀伤活性。结果：经树突状细胞（dendritic cell,DC)摄取肿瘤细胞抗原，并提呈给细胞因子诱导杀伤（cytokine induced killer,CIK)细胞所获得的DC－A－CIK细胞对同一种肿瘤靶细胞的杀伤活性，较CIK细胞、未摄取抗原的DC－CIK细胞及摄取不相同肿瘤抗原的DC－A不相同－CIK细胞具有更高的杀伤活性。结论：摄取肿瘤可溶性抗原的DC细胞可明显提高CIK细胞对相同肿瘤靶细胞的杀伤特性性和杀伤活性。     

DC-CIK与CIK体外抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨树突状细胞（Dc）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养后对白血病细胞株K562、淋巴瘤细胞株Raji、肺癌细胞株A549、胃癌细胞株BOG-803的杀伤作用。方法采集健康志愿者外周血50mL,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,分别用不同的细胞因子诱导,培养D0细胞与CIK细胞。然后将成熟的DC和CIK细胞混合培养,用流式细胞仪检测两组细胞中。D3＋CD56＋、CD3＋CD8＋T细胞的比例;用MTT法检测其对K562、P-ajj、A549、BCG-803细胞株的杀伤活性。结果DC-CIK组较CIK组具有较高的CD3＋CD56＋、CD3＋CD8＋T细胞比例（p〈0．05）;DC—GIK、GIK对K562、Pajj、A549、BCG-803细胞株均具有较强的杀伤作用,且随着效靶比的增加,杀伤活性逐渐增加;DC—CIK的杀伤活性较CIK明显增高（P〈0．05）。结论DC—CIK共培养体外可增强对肿瘤细胞的杀伤作用,为肿瘤的临床治疗提供了理论和实验依据。     

晚期结直肠癌患者树突细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗效果研究

目的探讨树突细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗晚期结直肠癌患者的临床疗效。方法将40例临床确诊的晚期结直肠癌患者随机分为两组,观察组给予免疫治疗联合化疗,对照组仅给予化疗。观察两组患者治疗前后细胞免疫指标(CD3+、CD4+、CD8+细胞比例及CD4+/CD8+)变化、卡氏评分(Karnofsky,KPS评分)和疗效,并观察其不良反应。结果观察组患者治疗后CD3+细胞的比例较治疗前显著增加,差异有统计学意义(P=0.001);而CD4+、CD8+细胞的比例及CD4+/CD8+治疗前后比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组免疫学指标(CD3+、CD4+、CD8+细胞的比例及CD4+/CD8+)治疗前后比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。观察组患者治疗后有效率为45%,对照组有效率为35%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组KPS评分总提高率为80%,对照组为60%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DC联合CIK治疗可明显改善晚期结直肠癌患者外周血淋巴细胞亚群水平,能提高患者的生活质量。     

食管鳞癌上皮细胞间质转化对NK细胞活化及其生物学作用的研究

目的 探讨食管鳞癌上皮细胞间质化（EMT）对自然杀伤（NK）细胞生物学活性的影响。方法 通过Western blot检测EMT化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达,从6株细胞系中筛选出 EMT化和非EMT化食管鳞癌细胞株;收集10例正常人外周血,负性分选NK细胞;根据共培养不同的条件培养基分为RPMI 1640正常培养基刺激-NK组（NC组）、EC9706细胞上清液刺激-NK组（EC9706组）与KYSE150细胞上清液刺激-NK组（KYSE150组）,将不同的条件培养基加入NK细胞共培养72 h,流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达。10 ng/mL 转化生长因子-β（TGF-β）处理KYSE150细胞株7 d诱导EMT化后,收集KYSE150 EMT和KYSE150上清液,分别与NK细胞共培养,72 h后以流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达、CD107a脱颗粒能力、靶细胞K562杀伤效应、NK细胞增殖及凋亡。结果 6株细胞系中筛选出2株EMT化和4株非EMT化的食管鳞癌细胞株,从中各选出一株（EC9706和KYSE150）用于后续实验;NK细胞负性筛选达到90%以上的纯度,T细胞<1%。不同的食管鳞癌细胞上清液刺激后,3组NK细胞表面活化型、抑制型受体,效应分子结果显示:与NC组和KYSE150组比较,EC9706组活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,颗粒酶释放均降低（ P<0.05）;抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加（ P<0.05）;NKP46、CD226、CD16表达和穿孔素释放在3组间差异无统计学意义。与KYSE150上清刺激比较,KYSE150 EMT上清刺激后,NK细胞活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,穿孔素释放均降低;CD107a脱颗粒作用、靶细胞K562杀伤效应均减弱,NK细胞Ki67增殖指数下降（ P<0.05）;抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加（ P<0.05）;NKP46、CD226、CD16表达,颗粒酶释放及NK细胞凋亡在两组间差异无统计学意义。结论 食管鳞癌细胞EMT化可能通过抑制NK细胞活化、减少NK细胞杀伤效应分子的分泌来降低NK细胞杀伤效应,从机体免疫监视中逃逸。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的肿瘤杀伤细胞生物学特性及其在肿瘤治疗中的研究进展

恶性肿瘤是导致死亡的重大疾病之一,而肿瘤的生物治疗因具有符合生理、高效和低毒的特点,已经成为手术、化疗、放疗外的第四种肿瘤治疗方式,有着巨大的治疗前景.免疫活性细胞的体内注射是肿瘤生物治疗的一个重要领域.其中,树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞是肿瘤生物治疗的两个主要组成部分,两者联合确保了一个高效和谐的免疫系统,已成为当今肿瘤治疗研究的热点之一.该文就DC-CIK细胞的生物学特性及其在肿瘤生物治疗中的研究进展进行综述.     

DC-CIK治疗恶性肿瘤的研究进展

树突状细胞(DC)是目前已知功能最强的专职抗原呈递细胞,而细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞杀伤肿瘤活性具有非主要组织相容性复合体限制性,故对多种肿瘤均具有杀伤活性。近年来大量体内外研究表明,共培养的DC和CIK(DC-CIK)细胞具有高效的抗肿瘤活性,患者的生存时间明显延长,因此成为肿瘤生物免疫疗法中的研究热点。现就DC-CIK治疗恶性肿瘤的研究进展予以综述。     

DC-CIK治疗肾癌研究进展

树突状细胞（DC）是目前已知体内功能最强的抗原递呈细胞。细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞是一种高效、广谱杀瘤活性的非主要组织相容性复合体限制性免疫效应细胞。DC细胞与CIK细胞的有机结合可产生特异性免疫和非特异性免疫的双重抗肿瘤作用。DC-CIK合理应用可有效提高机体抗肿瘤作用,能够杀伤清除不能用手术切除的极微小瘤灶或体内散存的肿瘤细胞,起到延缓或阻止肿瘤转移或复发的作用,为肾癌治疗开辟了一条新的治疗途径。现就DC-CIK治疗肾癌的研究进展予以综述。     

吉非替尼联合自体DC/CIK细胞治疗对晚期非小细胞肺癌临床研究

目的：探讨靶向治疗吉非替尼联合自体树突状细胞(DC)/细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞回输治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的TGF-β1、免疫功能、安全性及疗效的影响。方法随机选取2013年7月—2015年1月于该院接受治疗的100例晚期非小细胞肺癌患者,采用随机数字表法随机分为治疗组和对照组各50例。对照组单纯采用口服吉非替尼250 mg/d靶向治疗,治疗组在此基础上给予至少3次DC/CIK细胞输注。随访时间为12个月,对比观察两组以下指标：血清TGF-β1、外周血淋巴细胞表型、不良反应、总生存期(OS)和中位生存期(mOS)。结果血清TGF-β1：两组治疗后血清TGF-β1水平均较治疗前下降(P<0.05),治疗组下降较对照组明显(P<0.05)。外周血淋巴细胞表型：经过治疗,治疗组外周血 CD 3+、CD 4+、CD 8+和CD 4+/CD 8+对对照组相较有明显差异,两组差异有统计学意义(P<0.05)。不良反应：治疗组接受 DC和CIK自体细胞输注后出现发热7例,经相应处理后缓解。两组皮疹和腹泻发生率比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组OS为9.1~18.1(12.1±3.4)个月,mOS为11.9个月,对照组分别为7.4~11.5(9.6±1.2)和9.5个月,两组相较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在吉非替尼靶向治疗基础上联合自体DC/CIK细胞回输治疗晚期NSCLC,可以减轻不良反应,改善免疫功能,延长患者生存期,并具有较好的安全性。     

SKOV3冻融抗原负载的DC-CIK细胞对SKOV3的杀伤作用

目的 探讨负载人卵巢癌细胞株SKOV3冻融抗原(Ag)的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后对SKOV3杀伤作用的影响.方法 取12例卵巢癌患者外周血,常规诱导出DE及CIK细胞,以SKOV3冻融Ag负载DC,经Ag负载与未经Ag负我的DC分别和CIK细胞共培养,流式细胞技术分析DC、Ag-DC、Ag-DC-CIK 3组DC细胞表型,CIK、DC-CIK、Ag-DC-CIK组CIK细胞表型;乳酸脱氢酶释放法测CIK组、DC-CIK组、Ag-DC-CIK组对SKOV3杀伤活性.结果 Ag-DC-CIK组中DC细胞成熟表型高于DC及Ag-DC组(P<0.01);Ag-DC-CIK组中CIK细胞成熟表型高于CIK及DC-CIK组(P<0.01);Ag-DC-CIK组对SKOV3杀伤率高于CIK及DC-CIK组(P<0.01).结论 负载SKOV3冻融Ag的DC与CIK共培养可促进DC、CIK的成熟,且可提高对SKOV3的杀伤作用.     

芹菜素对人CIK细胞杀伤结肠癌SW1116细胞的影响

目的观察芹菜素对人结肠癌细胞SW1116及CIK细胞的作用,探讨芹菜素对人CIK细胞杀伤结肠癌SW1116细胞的影响。方法不同浓度的芹菜素分别诱导人CIK细胞和结肠癌细胞SW1116细胞24、48、72 h,四甲基偶唑蓝(MTT)法检测上述两种细胞的生长。乳酸脱氢酶释放法检测CIK细胞对结肠癌SW1116细胞杀伤活性。结果体外培养10 d后,CIK细胞比例由3.12%增加到17.55%。与对照组比较,浓度1.17～4.7μmol/L芹菜素作用后的CIK细胞的增殖率显著提高(P<0.05),浓度37.5～600μmol/L的芹菜素对SW1116细胞生长抑制率显著提高(P<0.05),三个时间段比较均无明显差异。浓度2.35～9.4μmol/L的芹菜素作用48 h后,CIK细胞对结肠癌SW1116细胞的杀伤活性显著高于对照组(P<0.05)。结论芹菜素在一定浓度范围内可促进CIK细胞的生长,明显提高CIK细胞对SW1116细胞的杀伤作用,且抑制结肠癌SW1116细胞的生长。