188Re-Herceptin放免导向治疗鼻咽癌裸鼠模型的实验研究

目的应用,^188Re标记针对HER2／neu癌基因表达蛋白P185^HER2的人源化单抗Herceptin瘤内给药治疗HER2／neu过度表达的鼻咽癌裸鼠移植瘤,探讨^188Re—Herceptin作为肿瘤化疗和放免治疗双重治疗药物的可行性。方法^188Re标记Herceptin采用直接标记法。荷人鼻咽癌裸鼠37只,分为5组,分别经瘤内注射^188Re—Herceptin、^188Re-鼠IgG、^188Re、生理盐水和静脉注射,SSRe—Herceptin．2 d后每组各取3只作组织分布测定,其余连续观察4周,比较各组肿瘤体积及其生长抑制率,评估其治疗效应和反应。结果给药2d后,^188Re—Herceptin瘤内注射组中肿瘤组织放射性摄取为11．53％ID／g,是^188Re—Herceptin静脉注射组的4倍（2．79％ID／g）,而血、肝、肾等正常组织摄取均〈1％ID／g,明显低于^R—Herceptin静脉注射组（〉1．5％ID／g）。而^188Re．nmlgG瘤内注射组和,SSRe瘤内注射组肿瘤组织和正常组织的放射性摄取相差不大,约为1％ID／g。放免治疗结果显示瘤内注射^188Re—Herceptin对人鼻咽癌裸鼠移植瘤具有较强抑制作用,4周后肿瘤生长抑制率高于静脉注射组,分别为58．7％和48．8％,在放射性活度为11．1MBq时瘤内给药抑瘤效果优于静脉给药。结论采用瘤内注射^188Re—Herceptin导向治疗HER2／neu过度表达的鼻咽癌可显著抑制人鼻咽癌裸鼠模型肿瘤的生长,为临床鼻咽癌的治疗提供一种较为有效的局部治疗方法。     

Herceptin及联合顺铂对高表达HER-2/neu卵巢癌体外作用的实验研究及机制探讨

Herceptin是针对HER-2／neu蛋白设计的人源化鼠抗，是一种新型靶向抗肿瘤药物，可明显延长高表达HER-2／neu的晚期乳腺癌患者的生存期。卵巢癌HER-2／neu蛋白的过度表达率为20％～30％，与乳腺癌相似。本研究应用Herceptin联合顺铂对高表达HER-2／neu人卵巢癌进行体外作用的实验研究，并对其作用机制进行探讨。     

Herceptin与阿霉素序贯应用对乳腺癌细胞的杀伤效应

目的 探讨Herceptin与阿霉素序贯应用对乳腺癌细胞株的杀伤效应。方法 应用Herceptin、阿霉素及二者联合序贯应用于对数生长期的乳腺癌BT-474细胞,光学显微镜下观察各组细胞用药前后细胞形态变化,流式细胞仪检测各组细胞HER-2／neu的表达率、HER-2／neu表达的平均荧光强度及各组细胞的死亡率。结果 光学显微镜下各用药组细胞均有不同程度的变暗、细胞碎片增多、细胞外形部分不规则、细胞内颗粒增多;流式细胞仪检测表明各组间细胞HER-2／neu表达率无显著性差异,但各用药组细胞HER-2／neu表达的平均荧光强度明显低于对照组（P〈0．05）;流式细胞仪检测表明各用药组细胞的死亡率明显高于对照组。Herceptin后续应用阿霉素组细胞的死亡率明显高于阿霉素后续应用Herceptin组（P〈0．05）。结论 应用Herceptin后再辅以阿霉素化疗,对乳腺癌细胞杀伤效应最强,为临床乳腺癌生物化疗的序贯应用模式提供了实验依据。     

三羟异黄酮联合阿霉素对人乳腺癌细胞HER-2/neu表达的影响

目的:探讨三羟异黄酮(GEN)联合阿霉素(ADM)对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中HER-2/neu mR-NA及蛋白表达的影响。方法:将不同浓度GEN和ADM单独或联合作用于体外培养的MCF-7/ADM细胞后,RT-PCR检测HER-2/neu mRNA表达情况,Western blot检测HER-2/neu蛋白表达情况。结果:体外培养的MCF-7/ADM细胞高表达HER-2/neu mRNA及蛋白,经GEN单独及联合ADM作用后,HER-2/neu mRNA和蛋白表达明显下调。联合用药比相同浓度GEN单用下调更明显。结论:人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性与HER-2/neu mRNA及蛋白高表达相关,GEN能部分逆转MCF-7/ADM细胞多药耐药性。     

扶正消瘤颗粒对人表皮生长因子受体2阳性乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察扶正消瘤颗粒对人表皮生长因子受体2(HER-2)阳性乳腺癌细胞SKBR-3增殖和凋亡的影响。方法 SKBR-3细胞以2×106/2 000μL的密度接种到6孔培养板中,共5组。24 h后分别加入1倍、2倍、3倍剂量的扶正消瘤颗粒含药血清,以赫赛汀为阳性对照,空白血清为空白对照。加药后72 h,分别用四甲基偶氮唑蓝显色(MTT)法及流式细胞仪检测SKBR-3细胞的增殖和凋亡。结果 2倍剂量的扶正消瘤颗粒和赫赛汀均可抑制SKBR-3细胞增殖;3种剂量的扶正消瘤颗粒均可促进SKBR-3细胞早期凋亡,2倍剂量组早期凋亡率及总凋亡率最高。结论扶正消瘤颗粒可明显促进乳腺癌SKBR-3细胞凋亡,2倍剂量的扶正消瘤颗粒能抑制乳腺癌SKBR-3细胞增殖。     

188Re-血管抑素的制备及其在小鼠体内分布

目的: 探索用铼( 188Re)直接标记血管抑素(Angiostatin,AS)的方法,并研究标记产物的体外稳定性及其在小鼠体内的生物分布.方法: 制备的AS经鉴定后,用氯化亚锡(SnCl2)还原法进行 188Re标记AS;对标记产物用纸层析法测标记率;产物中分别加入牛血清白蛋白(BSA)、生理盐水及不同摩尔比的半胱氨酸(Cys)以观察其体外稳定性.结果: AS 100 μg,20 g/L SnCl2(溶于1 mol/L的HCl中)200 μL,以0.1 mol/L酒石酸钠(溶于0.05 mol/L的HCl中)1 mL为络合剂,加入188ReO4 37 MBq,标记率可达76.3%.产物在体外较为稳定;标记物在肝、肾、脾中有较高的放射性摄取,放射性在24 h内大部分排出体外.结论: 用188Re直接法标记AS简单易行,稳定性较好.     

载体介导HER-2 RNA干扰治疗乳腺癌研究

目的 探讨载体介导HER-2RNA干扰治疗HER-2阳性乳腺癌的可行性。方法 构建能够产生HER-2 siRNA的质粒载体,利用载体转染HER-2阳性乳腺癌细胞SKBR-3,利用RT-PCR与Western blot检测HER-2 mRNA与蛋白表达情况,同时观察转染后SKBR-3细胞凋亡及生长情况。结果 SKBR-3细胞HER-2受到载体介导的RNA干扰后．HER-2 mRNA及蛋白表达出现明显下调,细胞凋亡增加,肿瘤细胞生长受到抑制。结论 乳腺癌HER-2是理想的RNA干扰治疗靶点,靶向HER-2的RNA干扰可以诱导肿瘤凋亡,抑制肿瘤生长。     

癌基因扩增和癌瘤的预后

人的原发乳腺癌N细胞即HER-2/neu癌基因可能扩增。Slamon等发现,当HER-2/neu出现时,病人迅速复发,总存活率也较低。因此,HER-2/neu在乳腺癌发病机制中可能是一项有意义的因素。具有5个或更多的基因拷贝的病人预后最差。位于人染色体17上的癌基因为185 000 dalton蛋白编码,人们认为这种蛋白是一种细胞受体,因为它类似表皮生长因子受体,     

非基因组活性对雌激素受体阳性乳腺癌细胞Herceptin敏感性的影响

目的探讨雌激素(estrogen,E2)通过雌激素受体(estrogen receptor,ER)非基因组活性干扰ER阳性(ER+)乳腺癌细胞对人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)的人源化单克隆抗体赫赛汀(Herceptin)的敏感性及其机制。方法采用Western blot和瞬时转染结合荧光素酶报告基因分析,确定BT-474乳腺癌细胞(ER+/HER2+)和SKBR-3乳腺癌细胞(ER-/HER2+)作为对比研究对象;在E2存在与否的情况下,采用细胞增殖分析比较Heregulin(HRG)诱导的BT-474和SKBR-3细胞对Herceptin敏感性的改变;采用Western blot检测HER2途径下游关键分子MAPK的磷酸化水平。结果在没有E2存在的情况下,Herceptin可有效抑制BT-474和SKBR-3细胞的增殖(P<0.01);在E2存在的情况下,Herceptin对BT-474细胞增殖的抑制效应消失(P<0.01),同时,Herceptin不能降低MAPK的磷酸化;这些现象在SKBR-3乳腺癌细胞中却不会出现。结论 E2可通过ER非基因组活性影响ER+的乳腺癌细胞Herceptin的治疗效果,并可能参与了Herceptin抵抗的发生。     

Genistein对乳腺癌异种移植瘤的抑制作用及其与uPA表达变化的关系

目的探讨三羟异黄酮(genistein)对原癌基因HER-2/neu高表达乳腺癌异种移植瘤的抑制作用及其与尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase type plasminogen activator, uPA)表达变化的关系.方法应用基因转染技术建立HER-2/neu高表达的乳腺癌MCF-7细胞(MCF-7/HER-2).BALB/c裸鼠皮下接种MCF-7和MCF-7/HER-2细胞,其中接种MCF-7/HER-2细胞的裸鼠随机分为3组:对照组、genistein处理组、HER-2/neu抗体处理组.应用免疫组化法观察移植瘤细胞生长能力,应用Western blot 法观察移植瘤uPA的表达变化.结果 MCF-7/HER-2移植瘤与MCF-7移植瘤相比细胞增殖能力较强且uPA表达增加,而MCF-7/HER-2移植瘤经genistein和HER-2/neu抗体处理后,移植瘤细胞增殖能力减弱,其uPA表达降低.结论 Genistein能有效抑制HER-2/neu高表达乳腺癌异种移植瘤细胞的增殖能力,且这种作用与uPA的表达有关.     

Effects of Nitric Oxide on Proliferation and Apoptosis of Cultured Bovine Trabecular Meshwork Cell

Nitric Oxide (NO) shows a dualism in thepathogenesis of glaucoma:in one side,NO can im-prove outflow facility of aqueous humor and dropintraocular pressure (IOP) ;on the other side,ithas direct toxic effect on retinal ganglion cell[1] .Our preveious studies demonstrated,in some ex-tent,pressure could induce inducible nitric oxidesynthase(i NOS) m RNA expression,so to increase NOS synthesis and NO level[2 ] .In this experimentwe discussed the effects of NO on the proliferationand apopto…     

Effects of angiotensin II and losartan on the growth and proliferation of hepatic stellate cells.

OBJECTIVE: To investigate the effects of angiotensin II (AngII) and AT1a blocker losartan on growth and proliferation of rat hepatic stellate cells (HSCs). METHODS: Rat HSCs were isolated, cultured and identified, followed by incubation with AngII or losartan at different concentrations. The cell growth and proliferation were assessed via cell counting and MTT assay, and the effects of the agents on HSC DNA synthesis evaluated by way of (3)H-thymidine incorporation ((3)H-TDR). RESULTS: AngII (1 x 10(-9) to 1 x 10(-7) mol/L) stimulated HSC proliferation as demonstrated by cell counting, MTT assay and thymidine incorporation test (P < 0.05), but such effect was not observed at lower doses (<1 x 10(-9) mol/L). Losartan had significant inhibitory effect on HSC growth at the concentration of 1 x 10(-8) to 1 x 10(-6) mol/L (P < 0.05), but not at lower doses (<1 x 10(-8) mol/L). Co-stimulation of the cells with losartan and AngII did not result in a significant increase in cell number as compared with the control group (P > 0.05). CONCLUSION: Rapid proliferation of rat HSCs occurs in response to AngII treatment, but is inhibited after AT1a receptor is blocked with the antagonist losartan.     

钙通道、钙调蛋白拮抗剂对内皮素—1分泌的影响

OBJECTIVE: The study is to investigate the effects of calcium channel blockers and calmodulin inhibitors on the secretion of endothelin-1 (ET-1) in cultured endothelial cells from human umbilical veins. RESULTS: Results showed that calcium channel blockers verapamil (5.5 x 10(-6) mol/L, 5.5 x 10(-5) mol/L), diltiazen (2.4 x 10(-4) mol/L) and calmodulin inhibitors chlorpromazine (3.1 x 10(-5) mol/L, 3.1 x 10(-4) mol/L), berbamine (1.6 x 10(-5) mol/L, 1.6 x 10(-4) mol/L) significantly decreased medium ET-1 levels in cultured endothelial cells. CONCLUSION: It was also indicated that extracellular calcium influx and calmodulin activity were necessary to the secretion of ET-1. In addition, nitroglycerine (2.2 x 10(-3) mol/L) remarkably reduced medium ET-1 levels in cultured endothelial cells, which suggested that nitric oxide might inhibit the secretion of ET-1.     

羟基脲对脑膜瘤培养细胞的作用

目的:建立脑膜瘤短期原代培养的体外模型,研究羟基脲对脑膜瘤培养细胞的抑制作用及其可能机理.方法:进行脑膜瘤细胞原代培养,应用羟基脲作药敏试验,利用细胞计数、MTT法、流式细胞仪等检测结果.结果:显微镜下可见羟基脲明显影响脑膜瘤培养细胞的生长状态;5×10-3 mol/L组的细胞数减少84%,5×10-4 mol/L组减少46%,而5×10-5 mol/L组减少20%(P<0.01);5×10-3 mol/L组的细胞活力减少86%,5×10-4 mol/L组减少60%,而5×10-5 mol/L组减少28%(P<0.01).应用流式细胞仪检测细胞凋亡,5×10-3 mol/L组的细胞凋亡率增加了8.82倍,5×10-4 mol/L组增加了3.94倍,而5×10-5 mol/L组增加了0.73倍(P<0.01).结论:羟基脲能抑制脑膜瘤培养细胞的增生,且呈浓度依赖性;羟基脲抑制脑膜瘤培养细胞的增生可能与羟基脲诱导其凋亡有关.     

中华眼镜蛇膜毒素和碘-131协同免疫导向对体外鼻咽癌细胞的抑制作用

目的 为探索鼻咽癌新的特异性治疗方法,制备了中华眼镜蛇膜毒素(CT)和碘-131(131I)与抗鼻咽癌单克隆抗体BAC5的偶联物,观察其对体外鼻咽癌细胞CNE2的抑制作用.方法 采用氯胺T法将131I标记于BAC5,Iodogen法将125I标记于CT,用异型双功能交联剂SPDP偶联BAC5和125I-CT,并用噻唑蓝法观察抑瘤效应.结果 125I-CT-BAC5的IC<50>为9.17×10-8mol/L,131I-BAC5的IC50为5.83×108Bq/L,联合用药后抑制率明显提高.结论 125I-CT-BAC5和131I-BAC5对体外培养的CNE2细胞均有抑制作用,二者联合应用则抑制作用更为明显.     

Effects of Spinach Powder Fat—Solouble Extract on Proliferation of Human Gastric Adenocarcinoma Cells

Four kinds of assays were used to study the effect of a fat-soluble extract of spinach powder (SPFE) on the proliferation of human gastric adenocarcinoma cell line (SGC-7901) in vitro. These studies included: (i) cell growth assay, (ii) colony forming assay, (iii) MTT colorimetric assay, and (iv) 3H-TdR incorporation assay. The concentrations of SPFE expressed as the level of beta-carotene in the medium were 2 x 10(-8), 2 x 10(-7) and 2 x 10(-6) mol/L beta-carotene in assay (i)-(iii), but 4 x 10(-8), 4 x 10(-7) and 4 x 10(-6) mol/L beta-carotene in assay (iv) respectively. The results indicated that SPFE inhibited the proliferation and colony forming ability of SGC-7901 cells. And in MTT assay, SPFE inhibited the viability of SGC-7901 cells, but no inhibitory effect of SPFE was observed on the viability of lymphocytes in peripheral blood of healthy people. Finally, in the 3H-TdR incorporation test, both SPFE and beta-carotene showed significant inhibitory effects on DNA synthesis in SGC-7901 cells, but SPFE was more effective than beta-carotene.     

乳腺癌干细胞在无血清培养基K-SFM中的有效富集

摘要:CD24+/CD24-已被证实是乳腺癌干细胞的标记,该群细胞具有致瘤性、克隆形成及转移潜能。但在癌组织中或细胞系中含量极小,对其有效分离及纯化方法的缺乏已成为研究干细胞的主要障碍。本研究应用改良的无血清培养基K-SFM能在乳腺癌原代细胞及已建立的乳腺癌细胞系中体外有效富集CD24+/CD24-细胞群,对乳腺癌干细胞相关基因的检测显示Oct-4、ABCG2、Nanog和N-cadherin显著上调,而E-cadherin显著下调。 方法 1．乳腺癌细胞系培养 人乳腺癌细胞系MCF-7、SKBR-3在含20 ng/ml 表皮生长因子(EGF; R and D Systems, Minneapolis, MN), 5 μg/ml 胰岛素, 0.4% 牛血清白蛋白 (Sigma, St. Louis, MO) 的K-SFM无血清培养基中培养,对照组为含10%小牛血清RPMI 1640培养基培养。37˚C、5%二氧化碳浓度下,恒湿培养箱培养。 2．乳腺癌组织标本原代培养 乳腺癌标本在离体30分钟内获取,进行机械分离,部分需酶消化。用30μm 柱状微孔过滤,制成单细胞悬液,以1000个/ml分别于RPMI-1640全培养基和K-SFM无血清培养基中培养。培养方法同上。 3．流式细胞分析与分选 收集上述方法培养的细胞系以及原代培养细胞,通过流式检测乳腺癌干细胞分子标记CD44+/CD24-/low,确定培养方法对于富集干细胞的有效性。同时通过荧光分选 (FACS),富集CD44+/CD24-/low样细胞制成单细胞悬液。 4．定量RT-PCR分析 收集流式细胞仪分选的K-SFM无血清培养基中细胞及对照分化细胞,提取RNA,通过实时定量 RT-PCR检测干细胞相关基因Oct-4, ABCG2, Nanog 和N-cadherin的表达,以GAPDH作为内参。 结果 在MCF-7细胞系观察到微球体的形成,制成单细胞悬液,应用乳腺癌干细胞表面标记CD44+/CD24-/low标记,经流式细胞仪分选发现MCF-7中干细胞标记细胞占17.3%,较含血清培养基中干细胞比例（0.5%）增加了34.6倍;而 SKBR-3干细胞比例占17.4%,较对照组（0.9%）高28倍。且实时定量 RT-PCR检测显示该群细胞大量表达干细胞相关基因Oct-4, ABCG2, Nanog 和N-cadherin。在人乳腺癌组织作原代培养也得出相似结论。