骨髓间充质干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复皮肤缺损

目的：骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)具有多向分化潜能和持续增殖能力，显示出作为组织工程种子细胞新来源的诱人前景。探讨MSCs作为皮肤组织工程种子细胞修复皮肤缺损的可能性。方法：采用密度梯度离心结合贴壁法分离纯化新西兰兔MSCs，经体外扩增后接种于胶原凝胶构建组织工程活性皮肤替代物。12只兔随机分成3组：MSCs复合胶原组织工程活性皮肤替代物实验组、单纯胶原对照组和空白对照组。将各组相应材料分别移植于兔耳皮肤缺损处，比较观察创面修复效果。结果：MSCs复合胶原实验组、单纯胶原对照组和空白对照组创面愈合时间分别为(14．2&;#177;1．9)d，(16．3&;#177;2．7)d和(20．1&;#177;4．1)d，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。组织学观察显示，MSCs复合胶原实验组成纤维细胞、微血管、胶原纤维均较单纯胶原对照组和空白对照组明显增多。结论：MSCs复合胶原构建的组织工程活性皮肤替代物移植后可加速新生血管形成、促进创面修复。提示以MSCs作为种子细胞复合胶原构建的组织工程皮肤可用于皮肤缺损的修复治疗。     

转染血管紧张素Ⅰ骨髓间充质干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复烫伤后的创面

背景:组织工程皮肤作为可行的皮肤替代物,近年来已成为研究和开发的热点,为烧伤、皮肤溃疡等病变的创面治疗提供了新的解决途径.目的:观察转染血管紧张素Ⅰ基因的骨髓间充质干细胞复合胶原构建的组织工程皮肤对烫伤后创面的修复及促血管形成作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,丁2008-03/11在中山大学第一附属医院实验动物中心完成.材料:鼠龄4周的雄性SD大鼠45只,体质量120-150 g,用于制备烫伤模型;牛Ⅰ型胶原为美国Sigma公司产品.方法:脂质体介导质粒pEGFP-N1-hAng-Ⅰ转染大鼠骨髓间充质干细胞,转染后与牛Ⅰ型胶原复合,体外构建组织工程皮肤,修复大鼠烫伤模型创面.45只SD大鼠按随机抽签法分为3组:血管紧张素Ⅰ,胶原移植组、骨髓间充质下细胞,胶原移植组和空白对照组,每组15只.在烫伤创面分别植入复合骨髓间充质干细胞,转血管紧张素Ⅰ的组织工程皮肤、单纯骨髓间充质干细胞复合的组织工程皮肤.空白对照组不移植任何组织和细胞,其他处理与实验组相同.主要观察指标:分别在移植后3,7,14,28 d取材,以扫描电镜、组织学、免疫组织化学分析等方法检测构建的组织工程皮肤结构、创面修复及血管再生情况.结果:pEGFP-N1-hAng-Ⅰ在阳离子脂质体的作用下,成功地进入大鼠骨髓间充质干细胞,转录出相应mRNA.蛋白免疫印迹分析显示转染细胞有与目的基因相对分子质量相符的血管紧张素Ⅰ抗体结合蛋白印迹条带.实验所构建的组织工程皮肤结构完整,细胞状态良好.血管紧张素Ⅰ/胶原移植组、骨髓间充质干细胞/胶原移植组和空白对照组创面的愈合时间分别为(12.6±1.9),(15.4±2.3),(28.4±3.6)d,P<0.05.组织学检查见转染细胞组毛细血管生长及新形成活跃,移植后7,14,28d骨髓间充质干细胞,胶原移植组和血管紧张素Ⅰ/胶原移植组微血管密度分别为(22.8±1.4),(34.3±2.6),(57.4±6.1)条/mm2;(38.2±3.4),(53.2±5.8),(74.2±6.9)条/mm2,P<0.05.结论:血管紧张素Ⅰ转染细胞组较对照组血供加强,创面修复加速,与细胞因子局部定向释放,加强血管形成有关.     

骨髓间充质干细胞复合小肠黏膜下层构建组织工程皮肤修复糖尿病皮肤缺损

背景:小肠黏膜下层已经被证实可以引导许多组织的特异性再生.目的:将骨髓间充质干细胞复合猪小肠黏膜下层构建组织工程皮肤并移植修复兔糖尿病皮肤缺损,观察其对糖尿病皮肤缺损的愈合影响和疗效.方法:制作兔糖尿病皮肤缺损,将骨髓间充质干细胞与冻干、灭菌、水合后的猪小肠黏膜下层膜复合制作组织工程皮肤并覆盖修复兔糖尿病皮肤缺损,并与小肠黏膜下层支架组和空白对照组做对照.结果与结论:造模后1,2,4 周,组织工程皮肤组缺损皮肤修复面积百分比显著大于小肠黏膜下层支架及空白对照组(P <0.05).缺损皮肤修复组织观察组织工程皮肤组组织生长明显快于小肠黏膜下层组与空白对照组.3 组均未见明显皮肤附件结构.表明骨髓间充质干细胞复合猪小肠黏膜下层构建的组织工程皮肤修复兔糖尿病皮肤缺损好于单纯小肠黏膜下层膜,无明显瘢痕组织的生成,可作为支架材料用于皮肤缺损的修复.     

骨髓间充质干细胞复合小肠黏膜下层构建组织工程皮肤修复糖尿病皮肤缺损

背景：小肠黏膜下层已经被证实可以引导许多组织的特异性再生。目的：将骨髓间充质干细胞复合猪小肠黏膜下层构建组织工程皮肤并移植修复兔糖尿病皮肤缺损,观察其对糖尿病皮肤缺损的愈合影响和疗效。方法：制作兔糖尿病皮肤缺损,将骨髓间充质干细胞与冻干、灭菌、水合后的猪小肠黏膜下层膜复合制作组织工程皮肤并覆盖修复兔糖尿病皮肤缺损,并与小肠黏膜下层支架组和空白对照组做对照。结果与结论：造模后1,2,4周,组织工程皮肤组缺损皮肤修复面积百分比显著大于小肠黏膜下层支架及空白对照组（P〈0.05）。缺损皮肤修复组织观察组织工程皮肤组组织生长明显快于小肠黏膜下层组与空白对照组。3组均未见明显皮肤附件结构。表明骨髓间充质干细胞复合猪小肠黏膜下层构建的组织工程皮肤修复兔糖尿病皮肤缺损好于单纯小肠黏膜下层膜,无明显瘢痕组织的生成,可作为支架材料用于皮肤缺损的修复。     

复方壳多糖人工皮肤促进创面愈合的作用

目的:证明复方壳多糖人工皮肤在体促进创面愈合能力,为该人工皮肤应用于临床尤其是覆盖感染创面提供实验依据。方法:健康雄性大鼠24只,每只背部做全层皮肤缺损创面2个,每个创面涂1×105克隆形成单位(colonyformingunit,CFU)金黄色葡萄球菌,建立金黄色葡萄球菌污染创面大鼠模型,随机数字法分成实验组、对照组和空白对照组,每组16个创面,将复方壳多糖人工皮肤和复方胶原凝胶人工皮肤分别覆盖于实验组和对照组创面上,空白对照组无覆盖,通过细菌学、病理、免疫组化检查,了解两组之间的差别。结果:实验组和对照组的一般情况好,空白对照组差,实验组创面感染轻、创面收缩好,24h痂下细菌计量实验组为(8.09±2.51)×104CFU/g,明显少于对照组(5.91±2.51)×105CFU/g和空白对照组(5.55±2.18)×107CFU/g,差异有显著性意义;创周组织病理切片观察,实验组炎性细胞浸润少,愈合最快最好,对照组有炎性细胞浸润,空白对照组可见大量炎性细胞和渗出、出血、坏死;肌动蛋白免疫组化表明,实验组增生的纤维母细胞染色强阳性,对照组散在阳性,空白对照组染色阴性。结论:复方壳多糖人工皮肤有抗菌、抗感染和促进创面愈合作用,其作用优于复方胶原凝胶人工皮肤,是理想的创面覆盖物。     

组织工程皮肤移植过程中白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达

背景:白细胞介素10和肿瘤坏死因子α在异体异种皮肤移植局部免疫与排斥反应中发挥了重要作用.但在组织工程人工皮肤移植过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的表达情况目前尚不清楚.目的:采用表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤并移植修复兔全层皮肤缺损创面,观察创面修复效果和局部皮肤组织白介素10与肿瘤坏死因子α的表达变化.方法:将体外培养的人表皮干细胞或角质细胞接种到脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤;取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面随机分为4组,表皮干细胞组、角质细胞组用含表皮干细胞或角质细胞的组织工程皮肤移植于皮肤缺损创面;脱细胞真皮组移植单纯脱细胞真皮;对照组创面空置.观察刨面修复情况,局部炎症反应,创面愈合时间.各组分别于术后7d在部分创而取材观察组织形态和白细胞介素10与肿瘤坏死因子α表达.结果与结论:含表皮干细胞的人工皮肤移植后创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较角质细胞组明显缩短.白细胞介素10在各组均有表达,其中表皮干细胞组表达最强,角质细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组最弱.肿瘤坏死因子α在各组也均有表达,其中角质细胞组表达最强,表皮干细胞组次之,脱细胞真皮组和对照组较弱.说明以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用有效促进皮肤缺损创面的修复治疗,创面修复过程中局部皮肤组织内白细胞介素10和肿瘤坏死因子的表达变化可能是其取得较好效果的主要机制之一.     

表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验研究

目的探讨表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的可行性。方法（1）用胰蛋白酶和EDTA联合消化法分离表皮,用Ⅳ型胶原快速黏附法分离、纯化人表皮干细胞,以含表皮生长因子、角质细胞无血清培养液等组成人表皮干细胞培养基进行体外培养,测定克隆形成率。（2）将培养人表皮干细胞接种于制备的脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤,移植治疗兔全层皮肤缺损创面,观察创面修复效果。（3）取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面,随机分为4组：A、B、C组分别用含表皮干细胞的组织工程皮肤、含角质细胞的组织工程皮肤和单纯脱细胞真皮移植于皮肤缺损创面;D组用创面空置为对照。观察创面修复情况、局部炎症反应,并记录创面愈合时间。结果体外培养的人表皮干细胞增殖稳定,克隆形成率明显高于角质细胞对照组（P〈0．05）。移植后A组创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较B、C、D组明显缩短（P〈0．05或P〈0．01）。结论以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用于皮肤缺损创面的修复治疗。     

羊膜负载骨髓间充质干细胞对放创复合伤促愈的实验研究

目的将贵州小香猪骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)接种到人羊膜(humanamnioticmembrane,HAM)上,用于治疗放创复合伤全厚皮肤缺损。方法将HAM负载经核荧光标记物DAPI标记的MSCs,培养3～5d后,移植到小香猪全厚皮肤缺损创面作为实验治疗组,以单纯无细胞接种的HAM作对照治疗组。从宏观、光镜、电镜水平进行较系统的观察。结果与对照治疗组相比,HAM负载MSCs能较好地促进放创复合伤皮肤缺损的愈合。荧光标记显示,MSCs参与了局部组织的修复。结论HAM负载MSCs能较好地促进放创复合伤全厚皮肤缺损创面的组织修复。     

复方壳多糖人工皮肤促进刨面愈合的作用

目的证明复方壳多糖人工皮肤在体促进创面愈合能力,为该人工皮肤应用于临床尤其是覆盖感染创面提供实验依据.方法健康雄性大鼠24只,每只背部做全层皮肤缺损创面2个,每个创面涂1×105克隆形成单位(colonyforming unit,CFU)金黄色葡萄球菌,建立金黄色葡萄球菌污染创面大鼠模型,随机数字法分成实验组、对照组和空白对照组,每组16个创面,将复方壳多糖人工皮肤和复方胶原凝胶人工皮肤分别覆盖于实验组和对照组创面上,空白对照组无覆盖,通过细菌学、病理、免疫组化检查,了解两组之间的差别.结果实验组和对照组的一般情况好,空白对照组差,实验组创面感染轻、创面收缩好,24 h痂下细菌计量实验组为(8.09±2.51)×104CFU/g,明显少于对照组(5.91±2.51)×105 CFU/g和空白对照组(5.55±2.18)×107 CFU/g,差异有显著性意义;创周组织病理切片观察,实验组炎性细胞浸润少,愈合最快最好,对照组有炎性细胞浸润,空白对照组可见大量炎性细胞和渗出、出血、坏死;肌动蛋白免疫组化表明,实验组增生的纤维母细胞染色强阳性,对照组散在阳性,空白对照组染色阴性.结论复方壳多糖人工皮肤有抗菌、抗感染和促进创面愈合作用,其作用优于复方胶原凝胶人工皮肤,是理想的创面覆盖物.     

含有生肌液的组织工程皮肤修复免皮肤缺损

背景:在皮肤开放创面上进行缺损修复与重建是组织修复领域的研究焦点.构建含有中药的组织工程皮肤修复刨面缺损的研究并不多见.目的:将含有生肌液的皮肤支架与自体皮肤细胞复合,构建含药组织工程皮肤,修复兔皮肤缺损.设计:自体对照动物实验.单位:实验于2005-02/08在天津市天律医院骨科研究所细胞工程室完成.材料:同窝大耳白兔8只,体质量1.6-1.8kg.自行提取生肌液(1 500g/L),成分为当归、生地、龟板、象皮、血余、生石膏、炉甘石;明胶-壳聚糖支架材为料天津大学提供,分别修剪成1.3cm直径的圆片,60Co照射火菌;DR无细胞真皮基质由江苏省启动市医疗用品研究所提供.方法:分离培养兔皮肤细胞,获取第3代角质形成细胞与成纤维细胞.延兔脊柱两侧制作直径1.5 cm的圆形伞层皮肤缺损创面4个.分为4组,阴性对照组(明胶-壳聚糖支架贴附于创面后滴加生理盐水),人工真皮组(DR无细胞真皮基质贴附于创面后接种细胞悬液),非含药组织工程皮肤组(明胶-壳聚糖支架贴附于创面后接种细胞悬液),含药组织工程皮肤组(生肌液-明胶-壳聚糖支架贴附于创面后接种细胞悬液).主要观察指标:①术后13 d测量剩余创面面积.②术后7 d、10d取材行组织学与免疫组织化学染色检测.结果:①术后13 d各组创面面积均有不同程度的缩小,剩余面积阴性对照组＞人工真皮组＞非含药组织工程皮肤组＞含药组织工程皮肤组,非含药组织工程皮肤组、含药组织工程皮肤组与阴性对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05).②术后10 d,阴性对照组、人工真皮组、非含药组织工程皮肤组均有炎性肉芽组织增生,无表皮组织形成;含药组织工程皮肤组形成接近正常的上皮组织及幼稚的真皮组织.非含药组织工程皮肤组与人工真皮组BrdU标记弱阳性,含药组织工程皮肤组BrdU标记强阳性.结论:实验采用的方法使种子细胞在含有生肌液的明胶-壳聚糖支架上增殖,在体修复皮肤损伤,能够有效扩展皮肤缺损处的覆盖面积,缩短皮肤缺损的愈合时间.     

Celebrating a fortnight of skin to skin holding

The fortnight of skin-to-skin holding was a great event held together with the formal launch of the Integrated Family Delivered Care (IFDC) project; emphasising the importance of staff supporting parents to be part of their babies’ care and the vital benefits that closeness of skin-to-skin care brings to their baby. Our aim was to showcase this event in order to reinforce skin-to-skin practice within our neonatal service with customised supporting material designed for this purpose. Supporting skin-to-skin holding is often the first step on the road to family integrated care.     

Effects of local forearm skin heating on skin properties

This study investigated impacts of local skin heating on skin properties and tested whether skin changes depended on heat‐induced hyperaemia. It was reasoned that heat‐induced vasodilation impacts accompanying interstitial fluid changes. Forearm skin was locally heated from a baseline of 35°C to 40–42°C in 30 young adults (15 females, 15 males, 24.9 ± 2.1 years) and non‐heated in 10 others (5 females, 5 males, 25.2 ± 1.3 years. Skin blood flow (SBF) was continuously measured using a laser Doppler method and skin tissue dielectric constant (TDC), stratum corneum capacitance (SCC) and transepidermal water loss (TEWL) were measured before and after maintained heat for 12 min. TDC values were determined to effective measurement depths of 1.5 mm (TDC15) and 2.5 mm (TDC25). Results showed a large heat‐induced hyperaemia, with SBF increasing on average 8.8‐fold from its baseline of 35°C. Heating also caused significant increases in TDC, SCC and TEWL that, compared to preheating, increased approximately 1.1‐fold, 3.1‐fold and 4.5‐fold. None of these skin changes correlated with the magnitude of the SBF hyperaemic response. Absence of this correlation may indicate that in young healthy adults, increased capillary filtration due to heat‐induced arteriolar vasodilation is rapidly accommodated by postcapillary reabsorption, enhanced lymphatic activity and TEWL processes. An alternate explanation is that heating caused increased red cell oscillations that were detected as part of the laser Doppler increase without representing increased capillary flux. The major determinant of the Increases in TDC, SCC and TEWL is likely a consequence of heat‐induced eccrine gland activation. Studies of older persons or those with depressed function are warranted.     

Complicated infections of skin and skin structures: when the infection is more than skin deep

Skin and skin-structure infections are common, and range from minor pyodermas to severe necrotizing infections. Complicated infections are defined as involving abnormal skin or wounds, occurring in compromised hosts, or requiring surgical intervention. Classification schemes for these infections are varied and confusing. Distinguishing characteristics include the aetiological agent(s), clinical context and findings, depth of tissue involvement and rate of progression. The most common pathogens are aerobic Gram-positive cocci, but complicated infections frequently involve Gram-negative bacilli and anaerobic bacteria. Initial antibiotic therapy is usually empirical, and later modified by the results of stains and cultures of wound specimens. Broad-spectrum coverage is frequently needed for complicated infections. Ertapenem is a once-a-day parenteral Group 1 carbapenem antibiotic, recently licensed in the USA and Europe, which may assume an important role in treating some complicated skin and skin-structure infections. Surgical debridement is important for many complicated infections, and is the critical element in managing necrotizing fasciitis and myonecrosis.     

皮肤钉合器在自体取皮植皮术中的应用

[目的]探讨皮肤钉合器在自体取皮植皮术中的应用.[方法]将52例需行自体取皮植皮术的病人随机分为皮肤钉合器组(植皮时边缘使用皮肤钉合器,将丝线缠绕钉打结,留长度15 cm用于打包)27例和常规丝线组(植皮时边缘缝合使用常规丝线,留长度15 cm用于打包)25例.对比两组病人植皮打包时间、植皮边缘伤口分泌物情况、皮片成活情况.[结果] 植皮打包时间皮肤钉合器组明显短于常规丝线组,植皮边缘清洁度皮肤钉合器组明显好于常规丝线组,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]皮肤钉合器用于植皮术打包能达到省时、减少植皮边缘伤口分泌物、避免针刺伤的效果.     

手术患者皮肤交接单的优化设计在手术全期患者皮肤管理中的应用

目的：应用优化后的手术患者皮肤交接单,对手术全期患者进行连续、动态、全面的评估,以降低患者皮肤损伤的发生率。方法：对原有手术护理记录单进行优化设计,采用表格、人体四面图示、文字书写相结合的方式,进行分层培训,规范手术患者皮肤交接单的临床应用,对比两组手术患者皮肤情况。结果：使用优化设计后的手术患者皮肤交接单的患者,皮肤异常情况的发生率降低。结论：手术患者皮肤交接单的使用利于手术全期患者皮肤的质量控制检查,有效减少了因问题皮肤的交接遗漏而致的患者皮肤损伤。     

OCT of healthy skin,actinic skin and NMSC lesions

ObjectiveOptical coherence tomography (OCT) is able to produce two-dimensional images of living skin in situ. We evaluated a frequency-domain OCT system (SR-OCT Imaging System, Thorlabs) with regard to its clinical impact.Material and methodsSeven healthy volunteers and 10 patients were recruited who had been referred for local photodynamic therapy (PDT) of suspicious dermal lesions (actinic lesions with different degrees of dysplasia (AK), Bowen's disease (BD) and basal cell carcinoma (BCC)). In a first step, OCT images were obtained from the healthy skin of the forearms and foreheads of all 17 subjects to compare interindividual differences. OCT images from the suspicious skin lesions (AK, BD, and BCC) were then taken for the 10 patients and compared with OCT images of corresponding healthy skin. Additionally, the OCT images of pathological sites were compared to histopathological preparations.ResultsIn healthy skin a good correlation was found between the images of standard histological samples and the two-dimensional OCT images with regard to the discrimination of epithelial layer with its different zones and borders and adjacent dermal structures. The thickness of skin layers in the forehead and the forearm varied between the subjects (of different ages), but showed similar patterns of ‘lucidity’ in the OCT images. In diseased skin, the typical histological features of epithelial dysplasia and changes in dermal layers could be recognized in the equivalent OCT images.ConclusionOCT may be used as investigative tool in the clinical evaluation of actinic keratosis and NMSC lesions. The comparison of images revealed a strong correlation with histological cross-section images for the dermis.     

Drug reaction, skin care, skin loss

Stevens-Johnson syndrome is a rare, potentially fatal drug reaction that causes necrosis of epidermal cells. Early recognition of the syndrome is essential to prevent complications. This article discusses identification, complications, and treatment of Stevens-Johnson syndrome.