杂色曲霉素致人胚肺细胞p53及Ki-ras基因突变研究

为探讨中国恶性肿瘤高发区粮食中优势污染霉菌毒素－杂色曲霉素（Ｓｔｅｒｉｇｍａｔｏｃｙｓｉｎ,ＳＴ）的致癌作用,运用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析了不同浓度的ＳＴ（１μｇ／ｍｌ和３μｇ／ｍｌ）对体外培养的人胚肺细胞恶性转化过程中抑癌基因ｐ５３第５、６、７、８显外子及癌基因Ｋｉ－ｒａｓ的突变情况。结果显示ＳＴ处理后第２２周,人胚肺成纤维细胞ｐ５３基因的第８外显子和Ｋｉ－ｒａｓ癌匀出现异常泳动带型,表明Ｓ     

温石棉改性前后对人胚肺细胞癌基因改变的比较

目的寻求一种适宜的石棉表面改性剂。方法利用斑点杂交和流式细胞技术观察柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠等３种化合物对温石棉致人胚肺（ＨＥＬ）细胞转化过程中ｃＨａｒａｓ癌基因和Ｐａｎｒａｓ小鼠抗体（Ｐ２１ｒａｓ）蛋白的影响。结果在温石棉染毒组，ｃＨａｒａｓ癌基因的转录水平及Ｐ２１ｒａｓ蛋白含量明显高于对照组。在上述３种化合物预处理的温石棉组，ＨＥＬ细胞ｃＨａｒａｓ癌基因的转录水平及Ｐ２１ｒａｓ蛋白含量均明显低于未处理温石棉组。结论用上述３种化合物预处理温石棉，有可能减轻温石棉对人类的致癌危害性。     

室内煤烟污染相关肺癌患者血清中rasp21和p53蛋白的Western免疫印迹…

用Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹技术检测了接触室内煤烟的肺癌患者１９例和未患肺癌者２２例以及不接触煤烟的未患肺患者１９例血清中的ｒａｓｐ２１癌基因蛋白和ｐ５３抑癌基因蛋白。结果显示；肺癌组血清中Ｐ２１和Ｐ５３蛋白含量明显高于明显高于其他两组人群；肺癌组Ｐ２１和Ｐ５３蛋白阳性样品数各为６例，非肺癌组Ｐ２１蛋白阳性样品数为２例。     

杂色曲霉素对人胚胃粘膜细胞p53基因致突变研究

为探讨杂色曲霉素（ＳＴ）的致癌作用，运用细胞培养、流式细胞术（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）和银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ等方法研究了不同浓度的ＳＴ（１ｍｇ／Ｌ和３ｍｇ／Ｌ）诱发体外培养的人胚胃粘膜细胞恶性转化情况以及此过程中抑癌基因ｐ５３在蛋白及基因水平上的变化。结果表明，ＳＴ处理４周后处理细胞增殖旺盛，并出现恶性转化灶；ＳＴ处理２４周后处理细胞可在软琼脂上形成细胞集落（ＳＴ１ｍｇ／Ｌ和３ｍｇ／Ｌ组每皿细胞集落数平均分别为１５和１７个）；ＦＣＭ检测结果表明，ＳＴ处理的细胞细胞增殖指数增高，ＤＮＡ含量增高，出现ＤＮＡ异倍体，突变型抑癌基因ｐ５３蛋白表达明显增强。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结果显示，ＳＴ处理２２周后，处理细胞ｐ５３第８外显子出现异常泳动带型。本研究进一步证实了ＳＴ对体外培养的人胚胃粘膜细胞的致癌作用     

室内煤烟污染相关肺癌患者血清中rasp21和p53蛋白的Western免疫印迹检测

用Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹技术检测了接触室内煤烟的肺癌患者１９例（肺癌组）和未患肺癌者２２例（非肺癌组）以及不接触煤烟的未患肺癌者１９例（对照组）血清中的ｒａｓｐ２１癌基因蛋白和ｐ５３抑癌基因蛋白。结果显示：肺癌组血清中ｐ２１和ｐ５３蛋白含量明显高于其他两组人群（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；肺癌组ｐ２１和ｐ５３蛋白阳性样品数各为６例，非肺癌组ｐ２１蛋白阳性样品数为２例。验证了本室以前采用酶联免疫斑点法进行初步筛检的结果，表明血清中癌基因蛋白和抑癌基因蛋白可作为环境相关肺癌的生物标志。本文还讨论了上述两种免疫学检测方法的适用条件和优缺点     

柴油机排放颗粒物有机组份诱发细胞中p53及p21蛋白的表达

采用中国仓鼠肺成纤维细胞（Ｖ７９），对国产跃进中型柴油机排放颗粒提取物不同有机组份诱导体外培养的Ｖ７９恶性转化细胞进行ｐ５３及ｐ２１蛋白表达水平的免疫组织化学－ＡＢＣ法检测。结果表明：各组份均能引起体外培养转化的Ｖ７９细胞中ｐ５３蛋白水平的异常表达。但ｐ２１蛋白表达水平未发现有显著改变     

微囊藻毒素和水体有机污染物联合诱导SHE细胞转化及相关癌基因的变化

应用ＳＨＥ细胞体外二阶段转化实验和免疫组化方法，分析了上海淀山湖水体有机污染物和微囊藻毒素（ＭＣＹＳＴ）联合诱导ＳＨＥ细胞恶性转化的作用，发现微囊藻毒素单独作用不能诱发ＳＨＥ细胞转化，但可明显促进低剂量水体有机污染物启动的细胞恶性转化。在典型的Ⅲ型转化灶细胞中ｒａｓＰ２１蛋白表达明显增强。提示：微囊藻毒素具有促癌作用，二阶段诱导的转化细胞中ｒａｓ癌基因被激活。     

沥青工和焦炉工血清中ras癌基因P21蛋白的检测

本研究应用ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术，对１１名焦炉工和１１名沥青工血清中ｒａｓ癌基因产物Ｐ２１蛋白进行检测，有２Ｐ２１阳性，接触组Ｐ２１蛋白水平显著高于对照组，沥青工高于焦炉工，结果表明，沥青烟气对Ｐ２１蛋白表达水平的升高有较强的作用。     

ras、c-erbB-2蛋白在砷致皮肤癌中的表达及机理探讨

为研究ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因在砷致皮肤癌中的表达状况及其意义。利用免疫组织化学技术,检测ｒａｓ和ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白在砷致皮肤癌中的表达。结果表明,砷致皮肤癌中ｃ－ｅｒｂＢ－２及ｒａｓ呈高表达,Ｐ２１及Ｐ１８５阳性均为９例,占９０％;并且两者均高于文献报道的Ｐ２１和Ｐ１８５在一般皮肤癌中的阳性表达结果,提示砷致皮肤癌与癌基因突变密切相关。     

松弛素在大鼠矽肺形成过程中肺组织的表达及作用

[目的]探讨松弛素（relaxin）在石英尘诱导矽肺形成中的潜在作用。[方法]建立矽肺体内动物模型和体外细胞模型,在动物模型中应用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR分析肺组织松弛素蛋白及基因表达,在细胞模型中通过酶联免疫法测人胚肺成纤维细胞（HFL-Ⅰ）Ⅰ型胶原分泌量。[结果]松弛素蛋白在大鼠正常肺组织中弱表达,主要定位于Ⅰ型肺泡细胞。大鼠染石英尘（DQ12）后肺组织松弛素蛋白和mRNA表达呈现先上升后下降的趋势,主要定位于Ⅰ型肺泡细胞和巨噬细胞;与对照组相比,染石英尘后第7天松弛素蛋白水平达到最高（P〈0.05）,第14天时无明显差异（P〉0.05）,第28天时明显减少（P〈0.05）。与DQ12组相比,松弛素处理组中HFL-Ⅰ细胞Ⅰ型胶原的生成明显减少（P〈0.05）。[结论]松弛素可以抑制石英尘诱导的肺成纤维细胞胶原合成,可能对石英尘诱导矽肺发生有影响。     

二十碳五烯酸联合视黄酸对HL-60细胞株N-ras基因表达的影响

目的 :　研究二十碳五烯酸 (Eicosapentaenoicacid,EPA )是否协同视黄酸 (retinoicacid,RA)影响 HL-60细胞的增殖与分化功能及相应分子机制。方法 :　流式细胞仪 (FCM)测定细胞增殖功能 ;NBT还原实验鉴定 HL-60细胞分化 ;Western blot法分析 p2 1 N- ras表达。结果 :　EPA和 RA联合应用能增强 HL-60细胞的增殖抑制和分化效应 ,同时细胞内 p2 1 N- ras表达降低。结论 :　 EPA和 RA可能通过下调节 N-ras基因的蛋白质表达 ,发挥它们对 HL-60细胞增殖与分化功能的联合效应     

Expression of ras (p21) protein in plasma from exposed workers and from patients with lung disease.

Oncogenes are involved with the regulation of cellular proliferation and thus could be important in the development of many cancers. Cells transformed in culture by ras genes can be activated either by the introduction of specific point mutations or by overexpression of the normal proto-oncogene. The ras genes encode a protein of 189 amino acids (molecular mass 21 kDa) designated as p21. ras p21 proteins are contained in all eukaryotic cells on the inner surface of the plasma membrane. We measured ras p21 proteins in lung cancer patients, patients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD) and workers exposed to emissions from petrochemical plants and 1,3-butadiene and 1,3-butadiene/styrene. Proteins were separated by gel electrophoresis, transferred to a nitrocellulose membrane by Western blotting and detected by chemiluminescence. A monoclonal pan-ras antibody was used as the primary antibody. Optical densities of the peak area of the protein bands were calculated and values which were two standard deviations above negative control means were considered positive. Many of the cancer patients and some of the COPD patients gave positive responses, whilst exposed worker groups did not show statistically significant increases by comparison with the controls. Thus, an increase in ras oncoproteins could be a biomarker for cancer or the disease state in general, but it cannot be ruled out that it is a biomarker for exposure since many of the individuals examined were smokers exposed to cigarette smoke.     

生物学标志物在大肠癌化学预防中的应用研究

建立大鼠大肠癌动物模型,选用一系列生物学标志物,观察茶对大肠癌的化学预防效果。结果 表明,与阳性对照组相比,在１６和３２周,绿茶组和茶色素组动物大肠细胞增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）标记指数和核仁组成区嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲｓ）颗粒数目显著减少,ｒａｓ－ｐ２１蛋白表达也降低;而且,绿茶和茶色素还抑制了Ｂｃｌ－２蛋白的表达,诱导了Ｂａｘ蛋白的表达。     

细胞凋亡及相关基因联合检测对胃黏膜癌前病变的诊断及癌变预测的意义

目的探讨细胞凋亡及相关基因的表达在胃黏膜癌变中的作用及对胃癌的预测和早期诊断的意义。方法对胃镜活检确诊为胃癌（胃癌组）及不典型增生（分为轻、中、重度不典型增生组）的标本应用TUNEL法检测细胞凋亡，应用免疫组化法检测p16、bcl-2、raa、c—myc、p53基因的表达。结果p16、bcl-2、ras、c-myc和p53基因表达率在轻、中、重度不典型增生组和胃癌组分别为69．23％，30．77％，38．46％，23．08％，7．69％；50．00％，37．50％，81．25％，43．75％，18．75％：36．36％．63．64％．81．82％．72．73％，45．45％：27．50％，67．50％，95．00％。90．00％，60．00％。轻度不典型增生组与胃癌组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；ras、c—myc和p53基因表达率轻度不典型增生组与重度不典型增生组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；p53与c—myc基因表达率中度不典型增生组与胃癌组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。p16、bcl-2、ras、c—myc和p53基因表达存在相关性。细胞凋亡指数胃癌组最低，轻、中度不典型增生组与胃癌组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。轻度不典型增生组与重度不典型增生组比较，差异也有统计学意义（P〈0．01）。结论细胞凋亡指数减少及ras、bcl-2、c—myc、p16、p53基因的异常表达在胃黏膜癌变过程中发挥重要作用。中、重度不典型增生为重要的癌前病变。     

OK-432联合IL-2对C_(57)BL/6小鼠Lew is肺癌的抑制作用及p21的表达

目的　研究 OK- 432与 IL - 2抑制近交系小鼠 C5 7BL / 6 L ewis肺癌 (L L C)的生长及 p2 1的表达。　方法　以 C5 7BL / 6荷瘤 L L C小鼠为模型 ,观察 OK- 432联合 IL - 2对肿瘤发生、生长、转移的影响 ,体内对肿瘤细胞的作用及用抗鼠 p2 1单克隆抗体进行 SABC免疫组化技术半定量测定 p2 1在 L ewis肺癌原发灶中的表达。　结果　二者联用对肿瘤体积和重量的抑制作用明显增强 (P<0 .0 1) ,增强抑瘤率 (P<0 .0 5 ) ,肺转移灶数目明显减少。电镜下显示肿瘤灶中出现许多凋亡细胞 ,瘤细胞核染色质浓集成块 ,在核膜内呈新月形或环形排列 ,核膜清楚 ,瘤细胞内质网扩张 ,线粒体肿胀。 p2 1在联合用药组表达明显减少。　结论　 OK- 432与 IL - 2有明显的协同抗肿瘤活性 ,其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接或间接攻击 ,部位原因可能阻抑 ras癌基因的激活 ,诱导瘤细胞凋亡 ;提示 OK- 432联合 IL - 2可为临床治疗癌症患者一种有效的生物治疗方法     

太原市某焦炉厂焦炉作业工人血清rasP21蛋白表达的5年随访研究

[目的]探讨rasP21蛋白在焦炉工血清中随接触时间的表达变化,以期用于焦炉工肺癌的早期筛选。[方法]2004~2008年对某煤气化公司焦化厂25名焦炉工连续进行血清rasP21蛋白检测,并与16名同集团公司的不接触职业性致癌物的库房管理人进行比较。[结果]2004~2008年血清P21水平,16名对照者有逐年增高的趋势(P<0.05),25名焦炉工均保持在较高水平(P>0.05);各年接触组均高于对照组(P<0.01或<0.05)。广义估计方程分析结果,分组、观察时间、起始年龄、饮茶(保护因素)与血清P21蛋白水平有统计学意义(P<0.01)。[结论]焦炉工血清P21高于对照组,随着时间的延长2组P21水平均越高,喝茶者血清P21水平较低。