玻璃化冷冻技术在人类辅助生殖中的应用

玻璃化冷冻技术是一种快速冷冻细胞或组织的方法,可避免冻融过程中细胞内冰晶的形成,最大限度的降低细胞损伤,在人类配子、胚胎的冷冻保存中取得了不少进展。近十几年来,玻璃化冷冻技术已成功应用于成熟卵母细胞、未成熟卵母细胞、精子及胚胎的各个发育时期的冷冻保存并陆续有健康婴儿出生的报道。该技术操作简单、迅速快捷,正逐渐成为人类辅助生殖技术中重要的应用技术之一。本文综述了玻璃化冷冻技术在人类辅助生殖中应用于配子、胚胎冻存的研究进展。     

冷冻平衡液及保护剂的不同组合对小鼠未成熟卵母细胞OPS法冷冻效果的影响

超低温冷冻保存小鼠卵母细胞的研究开始于20世纪50年代，此后研究者对各种动物的卵母细胞冷冻保存进行了探索，但其效果远不及胚胎冷冻水平。自从1998年Vajta等发明了OPS法（open pulled straw，0PS）成功地冷冻保存了牛卵母细胞和囊胚以来，OPS法已成功地应用于小鼠成熟卵母细胞、原核胚、2-cell胚等的冷冻保存，认为该冷冻方法是一种比较理想的玻璃化冷冻法。     

玻璃化冷冻对卵母细胞、胚胎和子代的影响及其相关表观遗传学的研究进展

玻璃化冷冻技术目前已逐步取代程序化冷冻技术并广泛运用于体外受精-胚胎移植助孕过程。虽然卵母细胞及胚胎经玻璃化冷冻后有较好的临床结局,但玻璃化冷冻过程中使用的高浓度冷冻保护剂、体外冷冻复苏等操作是否对卵母细胞、胚胎以及其子代的安全性造成不良影响仍然备受关注。分子层面研究结果表明,虽然玻璃化冷冻不改变哺乳动物DNA序列,但可导致基因表观遗传修饰水平的变化进而影响其靶基因表达水平。本文从哺乳动物卵母细胞和胚胎经玻璃化冷冻后对胚胎、妊娠结局和子代的影响以及对相关表观遗传修饰水平的改变进行综述,探索玻璃化冷冻对卵母细胞和胚胎影响的分子机制,为进一步提高卵母细胞和胚胎的冷冻保存技术提供理论依据。     

人未成熟卵母细胞冷冻技术进展

人成熟卵母细胞的纺锤体对低温敏感,在冷冻保存中极易受到伤害,加上成熟卵母细胞来源有限,人们开始研究人未成熟卵母细胞的冷冻保存。本文综述了人未成熟卵母细胞冷冻技术的意义、优势、影响因素以及目前存在的关键问题,期望能拓展配子冷冻领域。     

比较四种冷冻载体在水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中的效果

目的探讨不同冷冻载体对水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存效果的影响。方法以体外成熟培养18 h的水牛卵母细胞为实验材料,分别以0.25 ml冻精塑料细管(A)、自制拣卵针尖端部分制成的极细玻璃微管(D)和两种制作核移植工具针的玻璃细管(B、C)为冷冻载体卵母细胞,解冻后统计成熟率及早期胚胎发育率等冷冻保存效果指标。结果A组卵母细胞冷冻保存效果最差(成熟率:A vs B、C、D为43.9%vs 51.7%、51.9%、55.9%,2~4细胞率:A vs B、C、D为34.1%vs 40.0%、40.7%、41.2%),D组卵母细胞冷冻效果最好,但解冻时卵母细胞的回收率显著低于其他组(D vs A、B、C为69.2%vs 87.0%、94.1%、91.9%)。B、C两组在解冻后的成熟率及早期发育率上显著高于A组,低于D组,但差异不明显,且其解冻后卵母细胞回收率显著高于D组(P<0.05)。结论综合回收率和解冻后早期胚胎发育率,B、C两种玻璃细管是一种水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体。     

玻璃化冷冻人卵母细胞的临床应用：附一例成功分娩

人卵母细胞冷冻保存是女性生育力直接保存的一种方法。但由于卵母细胞自身生物学特性的影响,卵母细胞冷冻的妊娠率始终不高。本院采用玻璃化技术冷冻人卵母细胞2例,1例获得临床妊娠,目前已分娩。     

卵母细胞冷冻及相关伦理思考

卵母细胞冷冻指经过促排卵后，将所获卵母细胞进行冷冻，待准备生育时再复苏并通过辅助生殖技术帮助母体受孕的新兴技术，其可分为医疗性卵母细胞冷冻和社会性卵母细胞冷冻。卵母细胞冷冻技术的快速发展也带来了相应的伦理困惑。本文从卵母细胞冷冻保存的现状及其相关伦理两个方面进行综述，以期促进理性正视卵母细胞冷冻问题。     

体内、外成熟卵母细胞的胚胎冷冻-复苏后发育能力的比较

目的比较体外与体内成熟卵母细胞受精后第3天胚胎冷冻-解冻后的发育能力。方法体外成熟组的胚胎来源于在本生殖中心行未成熟卵体外成熟(IVM)治疗的患者(6例)。体内成熟组为同期行常规卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的患者(22例)。两组患者胚胎移植后多余的胚胎按慢冻法进行冷冻保存。冻胚移植周期时冷冻胚胎按快融法解冻,体外培养约24 h后行胚胎移植。结果体外与体内成熟卵母细胞的胚胎冷冻-解冻后的复苏率、解冻培养后的可移植胚胎率以及临床妊娠率均无显著差异。结论人未成熟卵母细胞在体外培养系统中完成细胞核和细胞质成熟的同时,细胞膜的成熟可能也较充分,受精后的胚胎能够一定程度地耐受冷冻-解冻过程中面临的各种损伤,复苏后,仍能继续发育和着床并获得妊娠。     

冷冻胚胎保存时限的中国专家共识

胚胎冷冻保存技术是辅助生殖技术的重要衍生技术,它有助于提高单个取卵周期的胚胎利用率和累积妊娠率,降低患者的治疗费用及卵巢过度刺激综合征的发生率,并在生育力保存中发挥重要作用。然而,随着体外受精-胚胎移植周期数的不断增长,冷冻保存胚胎的数量也随之显著增加,其中不少冷冻胚胎长期保存不用(如无主胚胎、欠费胚胎),给各生殖医学中心造成了负担并占用大量社会医疗资源,同时也带来了一系列伦理问题。中华医学会生殖医学分会伦理学组针对胚胎的属性、胚胎冷冻保存安全性和冷冻保存相关处置等问题反复讨论,修订并形成了有关冷冻胚胎保存时限的十条共识,以利于规范我国胚胎冷冻技术的应用及管理。     

自体卵巢组织冷冻在女性肿瘤患者生育力保存中的应用

目的探讨适合育龄期女性肿瘤患者的生育力保存方案。方法回顾性分析2017年12月至2019年9月在安徽医科大学第一附属医院生殖中心生育力保存库进行生育力保存的14例肿瘤患者的临床治疗资料,并结合相关文献,探讨合适的生育力保存方案。结果 14例女性肿瘤患者中,已婚和未婚女性各7例,平均年龄(27.35±1.52)岁,包括8例乳腺癌患者、4例卵巢交界性肿瘤患者,以及结肠癌、子宫内膜癌患者各1例。14例患者均未进行促排卵治疗,仅经腹腔镜手术取部分卵巢皮质组织进行冷冻保存。7例患者体外获取的未成熟卵母细胞经体外成熟(IVM)技术于体外培养得到成熟卵母细胞,平均成熟率为54.05%(40/74);其中2例患者(未婚)进行了卵母细胞冻存,5例患者(已婚)进行了胚胎冻存,平均冻胚(3.2±1.92)枚。结论卵巢组织、卵母细胞及胚胎冷冻技术均可用于育龄期女性肿瘤患者的生育力保存。     

人卵母细胞胞浆中央颗粒化对胚胎发育潜能的影响及其分级和成因探讨

目的探讨人类辅助生殖技术中卵母细胞胞浆中央颗粒化(CLGC)对胚胎发育潜能的影响及其分级评估、形成的可能原因。方法回顾性分析荆州市中心医院生殖中心2012年6月至2014年3月卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗的患者,选取全部卵母细胞CLGC的30例患者作为研究组,随机选择同期卵母细胞胞浆形态无异常的200例患者作为胞浆形态正常组,比较二组间年龄、基础FSH、平均促性腺激素(Gn)使用天数、平均Gn总量,以及受精率、卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率及妊娠结局的差异。并对卵母细胞CLGC的程度进行分级评估,比较轻、重度CLGC患者受精率、优质胚胎率、可利用胚胎率的差异。结果研究组与对照组之间的年龄、基础FSH无统计学差异(P0.05),而平均Gn使用天数、平均Gn总量、受精率、卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率及临床妊娠率、流产率差异均有统计学意义(P0.05);轻度CLGC组受精率、卵裂率、优质胚胎率、可利用胚胎率均显著高于重度CLGC组(P0.05)。结论人卵母细胞随CLGC的程度加重其胚胎的发育潜能逐渐降低。CLGC作为一种常见的卵母细胞胞浆形态异常对胚胎发育潜能的评估有重要的参考意义。合理的临床降调节方案、合适剂量的Gn使用可能是减少所获卵母细胞CLGC的途径之一。     

Application of ICSI for cryptorchid therapy

Recent advances are provided in assisted reproductive technology and application of ICSI as treatment for infertile patients with previous cryptorchidism. Fertility rates were 25-81% and 8-48% in patients with unilateral and bilateral cryptorchidism, respectively. With the advent of assisted reproductive technology, pregnancy was not possible without sperm. Research in humans has resulted in pregnancy and live births after the injection of haploid germ cells (round spermatids) into the oocytes. In the mouse tetraploid germ cells (primary spermatocytes), nuclei have been injected into oocytes, which undergo meiosis, forming an embryo and live young. In animal models, round spermatids from both cryptorchid and previously cryptorchid testes can initiate normal embryo development when injected into mature oocytes. These cells may be used as substitutes for mature sperm. However, cryptorchidism in humans is often associated with inherent defects of spermatogenesis. With successive breakthroughs in treatment of impaired fertility associated with cryptorchidism, there is an increased risk of genetic abnormalities in the progeny. It is incumbent on clinicians who are involved in reproductive medicine to proceed cautiously with the development and application of assisted reproductive techniques to avoid creating future generations of genetically abnormal individuals.     

卵母细胞玻璃化冷冻对胚胎发育及妊娠结局的影响

目的探讨玻璃化冷冻对卵母细胞体外受精、胚胎发育以及妊娠结局的影响。方法将193枚玻璃化冷冻卵母细胞解冻复苏,采用卵胞浆内单精子注射法受精,观察胚胎发育形态,经72h体外培养后移植。结果成熟卵母细胞解冻复苏率为75．6％,正常受精率为72．6％,卵裂率为88．7％,优质胚胎率为48．9％。共移植19例,9例妊娠,已分娩2例,临床妊娠率为47．3％。新鲜周期与冻卵解冻周期相比,卵裂率、可移植胚胎率和优质胚胎率均无显著性差异（P〉0．05）。结论玻璃化冷冻方法对成熟卵母细胞的胚胎发育及妊娠结局无显著影响。     

时差成像系统对IVF-ET结局的改善及其优选模型初探

目的比较时差成像(time-lapse imaging,TLI)系统与常规胚胎培养的胚胎结局和临床妊娠结局,探讨基于TLI技术的胚胎优选模型的临床应用价值。方法回顾性分析2019年6~11月在我院行体外受精/卵泡浆内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)助孕的610个周期患者资料。按胚胎培养方式的不同分为常规培养组(n=543)和TLI组(n=67),常规培养组通过胚胎形态学评分优选胚胎,TLI组结合胚胎形态学和动力学方法优选胚胎。比较两组患者女方年龄、不孕年限、BMI、激素水平、胚胎结局、种植率和临床妊娠率等临床资料;再将两组根据女方年龄、获卵数和可用胚胎数进行分组,比较各亚组间种植率和临床妊娠率的差异。结果两组患者间的一般资料和获卵数、正常受精数、可用胚胎数、囊胚形成率均无显著性差异(P>0.05);TLI组的卵母细胞利用率显著高于常规培养组(37.15%vs.35.30%)(P<0.05)。进行新鲜周期移植的两组患者在移植日的子宫内膜厚度和移植个数上均无显著性差异(P>0.05),TLI组的种植率和临床妊娠率较常规培养组略有增高,但无显著性差异(P>0.05)。亚组分析显示,不同年龄段,TLI组的种植率和临床妊娠率较常规培养组均略有提升,但无显著性差异(P>0.05);获卵数≥10个或D3可用胚胎数/移植个数>3时,TLI组的临床妊娠率和种植率较常规培养组均有增高趋势,但无显著性差异(P>0.05)。结论TLI系统可显著提高卵母细胞利用率,TLI优选模型是一种简单的胚胎优选方案;获卵数>10个或D3可用胚胎数/移植胚胎数>3时,TLI胚胎优选方案的种植率和临床妊娠率较常规优选方案可能有所改善。     

不同剂量FSH进行控制性卵巢刺激的结局

<正> 控制性卵巢刺激(controlled ovarian stimulation,COS)是通过适当的刺激方案和促性腺激素(Gn)的剂量达到理想的卵巢反应和妊娠结局,这是体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术的重要部分。COS的目的是期望获得理想的卵泡数、成熟卵母细胞数,增加可供移植胚胎数及胚胎冻存的机会,最终达到提高临床妊娠率的目的。Gn中的卵泡刺激素(FSH)在卵泡选择和优势卵泡的发育过程中起重     

三种颗粒细胞剥除方式对卵母细胞受精率及胚胎发育的影响

目的对三种颗粒细胞剥除方式在常规体外受精(IVF)中对卵母细胞受精率及胚胎发育影响进行前瞻性研究。方法2004年1～12月,因输卵管因素不育在我院生殖中心行常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的患者54例,患者年龄均小于35岁。采用随机表法随机分为三组,每组18例,共818个卵母细胞。对三组卵母细胞在IVF后采取不同的颗粒细胞剥除方式:第一组在受精后4h完全剥除颗粒细胞;第二组在受精后4h部分剥除颗粒细胞,受精后16～18h再将颗粒细胞完全剥除;第三组在受精后16～18h完全剥除颗粒细胞(即传统的过夜培养方式)。对三组的受精率、优质胚胎率、囊胚形成率进行比较。结果第一组及第二组的优质胚胎率高于第三组,差异有统计学意义(P<0.05)。三组在受精率及囊胚形成率方面没有显著差别。结论第一组的颗粒细胞剥除方式最好,即缩短精-卵共培养时间可以提高胚胎质量,长时间的精-卵共培养对优质胚胎的形成有不利影响。较短时间(12～14h)的颗粒细胞与卵细胞的共培养可能对胚胎发育的质量无显著影响。     

35岁以下患者长方案促排卵获卵数对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期最佳获卵数及其对妊娠结局的影响。方法回顾性分析我院2009年9月至2010年8月35岁以下行长方案IVF-ET治疗的544个获卵周期的资料。比较不同获卵数的受精率、卵裂率、优胚率、临床妊娠率及并发症等指标的差异。结果不同获卵数各组间促性腺激素（Gn）刺激天数、Gn用量、卵裂率、优胚率无明显差别（P〉0．05）,获卵数〉25个组受精率低于其他各组（P〈0．05）。随获卵数的增加,冷冻胚胎数、注射人绒毛膜促性腺激素（hCG）日血雌二醇（E2）值及卵巢过度刺激综合征（OHSS）发生率增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。临床妊娠率随获卵数增加逐渐增加,当获卵数〉15个,临床妊娠率较前下降,累积妊娠率随获卵数增加而增加,当获卵数〉25个,临床妊娠率和累积妊娠率明显下降。结论获得适量的卵有利于获得较满意的妊娠结局。     

代谢组学预测人卵母细胞质量与胚胎体外发育潜能的研究现状

筛选高质量配子和高发育潜能胚胎是辅助生殖技术关注的重点。代谢物检测是一种非侵入性方法,如果可以应用在配子或胚胎质量的评估中,就可以开发出快速且无创的检测方法,客观地评价配子及胚胎质量,从而有效改善生殖结局。本文总结了代谢物预测卵母细胞质量及胚胎发育潜能的已发表研究,提示在预测配子及胚胎发育的过程中,多参数建模是颇具潜能的方法。现代近红外光谱(NIR)分析技术联合质子核磁共振(NMR)是检测卵泡液和胚胎培养液中代谢物的理想方法。卵泡液中葡萄糖、氨基酸(谷氨酸、缬氨酸)、胆固醇(7β-羟基胆固醇)、维生素(E类)等与卵母细胞质量相关。氧耗(活性氧和氧化应激指标)、氨基酸(谷氨酸和甘氨酸)可能作为预测胚胎发育潜能的标志物。卵泡液中脂质及胚胎培养液中的丙氨酸的预测价值应该进行更深入的研究。     

Intracytoplasmic sperm injection in cases with history of in vitro fertilization failure

Aim: To evaluate the effect of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) in the management of cases with a history of conventional in vitro fertilization (IVF) failure. Methods: Two groups of patients, 19 with normal semen parameters and a history of IVF failure (metaphase Ⅱ oocytes: 0~30 %) and 28 with severe male factor infertility received ICSI technology during the same period. Ovarian stimulation was achieved by conventional procedure. Transvaginal ultrasound-guided oocyte collection was done 35~37 h after human chorionic gonadotrophin (hCG) injection. Only metaphase Ⅱ oocytes were selected for microinjection. Results: Fertilization was achieved with ICSI in all the patients. The fertilization rate (75.6 %±21.1 % vs. 73.9 %±19.2 %), cleavage rate (85.1 %±19.3 % vs. 82.7 %±22.1 %), clinical pregnancy rate per embryo transfer cycle (31.6 % vs. 28.6 %) and implantation rate per embryo (15.3 % vs. 14.4 %) did not differ significantly between the two groups. Conclusion: ICSI is a valuable method for