6-溴异香兰素对HeLa细胞的增殖抑制及放射增敏作用

目的研究香兰素衍生物中的6-溴异香兰素（6-溴-5-羟基-4-甲氧基苯甲醛,BVAN08）对HeLa细胞增殖和放射敏感性的影响,为开发新的抗癌和放射增敏药物提供理论依据。方法利用MTT法检测细胞增殖,单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤,流式细胞术检测细胞周期,克隆形成率法检测细胞放射敏感性,AnnexinⅤ/PI染色法检测细胞凋亡。结果研究表明BVAN08在10～20μmol/L以上浓度就显示出对HeLa细胞增殖的抑制作用,抑制程度具有剂量依赖性,抑制细胞存活的IC50值为19.07μmol/L。BVAN08能诱发细胞DNA双链断裂损伤,作用4h就开始诱发细胞周期G2/M阻滞,随时间延长阻滞更加明显。BVAN08明显降低DNA修复蛋白DNA-PKcs的表达水平,20μmol/LBVAN08与2Gyγ射线复合作用可以显著增加细胞对射线的敏感性,增加细胞凋亡率。结论 BVAN08抑制HeLa细胞增殖,提高细胞的放射敏感性,其放射增敏作用与降低DNA-PKcs蛋白表达水平和G2/M阻滞有关。     

肿瘤辐射增敏机制研究进展

辐射增敏作用机制非常复杂，迄今为止尚无明确的解释。其机制主要包括改变肿瘤微环境、清除自由基和电子、细胞周期同步化、抑制DNA损伤修复、促进细胞凋亡和生物还原作用。辐射增敏作用机制的研究在提高肿瘤放疗效果方面具有重要的理论指导意义。     

X射线对同步化的HeLaS3细胞CyclinB1蛋白表达和转录水平的影响

中、高剂量电离辐射对生长的真核细胞的一个普遍效应是导致分裂延迟 ,这早已被放射生物学界所公认。但有关低剂量电离辐射对细胞周期及其分子调控的影响报道甚少 ,我室以往实验资料已揭示低剂量辐射可促进细胞的ＤＮＡ合成与增殖 ,加速细胞周期的进程[1 ,2 ] 。为了进一步探讨低剂量电离辐射促进细胞周期进程的分子机理以及低、高剂量辐射作用机理的差异 ,我们运用ＴｄＲ双阻断法、ＲＮＡ分子杂交技术和免疫组织化学法观察并探讨Ｘ射线作用于同步化的ＨｅＬａＳ3 细胞后 ,其细胞周期相关基因ＣｙｃｌｉｎＢ1 蛋白表达和转录水平的变化。一、…     

RNA干扰抑制端粒酶反转录酶联合γ射线对人喉癌细胞的作用

目的 观察人端粒酶反转录酶特异性干扰载体(pshRNA-hTERT)联合放射线在细胞和动物模型水平上对人喉鳞癌Hep-2细胞株的生长抑制作用,研究抑制hTERT在放射增敏中的作用。方法 细胞水平:联合pshRNA-hTERT和γ射线作用于人喉癌细胞Hep-2,用TRAP-PCR-ELISA法检测端粒酶活性,彗星电泳检测DNA损伤;动物水平:建立Hep-2和Hep-2R移植瘤模型,瘤内注射pshRNA-hTERT并联合放射线观察对移植瘤的抑制作用,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤内hTERT蛋白的表达。 结果 转染pshRNA-hTERT后Hep-2细胞hTERT的mRNA表达抑制率为60.78%;pshRNA-hTERT不仅能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性,而且抑制照射后DNA损伤的修复;在移植瘤模型中,pshRNA-hTERT与放射线有协同抑制移植瘤生长的作用(Hep-2:EPO＝1.79;Hep-2R:EPO＝2.01)。结论 pshRNA-hTERT在细胞和动物实验水平均具有放射增敏作用,表明抑制端粒酶及其亚单位可以增加在体肿瘤的放射敏感性,这为喉癌的基因放疗研究提供了依据。     

电离辐射诱导的细胞G2期阻滞

哺乳动物受X射线照射后,可以使细胞周期延迟或阻滞,包括G1期阻滞、S期延迟和G2期阻滞。G1期阻滞仅在野生型p53基因存在时出现,在清除DNA损伤的细胞中具有重要作用;而G2期阻滞更有利于损伤后DNA的修复和细胞存活,并且与p53基因存在状态无关。因此,对电离辐射诱导细胞G2期阻滞机制的探讨成为近年来国内外放射生物学领域的研究热点。     

电离辐射诱导的细胞G2期阻滞

哺乳动物受X射线照射后，可以使细胞周期延迟或阻滞，包括G1期阻滞，S期延迟和G2期阻滞，G1期阻滞仅在野生型p53基因存在时出现，在清除DNA损伤的细胞中具有重要作用；而G2期阻滞更有利于损伤后DNA的修复和细胞存活，并且与p53基因存在状态无关，因此，对电离辐射诱导细胞G2期阻滞机制的探讨成为近年来国内外放射生物学领域的研究热点。     

放射抗拒性食管癌细胞系的建立及基因表达差异分析

目的观察食管癌细胞经射线反复照射后放射敏感性的变化，应用基因芯片技术分析放射抗拒性食管癌细胞基因表达变化。方法食管鳞状细胞癌细胞株TE13经反复γ射线照射（累积剂量120Cy），逐步筛选出具有放射抗拒性的细胞TE13R120。相差显微镜下观察TE13及TE13R120的形态学差异；应用细胞克隆形成实验，验证TE13及TE13R120两种细胞的不同放射敏感性，用流式细胞术检测它们的细胞周期分布特征；基因芯片分析两种细胞基因表达差异。结果TE13R120的细胞群体倍增时间为39．93h，长于亲代TE13（33．94h）。TE13及TE13R120的放射敏感性明显不同（仇值分别为1．63和2．85Gy，SF2值分别为0．55和0．64，Dq值分别为1．38和1．15Gy，n值分别为2．33和1．49）。两种细胞经4Gy放射线照射后，出现不同的细胞周期分布改变，12～48h TE13R120细胞周期变化不明显，而其亲代细胞TE13发生明显G1期阻滞。应用DNA芯片对2159个基因进行了筛选，TE13R120与TE13相比，上调基因96个，下调基因80个。结论新的食管癌细胞系TE13R120比其亲本对射线更加抗拒，并且在基因水平上发生明显变化。4Gy照射后12～48hTE13R120细胞周期变化不明显，而其亲代细胞TE13发生明显G1期阻滞。     

Hp/DNA双参数分析放射损伤小鼠骨髓细胞周期、凋亡和Hp

目的：建立结合珠蛋白(Hp)／DNA双参数流式细胞技术，以探讨放射损伤小鼠骨髓细胞中Hp含量与细胞周期和凋亡的关系。方法：小鼠骨髓细胞经70％乙醇固定后，Triton-X100破膜，间接免疫荧光技术标记Hp，PI标记DNA，上流式细胞仪测试。用ModFit软件设双门法分析Hp^ 和Hp^-细胞的细胞周期和凋亡，CELLQuest软件分析Hp^ 细胞比例。结果：γ射线照射后6h小鼠骨髓有核细胞中Hp^ 细胞的比例明显高于未照射对照组，骨髓细胞的凋亡来自于Hp^-细胞，Hp^ 细胞未见凋亡，Hp^-细胞发生的G2/M阻滞比Hp6 细胞严重。这些信息是单用Westem印迹法或单纯DNA分析所不能提示的。结论：Hp/DNA双参数流式细胞技术可用于分析Hp与细胞周期和凋亡的关系，是一种快速、客观的分析方法。     

放射诱导肿瘤细胞自噬及其对肿瘤放射效应的影响

自噬(autophagy)是细胞内物质代谢的一种方式,是一种进化上高度保守的细胞"自我消化"过程,在适应应激、维持细胞稳态和基因组完整性方面起着至关重要的作用。自噬能够抑制或促进肿瘤生长,与肿瘤放射效应密切相关。肿瘤细胞对放射线的应激反应是否通过诱导自噬,导致放射抵抗和促进存活目前仍不完全清楚。放射诱导肿瘤细胞自噬及其对肿瘤放射效应的影响及机制的研究也少见报道。为此,本文对自噬相关机制和放射诱导肿瘤细胞自噬及其对肿瘤放射效应影响的研究进展进行了综述。     

电离辐射诱导的S期检查点非依赖于CD-KN1A

细胞周期检查点在DNA的复制和有丝分裂过程中具有调节细胞分化与死亡的关键作用。近来研究表明,除了G1和G2期检查点外,S期检查点在DNA的损伤修复及复制过程中同样具有重要的作用。为此,采用HCT116细胞来源的蛋白激酶抑制因子CDKN1A敲除的细胞株(CDKN1A+/+和CD-KN1A-/-),直接观察了电离辐射诱发的细胞S期损伤应答过程中CDKN1A的作用。方法:1采用3H-脱氧胸苷掺入法,观察不同剂量的电离辐射对HCT116(CDKN1A+/+)和S4(CD-KN1A-/-)细胞DNA合成抑制的剂量反应曲线;2将两种细胞同步化,观察10Gy照射诱导的DNA合成抑制动力学变…     

放射损伤细胞中高尔基体弥散现象及香兰素衍生物的防护作用

目的：通过观察辐射对高尔基体形态的影响,确定香兰素衍生物VND3207对受照细胞高尔基体的防护作用。方法采用免疫荧光技术检测放射损伤细胞中高尔基体弥散现象并统计弥散面积,检测细胞周期变化,分析细胞存活率,同时对高尔基体蛋白的表达水平进行检测。结果免疫荧光检测结果显示,照射后高尔基体的弥散面积增加,具有一定的剂量效应和时间效应;VND3207能减轻γ射线对高尔基体的损伤,其表现为与未加药组相比,在抑制不同剂量照射后可使高尔基体弥散面积增加;细胞周期测定结果显示,4 Gy γ线照射后G2／M期阻滞峰值约出现在12 h后;免疫印迹结果显示DNA损伤引起的G2／M期阻滞也在12 h后解除;而高尔基体弥散在细胞周期阻滞解除后12和24 h仍然存在;平板克隆结果显示,VND3207促进了受照细胞的存活。结论放射损伤能引起剂量依赖性高尔基体弥散效应,且这种弥散与DNA损伤诱导的周期阻滞无关,VND3207对放射损伤引起的高尔基体弥散有一定的抑制作用,可能与受照细胞受到保护有关。     

阻断血管内皮生长因子表达对食管癌细胞放射敏感性的影响

目的 观察转染反义VEGF cDNA质粒和反义寡核苷酸后,TE-1食管癌细胞在体外的生长状况、VEGF表达水平及其放射敏感性的变化。方法 分别用反义VEGF cDNA质粒及空载体质粒和反义VEGF寡核苷酸经Lipofectamine^TM2000介导转染TE-1细胞,然后经γ射线照射。采用RT-PCR、Western blotting、流式细胞术、MTT法和克隆形成实验分别检测4组细胞照射前后VEGF基因的表达、凋亡率和细胞周期变化、细胞增殖情况以及转染细胞放射敏感性的变化。结果 将反义VEGF cDNA和反义寡核苷酸成功转入食管癌TE-1细胞后,VEGF表达水平明显降低,细胞增殖反应、细胞周期无明显变化,亦未见明显凋亡发生。照射后4组细胞增殖情况未见明显差异;反义组细胞凋亡率略有上升, 放射敏感性增加。结论 转染反义VEGF cDNA质粒和反义寡核苷酸可抑制食管癌TE-1细胞VEGF表达,联合放射线作用,对TE-1细胞的增殖无明显影响,而对其放射敏感性有增强作用。     

电离辐射与细胞动力学

细胞对电离辐射的反应取决于DNA的损伤程度及细胞对此损伤的修复能力,损伤后修复能力和损伤性质因细胞周期而异。因此,细胞动力学改变是影响放射治疗效果的重要因素。随着放射生物学研究的进展,细胞动力学改变与修复的分子基础逐渐被揭示出来,并表现出许多明显的共同点。近年来有关放射治疗的分子生物学研究成果,展示了放射生物学几个重要因素之间的内在联系。     

p53在调节细胞周期阻滞和细胞凋亡中的作用及其机制

p53作为抑癌基因,在各种应激情况下(包括电离辐射所致DNA损伤、核苷酸缺失、低氧或癌基因激活)调控细胞周期进程和细胞凋亡过程。本文综述了p53及其下游分子在细胞周期和细胞凋亡中的作用,在此基础上探讨p53在选择细胞周期阻滞和细胞凋亡中的影响因素。     

HeLa细胞中细胞周期蛋白B不降解也能完成有丝分裂中后期转变

目的：在用细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｂ１作为ＨｅＬａ细胞周期Ｇ１期时相的阴性标志物时，发现呈阳性结果，为此，对细胞周期蛋白Ｂ在细胞的Ｍ期向Ｇ１期过渡中的作用做进一步探讨。方法：分别用诺考达唑（ｎｏｃｏｄａｚｏｌｅ）和离心淘洗的方法同步化ＨｅＬａ细胞，用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法检测细胞周期蛋白Ｂ的存在。结果：用诺考达唑阻断细胞于Ｍ期，然后释放４ｈ所得的Ｇ１期细胞中有细胞周期蛋白Ｂ，而离心淘洗的方法所得Ｇ１期细胞中没有细胞周期蛋白Ｂ。结论：（１）诺考达唑阻断细胞于Ｍ期后，可影响细胞周期蛋白Ｂ１在Ｍ期后期的降解；（２）细胞周期蛋白Ｂ１的降解对于ＨｅＬａ细胞由Ｍ期向Ｇ１期过渡并不是必需的，可能还有别的蛋白质参与；（３）采用药物阻断的方法同步化细胞，对细胞的生理、生化活动有潜在的影响。     

HeLa细胞中细胞周期蛋白B不降解也能完成有丝分裂？…

目的：在用细胞周期蛋白Ｂ１作为ＨｅＬａ细胞周期Ｇ１期时相的阴性标志物时，发现呈阳性结果，为此，对细胞周期蛋白Ｂ在细胞的Ｍ期向Ｇ１期过渡中的作用做进一步探讨。方法：分别用诺考达唑和离心淘洗的方法同步化ＨｅＬａ细胞，用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法检测细胞周期蛋白Ｂ的存在。结果：用诺考达唑阻断细胞于Ｍ期，然后释放４ｈ所得的Ｇ１期细胞中有细胞周期蛋白Ｂ，而离心淘洗的方法所得Ｇ１期细胞中没有细胞周期蛋白Ｂ。结论：     

p53在调节细胞周期阻滞和细胞凋亡中的作用及其机制

p53作为抑癌基因，在各种应激情况下（包括电离辐射所致DNA损伤、核苷酸缺失、低氧或癌基因激活）调控细胞周期进程和细胞凋亡过程。本综述了p53及其下游分子在细胞周期和细胞凋亡中的作用，在此基础上探讨p53在选择细胞周期阻滞和细胞凋亡中的影响因素。     

恶性脑瘤增敏放射治疗研究进展

恶性脑瘤治疗困难,手术难以全切,极易复发,而且有些脑深部的肿瘤不适合外科手术治疗.因此,放疗已成为恶性脑瘤综合治疗的主要手段之一.但放疗的疗效也不尽理想,主要原因是某些肿瘤细胞对放射线不太敏感,除肿瘤细胞遗传的放射抗性外,细胞的氧合状况以及细胞周期时相的差异也严重影响     

不同周期的S-180V细胞DNA辐射损伤修复的比较

根据小鼠腹水瘤S-180 Ⅴ细胞的生长特点,设计了获取G_1、S、M期同步化细胞的方法,并用碱洗脱法对同步化细胞DNA单链断裂程度与重接修复速度进行了比较。观察到0～50Gyγ线照射范围内,不同周期细胞DNA单链断裂损伤无明显差别。30Gy照射后,不同周期细胞的断裂的DNA的修复速度不同,其中以S期重接修复速度最慢。     

α粒子照射引起C3H10T1/2细胞恶性转化:细胞周期的敏感性

实验研究比较了细胞同步化两种技术的效果,观察了同步化的C3H10T1/2细胞经4.3MeVα粒子(LET=101keV/μm)照射后的恶性转化率,目的在于检测细胞周期的敏感性。