含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达

目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和可诱导病毒,分别测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和可诱导病毒共感染HT-1080细胞,经梯度浓度强力霉素(Dox)诱导,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,免疫荧光染色检测HT-1080细胞FcγRⅡB表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定,测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表达病毒滴度达106TU/mL,可诱导病毒滴度达105TU/mL,感染性良好。HT-1080细胞被病毒感染后经Dox诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示FcγRⅡB能够在HT-1080细胞中表达;实时荧光定量PCR和Western blot法结果显示FcγRⅡB表达水平与诱导剂浓度正相关。结论成功制备了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080细胞后可实现FcγRⅡB的诱导表达。     

自身免疫性疾病的Fcγ受体的靶向治疗

IgG受体(Fcγ受体,FcγR)是重要的免疫应答调节分子。在人类,有3种白细胞FcγR,FcγRI(CD64)、FcγRⅡ(CD32)及FcγRⅢ(CD16)。FcγRⅡ具有两种功能不同的亚型,FcγRⅡA和FcγRⅡB。这两种亚型广泛分布于各种白细胞,是涉及自身免疫性疾病发病的主要受体。在临床和实验研究中已经发现FcγRⅡA的过度激活和/或FcγRⅡB的过度抑制均可导致免疫复合物介导的自身免疫性疾病。因此,下调FcγRⅡA或上调FcγRⅡB功能也许是治疗自身免疫性疾病的一种有效的方法。     

猪FcγR ⅡB多种剪接异构体的基因克隆与序列分析

目的:研究猪FcγRⅡB受体基因选择性剪接的多样性。方法:根据GenBank中猪FcγRⅡB(swFcγRⅡB)cDNA基因序列(DQ026064),应用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,应用RT-PCR技术,从不同个体的猪肺泡巨噬细胞中扩增FcγRⅡB基因并进行测序分析,在GenBank中查找猪FcγRⅡBDNA序列(NW-001886241.1),并用相关软件分析其外显子组成。结果:共克隆出6个转录体,其中转录体2,4在信号肽部分都有一个丙氨酸的缺失。转录体5,6是两个新型的FcγRⅡB转录体,转录体5胞外区只有一个Ig结构域,转录体6是一个只含有一个Ig结构域的推导性可溶性Fc受体。结论:猪FcγRⅡB的表达因RNA选择性剪接方式不同而呈现出多样性。     

急性免疫性血小板减少症患儿IgG-Fc受体表达变化

目的 探讨小儿急性免疫性血小板减少症(aITP)外周血单核细胞(MC) IgG-Fc受体(FcγR)表达变化.方法 急性ITP患儿组27例,同龄健康对照组25例,流式细胞术检测单核细胞表面活化型受体FcγR Ⅰ及FcγRⅢ表达;荧光定量PCR( real-time PCR)检测MC活化型FcγRⅡa及抑制型FcγRⅡb mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆IFN-γ、IL-4和IL-10浓度.结果 (1)急性ITP患儿组MC FcγR Ⅰ和FcγRⅢ表达明显高于对照组(P＜0.05);FcγRⅡa mRNA及FcγRⅡa/FcγRⅡb mRNA比值显著高于对照组及治疗后,经地塞米松治疗后,活化型FcγR Ⅰ、FcγRⅢ、FcγRⅡa mRNA表达下降,抑制型FcγRⅡb mRNA表达增加,FcγR活化型/抑制型平衡逐渐恢复.(2)血浆炎症细胞因子IFN-γ浓度较对照组显著增高;抗炎因子IL-4显著低于对照组.IFN-γ浓度水平与MC FcγRⅡa mRNA表达显著正相关(r=0.79,P＜0.05),IL-4与FcγRⅡb mRNA表达正相关(r=0.84,P＜0.05).结论 单核细胞活化型FcγRs过度表达,抑制型FcγRⅡb表达降低,活化型/抑制型FcγRs表达失衡可能参与儿童急性ITP免疫发病机制,MC FcγRs异常表达可能与细胞因子IFN-γ、IL-4的改变有关,地塞米松治疗可恢复FcγRs活化型/抑制型平衡表达.     

系统性红斑狼疮患者B细胞激活后FcγRⅡb1向脂筏信号域转移减少

目的观察系统性红斑狼疮(SLE)患者B细胞激活后FcγRⅡb1信号分子向脂筏信号域转移的改变。方法收集SLE患者和正常人外周血并分离出B细胞,分别用抗人μ链的F(ab’)2片段[F(ab’)2anti-μ]单独刺激B细胞抗原受体(BCR),或用抗人μ链的完整IgG(IgG anti-μ)激活B细胞、同时实现BCR与FcγRⅡb1的交联;采用密度梯度超速离心法提取B细胞膜脂筏;免疫沉淀及Western blot法分别检测膜脂筏中FcγRⅡb1的分布、脂筏FcγRⅡb1酪氨酸残基磷酸化水平、及脂筏FcγRⅡb1对含SH2结构域的肌醇磷酸酶(SHIP)的招募。结果 SLE患者B细胞经F(ab’)2anti-μ单独刺激BCR后,胞膜脂筏部位FcγRⅡb1的分布、脂筏FcγRⅡb1酪氨酸残基磷酸化水平、以及脂筏FcγRⅡb1对SHIP的招募,与正常对照组比较均无明显改变,但经IgG anti-μ激活B细胞以实现BCR与FcγRⅡb1的交联后,以上指标均显著低于正常对照组。结论 SLE患者B细胞经IgG anti-μ激活后,转移至膜脂筏部位的FcγRⅡb1、脂筏FcγRⅡb1酪氨酸残基磷酸化水平、以及脂筏FcγRⅡb1对SHIP的招募均显著减少。     

急性期过敏性紫癜患儿血清细胞因子及单核细胞Fcγ受体表达变化初探

目的 观察急性期过敏性紫癜(HSP)患儿单核细胞(MC) Fcγ受体(FcγR)表达变化,进一步探讨HSP免疫发病机制.方法 急性期HSP患儿30例,同年龄健康对照儿童15例.流式细胞术检测MC表面活化型受体FcγR Ⅰ和Fc-γRⅢ表达水平;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测活化型FcγRⅡa、抑制型FcγRⅡb、细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-α)、趋化因子(IP-10、RANTES、iNOS)和BLyS/April mRNA表达;试验酶联免疫吸附(ELISA)检测血浆IL-4、IL-10和TNF-α蛋白浓度.结果 (1)急性期HSP患儿MC FcγR Ⅰ和FcγRⅢ表达明显高于对照组(P＜0.05);FcγRⅡamRNA表达较对照组明显增高(P＜0.05),而FcγR Ⅱb mRNA表达较对照组显著降低(P＜0.05);(2)急性期HSP患儿MC细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-α)、趋化因子(IP-10、RANTES、iNOS)及BLyS/April表达均明显高于正常对照组(P＜0.05),相关性分析发现细胞因子和趋化因子与FcγRⅡa/FcγRⅡb均呈正相关;(3)急性期HSP患儿血浆炎症细胞因子IL-4、IL-10和TNF-α浓度显著增高(P＜0.05),其中TNF-α浓度与MC FcγRⅡb mRNA表达呈负相关(r=-0.73,P＜0.05).结论 急性期HSP出现细胞因子表达异常和单核细胞活化型/抑制型Fcγ表达失衡.     

人类抗人CD40单克隆抗体免疫激活活性依赖于其Fc与FcγRⅡB相互作用

激动型抗CD40单抗能够激活APC表面CD40免疫共刺激信号,促进其成熟和交叉提呈抗原并激活抗原特异性CTL以杀伤肿瘤,多年来一直是肿瘤免疫治疗的研究热点。以鼠源抗体为基础的研究表明,激动型抗鼠CD40单抗的活性受到抑制性Fcγ受体(FcγRⅡB)的驱动,但尚不清楚这一调控机制是否影响人类抗人CD40(hCD40) IgG单抗。为此,作者研究了Fcγ受体(Fcγreceptor, FcγR)结合能力对人类抗hCD40单抗活性的影响,发现抗体恒定区(Fc)失去FcγR结合能力会严重削弱人类激动型抗hCD40 IgG1单抗活性;同时,FcγRⅡB特异性阻断抗体可以显著抑制人类激动型抗hCD40 IgG1单抗活性;此外,增强抗体Fc的FcγRⅡB结合能力能够提高抗体的激动活性。而且,多个抗原结合表位不同的人类抗hCD40单抗在实验中表现一致,说明抗CD40单抗的激动活性普遍依赖于FcγRⅡB。上述研究有助于探索激动型抗CD40单抗的活性调控规律,为设计更好的激动型抗hCD40抗体提供思路。     

Fcγ和Fcε受体在小鼠三叉神经节的表达

目的 检测正常小鼠三叉神经节(TG)是否表达免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白E(IgE) Fc段Fcγ受体和Fcε受体,及其在过敏小鼠TG中的变化.方法 通过腹腔注射OVA和铝剂,建立小鼠过敏性结膜炎(ACJ)模型.EHSA检测血清总IgE.用Westernblot和免疫荧光检测Fcγ受体和Fcε受体的表达.结果 小鼠TG表达Fcγ受体和Fcε受体.其中IgG激活型高亲和力受体FcγRI和抑制型低亲和力受体FcγRⅡ只表达在小鼠TG神经元上,而IgG激活型低亲和力受体FcγRⅢ表达在小鼠TG中的卫星胶质细胞上.IgE激活型高亲和力受体FcεR Ⅰ表达在小鼠TG神经元上,而IgE低亲和力受体FcεRⅡ同时表达在小鼠TG神经元和卫星胶质细胞上.与正常小鼠比较,ACJ小鼠的血清总IgE水平升高,TG的FcεR Ⅰ和FcγRⅡ表达增加(P＜0.05).而ACJ小鼠的FcεRⅡ和FcγRⅠ表达下降(P＜0.05).FcγRⅢ在正常和ACJ小鼠TG中的表达无显著差别.结论 小鼠TG表达的Fcγ和Fcε受体可能参与ACJ及其他过敏性疾病的发生和发展.     

多态性FcγRⅡ基因定位于人类第1号染色体长臂(1q)上

人类白细胞表面的Fc受体(FcγR)是免疫应答过程中将体液免疫系统同细胞效应功能结合起来的重要组分,根据其分子大小,对IgG的亲和力、细胞分布类型及体外功能FcγR至少可分为3大类。人类FcγRⅡ则是表达于单核细胞、血小板、嗜酸性粒细胞、B细胞及中性粒细胞表面的一种分子量为40000的糖蛋白,它可结合寡聚体形式的人IgG及小鼠IgGl和IgG2b,同时有证据表明单核细胞FcγR Ⅱ     

抗中性粒细胞胞浆抗体诱导FcγRⅡa升高与血管炎相关细胞因子的关系

目的探讨抗中性粒细胞胞浆抗体是否通过影响中性粒细胞膜上FcγRⅡa的表达参与疾病进程。方法用不同浓度的抗中性粒细胞胞浆抗体相关血管炎活动期血清,分别是抗髓过氧化物酶抗体及抗蛋白酶3抗体阳性血清刺激健康人中性粒细胞,以健康人血清刺激中性粒细胞作为对照组,用流式细胞术分析血液中FcγRⅡa的荧光强度,Western blot分析FcγRⅡa的表达,鲁米诺化学发光方法检测中性粒细胞中氧自由基生成,用酶联免疫吸附试验检测血清细胞因子TNF-α、IL-6的水平及血清中抗髓过氧化物酶抗体及抗蛋白酶3抗体水平。结果伴随血清浓度的降低,FcγRⅡa荧光强度、FcγRⅡa蛋白的表达、中性粒细胞中氧自由基及其分泌的细胞因子TNF-α、IL-6水平下降(P0.05)。结论抗髓过氧化物酶抗体及抗蛋白酶3抗体可能均通过FcγRⅡa影响氧自由基生成及细胞因子TNF-α、IL-6的水平,进而导致血管炎的发生。     

IgG受体FcγRⅡB调节实验性自身免疫性脑脊髓炎致神经元损伤及Th17/Treg免疫平衡的作用研究

目的：探究IgG受体FcγRⅡB对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型小鼠神经元损伤与Th17/Treg失衡的作用。方法：C57BL/6小鼠随机分组为对照组、EAE组、FcγRⅡB组、EAE+FcγRⅡB组,每组15只,皮下注射MOG35-55肽诱导EAE模型,并给予FcγRⅡB慢病毒液处理;造模后每日称量小鼠体质量,进行神经功能评分,持续30 d;30 d后处死小鼠,HE染色观察脑组织病理形态学变化,LFB染色评估脊髓髓鞘结构变化,免疫荧光染色检测脊髓大脑皮质神经元核抗原（NeuN）和Caspase-3表达,TUNEL染色检测神经元细胞凋亡,ELISA检测血清IL-6、IL-17、IL-10及TGF-β水平,流式细胞术分析脾脏Th17、Treg细胞比例分布,Western blot测定脊髓组织维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与Forkhead家族转录因子3(Foxp3)蛋白表达。结果：与对照组比较,EAE组小鼠体质量下降,神经功能评分升高,脑组织内炎症细胞浸润明显,脊髓中出现脱髓鞘迹象,NeuN荧光表达强度减弱而Caspase-3荧光表达强度增强,TUNEL阳性着色细胞多,细胞...     

FcγRⅡb与狼疮性肾炎病理活动的相关性

肾脏是系统性红斑狼疮(SLE)最常累及的脏器,肾小球、肾小管、肾间质和肾血管均可受累,迄今为止仍是SLE的主要致死原因之一.狼疮性肾炎(LN)的发生机制不十分清楚.FcγRⅡb为免疫球蛋白超家族成员,是低亲和力的FcγR,本研究旨在探讨LN患者肾组织中FcγRⅡb的表达及其与LN活动性的关系.     

FcγR Ⅱ a基因多态性、中性粒细胞胞浆抗体、循环免疫复合物在系统性红斑狼疮发病肿饔玫难芯靠

目的 通过检测系统性红斑狼疮(SLE)病人FcγR Ⅱ a受体的基因型及其分布情况,检测了血清中的中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、循环免疫复合物(CIC).分析三者之间的关系和其与SLE的关系,从基因表达、转录及表达产物的作用三个层次探讨了SLE的发病机制.方法 收集69例SLE病人与48例健康人的标本,采用巢式PCR对FcγRⅡa基因进行分型,RT-PCR检测该基因的转录,采用ELISA方法对血清中的ANCA和CIC进行检测.结果 FcγR Ⅱ a-R131纯和子的分布在SLE患者组与正常对照组之间有统计学意义(P<0.02).三种基因型在狼疮病人中(分别为45%Fcγ/RⅡa-R/R131、30%H/R 131和25%H/H131)与正常对照组(21%FcγR Ⅱ a-R/R131、52%H/R131和27%H/H131)之间不同.FcγRⅡ a-R/R131基因型转录产物在SLE患者组与正常对照组之间有有统计学意义(P<0.02),此结果与分型结果一致.在FcγR Ⅱ a-R/R131基因型中抗ANCA阳性率为67.9%,CIC阳性率67.4%,与FcγRⅡ a-H/R131和FcγRⅡ a-H/H131两个基因型(ANCA:21.4%H/R131和10.7%H/H131;CIC:18.4%H/R131;14.0%H/H131)之间有统计学意义(P<0.05).ANCA与CIC的阳性率在H/R131与H/H131基因型之间无统计学意义(P0.2).结论 FcγR Ⅱ a-R/R基因型可能是云南汉族SLE病人的遗传易感因素,其在体内的过度表达可能是造成SLE患者血清中ANCA和CIC含量增高进而导致SLE发生的一个重要原因.     

胎盘Hofbauer细胞及其FcγRⅢ受体表达

Hofbauer细胞是胎盘巨噬细胞,位于绒毛间质,与胎儿血管相邻,能在母体和胎儿间游走,对入侵胎盘的病原微生物有较强的吞噬作用。其表面含FcγRⅢ受体,包括FcγRⅢA和FcγRⅢB,两者胞外结构域有高度同源性,但FcγRⅢA是一种细胞特异性的糖基化跨膜蛋白,其在细胞表面稳定表达与γ链参与有关;FcγRⅢB不含任何跨膜或细胞质区域,其锚定于细胞膜的糖基磷脂酰肌醇(GPI),其表达与FcR的γ链或ξ链无关。Hofbauer细胞具有肯定的吞噬能力,但不能依赖溶酶体完全溶解杀灭被吞噬的病毒。Hofbauer细胞表面的FcγRⅢ与母体循环的HBsAg-抗-HBsAg等免疫复合物结合引起细胞免疫或淋巴因子的转录,介导HBV宫内感染。     

FcγRⅡb基因多态性与常见风湿病发病相关性研究进展

FcγRⅡb属FcγR中的抑制性受体,编码基因位于染色体1 q23.多项研究认为其基因多态性与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE),类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA),强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)等风湿免疫病相关.而在不同种族的人群中研究结果不同,但仍可以认为,FcγRⅡb基因多态性在某些人群的常见风湿免疫病发病过程中起重要作用.

Abstract：

IgG Fc receptor Ⅱ b ( FcγR Ⅱ b ) is an inhibitory Fc receptor expressed on B cells and myeloid cells, and its coding gene is located on Chromsome 1 q23. These receptors are very important for the regulation of body' s responses to infection. The reduced expression of function of these receptors may predispose to autoimmunity. The FcγR Ⅱ b gene polymorphisms affect the affinity with which FcRs interact with immunoglobulin molecules. Correlation of the FcγR Ⅱ b polymorphisma with susceptibility of common rheumatic diseases, such as Systemic Lupus Erythematosus ( SLE ) , Rheumatoid Arthritis ( RA ) ,Ankylosing Spondylitis (AS) , has been reported in various populations, but the results were inconsistent.     

静脉注射丙种球蛋白治疗对急性期川崎病IgGFc受体和TLR4表达的影响

目的 探讨静脉注射丙种球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)治疗对川崎病(Kawasaki disease,KD) Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)表达的影响.方法 急性KD患儿25例,正常同龄对照儿童15例.流式细胞术检测单核细胞(monocyte cells,MC) TLR4表达水平;双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆TNF-α浓度;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR检测MC FcγRⅡb、TLR4信号转导途径分子(MyD88、TRAF-6、TAKl)和细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)mRNA表达.结果 急性期KD患儿MC TLR4及其转导分子表达明显高于同龄对照组(P＜0.05),IVIG治疗后较治疗前明显降低(P＜0.05);急性期KD患儿MC FcγRⅡb明显低于同龄对照组(P＜0.05),IVIG治疗后明显升高(P＜0.05);急性期KD患儿IL-1β、IL-6、TNF-α表达及血浆TNF-α浓度显著增高(P＜0.05),IVIG治疗后下降(P＜0.05);急性期KD患儿MC FcγRⅡb表达与TLR4表达及炎症细胞因子呈相关性(P＜0.05).结论 IVIG可能上调FcγRⅡb表达,下调TLR4表达,从而抑制炎症反应.     

转染FcγRⅡb1基因纠正SLE患者B细胞的过度活化

目的观察转染FcγRⅡb1基因能否纠正SLE患者B细胞的过度活化。方法构建人FcγRⅡb1基因真核载体,通过电穿孔转染SLE患者B细胞。分别采用抗人μ链的F(ab’)2片段[F(ab’)2anti-μ]和抗人μ链的完整IgG(IgG anti-μ)2种抗体刺激B细胞,同时以正常人B细胞作对照。采用分光光度计检测激活B细胞胞内[Ca2+]i反应,3H-TdR掺入法检测B细胞的增殖能力,ELISA法检测B细胞分泌抗体的功能。结果分别以F(ab’)2anti-μ和IgG anti-μ激活SLE患者B细胞后,细胞内[Ca2+]i反应、cmp值及IgG分泌量的比值均显著低于正常人(P0.01),通过转染FcγRⅡb1基因后,这些比值均显著提高(P0.01或P0.05)。结论转染FcγRⅡb1基因能有效纠正SLE患者B细胞过度的活化、增殖及抗体分泌。     

人U937细胞吞噬IgA免疫复合物的研究

目的 对IgA Fc受体(FcaR Ⅰ)介导的U937细胞吞噬IgA免疫复合物进行研究。方法 以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的8．9NIP／BSA为抗原，与抗NIP的IgA或IgA抗体结合，分别形成IgA免疫复合物(IgA IC)和IgG免疫复合物(IgG IC)，再与经佛波醇乙酯(PMA)刺激分化为单核细胞样的13937细胞孵育，流式细胞仪分析U937细胞吞噬IgA Ic和IgG IC的情况。结果 U937细胞表面：FcaR Ⅰ表达量高于3种IgG Fe受体(FcγRⅠ、FcγRⅡ、FcγRⅢ)。PMA刺激后细胞表面FcαRⅠ上调明显，吞噬IgAIC能力增加。FcαRⅠ介导的U937细胞对IgA IC的吞噬作用高于FcγRⅠ和FcγRⅡ介导的对IgG IC的吞噬作用，且这种吞噬作用是特异性的。在补体受体CRl和CR3作用下，U937细胞对IgA IC的吞噬作用有所增强。结论 FcαRⅠ介导单核细胞非常强的吞噬IgA IC的作用。     

Fc⁃gammaⅠ型受体在阿尔茨海默病患者和模型小鼠脑皮质的表达

目的 探讨高亲和力IgG受体Fc?gammaⅠ型(FcγRⅠ)在阿尔茨海默病(AD)脑皮层的表达变化.方法 选用正常人脑组织样本和神经病理诊断为AD患者脑组织样本,6月龄野生型小鼠和APP/PS1小鼠.免疫荧光和免疫蛋白印迹检测脑皮层FcγRⅠ的细胞定位和表达.结果 人和小鼠脑皮层的神经元均普遍表达FcγRⅠ.与健康人...     

FcγRⅢ在乙型肝炎病毒胎盘感染中作用的研究

目的研究FCγRⅢ在乙型肝炎病毒胎盘感染中的作用。方法收集早孕、中孕,足月胎盘各15例,进行免疫荧光检测FcγRⅢ的表达情况;并随机选取经免疫组化PV-9000法检测为HBsAg( )的足月胎盘15例,进行免疫荧光双标检测HBsAg/FcγRⅢ的分布。结果早孕绒毛组织未见FcγRⅢ表达,中孕胎盘有11例表达,其中最早的为孕17w,足月胎盘均有明显表达;HBsAg/FcγRⅢ在胎盘屏障各层细胞上可分布于同一部位。结论孕17w后胎盘组织开始表达FCγRⅢ,使胎盘具有转运IgG的功能:HBV可能是以免疫复合物的形式经由滋养细胞表面FCγRⅢ的介导而感染胎盘的。