Decreased renal vitamin K-dependent γ-glutamyl carboxylase activity in calcium oxalate calculi patients

Objective To study the activity of vitamin K-dependent γ-glutamyl carboxylase in patients with calcium oxalate (CaOx) urolithiasis compared with healthy individuals and to assess its relationship to the renal calcium oxalate urolithiasis. Methods Renal parenchymas were harvested from urolithic patients and renal tumor patients undergoing nephrectomy. The renal carboxylase activity was evaluated as the radioactivity of ［14C］ labeled sodium bicarbonate in carboxylic reactions in vitro using β-liquid scintillation counting. Results Significantly reduced activity of renal vitamin K-dependent γ-glutamyl carboxylase was observed in the urolithic group as compared with normal controls (P<0.01). Conclusion It suggests that the reduced carboxylase activity observed in the urolithic patients may play an important role in the course of renal calcium oxalate urolithiasis.     

中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因的分离、克隆和鉴定

目的 克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因（frc），检测其在真核细胞中的表达。方法 用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc，通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重组质粒。重组质粒转染人胚。肾293细胞，检测frc基因在mRNA和蛋白水平上的表达。被转染细胞在含草酸培养液中培养，检测0～72h培养液中草酸浓度的变化。结果 frc基因的真核表达载体构建成功。转染293细胞后24～72h，可观察到明亮的绿色荧光，在mRNA和蛋白水平上可检测到frc基因在真核细胞中的表达。转染pEGFP-frc细胞12～72h培养液中草酸浓度明显低于转染空载体的细胞（P〈0．05）。结论 中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可分离出frc基因；frc基因可在真核细胞293细胞中表达并使293细胞获得代谢草酸的能力。     

胰蛋白酶加乙二胺四乙酸钠溶解草酸钙结石实验研究

目的：探讨胰蛋白酶加乙二胺四乙酸钠（ethylenediamine traacetic acid,EDTA)合用溶解草酸钙结石的效果。方法：用自制玻璃肾盂灌注模型，以胰蛋白酶作为基质溶解剂与EDTA合用灌注溶解草酸钙结石，用原子吸收光谱法测定溶石剂中钙离子浓度，扫描电镜观察结石表面结构的变化，并灌注家兔膀胱，观察毒性反应。结果：胰蛋白酶明显增强EDTA溶解草酸钙结石的效果， 减轻EDTA引起家多兔胱粘膜的炎性反应。结论：胰蛋白可以胜任基质溶解剂，加速EDTA对草酸钙结石的溶解，并减轻EDTA引起的炎性反应。     

草酸钙的形成机理及影响因素

目的 :探讨草酸钙结石的形成机理和影响因素。方法 :根据微溶电解质动力学原理 ,利用草酸与氯化钙作用形成草酸钙的性质 ,加入其它尿液中常见组分 ,测定草酸钙诱导期与过饱和溶液浓度的关系 ,并分析结石的显微结构。结果 :草酸钙的诱导期与溶液过饱和浓度呈反比关系 ,且不同干扰因素对草酸钙的过饱和比影响也不同。结论 :钙和草酸是草酸钙形成的必要条件 ;溶液的过饱和是草酸钙成核的基础 ;基质对草酸钙起胶结作用 ;氯化钠、氯化铵、氯化镁能促进草酸钙的形成 ,而氯化铁、尿素、甘氨酸能抑制草酸钙的沉淀。     

IPP在草酸钙结晶评分中应用的可行性研究

目的探究IPP图像分析软件评估结晶情况可行性、可靠性和稳定性。方法由两位研究员分别对同一批草酸钙结晶照片进行人工评分和应用IPP评分,通过统计学方法检验评分的一致性;1周后,一位研究员再次进行人工评分和应用IPP评分,通过统计学方法检验自身前后评分的一致性。结果人工评分草酸钙结晶,两位研究员及同一研究员前后所给的评分,其一致性均差;应用IPP评分,两位研究员及同一研究员前后所给的评分,其一致性均较高。结论应用IPP图像分析软件对草酸钙结晶情况进行评分具有可靠性和稳定性。     

TH蛋白和枸橼酸对尿草酸钙结晶动力学的影响的研究

目的研究枸酸盐和TH蛋白对草酸钙的成核、积聚的影响。方法通过分光光度计在620μm时的OD值的测定可在过饱和溶液中观察草酸钙晶体的成核和积聚。观察参数包括诱导时间(inducetime),简写为TI,即形成可观察微粒所需的时间;成核曲线(slopeofnucleation)的速率,简写为SN,即分光光度计OD620所观察的曲线上升支;聚积曲线(slopeofaggregation)的速率,简写为SA,即下降支,以及加入枸酸酸,NTHP(正常人尿液中所提取的TH蛋白),SF-THP(结石患者尿液中所提取的TH蛋白)后对参数的影响。然后相互比较。结果在实验浓度分别为1.50、2.50和3.50mmol/L时,枸酸酸可增加TI和抑制晶体成核(78%￣87%),聚集(63%￣70%),P<0.001。NTHP在30￣40mg/L时,可抑制晶体成核,也可抑制晶体的聚集(76%￣81%)。在实验浓度下,ST-THP降低TI(P=0.001和标准情况相比)并且促进聚集(33%￣48%)。当和NTHP并存时,柠檬酸可增强NTHP的抑制作用。当和ST-THP并存时,柠檬酸可逆转ST-THP的促成核和促聚集作用。结论在NTHP和ST-THP存在的情况下,柠檬酸决定草酸钙晶体的成核和聚集。     

姜黄素干预对乙二醇诱导的大鼠肾草酸钙结石形成的影响

目的 研究姜黄素对乙二醇诱导的大鼠肾草酸钙结石形成的影响.方法 32只Wistar大鼠分为单纯诱石组(1％乙二醇自由饮用诱导肾草酸钙结石形成)、诱石+姜黄素干预组(1％乙二醇自由饮用+20 mg·kg-1·d-1姜黄素灌胃)、单纯姜黄素组(去离子水自由饮用+ 20 mg· kg-1·d-1姜黄素灌胃)和空白对照组(去离子水自由饮用),每组8只.于实验前和实验结束时(分组处理后4周末),分别检测大鼠血、尿离子钙和镁浓度、尿草酸、尿枸橼酸及血清肌酐浓度;处死大鼠后取肾脏组织,检测肾脏组织丙二醛(MDA)含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性;HE染色观察肾脏组织草酸钙结晶形成情况;TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡.结果 与空白对照组比较,单纯姜黄素组大鼠尿草酸、肾小管上皮细胞凋亡指数、肾脏组织MDA含量和血清肌酐水平轻度升高,尿镁离子浓度、尿枸橼酸盐含量和肾脏组织T-SOD活性轻度降低.与单纯诱石组比较,诱石+姜黄素干预组大鼠尿草酸、肾小管上皮细胞凋亡指数、肾脏组织MDA含量明显下降,尿镁离子浓度、尿枸橼酸盐含量、肾脏组织T-SOD活性显著升高,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素对正常饮食大鼠具有轻微的诱发肾草酸钙结石的作用,但可明显抑制乙二醇诱导的大鼠肾结石生成.     

肾草酸钙结石大鼠肾小管细胞损伤的机制

目的探讨肾草酸钙结石大鼠肾小管上皮细胞损伤的机制,为临床预防和治疗肾结石提供理论依据。方法 20只大鼠随机分为模型组和对照组,每组10只。模型组制备肾草酸钙结石大鼠模型。分离大鼠肾小管上皮细胞并进行培养,用乳酸脱氢酶释放法检测上皮细胞活性,酶联免疫吸附法检测肾小管上皮细胞中caspase-3活性,Western blot方法检测肾小管上皮细胞中Bcl-2、Bax和Cyto C的表达。结果模型组大鼠肾小管上皮细胞活性显著低于对照组(P<0.05),且细胞中caspase-3活性显著升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),Cyto C释放显著增多(P<0.05)。结论肾草酸钙结石大鼠肾小管上皮细胞的损伤可能是由线粒体途径介导的细胞凋亡引起的。     

防石酸奶与市售酸奶降低大鼠尿草酸排泄量的效果比较

目的 比较自制结石预防型酸奶（防石酸奶）与某市售品牌酸奶对大鼠尿草酸排泄量的影响。方法 50只SD大鼠随机分为5组(n=10）,连续20 d分别每日灌喂4 mL自制防石酸奶（防石酸奶组）、某市售品牌酸奶（市售品牌酸奶组）、灭菌防石酸奶（灭菌防石酸奶组）、灭菌某市售品牌酸奶（灭菌市售品牌酸奶组）和去离子水（空白对照组）,灌喂前1天及灌喂期间每隔4天测量大鼠体质量及24 h尿草酸排泄量。结果 灌喂期间,各组大鼠体质量和24 h尿草酸排泄量均逐渐增加;灭菌防石酸奶组、灭菌市售品牌酸奶组和空白对照组尿草酸排泄量差异无统计学意义（P>0.05）;防石酸奶组和市售品牌酸奶组尿草酸排泄量的增加趋势明显小于其他三组,其分别于灌喂8 d和12 d后显著小于灭菌防石酸奶组和灭菌市售品牌酸奶组（P<0.05）;防石酸奶组尿草酸排泄量于灌喂16 d后小于市售品牌酸奶组（P<0.05）;各组大鼠体质量与24 h尿草酸排泄量呈正相关（r＝0.97～0.99,P<0.01）。结论 自制防石酸奶与某市售品牌酸奶均可降低大鼠尿草酸排泄量,前者效果显著优于后者。     

A Comparative Study on Several Models of Experimental Renal Calcium Oxalate Stones Formation in Rats

In order to compare the effects of several experimental renal calcium oxalate stones formation models in rats and to find a simple and convenient model with significant effect of calcium oxalate crystals deposition in the kidney, several rat models of renal calcium oxalate stones formation were induced by some crystal-inducing drugs (CID) including ethylene glycol (EG), ammonium chloride (AC), vitamin D3 [1α(OH)VitD3, alfacalcidol], calcium gluconate, ammonium oxalate, gen-tamicin sulfate, L-hydroxyproline. The rats were fed with drugs given singly or unitedly. At the end of experiment, 24-h urines were collected and the serum creatinine (Cr), blood urea nitrogen (BUN), the extents of calcium oxalate crystal deposition in the renal tissue, urinary calcium and oxalate ex-cretion were measured. The serum Cr levels in the stone-forming groups were significantly higher than those in the control group except for the group EG L-hydroxyproline, group calcium gluconate and group oxalate. Blood BUN concentration was significantly higher in rats fed with CID than that in control group except for group EG L-hydroxyproline and group ammonium oxalate plus calcium gluconate. In the group of rats administered with EG plus Vitamin D3, the deposition of calcium ox-alate crystal in the renal tissue and urinary calcium excretion were significantly greater than other model groups. The effect of the model induced by EG plus AC was similar to that in the group in-duced by EG plus Vitamin D3. EG plus Vitamin D3 or EG plus AC could stably and significantly in-duced the rat model of renal calcium oxalate stones formation.     

丛生蛋白与草酸钙肾结石复发的相关性

目的：研究草酸钙肾结石复发患者和初发患者体内丛生蛋白和炎症指标的表达差异性。方法：采集2015年9月~12月于上海长海医院住院治疗的草酸钙肾结石患者的临床数据,ELISA法检测患者血液和尿液中丛生蛋白浓度,同法检测血液中炎症指标白介素-1β（IL-1β）、白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）的浓度。根据患者发病史分为草酸钙结石初发和复发两组,单因素及多因素回归分析影响草酸钙肾结石复发的独立因素。结果：两组各纳入36例患者,单因素分析显示两组间年龄、性别、BMI、eGFR及结石大小差异无统计学意义（P>0.05）;两组间血液丛生蛋白、IL-1β、IL-2及IL-6值差异无统计学意义;复发组尿液丛生蛋白浓度显著低于初发组 [（44.35±15.44）ng/mL vs（56.76±16.80）ng/mL,P＜0.05]。多因素Logistic回归分析显示,尿液丛生蛋白浓度（OR=0.951）是影响草酸钙肾结石复发的独立因素。结论：草酸钙结石复发组患者尿液丛生蛋白明显低于初发组,提示尿液中丛生蛋白的分泌可能与结石复发有密切关联。     

富马酸二甲酯对肾草酸钙结石大鼠肾功能和氧化应激的影响及其机制研究

目的 基于p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路,探讨富马酸二甲酯对肾草酸钙结石大鼠肾功能及氧化应激的影响及其作用机制。方法 将30只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、富马酸二甲酯组,每组10只。其中模型组、富马酸二甲酯组大鼠腹腔注射0.25% L-羟脯氨酸2.5 kg/（kg·d）复制肾草酸钙结石大鼠模型。富马酸二甲酯组大鼠腹腔注射富马酸二甲酯25 mg/（kg·d）,连续28 d,对照组、模型组同时腹腔注射等量生理盐水。采用全自动生化分析仪检测大鼠尿蛋白、尿钙,以及血肌酐水平;HE染色检测大鼠肾组织草酸钙晶体形成情况;试剂盒检测血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及活性氧簇（ROS）水平;Western bloting检测大鼠肾组织p38 MAPK通路蛋白相对表达量。结果 与对照组比较,模型组和富马酸二甲酯组大鼠肾组织SOD活性降低,草酸钙晶体含量、尿蛋白、尿钙、血肌酐及肾组织MDA、ROS水平,p-JNK、p-p38蛋白相对表达量升高（P <0.05）;但富马酸二甲酯组大鼠SOD活性高于模型组（P <0.05）,肾组织草酸钙晶体含量、尿蛋白、尿钙、血肌酐,肾组织MDA、ROS水平,p-JNK、p-p38蛋白相对表达量低于模型组（P <0.05）。结论 富马酸二甲酯可能通过抑制p38 MAPK通路活化,抑制肾脏组织氧化应激反应,从而抑制肾草酸钙结石形成,进而保护肾功能。     

Association of Vitamin D Receptor Gene Polymorphisms with Calcium Oxalate Calculus Disease

Urinary calculus is a common disease that isclosely related to the disorder of calcium metabolismand has the tendency of polygenic inheritance.Butup to now its predisposing genes have yetto be iden-tified.Vitamin D receptor(VDR) can regulate themetabolism of calcium and phosphorus in the body.Its allele polymorphisms are widely used to detectge-netic characteristics of some diseases such as osteo-porosis,rickets and secondary hyperparathy-roidism[1— 6 ] .In recent years,some researchers be-…     

泽泻不同溶剂提取物对大鼠尿草酸钙结石形成的影响

目的　研究泽泻不同溶剂提取物对大鼠尿草酸钙结石形成的影响 ,并确定其抑制尿草酸钙结石形成的有效部位。方法　通过 ig不同剂量的泽泻不同溶剂提取物对乙二醇和氯化铵诱导的大鼠肾草酸钙结石模型进行试验研究。结果　泽泻乙酸乙酯浸膏高剂量组大鼠的血清 Cr,BU N,肾 Ca2 +含量 ,2 4 h尿 Ca2 +分泌量 ,肾组织的草酸钙晶体沉积均明显低于成石组 (P<0 .0 5 )。结论　泽泻乙酸乙酯浸膏能抑制实验性高草酸尿症大鼠尿草酸钙晶体的形成 ,是泽泻抑制尿草酸钙结石形成的有效部位。     

六味地黄方抑制草酸钙结石形成的实验研究

目的 探讨六味地黄方体内外对草酸钙结石形成的影响。方法 采用种晶技术检测六味地黄方不同质量浓度（20、10、5、1 mg/mL）在体外对(Coo)₂Ca?H₂O晶体生长的抑制指数。60只SD大鼠随机分为6组,对照组,模型组,阳性对照组,六味地黄方高、中、低剂量（0.8、0.4、0.2 g/kg）组。饲养4周后,检测各组大鼠血生化指标,24 h尿草酸量,Ca^2＋、Mg^2＋分泌量和肾组织Ca^2＋、Mg^2＋水平。镜下观察各组大鼠肾组织切片中草酸钙结晶分布及组织病理改变。结果 体外实验中,20、10、5 mg/mL六味地黄方对结晶生长抑制指数分别为98.50%、89.20%、43.94%,明显高于对照组（P＜0.05）。体内实验,六味地黄方高剂量组大鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）水平,肾Ca^2＋水平,24 h尿Ca^2＋分泌量及肾组织草酸钙结晶沉积均低于模型组与阳性对照组（P＜0.05）。结论 六味地黄方具有抑制草酸钙结石形成的作用,并且其抑制效果优于枸橼酸钾。     

基于miRNA-mRNA调控网络对草酸钙肾结石形成关键分子的筛选和分析

目的 应用生物信息学技术构建草酸钙肾结石大鼠miRNA-mRNA调控网络并筛选出调控草酸钙肾结石形成的关键分子。方法 从GEO数据库中筛选出乙二醇喂养14天诱导的草酸钙肾结石大鼠肾组织的miRNA和mRNA数据集,应用GEO2R在线工具分析得到显著差异表达的miRNA(DEMs)和mRNA(DEGs),并应用热力图进行展示。利用miRWalker预测DEMs的靶基因,根据miRNA负向调控mRNA原理应用R语言“venn.diagram”包与DEGs分别取交集,得到参与调控草酸钙肾结石形成的基因,然后应用 “clusterprofile”包对调控基因进行GO和KEGG富集分析、应用string数据库进行蛋白质互作分析(PPI),利用Cytoscape软件实现对PPI和miRNA-mRNA调控网络可视化和关键基因的筛查。结果 共分析得到38个DEMs和349个DEGs。将预测得到的DEMs靶基因与DEGs取交集后得到116个调控基因,这些基因富集到24个GO条目和22个KEGG信号通路。成功构建miRNA-mRNA调控网络,处于核心调控位置的miRNA为miR-6215、miR-758-5p和miR-214-3p。PPI网络分析筛选出5个关键基因,分别为：Foxm1、Ndc80、Cdkn2b、Cdt1和Ikbkg。结论 通过构建miRNA-mRNA调控网络,我们筛选出在草酸钙肾结石形成过程中起关键调控作用的miRNA和基因,为草酸钙结石的防治提供了新的研究思路和理论支撑。     

夏枯草提取物对大鼠尿草酸钙结石形成的影响

目的探讨夏枯草不同提取物对大鼠尿草酸钙结石形成的影响。方法40只Wistar大鼠随机分为5组（每组8只），采用乙二醇和氯化铵诱导的大鼠肾草酸钙结石模型进行试验研究。对照组（A组）、成石组（B组）、夏枯草水溶性提取物组（c组）、50％甲醇提取物组（D组）、100％甲醇提取物组（E组），分别通过灌胃方式予一定剂量的夏枯草不同提取物。饲养4周后，检测各组大鼠血BUN、Cr，24h尿草酸（Ox）、Ca^2＋分泌量和肾组织Ca^2＋含量。镜下观察肾组织切片中草酸钙结晶及肾小管扩张情况。结果A组大鼠血BUN、Cr明显低于其他各组，差别有显著性（P〈0.05），各组间血Ca^2＋、P浓度则无明显差异；24h尿Ox、Ca^2＋分泌量各夏枯草实验组与B组差异无显著性（P〉0．05）；C、D组肾组织Ca^2＋含量明显低于B组，差异有显著性（P〈0．05）。A组肾小管正常，B组肾小管腔可见大量成片草酸钙结晶存在，管腔明显扩张；C组肾小管腔可见散在草酸钙结晶存在，少数呈片状，管腔轻度扩张；D组肾小管腔仅见少许散在草酸钙结晶存在，管腔未见明显扩张；EL、EH组基本同B组。结论夏枯草水提取物和50％甲醇提取物能有效防止大鼠尿草酸钙结石形成。     

草酸钙肾结石患者肾乳头钙盐沉积特点及其形成机制

目的:分析草酸钙肾结石患者肾乳头钙盐沉积特点及其在肾结石形成中的作用,并探讨肾钙盐沉积的机制。方法: 选择21例行经皮肾取石术(PCNL)的草酸钙肾结石(采用傅立叶转换红外光谱法检测结石成分)患者,术中观察肾乳头钙斑情况;获取肾组织标本,行茜素红染色,显微镜下观察钙盐沉积特点;免疫组化检测骨桥蛋白、骨形成蛋白-2（BMP-2）和Ⅱ型胶原在肾结石患者肾组织的表达情况。另选7例非结石肾切除标本作为正常对照。结果:21例草酸钙肾结石患者均可见肾乳头钙斑;活检标本可见钙盐沉积于肾小管基底膜附近肾间质,并可向肾乳头黏膜延伸;当钙盐突破尿路上皮进入集合系统后,其上可见小结石生长。肾结石患者肾组织和正常肾组织均可见骨桥蛋白表达,未见BMP-2和Ⅱ型胶原明显表达。结论:肾乳头钙盐沉积是草酸钙肾结石形成的起始病灶之一;钙盐的形成可能并不是一种类似于动脉钙化的成骨性反应。     

夏枯草提取物对肾草酸钙结石模型大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响

目的研究夏枯草50％甲醇提取物对大鼠肾组织骨桥蛋白（osteopontin，OPN）表达的影响。方法采用乙二醇和氯化铵诱导建立大鼠肾草酸钙结石模型，将24只Wistar大鼠随机分成3组：对照组（A）、结石组（B）、夏枯草组（C）。C组则通过灌胃方式予一定剂量的夏枯草50％甲醇提取物。饲养4周后，检测各组大鼠肾组织病理学改变和草酸钙结晶沉积情况。采用原位杂交RT—PCR观察各组大鼠肾组织中OPN mRNA表达，免疫组织化学和Westem blot检测各组大鼠肾组织OPN蛋白的表达水平。结果A组肾小管正常，B组肾小管腔可见大量成片草酸钙结晶存在，管腔明显扩张；C组肾小管腔可见少许散在草酸钙结晶存在，管腔轻度扩张。原位杂交显示A组大鼠肾组织中仅肾脏髓质小部分亨利氏袢中检测到OPN mRNA的表达，与此相反在B组和C组大鼠肾组织中则明显检测到OPN mRNA的表达，只是C组中OPN mRNA的表达强度相对弱于成石对照组。RT-PCR检测结果与原位杂交一致。免疫组化显示A组中仅能检测到OPN蛋白的微弱表达，B组大鼠肾组织中OPN表达则明显增强，C组大鼠肾组织中OPN表达强度低于B组。Western blotting检测显示A组轻度表达OPN，而B组则显著表达，C组表达强度低于B组。结论夏枯草50％甲醇提取物能有效抑制大鼠肾组织OPN的表达，减少肾组织草酸钙结晶的沉积，从而能有效抑制大鼠肾草酸钙结石的形成。     

Genetic mutation of vitamin K-dependent gamma-glutamyl carboxylase domain in patients with calcium oxalate urolithiasis

To investigate the exon mutation of vitamin K-dependent gamma-glutamyl carboxylase （GGCX or VKDC） in patients with calcium oxalate urolithasis, renal cortex and peripheral blood samples were obtained from severe hydronephrosis patients （with or without calculi）, and renal tumor patients undergoing nephrectomy. GGCX mutations in all 15 exons were examined in 44 patients with calcium oxalate urolithiasis （COU） by polymerase chain reaction （PCR） and denatured high pressure liquid chromatography （DHPLC）, and confirmed by sequencing. Mutation was not found in all COU samples compared to the controls. These data demonstrated that functional GGCX mutations in all 15 exons do not occur in most COU patients. It was suggested that there may be no significant association between the low activity and mutation of GGCX in COU.