成人关节软骨细胞增殖与人参皂甙Rg1的促进作用☆

背景:人参总皂甙的主要有效成分为人参皂甙Rg1,有促进细胞增殖、抗衰老、抗细胞凋亡、抗炎及抗自由基等作用,但以往实验对象多为鼠、兔等动物的关节软骨细胞. 目的:体外培养成人软骨细胞,观察人参皂甙Rg1对体外培养的成人关节软骨细胞增殖的促进作用. 方法:实验分2组,Rg1组使用含质量浓度为40 mg/L人参皂甙Rg1的DMEM培养液培养,对照组使用未加人参皂甙的DMEM培养液培养,每日应用倒置相差显微镜观察细胞生长情况至第7天,并进行细胞计数.同时培养至第6天检测软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达. 结果与结论:对照组自培养第2天起细胞进入对数增殖期,到第7天细胞数约为接种时的8倍.Rg1组自培养第2天起细胞增殖能力较对照组增强(P <0.05),到第7天细胞数约为接种时的18倍(P <0.05).免疫组织化学SABC法检测结果显示,Rg1组与对照组细胞胞浆均可见Ⅱ型胶原表达,两组差异无显著性意义(P >0.05).说明人参皂甙Rg1可促进成人软骨细胞的增殖.     

成人关节软骨细胞增殖与人参皂甙Rg1的促进作用

背景：人参总皂甙的主要有效成分为人参皂甙Rg1,有促进细胞增殖、抗衰老、抗细胞凋亡、抗炎及抗自由基等作用,但以往实验对象多为鼠、兔等动物的关节软骨细胞。目的：体外培养成人软骨细胞,观察人参皂甙Rg1对体外培养的成人关节软骨细胞增殖的促进作用。方法：实验分2组,Rg1组使用含质量浓度为40mg/L人参皂甙Rg1的DMEM培养液培养,对照组使用未加人参皂甙的DMEM培养液培养,每日应用倒置相差显微镜观察细胞生长情况至第7天,并进行细胞计数。同时培养至第6天检测软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达。结果与结论：对照组自培养第2天起细胞进入对数增殖期,到第7天细胞数约为接种时的8倍。Rg1组自培养第2天起细胞增殖能力较对照组增强（P〈0.05）,到第7天细胞数约为接种时的18倍（P〈0.05）。免疫组织化学SABC法检测结果显示,Rg1组与对照组细胞胞浆均可见Ⅱ型胶原表达,两组差异无显著性意义（P〉0.05）。说明人参皂甙Rg1可促进成人软骨细胞的增殖。     

人参皂苷Rg1抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成

目的探讨人参皂苷Rg1对高糖诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响。方法体外分离培养心肌成纤维细胞,分为正常组(用正常细胞培养液培养)、高糖组(用D葡萄糖浓度为30 mmol/L的细胞培养液培养)和人参皂苷Rg1组(用含有D葡萄糖浓度为30 mmol/L、人参皂苷Rg1浓度为50 mg/L的细胞培养液培养),培养48 h后,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,羟脯氨酸法检测羟脯氨酸含量间接反映胶原蛋白合成水平,Western blot检测细胞中转化生长因子(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达水平。结果高糖组细胞存活率、细胞G0+G1期比率、羟脯氨酸含量、TGF-β1表达均明显高于正常组,而MMP-1、MMP-2明显低于正常组(P0.01)。人参皂苷Rg1组细胞存活率、细胞G0+G1期比率、羟脯氨酸含量、TGF-β1均明显低于高糖组,而MMP-1、MMP-2明显高于高糖组(P0.01)。结论人参皂苷Rg1能够抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞细胞增殖和胶原合成。     

生长激素对大鼠胫骨生长板软骨细胞胶原Ⅱ表达的影响

目的探讨生长激素（growth hormone,GH）对离体培养的大鼠胫骨生长板的软骨细胞Ⅱ型胶原（collagenⅡ,colⅡ）表达的影响。方法采用两步酶消化法分离培养5～8只三周龄大鼠生长板的软骨细胞,用RT—PCR和免疫组化的方法分别检测不同浓度GH对软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达。结果GH能促进软骨细胞ColⅡ的表达并呈浓度依赖性,GH在10～500ng/ml之间能促进ColⅡ的表达,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,并且以100ng／ml时表达最强,随着GH浓度的加大,其促ColⅡ表达的效应逐渐减弱,1000ng／ml与对照组比较无差异（P〉0．05）。结论GH通过促进软骨细胞ColⅡ的表达能维持软骨细胞的表型,GH在使用过程中不会导致骨龄的增加。     

关节软骨损伤后体外培养软骨细胞的功能变化

背景:关节软骨损伤可以影响软骨细胞功能,诱发创伤性骨关节炎.目的:观察关节软骨损伤后体外培养的软骨细胞功能的变化.方法:通过酶消化法分离培养高能量、低能量撞击后和正常兔膝关节透明软骨细胞,观察创伤能量对软骨细胞生存能力的影响;检测软骨细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原能力,检测细胞中白细胞介素1β和核转录因子κB mRNA表达水平,检测细胞合成白细胞介素1β和基质金属蛋白酶1的表达.结果与结论:高能量和低能量关节软骨损伤后,软骨细胞的存活率下降,原代细胞的贴壁细胞数量减少,贴壁时间延长,生长曲线下移,细胞甲苯胺蓝染色异染反应减弱,Ⅱ型胶原免疫组化染色强度减弱,软骨细胞中白细胞介素1β和核转录因子κB mRNA表达水平上升,细胞培养液中白细胞介素1β和基质金属蛋白酶1的质量浓度升高,其中高能量组效果更为显著(P < 0.05).说明关节软骨损伤后软骨细胞的功能受到影响,受损程度与创伤强度及炎性细胞因子的表达相关.     

关节软骨损伤后体外培养软骨细胞的功能变化

背景：关节软骨损伤可以影响软骨细胞功能,诱发创伤性骨关节炎。目的：观察关节软骨损伤后体外培养的软骨细胞功能的变化。方法：通过酶消化法分离培养高能量、低能量撞击后和正常兔膝关节透明软骨细胞,观察创伤能量对软骨细胞生存能力的影响;检测软骨细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原能力,检测细胞中白细胞介素1β和核转录因子κB mRNA表达水平,检测细胞合成白细胞介素1β和基质金属蛋白酶1的表达。结果与结论：高能量和低能量关节软骨损伤后,软骨细胞的存活率下降,原代细胞的贴壁细胞数量减少,贴壁时间延长,生长曲线下移,细胞甲苯胺蓝染色异染反应减弱,Ⅱ型胶原免疫组化染色强度减弱,软骨细胞中白细胞介素1β和核转录因子κB mRNA表达水平上升,细胞培养液中白细胞介素1β和基质金属蛋白酶1的质量浓度升高,其中高能量组效果更为显著（P〈0.05）。说明关节软骨损伤后软骨细胞的功能受到影响,受损程度与创伤强度及炎性细胞因子的表达相关。     

维药买朱尼对关节软骨前炎性因子的影响

背景：骨关节炎病理过程中,白细胞介素1β被认为是促进软骨基质降解和关节软骨破坏的最重要的细胞因之一。目的：观察白细胞介素113在关节软骨中的表达,并观察维药买朱尼对其的影响。方法：将40只SD大鼠随机数字表法随机等分为模型对照组、维药买朱尼组、假手术组、正常对照组。模型对照组和维药买朱尼组采用改良Hulth造模法建立大鼠膝骨关节炎模型,假手术组仅显露膝关节,不切断韧带,不切除内侧半月板。维药买朱尼组建模第2周开始灌胃维药买朱尼10．31mg／（kg·d）,模型组及假手术组大鼠均灌服等量生理盐水,连续4周。结果与结论：模型组软骨退变程度明显重于维药买朱尼组,模型组软骨大体评分及Mankin评分均明显高于维药买朱尼组（P〈0．05）,模型组软骨细胞白细胞介素1β的表达强度亦明显高于维药买朱尼组（P〈0．05）。与正常对照组比较,假手术组软骨大体评分、Mankin评分及软骨细胞白细胞介素1β差异无显著性意义（P〉0．05）。结果说明,维药买朱尼可以抑制关节软骨前炎性因子白细胞介素1β的表达。     

基因转染技术提高体内构建组织工程化软骨质量的实验研究

目的：研究转化生长因子β(TGF—β1)cDNA基因转染对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的调控作用，为基因转染技术在软骨组织工程中的应用提供理论依据。方法：利用脂质体Fugene6将含TGF-β1基因的其核表达载体及空白载体分别转染至软骨细胞(基因转染组和对照组)，RT—PCR、Nonhem—Blots、原位杂交及免疫组化检测TGF—β1调节体外培养软骨细胞II型胶原表达的变化。结果：TGF-β1基因转染软骨细胞后，其II型前胶原mRNA及其蛋白的表达均显著增强，且随着TGF—β1蛋白表达的丧失，其对软骨细胞II型前胶原mRNA表达的促进作用亦逐渐减弱。结论：TGF—β1可以上调体外培养软骨细胞II型胶原的表达。     

京尼平苷干预体外培养大鼠软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白的合成

背景：近年来的研究表明,中药栀子可能具有活化软骨细胞的功能,而京尼平苷是栀子中重要成分之一。目的：观察京尼平苷对体外培养大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白合成的影响。方法：体外分离培养大鼠膝关节软骨细胞,分别应用25,50及100 mmol/L京尼平苷干预,并设置正常对照组。RT-PCR和Western blot法观察京尼平苷对各组细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达的影响。结果与结论：RT-PCR和Western blot法检测结果显示,与正常对照组相比,25,50及100 mmol/L京尼平苷干预可以明显促进Ⅱ型胶原mRNA及蛋白的表达（P 〈0.01）。结果证实,京尼平苷可以促进大鼠膝关节软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白的合成。     

肝细胞生长因子诱导前软骨干细胞向软骨细胞的分化

目的:探讨肝细胞生长因子诱导前软骨干细胞向软骨细胞分化的机制。方法:实验于2005-12/2006-03在河南省正骨研究院完成。①实验材料:普通级新生兔10只,平均体质量3kg。②实验干预:采用免疫磁珠分离技术分离新生兔长骨干骺端前软骨干细胞。利用肝细胞生长因子(浓度分别为0.5,1,2,4μg/L)作用前软骨干细胞;另以2μg/L肝细胞生长因子作用前软骨干细胞,对照用相同剂量的培养基,检测前软骨干细胞Ⅱ型胶原及Ⅱ型胶原mRNA的表达。③实验评估:采用光学显微镜观察前软骨干细胞形态及生长情况;四甲基偶氮唑盐比色法检测前软骨干细胞的增殖;免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达;反转录-聚合酶链反应检测Ⅱ型胶原mRNA的表达。结果:①前软骨干细胞形态及生长情况:分离纯化的前软骨干细胞贴壁稳定,在光学显微镜下呈多角和梭形,生长旺盛,曲光度好。②前软骨干细胞增殖情况:细胞增殖率上升,在24,48,72h内呈时间浓度依赖。③Ⅱ型胶原表达:肝细胞生长因子作用第5天前软骨干细胞出现Ⅱ型胶原蛋白的表达。④Ⅱ型胶原mRNA的表达:在肝细胞生长因子刺激3d开始出现表达,并且5d,7d逐渐增加。结论:肝细胞生长因子作用前软骨干细胞后,出现软骨特征标志抗原Ⅱ型胶原的表达,细胞增殖活性上升,表明肝细胞生长因子能诱导前软骨干细胞向软骨细胞方向分化。其机制可能是前软骨干细胞也存在肝细胞生长因子受体。     

共培养诱导人脐血间充质干细胞向软骨细胞分化

背景：研究发现共培养可诱导人源干细胞向特定细胞分化,但如何控制两种细胞间比例以最大效率获得目的细胞是研究中的难题。目的：观察人脐血问充质干细胞与兔软骨细胞按不同比例共培养后向软骨细胞分化的情况。方法：复苏人脐血间充质干细胞并进行传代,将经流式细胞仪鉴定的人脐血间充质干细胞与体外分离的兔软骨细胞按照2：1或3：1的比例共培养,并用100pg／L的胰岛素样生长因子1进行诱导。在共培养14d,提取细胞RNA和蛋白质,实时定量PCR检测聚集蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA的表达,Westernblot检测聚集蛋白多糖和Ⅱ型胶原蛋白的表达。结果与结论：人脐血间充质干细胞与兔软骨细胞共培养14d,共培养的细胞聚集蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA及蛋白的表达高于单纯胰岛素样生长因子1诱导的细胞。在人脐血间充质干细胞与软骨细胞比例相同时,加入胰岛素样生长因子1可提高细胞聚集蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA及蛋白的表达。同时人脐血间充质干细胞与兔软骨细胞按3：1共培养更能促进细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白及聚集蛋白多糖蛋白的表达;而按2：1共培养时,细胞聚集蛋白多糖mRNA表达更多。可见人脐血问充质干细胞与兔软骨细胞共培养后可诱导人脐血间充质干细胞向软骨细胞分化,且按3：1的比例共培养可获得更多的软骨细胞。     

双醋瑞因对白细胞介素1β诱导软骨细胞凋亡的影响

背景：双醋瑞因是一种新型的白细胞介素1阻滞剂,其是否对软骨细胞的凋亡有抑制作用以及是否通过细胞信号转导通路发挥作用的基础应用研究较少。目的：观察双醋瑞因对体外白细胞介素1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡的影响。方法：体外培养SD大鼠关节软骨细胞,苏木精-伊红染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞,用白细胞介素1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡模型,再用10-4,10-5,10-6mol/L双醋瑞因干预培养。结果与结论：10-4mol/L和10-5mol/L的双醋瑞因可降低白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡率（P〈0.01和P〈0.05）。10-5mol/L双醋瑞因能够显著抑制白细胞介素1β诱导p38磷酸化（P〈0.01）。双醋瑞因干预的软骨细胞中p38mRNA的表达量较模型组下降0.38倍（P〈0.01）。结果证实,双醋瑞因能够抑制软骨细胞中p38蛋白和基因的表达,从而抑制白细胞介素1β诱导关节软骨细胞凋亡。     

双醋瑞因干预体外培养关节软骨结缔组织生长因子的表达

背景:在骨关节炎软骨退变中结缔组织生长因子作为一种重要的效应分子在软骨细胞的增殖、分化方面发挥重要作用。临床应用双醋瑞因治疗骨关节炎已取得了良好的效果,但其治疗的确切机制尚不清楚。目的:观察不同浓度双醋瑞因对体外白细胞介素1β诱导下软骨细胞中结缔组织生长因子的影响。方法:体外培养SD大鼠关节软骨细胞,重组人白细胞介素1β刺激软骨细胞制备体外骨关节炎模型。实验分组:正常对照组不给予任何处理因素;模型对照组给予重组人白细胞介素1β;实验组给予不同浓度双醋瑞因+10μg/L重组人白细胞介素1β。利用MTT比色法观察软骨细胞的增殖情况,Western Blot法检测结缔组织生长因子的表达。以上实验均重复3次。结果与结论:MTT结果显示,与正常对照组比较,双醋瑞因能促进软骨细胞MTT增殖活性,以浓度为10-5 mol/L更明显(P<0.01),白细胞介素1β作用后各实验组软骨细胞增殖能力下降(P<0.05);但与正常对照组比较,无论是否加白细胞介素1β,浓度为10-4 mol/L和10-5 mol/L双醋瑞因仍能促进软骨细胞MTT增殖活性(P<0.05)。Western Blot检测结果显示,白细胞介素1β能够降低结缔组织生长因子的表达(P<0.01),浓度为10-5 mol/L双醋瑞因能够显著促进白细胞介素1β诱导下结缔组织生长因子的表达,显著高于模型对照组(P<0.01)。提示双醋瑞因可以促进白细胞介素1β诱导下结缔组织生长因子的高表达,其可能是双醋瑞因促进软骨细胞的分化增殖,治疗骨关节炎的作用机制之一。     

甲状腺素诱导人脐血间充质干细胞向软骨细胞分化中的作用

背景：研究发现共培养可诱导人源干细胞向特定细胞分化,但如何获得更多的组织工程所需的种子细胞是研究中的难题。目的：探讨不同浓度甲状腺素在人脐血间充质干细胞向兔软骨细胞分化中的作用。方法：将人脐血间充质干细胞与兔软骨细胞按照2∶1比例共培养,并用含有不同浓度甲状腺素(0,0.01,0.1,1,10μmol/L)的培养基分组刺激,共培养14 d后分别观察各组细胞形态,并提取细胞RNA和蛋白质,Real-time PCR检测聚集蛋白多糖mRNA及Ⅱ型胶原mRNA表达量,Western blotting技术检测Ⅱ型胶原及聚集蛋白多糖蛋白表达水平。结果与结论：加入0.01,0.1,1,10μmol/L的甲状腺素干预后,聚集蛋白多糖、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达水平均随甲状腺素浓度增加而增强,与单纯共培养组比较差异有显著性意义(P <0.05)。实验证明高浓度甲状腺素可增强人脐血间充质干细胞与兔软骨细胞共培养后向软骨细胞分化的能力。     

白细胞介素1对骨关节炎软骨细胞基质金属蛋白酶阻滞剂1基因表达的影响

目的：观察不同浓度白细胞介素-1β(IL-1β)对体外培养人的关节透明软骨细胞基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达的影响。方法：将体外培养的人透明软骨细胞随机分为1，10，100ug／L浓度IL-1β作用组(分别加相应剂量作用12h)及空白对照组。采用反转录PCR(RT-PCR)方法及实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法，观察透明软骨细胞TIMP-1mRNA的表达状况，比较不同剂量IL-1β作用下传代培养的人透明软骨细胞TIMP-1基因表达与正常软骨细胞相应基因表达的关系。结果：正常人的软骨细胞均有TIMP-1的表达，但表达量极低。相同的作用条件，随着IL-1β浓度的增高，1，10，100ug／L组与空白对照组相比，TIMP-1的含量分别为正常组的12％，33％，40％，且各组之间差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：IL-1β对人的软骨细胞TIMP-1表达的调控作用随其浓度的变化而不同。     

人参皂甙Rg3与环磷酰胺并用对EMT-6乳腺癌小鼠肿瘤血管生成的影响

目的：研究持续低剂量人参皂甙Rg3并用环磷酰胺对EMT-6乳腺癌肿瘤血管生成的影响。方法：以荷EMT-6乳腺癌的BALB／c小鼠为模型，分为5组(每组20只)，低剂量环磷酰胺组：环磷酰胺30mg／(kg&;#183;d)灌胃；最大耐受剂量(maximum tolerated dose，MTD)环磷酰胺组：环磷酰胺150mg／kg隔日皮下注射，3次后间歇两周再重复；Rg3组：人参皂甙Rg3 10mg／(kg&;#183;d)灌胃；联合组：环磷酰胺30mg／(kg&;#183;d)+人参皂甙Rg3 10mg／(kg&;#183;d)灌胃；对照组：每日等体积生理盐水灌胃。观察肿瘤体积、小鼠质量和外周血白细胞计数及小鼠生存期，实验终末时行免疫组化染色，测定肿瘤微血管密度(mierovaseulardensity，MVD)、核增殖抗原表达基因Ki-67、血管内皮生长因子(vascular endothlial growth factor，VEGF)、凋亡抑制基因Bcl-2、突变型P53表达情况。结果：低剂量环磷酰胺组肿瘤生长比较缓慢，小鼠质量及外周血白细胞数均无明显下降(P&;gt;0．05)，生存期延长(P&;lt;0．05)；合用人参皂甙Rg3时抑瘤效果更持久而稳定，毒副作用未增加，小鼠生存期最长(P&;lt;0．05)。低剂量环磷酰胺组较MTD环磷酰胺组MVD下降明显(P&;lt;0．05)；与对照组相比，低剂量环磷酰胺组MVD，VEGF及Ki-67表达均下降，在合用人参皂甙Rg3时下降更多，同时Bcl-2，P53表达也下降(P&;lt;0．05)。结论：环磷酰胺的持续低剂量给药方式增加了其靶向于乳腺瘤微血管的有效性，并且具有毒副作用小、不易产生耐药的优点，延长动物生存期。这种效果在抗血管生成中药人参皂甙Rg3合用环磷酰胺时更为显著。     

螺内酯对肝星状细胞表达基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响

目的研究螺内酯干预肝星状细胞（HSCs）后基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、MMP-13和其组织抑制剂1（TIMP-1）的变化。探讨螺内酯对胶原代谢影响的机制。方法应用不同浓度螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-7）mol／L干预HSCs 48小时,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测MMP-2、MMP-9、MMP-13 mRNA和TIMP-1 mRNA的表达。结果①螺内酯组的MMP-13基因表达强度上调,螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-5）mol／L浓度组MMP-13基因表达强度（0．91±0．13、0．80±0．01、0．67±0．15）均明显高于对照组（0．53±0．10）（P〈0．01）。1×10^-4mol／L浓度组MMP-13基因表达强度接近对照组的2倍。②螺内酯干预HSCs48小时后,TIMP-1基因表达减少,螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-6）mol／L浓度组（0．15±0．05、0．28±0．15、0．37±0．03）明显低于对照组（0．47±0．04）（P〈0．01或〈0．05）。③螺内酯不同浓度干预HSCs 48小时后,HSCs MMP-2、MMP-9基因表达无明显变化（P〉0．05）。结论螺内酯可抑制HSCs TIMP-1基因的表达,增加间质胶原酶MMP-13 mRNA的含量。螺内酯可能通过对MMPs及TIMP-1影响而促进胶原降解。     

人参皂苷Rg1．对淀粉样β蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的保护

目的：观察人参皂苷Rg1对淀粉样β蛋白25-35诱导的海马神经元细胞损伤是否具有保护作用，并分析其作用机制。 方法：实验于2004-03／2005-03在广州中医药大学临床药理研究所DME中心完成。①取新生24h清洁级SD大鼠，无菌环境下取出海马组织进行贴壁培养并以B27无血清培养基添加剂抑制非神经元细胞的生长。②海马神经元形态及细胞活力观察：细胞培养7d至分化成熟状态，然后被随机分为3组：人参皂苷Rg1预处理组（分为1，2,4，8，16μmol／L5个浓度组）。首先每加入各浓度的Rg1（中国药品生物制品检定所提供，批号：0703—200221）预作用24h后，再加入40μmoL／L淀粉样β蛋白25～35共孵育24h；模型组：每孔加入40μmol／L淀粉样β蛋白25-35作用24h；空白组：正常细胞培养用液；每组均为8孔。运用倒置显微镜进行海马神经元形态学观察，四甲基偶氮唑盐比色法法检澍细胞活力。即吸光度（A值），该值越高说明细胞活力越强。⑨检测核因子κB活性：调整细胞悬液密度为2&;#215;10^8L^-1，接种于6孔板（内置已用多聚赖氨酸包被的盖玻片），1mL／孔。随机分为5组（3孔／组）：正常组，模型组，2，4，8μmol／L人参皂甙Rg1预处理组。细胞培养7d后，2，4，8μmol／L人参皂甙Rg1预处理组加终浓度为2，4，8μmol／L的人参皂甙Rg1预作用24h后，与模型组一起加40μmol／L淀粉样β蛋白，作用24h。激光共聚焦显微镜检测核因子κB在细胞内的激活程度，以图像分析仪计算核区荧光与胞浆区荧光比值，比值越高说明核因子κB活性越高。④计量结果差异比较采用单因素方差分析。 结果：①神经元细胞形态：相差显微镜下可见人参皂甙Rg1预处理组细胞损伤相对较模型组轻，但较正常组严重。②海马神经元细胞活力：正常组和2，4μmol／L人参皂甙Rg1预处理组明显高于模型组（P〈0．05），以4μmol／L人参皂甙Rg1预处理组最高；1，8，16μmol／L人参皂甙Rg1预处理组虽然也高于模型组，但差异不明显（P〉0．05）。⑧神经元细胞核因子κB活性：正常组和2，4，8μmol／L人参皂甙Rg1预处理组明显高于模型组（P〈0．01），以4μmol/L人参皂甙Rg1预处理组最高；4,8μmol／L人参皂甙Rg1预处理组明显高于正常组（P〈0.01）。 结论：人参皂甙Rg1对淀粉样β蛋白25-35诱导的大鼠海马神经元损伤具有保护作用，尤以4μmol／L人参皂甙Rg1作用效果最明显。核因子κB信号通路可能是人参皂甙Rg1对抗淀粉样β蛋白25～35细胞毒性作用的重要途径之一。     

乳酸对肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞增殖和生物学活性的影响

背景：肌腱组织细胞具有分泌胶原的功能，在伤口愈合及粘连中有重要的作用。知之较少的是乳酸对肌腱细胞的生物学作用。 目的：探讨兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞增殖、胶原产生和乳酸对细胞的增殖、胶原产生和对转化生长因子β1，基础纤维母细胞生长因子，自细胞介素8分泌的影响。 设计、时间和地点：随机对照动物实验，于2005—09／2006—07在青岛大学医学院附属医院动物实验中心完成。 材料：选用6只成年清洁级新西兰大白兔，雌雄不拘。 方法：①进行兔腱鞘成纤维细胞、腱外膜和腱内膜成纤维样细胞的分离和培养，亚甲蓝染色观察细胞形态并鉴定3种细胞类型。②以加入25mmol／L乳酸培养细胞，测量细胞的数量。③比较加入25，50，100和200mmol／L乳酸后细胞胶原产生量和对转化生长因子β1，基础纤维母细胞生长因子，自细胞介素8分泌量，并与不加乳酸培养为对照比较。 主要观察指标：使用免疫组化检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的产生，通过酶联免疫吸附试验定量检测不同剂量乳酸对细胞Ⅰ型胶原产生的影响及对转化生长因子β1，基础纤维母细胞生长因子，自细胞介素8产生的影响。 结果：①25mmol／L乳酸使培养的细胞数量降低，3种细胞组间比较差异无显著性意义（P〉0．05）。②乳酸可以使实验组Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原组织产生明显多于对照组，差异有显著性意义（P〈0．05）。③当乳酸浓度增加至50mmol／L时，实验组3种细胞的I型胶原量增加达最高峰，与乳酸浓度为0mmol／L时比较，差异有非常显著性意义（t=4．58，3．97，3．16，P〈0．01）；当乳酸浓度增加到100 mmol/L和200 mmol/L时，I型胶原产生量明显减少。④实验组乳酸浓度为25 mmol/L时对转化生长因子β1，基础纤维母细胞生长因子，自细胞介素8的分泌量增加，自细胞介素8的分泌量减少，与对照组比较差异均有显著性意义（P〈0．05）。 结论：乳酸能增加腱鞘成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞的胶原产生量，增加的程度与乳酸的浓度有关，以50mmol／L时最佳，而这种刺激作用可能与增加转化生长因子β1，基础纤维母细胞生长因子和减少自细胞介素8的分泌量有关。     

微球培养人脂肪间充质干细胞向软骨细胞的诱导分化

目的:观察微球培养的人脂肪间充质干细胞在特定诱导条件下向软骨细胞的分化情况,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性。方法:实验于2006-03/08在湘雅医院中心实验室完成。①实验材料:皮下脂肪组织来源于股骨颈骨折手术患者6例,对本实验均知情同意。②实验方法:取皮下脂肪,分离培养脂肪间充质干细胞,胰酶消化,取传至第6代的细胞,密度调整为1×1010L-1进行接种培养,细胞贴附后加入软骨细胞诱导剂(含10μg/L转化生长因子β1、37.5mg/L维生素C、6.25mg/L胰岛素、6.25mg/L转铁蛋白、10-7mol/L地塞米松、1%新生牛血清的高糖DMEM),倒置显微镜下观察细胞团的变化。③实验评估:诱导14d后,将细胞吹散,细胞爬片,免疫组化染色检测Ⅱ型胶原的表达,甲苯胺兰染色观察细胞内异染情况,RT-PCR检测Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖aggrecan mRNA的表达。结果:①脂肪间充质干细胞向软骨细胞诱导后的形态:诱导3d后,细胞团向内呈放射状聚集。②诱导后Ⅱ型胶原的表达及细胞内异染情况:诱导14d后,Ⅱ型胶原在胞浆、胞膜及细胞外基质中均有表达,呈棕黄色;甲苯胺兰染色显示胞浆内呈蓝色异染。③诱导前后Ⅱ型胶原蛋白和aggrecan mRNA的表达:诱导前脂肪间充质干细胞无Ⅱ型胶原蛋白和aggrecan mRNA表达,而诱导14d后二者均有较高表达。结论:在微球状态下可成功诱导脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化。